导读:本文包含了华癸中慢生根瘤菌论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:华癸中慢生根瘤菌,焦磷酸硫胺素结合蛋白,tpp基因,共生固氮
华癸中慢生根瘤菌论文文献综述
吴和涛,谢婧,罗莎,何冬兰,李晓华[1]（2019）在《华癸中慢生根瘤菌焦磷酸硫胺素结合蛋白基因tpp的功能研究》一文中研究指出在构建M.huakuii tpp基因突变株的基础上,通过自生生长和植物盆栽试验,研究焦磷酸硫胺素结合蛋白tpp基因在根瘤菌的生长及与紫云英宿主共生固氮过程中的功能。通过同源重组获得华癸中慢生根瘤菌tpp突变菌株HKtpp,并进一步研究tpp基因突变对菌株生长及共生固氮功能的影响。结果显示:tpp基因突变会减缓菌株生长,突变菌株胞内的谷胱甘肽还原酶活性显着降低。植物盆栽试验表明,突变菌株感染紫云英宿主形成有效的红色根瘤,但是其固氮酶活降低了26.4%。结果表明:tpp基因在根瘤菌的生长和共生固氮中发挥着重要作用。(本文来源于《华中农业大学学报》期刊2019年03期）
于艳霞,佀再勇,曾小波,李友国[2]（2019）在《华癸中慢生根瘤菌7653R MCHK-3535基因在自生和与紫云英共生中的功能》一文中研究指出【目的】探究Mesorhizobium huakuii 7653R MCHK-3535基因在共生固氮中的功能。【方法】构建MCHK-3535插入失活突变体、超表达和互补菌株,对其进行共生表型鉴定;并测定各菌株的生长曲线、运动性及生物膜形成;利用qRT-PCR方法和组织表达定位分析MCHK-3535在共生过程中的时空表达特征。【结果】与野生型7653R相比,突变体Δ3535达到稳定期的生物量增加,运动性下降,生物膜形成增加。此外,MCHK-3535基因的失活会显着提高紫云英固氮能力和植物地上部分鲜重,但不影响根瘤数量及重量;且互补菌株C3535能部分回补到野生型性状,超表达菌株OV3535均无显着性差异;qRT-PCR和启动子组织表达定位发现,MCHK-3535基因主要在根瘤的侵染区、过渡区及固氮区表达,并且表达持续整个固氮期。【结论】MCHK-3535基因在自生及与紫云英共生过程中发挥重要功能,参与根瘤的正常发育并负向调控固氮酶活性。(本文来源于《微生物学报》期刊2019年03期）
殷杰[3]（2018）在《华癸中慢生根瘤菌谷胱甘肽合成酶基因gshB的功能研究》一文中研究指出谷胱甘肽(Glutathione,GSH)是广泛存在于细胞中的一种活性巯基短肽。谷胱甘肽对于维持细胞正常的氧化还原环境具有重要作用。谷胱甘肽是由γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(gshA编码)和谷胱甘肽合成酶(gshB编码)两个酶催化合成的。华癸中慢生根瘤菌(Mesorhizobium huakuii)是一种能够与豆科植物紫云英建立共生关系的革兰氏阴性细菌,它能通过与宿主植物形成的根瘤来固定大气中的N_2,从而转换成氨,为植物的生长提供所需的氮源,同时宿主植物也将为根瘤菌的固氮过程提供一定的能量。通过生物信息分析,在华癸中慢生根瘤菌7653R中发现了谷胱甘肽合成酶基因gshB(MCHK_5809)。本研究通过构建华癸中慢生根瘤菌谷胱甘肽合成酶gshB基因的突变体,来研究gshB基因在根瘤菌自由生长、抗氧化和共生固氮中的功能。通过生长和氧化物抑菌实验,研究了gshB在华癸中慢生根瘤菌7653R生长和氧化应急状态下的功能。gshB突变体MHgshB不能有效地利用蔗糖、果糖、麦芽糖、葡萄糖、甘露醇等化合物作为唯一碳源生长。同时对于谷氨酸、谷氨基酸、还原型谷胱甘肽、半胱氨酸、天冬氨酸、丙氨酸等多种氨基酸的利用效率也显着降低,表明谷胱甘肽是有效转运碳源和氨基酸所必需的物质。MHgshB在无机氧化物过氧化氢(H_2O_2)和有机氧化物叔丁基过氧化氢(t-BHP)胁迫下敏感,但是对于有机氧化物过氧化氢异丙苯(CuOOH)的氧化胁迫没有影响。因此,谷胱甘肽在某些抗氧化胁迫中有着重要的作用。通过华癸中慢生根瘤菌与紫云英的盆栽实验,研究了gshB基因在共生固氮中的功能。虽然gshB突变体形成的是红色根瘤,并且其结瘤数量与野生型相比没有差异,但是其固氮量减少了70%。根瘤切片和电镜结果表明:gshB突变株形成的根瘤含有少量正常类菌体以及大量正在衰亡的类菌体,表明谷胱甘肽在根瘤菌与紫云英共生固氮以及防止根瘤早衰方面有重要作用。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)实验,研究了相关基因在H_2O_2胁迫下和共生条件下的表达量。结果表明,支链氨基酸转运系统相关基因braE、braG,氨基酸通透酶基因aapJ、aapQ的表达量不仅没有降低反而有所增加。表明谷胱甘肽不是通过调控Bra和Aap转运系统的转录水平来影响氨基酸运输。过氧化氢-过氧化物酶基因katG表达量显着上调,而与电子传递相关的调控基因Hmus、RhtA的表达量没有显着变化,表明谷胱甘肽的缺失会启动机体内其他抗氧化机制发挥应急反应,从而导致其它抗氧化基因表达量增加。此外,根瘤固氮基因nifH、nifD表达量都显着下调,表明谷胱甘肽缺失会降低固氮基因的表达,从而导致根瘤固氮活性降低。(本文来源于《中南民族大学》期刊2018-05-20）
李振鹏,马春草,谢福莉,陈大松,李友国[4]（2016）在《华癸中慢生根瘤菌7653R SraG sRNA的共生固氮功能》一文中研究指出基于前期对华癸中慢生根瘤菌(Mesorhizobium huakuii)7653RsRNA(small non-coding RNA,sRNA)的生物信息学预测,经Northern blot验证获得SraGsRNA。本研究采用RACE与转录组高通量深度测序确定了SraG全长,并分别利用RNAfold软件和TargetRNA软件预测了SraG二级结构和靶位点,进而构建了M.huakuii 7653R的SraG插入失活突变体(M.huakuii SraGmut),并对突变体接种紫云英的共生表型进行了检测。盆栽试验结果表明,与野生型菌株M.huakuii 7653R相比,接种突变株M.huakuii SraGmut的固氮能力显着下降,突变株固氮酶活性下降约40%,植株鲜质量和根瘤数目也显着降低。结果表明,SraG的功能与M.huakuii 7653R的共生固氮过程相关,作为sRNA可能参与根瘤菌的共生固氮调控过程。(本文来源于《华中农业大学学报》期刊2016年05期）
路达,彭杰丽,谢福莉,陈大松,李友国[5]（2016）在《华癸中慢生根瘤菌7653R MCHK_8182基因的共生固氮功能》一文中研究指出根据华癸中慢生根瘤菌7653R全局转录组分析结果,获得在共生固氮阶段显着上调表达的基因MCHK_8182;设计重迭延伸PCR引物,构建MCHK_8182双交换突变重组质粒载体;通过叁亲本杂交,将突变载体导入7653R;在蔗糖压力培养下进行筛选,最终获得MCHK_8182双交换突变株。PCR及测序验证双交换突变株构建成功。植物盆栽试验结果显示,与7653R野生型接种的植株相比,MCHK_8182突变菌株接种的植株根瘤数减少,但固氮酶活未见明显差异。(本文来源于《华中农业大学学报》期刊2016年04期）
彭杰丽[6]（2014）在《基于全局转录组分析研究华癸中慢生根瘤菌7653R类菌体分化和固氮机理》一文中研究指出华癸中慢生根瘤菌7653R (Mesorhizobium huakuii7653R)可以与宿主豆科植物紫云英(Astragalus sinicus)形成生物固氮共生体,也可以在土壤中自由生长。在华癸中慢生根瘤菌7653R的全基因组测序完成之后,为了更好地了解7653R在类菌体分化过程中所发生的生理生化变化,我们采用RNA-Seq和Microarrays技术相结合的方法对7653R在两种代谢条件下(共生和自生)的转录组进行了研究。1.对类菌体的分离方法进行了比较分析,结果表明：如果需要获得完整的类菌体用于后续形态观察,可以使用物理分离的方法；如果需要获得高质量类菌体RNA用于RNA-Seq或Microarrays实验,可以采用Ambion MICROB Enrich试剂盒直接提取和纯化类菌体RNA的方法。应用上述所建立的技术方法,本文成功制备了华癸中慢生根瘤菌7653R在共生和自生条件下的RNA,进行了RNA-Seq和Microarrays实验。2.通过同源比对的生物信息学方法,构建了华癸中慢生根瘤菌7653R全局蛋白质互作网络(protein-protein interaction network, PPI)。3.对华癸中慢生根瘤菌7653R的转录组进行了分析。结果表明：(1)RNA-Seq和Microarrays均鉴定出7653R在两种生长状态下近叁千条差异表达的基因。对这些基因进行了共线性分析,发现两种方法检测到的基因及表达特征相似度高,共线性好。(2)采用整合数据的方式(两种方法检测到的差异表达基因的合集),对这些差异表达的基因进行了COG功能分类,代谢途径分析,KEGG富集分析以及GSEA基因集富集分析。结果显示7653R在自生条件下主要是维持基础代谢,而类菌体的功能主要是进行生物固氮。显着上调的基因位于共生质粒上。在类菌体条件下,能量代谢相关基因的表达水平上调明显,而脂肪酸代谢相关基因表达水平变化很小,大多数与细胞周期相关的基因均呈下调表达。(3)利用Cytoscape将基因的差异表达与7653R的全局蛋白质互作网络进行整合分析,解析获得一个与共生固氮密切相关的亚网络。该亚网络包含多个hub基因以及若干未曾报导与固氮过程相关的基因亚网络。(4)鉴于CtrA在细胞分裂和类菌体分化中具有重要调控作用,以CtrA为中心,本文解析获得一个与其直接互作的基因亚网络。这些研究结果对深刻揭示类菌体分化、固氮机理提供了新材料及新视野。4.选择共生固氮子网中的hub基因MCHK-0866及其相邻的MCHK-0867’进行突变体的构建。构建了单基因突变和双基因突变的置换载体,采用叁亲本结合转移的方法筛选获得双基因突变的稳定突变株,基于植物盆栽的共生表型检测为结瘤不固氮。5.改造了用于构建细菌单杂交随机文库的转录因子表达载体,建立并优化了构建随机文库的方法。结果显示此方法转化效率高,可获得大量转化子。为构建细菌单杂交随机文库,研究转录组中的重要转录因子及调控打下了工作基础。(本文来源于《华中农业大学》期刊2014-06-01）
王善明[7]（2014）在《华癸中慢生根瘤菌7653R全基因组测序及比较基因组学研究》一文中研究指出本论文对华癸中慢生根瘤菌(Mesorhizobium huakuii)菌株7653R的全基因组进行了测序、组装、拼接和功能注释。基于7653R基因组序列进一步与中慢生根瘤菌属(Mesorhizobium)内不同种的5株菌(Mesorhizobium huakuii bv. loti MAFF303099, Mesorhizobium loti R7A, Mesorhizobium ciceri bv. biserrulae WSM1271, Mesorhizobium australicum WSM2073, Mesorhizobium opportunistum WSM2075)进行了比较基因组学研究。详细分析了它们在基因组序列基本特征、基因组序列线性关系、直系同源蛋白、结瘤固氮基因、表面多糖、分泌系统等方面的异同点。旨在回答有关根瘤菌的系统发育地位、宿主专一性、基因组岛动力学、质粒起源与进化等科学问题。中慢生根瘤菌属内多个种间基因组基本特征是否存在差异,线性关系如何,生物功能差异有多大,这些都需要通过基因组间的比较来解答。百脉根根瘤菌MAFF303099的分类地位受到质疑,被认为是属于M. huakuii。为了能够确认MAFF303099与M. huakuii之间的系统发育关系,需要更多有力的全局基因组序列分析方面的证据。另外,MAFF303099与M. huakuii菌株7653R在宿主特异性方面存在明显差异,为了能够找到造成这种差异的原因,几个可能的决定因素需要在基因组水平上进行比较,主要包括结瘤因子、表面多糖、分泌蛋白。最后,移动基因元件能够整合到染色体并形成基因组岛,对这些移动元件的进一步了解,能够丰富我们关于基因组动力学对Mesorhizobium一般进化所起作用的认识。7653R共生质粒与其它几株菌的基因组岛具有相同的特征,那么它们之间是否存在关联,这需要对基因组岛的动力学进行研究。首先,我们描述和提交了7653R全基因组序列(GenBank accession number: CP006581-CP006583),并与另外五株Mesorhizobium基因组进行了比较。7653R基因组由1条染色体和2个质粒组成,染色体大小为6,364,365bp,质粒pMhu7653Ra大小为193,835bp,质粒pMhu7653Rb大小为323,475bp。7653R与MAFF303099共有很多的直系同源蛋白,更重要地是具有一个保守的染色体框架及较大完美的保守线性区域。第二,我们鉴定出决定7653R与MAFF303099两株菌宿主特异性差异的潜在分子差别,主要集中在结瘤因子合成途径及修饰作用和几种分泌系统两个方面。第叁,我们重现了一个祖先Mesorhizobium基因组岛,这个基因组岛在不同的Mesorhizobium菌株中经历了不同的变化,并分析了7653R共生质粒起源于祖先基因组岛的可能性。上述的基因组比较研究结果揭示：(1)直系同源蛋白及线性分析能够明确地将MAFF303099归类为M. huakuii;(2)结瘤因子,Ⅲ型分泌系统,Ⅳ型分泌系统及Ⅵ型分泌系统的差别可能是导致它们独特宿主特异性的原因；(3)对于中慢生根瘤菌来说,类似的染色体特定位置普遍存在一个基因组岛;7653R质粒可能是由其祖先染色体上的基因组岛剪切形成的。(本文来源于《华中农业大学》期刊2014-06-01）
潘悦[8]（2014）在《华癸中慢生根瘤菌7653R效应蛋白NopP的共生功能及蛋白互作研究》一文中研究指出根瘤菌可与豆科植物形成根瘤,这种共生关系的建立涉及根瘤菌与宿主植物之间复杂的基因表达调控、信号识别转导、分子间相互作用等过程。其中根瘤菌的Ⅲ型分泌效应蛋白在上述过程中发挥重要作用。在本室前期工作中,筛选获得与华癸中慢生根瘤菌(Mesorhizobium huakuii)7653RⅢ型分泌效应蛋白NopP互作的紫云英宿主蛋白NIP43,通过双分子荧光互补(BiFC)技术证实了二者在烟草细胞中的蛋白相互作用。针对7653R效应蛋白NopP的共生功能及蛋白互作研究,本文取得了如下实验结果。其一,植物盆栽和共生表型检测发现,相较于7653R,百脉根中慢生根瘤菌(Mesorhizobium loti) MAFF303099也可在紫云英上结瘤,但是共生效应差。其表现为较弱的结瘤能力,叶片偏黄,植株矮小,固氮酶活偏低。然而,7653R不能与百脉根形成共生根瘤。将M. huakuii7653R的nopP基因导入MAFF303099后接种百脉根,其共生表型与接种野生型MAFF303099的植株无显着性差异。其二,利用酵母双杂交技术,分别检测了广宿主根瘤菌(Rhizobium sp)NGR234、慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobium japonicum) USDA6以及费氏中华根瘤菌(Sinorhizobium fredii) USDA257中的NopP同源蛋白与NIP43的互作,发现B. japonicum USDA6的NopP与NIP43可以发生蛋白互作。其叁,利用插入突变技术,构建了M. huakuii7653R的nopP的失活突变株Mh-nopPmut。共生表型检测表明,突变株与宿主共生时根瘤数量减少,地上部分生物量减少,根瘤固氮酶活性无显着性差异。以上结果提供了更多的实验证据显示效应蛋白NopP与宿主蛋白NIP43互作的可靠性,也考察了NopP的突变体表型,为深入研究效应蛋白NopP在结瘤中的功能及机制奠定了良好的工作基础。(本文来源于《华中农业大学》期刊2014-06-01）
李一星,李芳,周鑫兰,谢福莉,李友国[9]（2014）在《利用细菌双杂交文库筛选华癸中慢生根瘤菌7653R中与外膜蛋白Opa22互作的蛋白》一文中研究指出为研究华癸中慢生根瘤菌(Mesorhizobium huakuii)7653R外膜蛋白Opa22在共生固氮过程中的作用机制,构建了细菌双杂交基因组随机文库,并以Opa22为诱饵,钓取与其相互作用的候选靶蛋白。结果获得12个与Opa22蛋白互作的阳性克隆,为后续研究Opa22的作用机制提供了新的线索和思路,同时也为开展根瘤菌蛋白互作的研究构筑了良好的技术平台。(本文来源于《华中农业大学学报》期刊2014年02期）
邹铮铮[10]（2013）在《华癸中慢生根瘤菌7653R sRNA的预测与初步鉴定》一文中研究指出随着生物技术的发展,人们对sRNA (small RNA)的研究逐渐深入,在植物、动物和微生物中报道的sRNA越来越多,并且建立了sRNA数据库,为sRNA的生物信息分析提供了大量资料。生物信息学分析成为预测sRNA的重要手段并被广泛采用,较为成熟的sRNA预测方法是QRNA法和deepBase法。结合Northern杂交和生物芯片等实验手段,可以进一步验证预测sRNA的真实性。本文通过QRNA预测方法,对华癸中慢生根瘤菌7653R基因组中的非编码区进行了预测,筛选获得9个候选sRNA,分别是SraG RNA、CsrBRNA、SraC RNA、 MicFRNA、RsmYRNA、HgcC RNA、RtTRNA、ISO61RNA、Qrr RNA。在查阅文献基础上对9个sRNA的可能功能、上下游结构基因的信息和作用方式进行了归纳和整理。为了进一步获得实验证据阐明9个预测的sRNA的真实性,我们通过RT-PCR证实了9个sRNA在自生培养的7653R总RNA中存在相应的转录产物,并利用Northern杂交和荧光定量RT-PCR初步查明其参与调控的生理过程。结果显示：经共生、厌氧培养和H2O2、4MNaCl、酸碱、温度等不同胁迫条件处理时,9个sRNA在7653R中均受不同胁迫条件的诱导表达,且在不同胁迫条件下表达量不同,特别是根瘤中表达量最高的是SraG RNA、HgcC RNA和RtT RNA;37℃处理时表达量最高的是CsrB RNA;10℃处理时表达量最高的是SraC RNA和ISO61RNA;H2O2处理时表达量最高的是MicF RNA、RsmYRNA和Qrr RNA.结合靶位点预测和文献分析,推测认为RtT RNA、Qrr RNA、MicF RNA可能直接调控根瘤菌共生固氮,SraG RNA、RsmYRNA、HgcC RNA可能间接发挥作用。(本文来源于《华中农业大学》期刊2013-06-01）
华癸中慢生根瘤菌论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
【目的】探究Mesorhizobium huakuii 7653R MCHK-3535基因在共生固氮中的功能。【方法】构建MCHK-3535插入失活突变体、超表达和互补菌株,对其进行共生表型鉴定;并测定各菌株的生长曲线、运动性及生物膜形成;利用qRT-PCR方法和组织表达定位分析MCHK-3535在共生过程中的时空表达特征。【结果】与野生型7653R相比,突变体Δ3535达到稳定期的生物量增加,运动性下降,生物膜形成增加。此外,MCHK-3535基因的失活会显着提高紫云英固氮能力和植物地上部分鲜重,但不影响根瘤数量及重量;且互补菌株C3535能部分回补到野生型性状,超表达菌株OV3535均无显着性差异;qRT-PCR和启动子组织表达定位发现,MCHK-3535基因主要在根瘤的侵染区、过渡区及固氮区表达,并且表达持续整个固氮期。【结论】MCHK-3535基因在自生及与紫云英共生过程中发挥重要功能,参与根瘤的正常发育并负向调控固氮酶活性。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
华癸中慢生根瘤菌论文参考文献
[1].吴和涛,谢婧,罗莎,何冬兰,李晓华.华癸中慢生根瘤菌焦磷酸硫胺素结合蛋白基因tpp的功能研究[J].华中农业大学学报.2019
[2].于艳霞,佀再勇,曾小波,李友国.华癸中慢生根瘤菌7653RMCHK-3535基因在自生和与紫云英共生中的功能[J].微生物学报.2019
[3].殷杰.华癸中慢生根瘤菌谷胱甘肽合成酶基因gshB的功能研究[D].中南民族大学.2018
[4].李振鹏,马春草,谢福莉,陈大松,李友国.华癸中慢生根瘤菌7653RSraGsRNA的共生固氮功能[J].华中农业大学学报.2016
[5].路达,彭杰丽,谢福莉,陈大松,李友国.华癸中慢生根瘤菌7653RMCHK_8182基因的共生固氮功能[J].华中农业大学学报.2016
[6].彭杰丽.基于全局转录组分析研究华癸中慢生根瘤菌7653R类菌体分化和固氮机理[D].华中农业大学.2014
[7].王善明.华癸中慢生根瘤菌7653R全基因组测序及比较基因组学研究[D].华中农业大学.2014
[8].潘悦.华癸中慢生根瘤菌7653R效应蛋白NopP的共生功能及蛋白互作研究[D].华中农业大学.2014
[9].李一星,李芳,周鑫兰,谢福莉,李友国.利用细菌双杂交文库筛选华癸中慢生根瘤菌7653R中与外膜蛋白Opa22互作的蛋白[J].华中农业大学学报.2014
[10].邹铮铮.华癸中慢生根瘤菌7653RsRNA的预测与初步鉴定[D].华中农业大学.2013
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