导读:本文包含了手霉素论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:前列腺癌,凋亡,手霉素,H2AX
手霉素论文文献综述
李劲高,陈景,佘妙容[1]（2018）在《手霉素通过上调P53诱导22Rv1前列腺癌细胞凋亡》一文中研究指出目的探讨手霉素对前列腺癌(prostate cancer,PC)细胞株22Rv1细胞的作用及其机制。方法使用MTT细胞毒性测定法评价人22Rv1细胞的活性,使用Annexin v和碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)染料标记细胞,应用流式细胞术检测细胞凋亡。采用免疫印迹技术检测Caspase-3、H2AX和P53蛋白的表达。结果手霉素有效杀伤前列腺癌22Rv1细胞,随着手霉素剂量的增加,细胞活性逐渐下降。手霉素能诱导22Rv1细胞凋亡,早期凋亡率和晚期凋亡率均增加。手霉素通过caspase途径有效诱导22Rv1细胞凋亡。同时手霉素快速增加22Rv1细胞H2AX磷酸化和上调P53的表达。结论手霉素通过上调P53的表达和激活H2AX诱导前列腺癌细胞凋亡,杀伤前列腺癌细胞。(本文来源于《实用医学杂志》期刊2018年11期）
黄晖婷[2]（2017）在《手霉素通过诱导ROS生成逆转白血病干细胞对allo-NK细胞的杀伤抵抗》一文中研究指出背景与目的急性髓性白血病(Acute myeloid Leukemia,AML)是起源于骨髓造血干细胞的恶性疾病,约占成人急性白血病(Acute Leukemia,AL)的80%。近年来,随着联合化疗和异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT)的不断发展明显改善了 AML病人的疗效,患者的完全缓解(complete remission,CR)率和无病生存率(disease free survival,DFS)都显着提高,但仍然有15%～25%的患者对化疗或者免疫治疗抵抗,超过60%的患者最终复发死亡。AML难治复发的根本原因是白血病干细胞(Leukemic stem cells,LSCs)的存在,LSCs对常规化疗药物耐药且对allo-HSCT后起关键杀伤作用的同种异体反应性自然杀伤细胞(allo-reactionNK,allo-NK)抵抗,残存的LSCs最终导致AML复发。因此,我们迫切需要新的治疗方法逆转LSCs的耐药和对allo-NK细胞杀伤抵抗,清除LSCs,最终治愈AML。Allo-NK细胞是机体固有免疫系统的主要成分之一,通过表达活化性受体和抑制性受体来识别异常和正常组织细胞。allo-NK细胞对包括白血病在内的多种肿瘤细胞,均有杀伤作用。NK细胞通过其表面的NKG2D和肿瘤细胞表面表达的NKG2D配体结合而激活,激活后的NK细胞能分泌穿孔素和颗粒酶来溶解肿瘤细胞;同时Allo-NK细胞表面表达的TRAIL和FasL,能和肿瘤细胞表面的DR4/5以及Fas结合,通过外源性凋亡途径诱导肿瘤细胞凋亡。allo-NK细胞对白血病细胞的杀伤活性受NKG2DL表达水平的影响,而白血病细胞通过不表达或低表达NKG2DL逃避NK细胞的杀伤。因此,有可能通过调节免疫激活物在LSCs的表达增强其被allo-NK杀伤的作用。LSCs存在多个信号通路异常,其中PI3K/AKT及NF-κB在导致LSCs凋亡抵抗及逃逸免疫治疗中起重要作用。手霉素(Manumycin,Manu)是链霉菌产生的天然抗生素,对多种肿瘤细胞有杀伤作用。我们前期的研究发现Manu能诱导NO产生,并通过线粒体凋亡途径诱导白血病细胞。手霉素可部分诱导LSCs凋亡,并能通过上调NKG2D配体恢复LSCs被allo-NK细胞杀伤的敏感性。但手霉素对LSCs的确切作用和机制尚不清楚。因此,本研究拟利用自建的LSC模型和分选自复发AML病人的LSCs,测定手霉素处理前后LSCs细胞活性,ROS生成及细胞凋亡情况,检测手霉素对LSCs表达NKG2DL及PI3K/AKT和NF-κB的影响,探讨ROS和PI3K/AKT/NF-κB在手霉素调控LSCs表达免疫激活物中的作用,旨在阐明手霉素调控LSCs表达免疫激活物的作用及其机制,为有效激活allo-NK细胞清除LSCs提供新靶点。方法第一章Manu提高LSCs被allo-NK细胞杀伤的敏感性1.从KGla细胞株分选CD34+CD38-LSCs及纯度检测;2.从健康人外周血分出单个核细胞,加入人IL-2、L-15诱导allo-NK细胞形成;3.LDH法检测Manu对allo-NK细胞杀伤KGla细胞株分选出LSCs的作用;第二章Manu诱导LSCs凋亡及ROS生成流式细胞术分别检测Manu对LSCs凋亡和ROS生成的影响。第叁章Manu上调死亡受体DR5,下调PI3K/AKT/NF-KB在LSCs的表达l.Western-blot法检测Manu干预后LSCs中外源性凋亡通路中关键蛋白DR5的表达情况。2.Western-blot法检测Manu干预后LSCs中PI3K/AKT/NF-κB信号通路的关键蛋白 PI3K,p-PI3K,AKT,p-AKT,NF-κB 的表达情况。第四章Manu提高LSCs被allo-NK细胞杀伤需ROS的参与1.流式细胞术检测NAC对Manu诱导LSCs产生ROS的抑制作用。2.Western-blot 法检测 NAC 对 Manu 调控 LSCs 表达 DR5、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT,NF-κB等蛋白的影响。3.流式细胞术检测NAC对LSCs细胞表达ULBP3和MICA/B的影响。4.LDH法检测NAC对Manu增强LSCs细胞被allo-NK细胞杀伤的影响。5.LDH法检测阻断LSCs表面NKG2DL与allo-NK表面NKG2D结合后allo-NK对LSCs杀伤的影响。结果第一章Manu提高LSCs被allo-NK细胞杀伤的敏感性1.从KGla细胞株分选LSCs及纯度检测从KGla细胞株分选出CD34+CD38-型LSCs;流式结果显示CD34+CD38-型LSCs占96%以上。2.成功分离allo-NK细胞从健康人的外周血中分离出单个核细胞,加入人IL-2、L-15诱导allo-NK细胞形成。发现allo-NK增殖速度较快,细胞呈圆形小而透亮,成团样聚集生长。3.Manu提高LSCs对allo-NK细胞杀伤的敏感性LDH检测结果显示:与对照组及allo-NK细胞组相比,Manu+allo-NK细胞组的杀伤率明显增加,各组的杀伤率分别为:0.73±0.26%、1.77±0.46%、76.68±14.44%、103.79±9.10%,各组间差异有统计学意义(F=113.691,P<0.05)。与NK细胞组相比,Manu+NK组的杀伤率明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。第二章Manu诱导LSCs凋亡及ROS生成1.Manu诱导LSCs凋亡流式结果显示Manu作用于LSCs 6h即开始出现凋亡,且随着时间的延长,LSCs的凋亡率逐渐升高,时间点Oh、6h、12h、18h、24h凋亡率的差别有统计学意义(F=4.251,P=0.029)。2.Manu诱导白血病干细胞ROS生成流式结果表明Manu作用于LSCs 3h即开始出现明显的ROS生成,3h、6h、12hROS的生成与Oh相比,差异有统计学意义(F=102.187,P=0.00)。第叁章Manu上调死亡受体DR5,下调PI3K/AKT/NF-κB在LSCs的表达1.手霉素上调DR5在LSCs的表达Manu处理LSCs后,Western-blot检测DR5的表达情况。结果显示:Manu上调LSCs中DR5的表达且随作用时间的延长DR5表达量增加。2.手霉素下调PI3k/Akt/NF-κB在LSCs的表达Manu干预LSCs后Western-blot检测相关蛋白的表达情况。结果显示:Manu下调 PI3K、P-PI3K、AKT、p-AKT、NF-κB 等蛋白的表达。第四章Manu提高LSCs被allo-NK细胞杀伤需ROS的参与1.NAC阻断Manu诱导的LSCs生成ROS和凋亡流式结果显示NAC本省不影响LSCs生成ROS的凋亡,但NAC可明显阻断Manu诱导LSCs生成ROS和凋亡。各组间ROS生成及凋亡的差异有统计学意义(F=19.79,P=0.00;F=695.36,P=0.00)。结果提示:Manu 诱导 LSCs 凋亡需要ROS参与。2.NAC抑制Manu下调LSCs表达PI3K/AKT/NF-κB等蛋白结果显示 NAC 本身不影响 LSCs 的 PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT,NF-κB等蛋白的表达,但NAC阻断Manu下调LSCs中PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT,NF-κB等蛋白的表达,提示ROS生成处于PBK/AKT/NF-κB信号通路上游。3.NAC抑制Manu上调LSCs中死亡受体DR5的表达结果显示NAC本身不影响LSCS的DR5蛋白表达,但NAC可抑制Manu上调LSCs中DR5的表达。4.NAC 抑制 Manu 上调 LSCsNKG2D 配体(ULBP3 和 MICA/B)的表达流式结果显示Manu明显上调LSCs表面ULBP3和MICA/B的表达,NAC本身不影响ULBP3和MICA/B的表达。NAC抑制Manu上调LSCsNKG2D配体(ULBP3和MICA/B)的表达。5.NAC抑制Manu增强LSCs被allo-NK细胞杀伤的影响。LDH结果显示Manu增强了 LSCs被allo-NK细胞杀伤的敏感性,而NAC抑制了 Manu增强LSCs被allo-NK杀伤的敏感性。6.阻断LSCs表面NKG2DL与allo-NK表面NKG2D结合后LSCs可逃避allo-NK细胞介导的杀伤。LDH结果显示:以人NKG2D Fc嵌合体阻断LSCs表面NKG2DL与allo-NK细胞表面NKG2D的结合后,Manu对allo-NK杀伤LSCs的增敏作用明显减弱。结论1.Manu提高LSCs被allo-NK细胞杀伤的敏感性。2.Manu可诱导LSCs的ROS生成和凋亡。3.Manu可下调PI3K/AKT/NF-κB蛋白的表达,上调LSCs表达DR5,激活外源性凋亡通路。4.Manu诱导LSCs生成ROS,且ROS处于PI3K/AKT/NF-KB信号通路和外源性凋亡通路的上游。5.Manu通过上调LSCs表面的NKG2DL而增强LSCs被allo-NK细胞杀伤。6.Manu通过诱导ROS生成逆转白血病干细胞对allo-NK细胞的杀伤抵抗。(本文来源于《南方医科大学》期刊2017-05-25）
黄晖婷,李劲高,肖定璋,陈景,佘妙容[3]（2017）在《手霉素通过阻断PI3K/Akt信号通路诱导U937白血病细胞凋亡》一文中研究指出目的:探讨手霉素对U937白血病细胞的作用及其机制。方法:2μmol/L的手霉素处理U937白血病细胞不同时间,分别使用Annexin V/PI试剂及ROS检测试剂标记细胞后,应用流式细胞术检测细胞凋亡及细胞内ROS生成,免疫印迹术检测PI3K、P-Akt、Akt等蛋白的表达。结果:与0 h对照组相比,随着处理时间的延长,手霉素诱导的U937细胞凋亡(P<0.05)及ROS生成逐渐增加(P<0.05),对PI3K/Akt信号通路活化的抑制逐渐增强。N-乙酰基-L-半胱氨酸(NAC)(能有效抑制ROS产生的物质)可以阻断手霉素对U937细胞内PI3K/Akt信号通路的抑制及手霉素诱导的U937细胞凋亡。结论:手霉素通过诱导ROS产生进而抑制PI3K/Akt信号通路活化来诱导U937细胞凋亡。(本文来源于《实用医学杂志》期刊2017年07期）
李劲高,黄晖婷,李倩,宛霞,佘妙容[4]（2016）在《手霉素对甲状腺癌KAT-18细胞的作用及其机制》一文中研究指出目的:探讨手霉素对甲状腺未分化癌KAT-18细胞株的作用及其机制。方法:使用SRB细胞毒性测定法评价KAT-18细胞的活性,使用Annexin v和一氧化氮(NO)染料标记细胞,应用流式细胞术检测细胞内NO生成和细胞凋亡,二氢乙啶(DHE)方法测定细胞内超氧阴离子。应用化学发光法测定超氧歧化酶(SOD)活性,Mn-SOD的表达采用免疫印迹技术检测。谷胱甘肽(GSH)含量采用荧光法测定。结果:手霉素有效杀伤KAT-18细胞,随着手霉素剂量的增加,细胞活性逐渐下降。手霉素诱导产生NO和超氧阴离子,降低GSH,但不影响Mn-SOD的蛋白表达和6 h的SOD活性,但24 h的SOD活性代偿性增加。手霉素诱导的凋亡与NO和超氧阴离子增加及GSH下降有关。用N-乙酰基-L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)抑制NO和超氧阴离子产生,提高GSH可减少手霉素诱导KAT-18细胞凋亡,从而逃避细胞被手霉素杀伤。结论:手霉素通过细胞内NO和超氧阴离子的产生诱导甲状腺癌细胞凋亡,杀伤甲状腺癌细胞。(本文来源于《实用医学杂志》期刊2016年15期）
李倩[5]（2016）在《手霉素增强白血病干细胞被NK细胞杀伤的敏感性》一文中研究指出背景与目的急性髓系白血病(acute myeloid leukaemia,AML)是一类恶性克隆性异质性疾病,具有病情凶险,病死率高,易复发的特点。大量的研究表明患者体内残留的白血病干细胞(leukemia stem cell, LSC)是白血病耐药和复发的根源,因此清除LSC成为根治AML的关键。目前关于LSC的来源仍没有明确的结论,但比较公认的说法是LSC源自于HSC的基因突变。近年来,AML的治疗已取得较大进步,其治疗方法主要是化疗和异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT),但有大量患者仍然会复发。复发的原因主要是LSC对常规化疗药物耐药,残留的LSC具有自我更新、增殖及分化功能,产生白血病细胞,从而导致AML患者复发。Allo-HSCT是治愈AML的重要方法,同种异体反应性NK细胞(allo-NK)在移植物抗白血病效应中起关键作用,但具有药物抵抗和allo-NK细胞抵抗的LSC导致的移植后复发仍是AML治疗的难点,因此研究NK细胞对LSC的免疫作用对治疗AML具有重要的作用。Allo-NK细胞作为固有免疫系统的重要成分,具有识别正常和异常组织细胞的能力,其表面表达活化性受体(KAR)和抑制性受体(KIR),一般情况下,正常组织细胞上杀伤细胞抑制性信号占主导地位,故NK细胞不会杀伤正常组织,避免了自身免疫性疾病的发生,然而肿瘤细胞由于失去KIR的抑制作用,使活化性受体KAR占主导地位,活化性受体DNAM-1和NKG2D与肿瘤细胞表面免疫激活物(配体)结合后,激活NK细胞,一方面,NK细胞分泌穿孔素和颗粒酶等直接使肿瘤细胞溶解破坏,另一方面,NK细胞表达的TRAIL和FasL能够与肿瘤细胞表面死亡受体DR4/5和Fas结合,诱导肿瘤细胞通过外源性凋亡途径凋亡。其中,活化性受体NKG2D与其配体MHC样分子(MHC class Ⅰ chain related A and B,MICA/B)、UL16结合蛋白家族成员(UL16-binding protein 1-3,ULBP1-3),构成抗肿瘤免疫监视的重要信号途径。allo-NK细胞对白血病细胞的杀伤活性受NKG2D配体表达水平的影响。白血病细胞通过不表达或低表达NKG2D配体逃逸机体的免疫监视,我们前期研究也发现LSC低表达NKG2D配体,LSC可能通过改变NK细胞受体的配体表达水平逃避免疫活性细胞的识别从而逃逸机体的免疫监视。因此,有可能通过调节免疫激活物在LSC的表达增强免疫细胞的抗肿瘤作用,这对清除LSC有重要的意义。研究表明,LSC存在多个信号转导系统异常激活,其中RAS信号通路在凋亡抵抗及逃逸免疫治疗中起重要作用。RAS是ras原癌基因的蛋白产物。细胞浆前体形式的RAS须经法尼基化修饰才能定位于细胞膜内侧,从而传导酪氨酸激酶的有丝分裂信号。RAS信号通路不但可通过激活PI3K/AKT促使LSC抵抗凋亡,也可能促使LSC下调NKG2D配体表达抵抗NK细胞的杀伤逃逸免疫治疗。有研究发现激活ras基因及DNA甲基转移酶的活性与NKG2D表达降低相关。手霉素(Manumycin)具有抑制法尼基转移酶的作用,其治疗肿瘤是基于RAS癌基因及相关信号通路的研究。手霉素酰胺侧链与法尼基焦磷酸酯的异戊二烯基团类似,与法尼基焦磷酸酯竞争性结合法尼基转移酶,可以阻断RAS相关的促有丝分裂作用,从而能诱导肿瘤细胞的凋亡,因此我们设想手霉素与免疫调节作用相关,通过测定手霉素处理前后LSC细胞活性变化、手霉素对LSC被NK细胞杀伤敏感性的影响、对NK细胞诱导LSC凋亡的影响以及检测手霉素对LSC表达免疫激活物(NKG2DL)及相关凋亡蛋白的影响,探讨手霉素免疫增敏的作用及机制。方法第一章手霉素增强NK细胞对LSC的杀伤及凋亡1.CD34+CD38-LSC的分选及纯度检测；分离纯化allo-NK细胞；CCK-8实验方法检测不同浓度手霉素对LSC的细胞毒性；LDH法检测NK细胞(NK-92细胞及allo-NK细胞)对LSC的杀伤作用；流式细胞术检测allo-NK细胞诱导LSC凋亡。2.实验数据采用SPSS20.0软件进行分析,以均数±标准差(X±s)表示。两组比较采用独立样本t检验进行分析,多组比较采用单因素方差分析进行分析,不同效靶比间NK-92/allo-NK细胞的杀伤活性比较采用析因设计方差分析进行分析；P<0.05表示差异有统计学意义。第二章手霉素增强NK细胞对LSC的杀伤及凋亡相关机制1.流式细胞术检测手霉素干预前后LSC及阳性对照K562细胞表面NKG2D配体MICA/B和ULBP1-3的表达；Western-blot法检测手霉素对LSC内源性及外源性凋亡途径关键蛋白分子的影响；2.实验数据采用SPSS 20.0软件进行分析,以均数±标准差(X±s)表示。K562细胞与LSC表面NKG2D配体表达、手霉素处理前后LSC细胞表面NKG2D配体表达均采用独立样本t检验；P<0.05表示差异有统计学意义。结果第一章手霉素增强NK细胞对LSC的杀伤及凋亡1.CD34+CD38-LSC的分选及纯度检测采用免疫磁珠分选(负选)方法从KGla细胞株中分选CD34+CD38-LSC细胞,流式细胞术检测分选细胞表面CD34+CD38-抗原表达率为99.98%。2.分离纯化allo-NK细胞的形态健康志愿者外周血分离出的PBMC,经Human rlL-2、Human rIL-15诱导刺激的第二天即开始分裂增殖,细胞生长较快,allo-NK细胞体积较小,圆形透亮,呈团簇状生长。3.手霉素对LSC的毒性不同浓度的手霉素处理LSC 24 h后,发现手霉素对于LSC具有细胞毒性,且毒性呈剂量依赖性,随着手霉素浓度的升高,对LSC的生存抑制作用越强。当手霉素浓度达到4umol/1时,LSC达到半数抑制,即IC50为4umol/l。4.手霉素对NK细胞杀伤LSC的影响LDH法检测结果显示,与对NK-92细胞杀伤敏感的K562细胞相比,LSC对NK-92细胞的杀伤敏感性低,在效靶比为5：1、10：1、20：1时,NK-92细胞株对K562细胞和LSC的杀伤率分别为：(47.00±4.31% Vs24.08±1.23%、53.58±3.09% Vs27.91±2.11%、67.97±3.09% Vs 34.8±4.12%),两组细胞在不同效靶比间的被杀伤率比较差异均有统计学意义(F=4.055,P<0.05)。同样地,与对allo-NK细胞杀伤敏感的K562细胞相比,LSC对allo-NK细胞的杀伤敏感性也较低,在效靶比为5：1、10：1、20：1时allo-NK细胞对K562细胞和LSC的杀伤率分别为： (43.38±1.83% Vs24.05±3.61%、66.80±1.58% Vs28.40±3.24%、73.99±4.17% Vs35.07±2.58%),两组细胞在不同效靶比间的被杀伤率比较差异有统计学意义(F=20.947,P<0.05)。手霉素4umol/1处理LSC 24 h后,LSC被NK-92细胞的杀伤敏感性明显增强,且随着效靶比的增加而增强,在效靶比为5：1、10：1、20：1时分别为(47.53±3.35% Vs24.08±1.23%、62.78±2.70% Vs27.91±2.11%、72.65±3.38% Vs34.89±4.12%),差异有统计学意义(F=9.704,P0.05); LSC被allo-NK细胞的杀伤敏感性也明显增强,且随着效靶比的增加而增强,在效靶比为5：1、10：1、20：1时分别为(71.51±2.94% Vs24.05±3.61%、89.47±1.07% Vs28.40±3.24%、93.47±0.90%Vs 35.07±2.58%),差异有统计学意义(F=11.456,P<0.05)。5.手霉素增强allo-NK细胞诱导LSC凋亡流式检测结果显示,手霉素处理组相比于对照组而言,凋亡率升高,8.16±0.36%Vs 1.19±0.37%,两组细胞凋亡率比较差异有统计学意义(P<0.05)。在效靶比为10：1时allo-NK细胞诱导LSC的凋亡率为4.13±0.33%,而手霉素4umol/1处理LSC 24 h后,allo-NK细胞诱导LSC的凋亡率是11.38±0.47%,明显增高,比较差异有统计学意义(P<0.05),表明手霉素可增强allo-NK细胞诱导LSC的凋亡。第二章手霉素增强NK细胞对LSC的杀伤及凋亡相关机制1.手霉素上调LSC表面NKG2D配体表达LSC表面NKG2D配体MICA/B、ULBP1、ULBP2、ULBP3的表达明显低于对NK细胞敏感的K562细胞,比较差异有统计学意义(P<0.05),提示LSC对NK细胞杀伤不敏感可能与NKG2D配体低表达有关,手霉素可能通过上调NKG2D配体增强NK细胞杀伤LSC。结果显示手霉素4 umol/1处理LSC 24 h后,LSC表面NKG2D配体的表达增加,MICA/B、ULBP1、ULBP2、ULBP3分别为(8.38±0.12% Vs0.62±0.26%、12.94±3.16% Vs0.33±0.15%、9.24±0.96%Vs0.83±0.15%、43.03±2.65% Vs0.66±0.44%),比较差异有统计学意义(P<0.05),表明手霉素可上调LSC表面NKG2D配体的表达。2.手霉素对LSC凋亡途径相关蛋白的影响手霉素干预LSC Oh,6h,12h,18h,24h后,提取蛋白,测定蛋白浓度,免疫印迹法检测内外源性凋亡途径关键分子的变化。结果显示：外源性凋亡途径中,Fas随干预时间的延长而逐渐表达增加,pro-caspase8逐渐减少,说明手霉素能够上调Fas蛋白表达,活化pro-caspase8,促进LSC外源性凋亡途径；线粒体凋亡途径中,pro-caspase9和pro-caspase3逐渐减少,pro-PARP在18h左右开始明显减少,蛋白表达降低,说明手霉素可能影响LSC内源性凋亡途径即线粒体途径；Bcl-2家族关键蛋白的变化：抑凋亡蛋白Bcl-xl和Bcl-2随时间延长都逐渐减少,促凋亡蛋白Bax随时间变化没有改变。结论1.手霉素对LSC具有细胞毒作用；2.LSC对NK-92细胞及allo-NK细胞抵抗,手霉素可增强LSC被NK-92细胞及allo-NK细胞的杀伤敏感性；3.手霉素可上调LSC表面NKG2D配体的表达增强LSC被NK-92细胞及allo-NK细胞杀伤的敏感性；4.手霉素增强LSC被NK-92细胞及allo-NK细胞杀伤的敏感性可能与其上调外源性凋亡通路关键分子Fas和下调Bcl-xl和Bcl-2,激活线粒体凋亡途径有关。(本文来源于《南方医科大学》期刊2016-03-01）
艾军,赵洪源,李巧霞,张超,单保恩[6]（2012）在《手霉素对食管癌Eca109细胞增殖和凋亡的影响》一文中研究指出目的:探讨手霉素对食管癌细胞Eca109体外增殖活性的影响及其作用机制。方法:用不同浓度的手霉素(10、20、40、80、120μmol/L)处理Eca109细胞24、48和72 h后,采用MTT方法测定肿瘤细胞生长抑制率;吉姆萨染色和透射电镜技术观察手霉素对食管癌细胞Eca109形态变化的影响;流式细胞分析技术检测手霉素对Eca109细胞周期和凋亡的影响。结果:不同浓度的手霉素对Eca109细胞增殖均有明显的抑制作用,与对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);Giemsa染色及透射电镜结果显示手霉素诱导Eca109细胞出现较典型的细胞凋亡形态学变化及超微结构改变;流式细胞分析结果显示,10、20、40、80和120μmol/L的手霉素作用Eca109细胞48 h后的细胞凋亡率分别为4.520%±1.035%、14.490%±1.707%、28.883%±4.299%、35.107%±2.276%、47.940%±8.126%,与对照组凋亡率(1.370%±0.028%)相比,差异均具有统计学意义(P<0.05);且凋亡率呈明显的剂量依赖关系;而细胞周期分布显示G2/M期细胞显着增多。结论:手霉素体外可显着抑制人食管癌细胞Eca109增殖,诱导细胞凋亡可能是其重要途径。(本文来源于《癌变·畸变·突变》期刊2012年04期）
张正茂,兰静,杨雪梅,顾来梅,刘洁[7]（2011）在《手霉素联合顺铂对人卵巢癌细胞3AO的增殖抑制作用》一文中研究指出目的:研究手霉素联合顺铂对人卵巢癌细胞3AO体外增殖及裸鼠移植瘤生长的抑制作用,并探讨其机制。方法:MTT法检测手霉素及手霉素联合顺铂对3AO细胞的体外增殖抑制作用;建立人卵巢癌裸鼠移植瘤模型,采用免疫组织化学SP法检测手霉素及手霉素联合顺铂对移植瘤组织survivin、NF-κB、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)和caspase-3蛋白的表达,FCM检测移植瘤细胞周期和细胞凋亡率的变化。结果:手霉素对3AO细胞的增殖有明显抑制作用,且呈时间和剂量依赖效应(P<0.05)。手霉素可增强顺铂对3AO细胞的增殖抑制作用,随着手霉素浓度的增加(10～40 μmol/L),对3AO细胞的增殖抑制作用增强。手霉素或顺铂单药组以及联合用药组的裸鼠移植瘤体积均明显小于对照组,其中联合用药组裸鼠移植瘤体积明显小于手霉素或顺铂单药组(P<0.05)。各给药组裸鼠移植瘤组织中survivin、NF-κB和VEGF蛋白的表达水平均低于对照组(P<0.05),其中联合用药组又明显低于各单药组(P<0.05);各给药组caspase-3蛋白的表达水平均明显高于对照组(P<0.05)。手霉素单药组、顺铂单药组和手霉素联合顺铂组的细胞凋亡率依次升高,与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,G0/G1期细胞依次减少(P<0.05),G2/M期细胞依次增多(P<0.05),S期细胞变化不明显。结论:手霉素联合顺铂可明显抑制3AO细胞的体内外增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与下调survivin、NF-κB和VEGF以及上调caspase-3蛋白的表达有关。(本文来源于《肿瘤》期刊2011年03期）
曹丽娜[8]（2011）在《手霉素对人髓系白血病细胞株K562的增殖抑制作用及机理研究》一文中研究指出本文旨在观察法尼基转移酶抑制剂手霉素对白血病K562细胞增殖的抑制作用,以及对增殖相关基因survivin蛋白表达的影响,为手霉素用于白血病的治疗提供理论依据和实验基础。本实验采用不同浓度的手霉素分别作用于K562细胞24、48.72h、MTT检测细胞增殖的抑制作用；随后用不同浓度的手霉素作用K562细胞48h, Western blot检测survivin蛋白的表达情况,结果显示,法尼基转移酶抑制剂手霉素能抑制K562细胞的增殖,其作用是时间和剂量依赖性。手霉素能下调survivin蛋白的表达,呈浓度依赖性。法尼基转移酶抑制剂手霉素抑制白血病细胞的增殖可能是由于手霉素下调survivin蛋白的表达进而影响细胞增殖。(本文来源于《吉林大学》期刊2011-03-01）
姜振宇,马宁,张彦东,姚程[9]（2010）在《手霉素对白血病干细胞和骨髓干细胞的细胞毒作用》一文中研究指出目的探讨手霉素对白血病干细胞(LSC)的细胞毒作用。方法采用MTT法检测手霉素对LSC的细胞增殖抑制作用,采用Annex-inⅤ-FITC法检测LSC细胞凋亡情况并采用流式细胞术分析细胞周期。结果随着手霉素浓度的增高,LSC细胞增生抑制率明显增高,细胞凋亡率也逐渐增高,且阻滞于G2/M期的细胞比率明显增加。结论手霉素通过阻滞LSC于G2/M期,促进凋亡而抑制其增长,而对正常造血干细胞(HSC)无细胞毒作用。(本文来源于《中国老年学杂志》期刊2010年16期）
张正茂,顾来梅,刘洁,张超,张风华[10]（2010）在《手霉素对人卵巢癌3AO细胞增殖和凋亡的影响》一文中研究指出目的:探讨手霉素对人卵巢癌3AO细胞体外增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制。方法:MTT法检测手霉素对3AO细胞的增殖抑制作用;Giemsa染色、透射电子显微镜下观察及FCM分析手霉素对3AO细胞的凋亡诱导作用;FCM检测手霉素对3AO细胞ras、survivin和核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)(p65)蛋白表达的影响。结果:手霉素能显着抑制3AO细胞的增殖(P<0.05),并且这种抑制作用随着手霉素浓度的增加和作用时间的延长而增强。Giemsa染色和透射电子显微镜下观察发现,手霉素可诱导3AO细胞出现典型的凋亡形态学变化及超微结构改变。FCM分析结果显示,与对照组相比,手霉素诱导3AO细胞凋亡率明显增加(P<0.05),细胞周期中的G2/M期细胞也明显增加(P<0.05);3AO细胞的ras、NF-κB(p65)和survivin蛋白的表达水平明显下降(P<0.05)。结论:手霉素可明显抑制人卵巢癌3AO细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与下调细胞ras、NF-κB(p65)和survivin蛋白的表达有关。(本文来源于《肿瘤》期刊2010年08期）
手霉素论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
背景与目的急性髓性白血病(Acute myeloid Leukemia,AML)是起源于骨髓造血干细胞的恶性疾病,约占成人急性白血病(Acute Leukemia,AL)的80%。近年来,随着联合化疗和异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT)的不断发展明显改善了 AML病人的疗效,患者的完全缓解(complete remission,CR)率和无病生存率(disease free survival,DFS)都显着提高,但仍然有15%～25%的患者对化疗或者免疫治疗抵抗,超过60%的患者最终复发死亡。AML难治复发的根本原因是白血病干细胞(Leukemic stem cells,LSCs)的存在,LSCs对常规化疗药物耐药且对allo-HSCT后起关键杀伤作用的同种异体反应性自然杀伤细胞(allo-reactionNK,allo-NK)抵抗,残存的LSCs最终导致AML复发。因此,我们迫切需要新的治疗方法逆转LSCs的耐药和对allo-NK细胞杀伤抵抗,清除LSCs,最终治愈AML。Allo-NK细胞是机体固有免疫系统的主要成分之一,通过表达活化性受体和抑制性受体来识别异常和正常组织细胞。allo-NK细胞对包括白血病在内的多种肿瘤细胞,均有杀伤作用。NK细胞通过其表面的NKG2D和肿瘤细胞表面表达的NKG2D配体结合而激活,激活后的NK细胞能分泌穿孔素和颗粒酶来溶解肿瘤细胞;同时Allo-NK细胞表面表达的TRAIL和FasL,能和肿瘤细胞表面的DR4/5以及Fas结合,通过外源性凋亡途径诱导肿瘤细胞凋亡。allo-NK细胞对白血病细胞的杀伤活性受NKG2DL表达水平的影响,而白血病细胞通过不表达或低表达NKG2DL逃避NK细胞的杀伤。因此,有可能通过调节免疫激活物在LSCs的表达增强其被allo-NK杀伤的作用。LSCs存在多个信号通路异常,其中PI3K/AKT及NF-κB在导致LSCs凋亡抵抗及逃逸免疫治疗中起重要作用。手霉素(Manumycin,Manu)是链霉菌产生的天然抗生素,对多种肿瘤细胞有杀伤作用。我们前期的研究发现Manu能诱导NO产生,并通过线粒体凋亡途径诱导白血病细胞。手霉素可部分诱导LSCs凋亡,并能通过上调NKG2D配体恢复LSCs被allo-NK细胞杀伤的敏感性。但手霉素对LSCs的确切作用和机制尚不清楚。因此,本研究拟利用自建的LSC模型和分选自复发AML病人的LSCs,测定手霉素处理前后LSCs细胞活性,ROS生成及细胞凋亡情况,检测手霉素对LSCs表达NKG2DL及PI3K/AKT和NF-κB的影响,探讨ROS和PI3K/AKT/NF-κB在手霉素调控LSCs表达免疫激活物中的作用,旨在阐明手霉素调控LSCs表达免疫激活物的作用及其机制,为有效激活allo-NK细胞清除LSCs提供新靶点。方法第一章Manu提高LSCs被allo-NK细胞杀伤的敏感性1.从KGla细胞株分选CD34+CD38-LSCs及纯度检测;2.从健康人外周血分出单个核细胞,加入人IL-2、L-15诱导allo-NK细胞形成;3.LDH法检测Manu对allo-NK细胞杀伤KGla细胞株分选出LSCs的作用;第二章Manu诱导LSCs凋亡及ROS生成流式细胞术分别检测Manu对LSCs凋亡和ROS生成的影响。第叁章Manu上调死亡受体DR5,下调PI3K/AKT/NF-KB在LSCs的表达l.Western-blot法检测Manu干预后LSCs中外源性凋亡通路中关键蛋白DR5的表达情况。2.Western-blot法检测Manu干预后LSCs中PI3K/AKT/NF-κB信号通路的关键蛋白 PI3K,p-PI3K,AKT,p-AKT,NF-κB 的表达情况。第四章Manu提高LSCs被allo-NK细胞杀伤需ROS的参与1.流式细胞术检测NAC对Manu诱导LSCs产生ROS的抑制作用。2.Western-blot 法检测 NAC 对 Manu 调控 LSCs 表达 DR5、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT,NF-κB等蛋白的影响。3.流式细胞术检测NAC对LSCs细胞表达ULBP3和MICA/B的影响。4.LDH法检测NAC对Manu增强LSCs细胞被allo-NK细胞杀伤的影响。5.LDH法检测阻断LSCs表面NKG2DL与allo-NK表面NKG2D结合后allo-NK对LSCs杀伤的影响。结果第一章Manu提高LSCs被allo-NK细胞杀伤的敏感性1.从KGla细胞株分选LSCs及纯度检测从KGla细胞株分选出CD34+CD38-型LSCs;流式结果显示CD34+CD38-型LSCs占96%以上。2.成功分离allo-NK细胞从健康人的外周血中分离出单个核细胞,加入人IL-2、L-15诱导allo-NK细胞形成。发现allo-NK增殖速度较快,细胞呈圆形小而透亮,成团样聚集生长。3.Manu提高LSCs对allo-NK细胞杀伤的敏感性LDH检测结果显示:与对照组及allo-NK细胞组相比,Manu+allo-NK细胞组的杀伤率明显增加,各组的杀伤率分别为:0.73±0.26%、1.77±0.46%、76.68±14.44%、103.79±9.10%,各组间差异有统计学意义(F=113.691,P<0.05)。与NK细胞组相比,Manu+NK组的杀伤率明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。第二章Manu诱导LSCs凋亡及ROS生成1.Manu诱导LSCs凋亡流式结果显示Manu作用于LSCs 6h即开始出现凋亡,且随着时间的延长,LSCs的凋亡率逐渐升高,时间点Oh、6h、12h、18h、24h凋亡率的差别有统计学意义(F=4.251,P=0.029)。2.Manu诱导白血病干细胞ROS生成流式结果表明Manu作用于LSCs 3h即开始出现明显的ROS生成,3h、6h、12hROS的生成与Oh相比,差异有统计学意义(F=102.187,P=0.00)。第叁章Manu上调死亡受体DR5,下调PI3K/AKT/NF-κB在LSCs的表达1.手霉素上调DR5在LSCs的表达Manu处理LSCs后,Western-blot检测DR5的表达情况。结果显示:Manu上调LSCs中DR5的表达且随作用时间的延长DR5表达量增加。2.手霉素下调PI3k/Akt/NF-κB在LSCs的表达Manu干预LSCs后Western-blot检测相关蛋白的表达情况。结果显示:Manu下调 PI3K、P-PI3K、AKT、p-AKT、NF-κB 等蛋白的表达。第四章Manu提高LSCs被allo-NK细胞杀伤需ROS的参与1.NAC阻断Manu诱导的LSCs生成ROS和凋亡流式结果显示NAC本省不影响LSCs生成ROS的凋亡,但NAC可明显阻断Manu诱导LSCs生成ROS和凋亡。各组间ROS生成及凋亡的差异有统计学意义(F=19.79,P=0.00;F=695.36,P=0.00)。结果提示:Manu 诱导 LSCs 凋亡需要ROS参与。2.NAC抑制Manu下调LSCs表达PI3K/AKT/NF-κB等蛋白结果显示 NAC 本身不影响 LSCs 的 PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT,NF-κB等蛋白的表达,但NAC阻断Manu下调LSCs中PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT,NF-κB等蛋白的表达,提示ROS生成处于PBK/AKT/NF-κB信号通路上游。3.NAC抑制Manu上调LSCs中死亡受体DR5的表达结果显示NAC本身不影响LSCS的DR5蛋白表达,但NAC可抑制Manu上调LSCs中DR5的表达。4.NAC 抑制 Manu 上调 LSCsNKG2D 配体(ULBP3 和 MICA/B)的表达流式结果显示Manu明显上调LSCs表面ULBP3和MICA/B的表达,NAC本身不影响ULBP3和MICA/B的表达。NAC抑制Manu上调LSCsNKG2D配体(ULBP3和MICA/B)的表达。5.NAC抑制Manu增强LSCs被allo-NK细胞杀伤的影响。LDH结果显示Manu增强了 LSCs被allo-NK细胞杀伤的敏感性,而NAC抑制了 Manu增强LSCs被allo-NK杀伤的敏感性。6.阻断LSCs表面NKG2DL与allo-NK表面NKG2D结合后LSCs可逃避allo-NK细胞介导的杀伤。LDH结果显示:以人NKG2D Fc嵌合体阻断LSCs表面NKG2DL与allo-NK细胞表面NKG2D的结合后,Manu对allo-NK杀伤LSCs的增敏作用明显减弱。结论1.Manu提高LSCs被allo-NK细胞杀伤的敏感性。2.Manu可诱导LSCs的ROS生成和凋亡。3.Manu可下调PI3K/AKT/NF-κB蛋白的表达,上调LSCs表达DR5,激活外源性凋亡通路。4.Manu诱导LSCs生成ROS,且ROS处于PI3K/AKT/NF-KB信号通路和外源性凋亡通路的上游。5.Manu通过上调LSCs表面的NKG2DL而增强LSCs被allo-NK细胞杀伤。6.Manu通过诱导ROS生成逆转白血病干细胞对allo-NK细胞的杀伤抵抗。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
手霉素论文参考文献
[1].李劲高,陈景,佘妙容.手霉素通过上调P53诱导22Rv1前列腺癌细胞凋亡[J].实用医学杂志.2018
[2].黄晖婷.手霉素通过诱导ROS生成逆转白血病干细胞对allo-NK细胞的杀伤抵抗[D].南方医科大学.2017
[3].黄晖婷,李劲高,肖定璋,陈景,佘妙容.手霉素通过阻断PI3K/Akt信号通路诱导U937白血病细胞凋亡[J].实用医学杂志.2017
[4].李劲高,黄晖婷,李倩,宛霞,佘妙容.手霉素对甲状腺癌KAT-18细胞的作用及其机制[J].实用医学杂志.2016
[5].李倩.手霉素增强白血病干细胞被NK细胞杀伤的敏感性[D].南方医科大学.2016
[6].艾军,赵洪源,李巧霞,张超,单保恩.手霉素对食管癌Eca109细胞增殖和凋亡的影响[J].癌变·畸变·突变.2012
[7].张正茂,兰静,杨雪梅,顾来梅,刘洁.手霉素联合顺铂对人卵巢癌细胞3AO的增殖抑制作用[J].肿瘤.2011
[8].曹丽娜.手霉素对人髓系白血病细胞株K562的增殖抑制作用及机理研究[D].吉林大学.2011
[9].姜振宇,马宁,张彦东,姚程.手霉素对白血病干细胞和骨髓干细胞的细胞毒作用[J].中国老年学杂志.2010
[10].张正茂,顾来梅,刘洁,张超,张风华.手霉素对人卵巢癌3AO细胞增殖和凋亡的影响[J].肿瘤.2010