导读:本文包含了细胞内吞论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:毒素,孔道形成蛋白,生理功能,免疫
细胞内吞论文文献综述
张云[1]（2019）在《细菌毒素类似孔道形成蛋白调控细胞内吞溶酶体的功能和机制》一文中研究指出细胞膜系统对于界定细胞与环境的边界及维持细胞内活动的区域化是必需的。膜蛋白是细胞膜执行众多功能的最重要的载体和参与者。经典的膜蛋白如膜受体、离子通道以及转运体等在合成后直接被运往并整合到特定的细胞膜区域。另一方面,"非经典"的孔道形成蛋白(PFPs)通常是以分泌的,水溶性的单体形式存在,但特定的条件下发生一系列的构象改变而能够在膜上形成不同大小(2-50 nm)的跨膜孔道。除了目前比较明确的孔道形成蛋白在细胞死亡中发挥着重要作用外,越来越多的证据发现孔道形成蛋白在生物体中发挥了极其重要的生理病理功能。气单胞菌溶素aerolysin属于典型的细菌分泌的β桶状孔道形成毒素。包含aerolysin跨膜结构域的蛋白质称为气单胞菌溶素类似蛋白(ALPs),目前在包括脊椎动物在内的动植物中发现的ALPs的数量在不断增加。然而,关于宿主来源的ALPs的功能和机制的研究目前仍处于"起始期"。前期研究中我们以两栖动物大蹼铃蟾为研究对象,在其皮肤分泌物中鉴定到一个由ALP(BmALP1)和叁叶因子(BmTFF3)组成的复合物蛋白,将其命名为βγ-CAT。研究进一步揭示细胞膜脂筏中的酸性糖鞘脂(神经节苷脂或硫糖脂)可与βγ-CAT相互作用进而介导了其内吞入胞。药理学阻断或RNA干扰降低细胞膜表面酸性糖鞘脂含量后会显着抑制βγ-CAT的上膜、寡聚化、入胞及活性,而当细胞重新获取这些酸性糖鞘脂后,βγ-CAT的活性又得以恢复。βγ-CAT的ALP结构域与神经节苷脂相互作用,而其TFF结构域与硫糖脂相互作用,表明βγ-CAT与酸性糖鞘脂的结合呈现出一种特有的"双结合"模式(Commun Biol,2019)。当其内吞后βγ-CAT的BmALP1亚基沿着内吞溶酶体通路在内吞囊泡的膜上寡聚化并形成孔道,从而调控了内吞溶酶体的生化特性和物质交换,如胞内囊泡pH的改变,取决于不同的细胞类型和状态,该作用可产生特定的生物学效应,例如:①激活炎症小体,保护大蹼铃蟾和老鼠免受细菌的感染(PNAS,2014,cover story);②许多胞内病原体能够通过内吞小体入侵细胞,并且在内吞途径中已经适应了p H的下降。βγ-CAT可以通过阻止内吞体的酸化从而抑制胞内病原体的感染,同时激发细胞外排驱逐出病原体(J Infect Dis,2017);③该复合物不仅可以通过加快皮肤组织损伤的再上皮化来促进伤口愈合,还具有减轻创伤水肿,促进无疤痕愈合的特征(FASEB J,2019)。上述发现揭示脊椎动物ALP和TFF的蛋白复合物在保持粘膜屏障防御功能,促进物质交换和宿主免疫中发挥重要功能。(本文来源于《中国毒理学会第九次全国毒理学大会论文集》期刊2019-09-17）
杨燕燕,吉登波,杨思敏,余四旺,李中军[2]（2019）在《小分子药物LS-1-2F促进肿瘤细胞内吞大分子（英文）》一文中研究指出在之前的研究中,我们发现抗肿瘤药物LS-1-2F可以引起肿瘤细胞的空泡化现象。本文中研究了化合物LS-1-2F对大分子(包括荧光量子点、人血清白蛋白、单链RNA和单克隆抗体)内吞进入肿瘤细胞内的作用。通过激光共聚焦显微镜和流式细胞仪,研究发现LS-1-2F能促进这些大分子的内吞作用,对提高赫赛汀生物类似物内化效率的作用尤为显着。促进内吞将有助于提高耐药肿瘤细胞对液相药物的吸收效率,还有望促进纳米颗粒递送载体中药物的利用。(本文来源于《Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences》期刊2019年08期）
林珑,史岸冰[3]（2019）在《细胞内吞循环运输通路及其分子调控机制》一文中研究指出内吞运输对于细胞与外界的物质信息交流至关重要,其过程涉及对胞外大分子、膜磷脂、膜蛋白内吞及分选的精细调控。在内吞运输系统中,循环运输通路负责将膜蛋白和磷脂等送回质膜,维持质膜组成的稳定,保障多种细胞生物学过程的正常进行,如营养吸收、细胞极性形成、细胞迁移、细胞分裂、突触可塑性、免疫应答、生长因子受体调控等。真核细胞中存在两大类循环运输通路,分别是网格蛋白依赖内吞货物蛋白的循环运输(CDE货物循环)和非网格蛋白依赖内吞货物蛋白的循环运输(CIE货物循环)。在体内具有重要生理功能的转铁蛋白受体TfR和低密度脂蛋白受体LDLR是CDE循环的代表性货物膜蛋白。近年,受CIE货物循环调控的重功能膜蛋白被逐步发现,如IL2受体α-亚基、主要组织相容性复合体MHC ClassⅠ、葡萄糖转运因子GLUT4等。因而,对CIE货物循环调控机制的研究越来越受到学界关注,相关研究既有重要的细胞生物学理论意义,也能为诸如Ⅱ型糖尿病和癌症等重大疾病的诊疗策略提供科学依据和潜在治疗线索。相较于CDE货物循环,学界对CIE货物循环的研究开展较晚,对其调控机制的了解也较少。为此,本文在介绍内吞循环运输通路类型及其特点的基础上,着重关注CIE循环运输调控的分子基础,对CIE货物循环研究领域的新进展、新研究体系进行了归纳和说明。(本文来源于《遗传》期刊2019年06期）
贾康昱[4]（2019）在《细胞骨架纤维的抗弯特性及其在细胞内吞过程中的作用》一文中研究指出细胞是一个生物化学/力学高度耦合的复杂系统,从细胞宏观尺度上表现出的细胞结构形态的维持、细胞内吞、细胞粘附/迁移等生理过程,到微观尺度上表现出的对力学信号的感知和传导等生理过程,都同细胞骨架纤维的力学行为密不可分。细胞骨架纤维的主动和被动动态力学行为,在细胞的许多生理过程中起到了重要的作用。精确描述和测量单个细胞骨架纤维的力学性质,不仅能够帮助我们理解细胞这些复杂生理行为背后的微观机制,还能够为生物实验中测量皮牛量级的力提供重要依据。目前,已经有许多方法尝试测量细胞骨架纤维的抗弯刚度,但是都存在不足且结果差别很大。因此,为了揭示影响测量细胞骨架纤维抗弯力学性质的主要因素,需要对细胞骨架纤维的动态弯曲行为进行深入研究。细胞内吞行为是一个复杂的生理过程,为细胞或者生物的新陈代谢提供了重要的通路。近年来,人们对细胞内吞行为的微观分子机制进行了较为深入的研究,并且提出了许多理论和计算模型对细胞内吞行为进行分析。尽管这些模型一定程度上揭示了细胞内吞行为的微观机制,但是很少有模型考虑细胞膜的拉伸变形以及肌动蛋白细胞骨架纤维对细胞内吞行为的影响,而这些影响是不可忽略的。因此,本文对细胞骨架纤维的抗弯力学性质以及肌动蛋白细胞骨架纤维对细胞内吞过程的影响开展了研究,取得的主要成果如下:1、对传统弯曲模态分析方法的不足进行了分析,基于模态分析法和虚功原理,提出了测量细胞骨架纤维抗弯刚度的线性静态方法。接着,以ABAQUS模拟得到的纤维构型以及文献中纤维构型为样本,计算相应纤维抗弯刚度,其结果同给定值吻合较好。线性静态方法首次从理论角度揭示了采样时间间隔和壁面水动力效应对测量纤维抗弯刚度的影响,能够有效地估算纤维的抗弯刚度,特别适用于微管这种抗弯刚度较大的细胞骨架纤维。2、从波动耗散定理出发,基于模态分析法和虚功原理,提出了测量细胞骨架纤维抗弯刚度的非线性方法。然后采用非线性动态有限元——布朗动力学方法模拟了细胞骨架纤维在溶液中的布朗运动,进而以模拟构型和文献中实验观察得到的纤维构型为样本,验证了非线性方法的有效性和正确性,并同线性方法以及传统的弯曲模态分析方法进行了比较,最后还讨论了测量误差对测量纤维抗弯刚度的影响。非线性动态方法首次从理论角度揭示了溶液粘性耗散、采样时间间隔以及壁面水动力效应对测量纤维抗弯刚度的影响,能够更加准确地测量细胞骨架纤维的抗弯刚度,而且更加接近物理真实,而传统弯曲模态分析方法中所使用的能量均分定理不适用于描述纤维各阶模态中储存的平均弯曲内能。3、对细胞内吞行为研究中广泛采用的传统Canham-Helfrich模型进行了扩展。首先推导了肌动蛋白主动力、渗透压、细胞膜张力作用下细胞内吞行为的控制方程以及模态函数解法,指出了传统Canham-Helfrich模型及其求解方法的不足。然后基于共旋节点方法,提出了一种考虑细胞膜面内应变的粗粒化Canham-Helfrich模型,对细胞内吞行为进行了计算模拟,结果同文献中实验结果吻合较好。计算结果发现,尽管在其它位置,细胞膜的弯曲内能要大于轴向应变能,但是,在内凹细胞膜颈部位置附近,拉伸变形占主导,不能忽略。4、研究了肌动蛋白纤维主动力对细胞内吞行为的影响,确定了不同作用位置、角度以及非对称条件下细胞内凹所需的肌动蛋白主动力的临界载荷。发现细胞内吞位点处的肌动蛋白纤维主动力是驱动细胞膜内凹的主要机制,在特定条件下,渗透压同肌动蛋白纤维主动力一道能够促使细胞膜的外凸变形,为细胞大胞饮提供了一种可能的通路机制。(本文来源于《华中科技大学》期刊2019-05-01）
陈芳芳,张旭,谭红黎,桂亚萍,余为一[5]（2019）在《鸡恒定链协助抗原肽结合MHCⅡ类分子并进入细胞内吞体》一文中研究指出为探明鸡恒定链(invariant chain,Ii)的胞质区/跨膜区[Ii(Cyt/Tra)]作为载体是否可携带抗原肽在细胞内结合MHCⅡ类分子和进入转运途径的细胞器(内吞体),构建4个基因目的片段[Ii、Ii(Cyt/Tra)、F2(新城疫病毒F蛋白片段)和Ii(Cyt/Tra)/F2],分别将它们插入原核表达载体pET-32a和真核表达载体pmCherry-C1/N1中,构建8个重组质粒,再转入工程菌(E.coli)和人肾细胞系(293T),并应用拉下法(pull-down)检测目的蛋白与MHCⅡβ的结合,应用激光共聚焦确定它们在真核细胞与MHCⅡβ的共定位以及在内吞体的定位。结果表明,构建的重组质粒均能相应地原核或真核表达相应目的蛋白;Ii、Ii(Cyt/Tra)和Ii(Cyt/Tra)/F2不仅能够与MHCⅡβ结合,还能进入细胞内吞体;但是F2既不能与MHCⅡβ结合,也不能进入内吞体。Ii活性片段Cyt/Tra不仅本身具有结合MHCⅡβ的作用,而且还可以携带抗原肽与之结合并一起转入细胞内吞体而进入抗原递呈途径。该结果为进一步研究Ii载体转运抗原提供了理论依据。(本文来源于《畜牧兽医学报》期刊2019年02期）
陈芳芳,张旭,林海彬,谭红黎,刘雪兰[6]（2018）在《恒定链载体协助抗原肽结合MHCⅡ类分子并进入细胞内吞体》一文中研究指出为探明鸡恒定链(Invariant chain,Ii)的胞浆区/跨膜区(Ii_((Cyt/Tra)))作为载体是否可携带抗原肽在细胞内结合MHCⅡ类分子和进入转运途径的细胞器(内吞体),构建4个基因目的片段(Ii、Ii_((Cyt/Tra))、F2 (新城疫病毒F蛋白片段)和Ii_((Cyt/Tra))/F2),分别将它们插入原体表达载体pET32a和真核表达载体pmCherry-C1/N1中,构建8个重组质粒,再转入工程菌(E.coli)和人肾细胞系(293 T),并应用拉下法(Pull-down)检测目的蛋白与MHCⅡβ的结合,应用激光共聚焦确定它们在真核细胞与MHCⅡβ的共定位以及在内吞体的定位。结果表明,构建的重组质粒均能原核和真核表达相应目的蛋白;Ii、Ii_((Cyt/Tra))和Ii_((Cyt/Tra))/F2不仅能够与MHCⅡβ结合,还能进入细胞内吞体;但是F2既不能与MHCⅡβ结合,也不能进入内吞体。Ii活性片段Cyt/Tra不仅本身具有结合MHCⅡβ的作用,而且还可以携带抗原肽与之结合并一起转入细胞内吞体而进入抗原递呈途径。该结果为进一步研究Ii载体转运抗原提供了理论依据。(本文来源于《第十叁届全国免疫学学术大会摘要汇编》期刊2018-11-07）
许静[7]（2018）在《CIN85介导PTEN调控足细胞内吞Nephrin异常导致糖尿病肾病的研究》一文中研究指出目的明确足细胞内吞Nephrin异常导致蛋白尿发生,并进一步促进糖尿病肾病发生和发展的机制,从而为临床明确糖尿病肾病发生机制提供新的思路和方法。方法体内动物实验:构建CIN85过表达及敲除动物模型,体内证实CIN85激活调控足细胞内吞Nephrin蛋白,继而促进糖尿病肾病的发生和发展;应用Loxp/Cre技术,特异性敲除足细胞PTEN,体内证明PTEN下降或缺失,通过CIN85调控足细胞对Nephin蛋白的内吞及足突结构的影响;体外细胞培养:(本文来源于《中国中西医结合学会肾脏疾病专业委员会2018年学术年会论文摘要汇编》期刊2018-10-11）
李逸群[8]（2018）在《鲆鲽鱼IgM~+B细胞内吞作用及其调控机制研究》一文中研究指出越来越多的证据表明硬骨鱼类的B淋巴细胞(简称B细胞)具有内吞作用。2006年,在虹鳟鱼中首先发现了B细胞可以摄取胞外颗粒,形成吞噬溶酶体并启动下游的溶酶体降解通路。随后在多种硬骨鱼类以及两栖动物、爬行动物和哺乳动物中都发现了具有内吞功能的B细胞。尽管B细胞内吞现象已经得到广泛的认可,然而其内在的分子机制及调控仍不清楚。本研究以鲆鲽类硬骨鱼为研究对象,通过免疫学、细胞生物学以及分子生物学等研究手段,分析了IgM~+B细胞对不同大小非己颗粒的内吞效率和内吞途径,明确了不同免疫器官中IgM~+B细胞内吞活性和内吞方式的异同,探究了B细胞共受体分子CD22对B细胞以及外周血白细胞免疫激活的调控机制。利用流式细胞技术和免疫荧光显微镜观察等方法,鉴定了大菱鲆外周血白细胞中具有内吞作用的IgM~+B细胞及其形态特征,探究了外周血白细胞中IgM~+B细胞对不同大小非己颗粒的内吞效率和内吞途径。结果表明,具有内吞作用的IgM~+B细胞核质比较大、体积较小且胞内颗粒度较少,IgM~+B细胞对不同大小的荧光乳胶微球(0.1、0.5、1和2μm)的内吞效率不同,其中对0.5μm微球的内吞能力最强,对1μm微球的内吞能力次之,对0.1μm和2μm微球的内吞能力最弱。对于0.5μm荧光乳胶微球,IgM~+B细胞的内吞活性依赖于巨胞饮途径,而IgM~-细胞的内吞活性呈现出网格蛋白依赖性和小窝蛋白依赖性;对于1μm荧光乳胶微球,IgM~+B细胞主要依赖于巨胞饮途径,部分依赖于小窝蛋白介导的内吞途径,而IgM~-细胞对于1μm微球的内吞与其对0.5μm微球的内吞相似。此外,IgM~+B细胞能够同时内吞乳胶微球以及巨胞饮标志物——高分子量的右旋糖苷,并且能够通过巨胞饮途径和小窝蛋白介导内吞作用摄取灭活的大肠杆菌。上述结果表明IgM~+B细胞主要通过巨胞饮途径实现对颗粒的摄取。在牙鲆中,IgM~+B细胞在脾脏白细胞中所占的比例高于其在外周血白细胞的比例,但是具有内吞能力的脾脏IgM~+B细胞的比例低于具有内吞能力的外周血IgM~+B细胞的比例。虽然外周血白细胞和脾脏白细胞中IgM~+B细胞能够摄取非己颗粒,但对不同大小颗粒的摄取效率不同:外周血IgM~+B细胞对0.5μm荧光乳胶微球的内吞活性高于其对1μm荧光乳胶微球的内吞活性,而脾脏IgM~+B细胞对1μm荧光乳胶微球的内吞活性高于其对0.5μm荧光乳胶微球的内吞活性。巨胞饮抑制剂能够显着抑制牙鲆外周血白细胞和脾脏白细胞中IgM~+B细胞对0.5μm和1μm微球的内吞活性,而网格蛋白介导的内吞抑制剂、小窝蛋白介导的内吞抑制剂和巨胞饮途径抑制剂都可以显着抑制外周血IgM~-细胞的内吞活性。在脾脏IgM~-细胞中,网格蛋白介导的内吞抑制剂和巨胞饮途径抑制剂预处理能够显着抑制细胞的内吞活性。以上结果表明,虽然外周血IgM~+B细胞和脾脏IgM~+B细胞表现出不同的内吞活性和颗粒大小依赖的内吞效率,但两者皆主要依赖于巨胞饮途径实现对非己颗粒的内吞。在哺乳动物中,CD22是B细胞表面的共受体分子,对B细胞的免疫活性起关键的调节作用。然而,鱼类CD22的B细胞调控功能未知。本研究中我们首次研究了鱼类两个CD22分子,即牙鲆PoCD22和半滑舌鳎CsCD22。PoCD22和CsCD22具有CD22家族保守的胞外段免疫球蛋白结构域和胞质区免疫受体抑制性酪氨酸基序。其中,PoCD22蛋白广泛表达于外周血白细胞和脾脏白细胞中,且分布于几乎全部IgM~+B细胞和部分淋巴细胞样IgM~-细胞的细胞膜表面。抗体封闭PoCD22显着降低外周血IgM~+B细胞对病原细菌的内吞,同时导致胞内ROS活性显着降低;相反,抗体封闭PoCD22显着增强脾脏白细胞中的IgM~+B细胞的内吞活性以及胞内ROS含量。以上结果表明,CD22分子对牙鲆外周血IgM~+B细胞的免疫激活起正向调控作用,而对脾脏IgM~+B细胞免疫激活起负向调控作用。抗体封闭CsCD22显着增强半滑舌鳎外周血白细胞的增殖活性、吞噬活性和抗菌活性,说明CsCD22在半滑舌鳎外周血白细胞的免疫激活中起负调控作用。综上所述,本研究首次发现了硬骨鱼类的IgM~+B细胞对非己颗粒的内吞效率与颗粒物大小呈现相关性,且不同免疫器官(外周血和脾脏)中的IgM~+B细胞内吞能力存在差异;硬骨鱼类的IgM~+B细胞对非己颗粒的内吞方式主要依赖于巨胞饮途径,且B细胞共受体分子CD22在IgM~+B细胞及白细胞的免疫激活中起重要调节作用。这些结果为我们研究B细胞的吞噬和进化起源提供了新的思路,同时为海洋经济鱼类的病害防控提供了理论指导。(本文来源于《中国科学院大学(中国科学院海洋研究所)》期刊2018-06-01）
王润生,刘义灏,毛克亚[9]（2018）在《磁性纳米颗粒细胞内吞评价方法研究及进展》一文中研究指出背景:磁性纳米颗粒在肿瘤热疗、药物可控性释放、磁共振造影等领域具有广阔应用前景,生物材料与细胞的作用关系是体外研究的重要内容,磁性纳米颗粒细胞内吞评价是肿瘤热疗、药物可控性释放不可或缺的环节。目的:综述磁性纳米颗粒细胞内吞评价方法。方法:由第一作者应用计算机检索Pub Med、SCI、Embase数据库2010年1月至2017年6月关于磁性纳米颗粒细胞内吞的文章,磁性纳米颗粒选择主题词"Magnetic nanoparticles",细胞内吞选择关键词"Cellular uptake"或"Internalization"或"Endocytosis",两者采用逻辑运算符"AND"连接。结果与结论:磁性纳米颗粒细胞内吞的评价有定性和定量评估方法,其中定性评估方法包括普鲁士蓝染色、荧光显微镜、共聚焦显微镜、透射电镜、光热显微镜、原子力显微镜;定量评估方法包括电感耦合等离子体、磁化强度测定、普鲁士蓝染色比色法。现有评估方法逐渐由定性评价方法向定量评价方法发展,每种方法具有各自优缺点,评价的角度也不同,根据磁性纳米颗粒功能、用途差异选择不同的评价方法或联合运用,才能为其在生物医学中的应用提供可靠的实验依据。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2018年18期）
蔡栋灵[10]（2018）在《番鸭呼肠孤病毒入侵DF-1/Vero细胞内吞机制的研究》一文中研究指出番鸭呼肠孤病毒感染是由番鸭呼肠孤病毒(Muscovy duck reovirus,MDRV)引起的一种免疫抑制性疾病,导致大批雏番鸭死亡,耐过的番鸭则生长停滞,给番鸭养殖行业造成巨大的经济损失。MDRV和鸡源呼肠孤病毒(Chicken reovirus,CRV)同属于禽正呼肠孤病毒(Avian orthoreovirus,ARV),但二者编码的蛋白存在一定的差异。已有报道以S1133株为代表的CRV通过小窝蛋白-1介导和动力蛋白-2依赖的内吞途径进入细胞,而对于MDRV进入细胞的内吞途径目前还没有被研究,故本试验通过荧光标记技术和利用化学抑制剂等方法探究番鸭呼肠孤病毒入侵细胞的内吞途径。试验结果如下:1.抑制剂对细胞增殖-毒性检测为保证细胞在药物处理后生长状态无明显改变,使用CCK-8试剂盒检测CPZ、M-β-CD和Dynasore叁种药物合适的安全浓度。在铺满DF-1/Vero细胞的96孔板中,加入不同浓度的M-β-CD、CPZ和Dynasore,使用Cell Counting Kit-8试剂盒测定药物处理后的细胞活性,结合显微镜下观察DF-1/Vero细胞的形态学变化,最后确定以M-β-CD 0.8 mM、1.6 mM、3.2 mM;CPZ 4 μM、8 μM、16 μM;Dynasore 15.5nM、31nM、62nM等浓度作为后期试验处理DF-1/Vero细胞的药物安全浓度。2.番鸭呼肠孤病毒入侵DF-1/Vero细胞的内吞途径的初步探究CPZ和M-β-CD分别可以阻滞网格蛋白和非网格蛋白介导的内吞途径,Dynasore则是可以抑制发动蛋白-2的装配。本试验通过设置CPZ、M-β-CD、Dynasore、CPZ + M-β-CD、CPZ + Dynasore、M-β-CD+ Dynasore等不同药物分组处理DF-1/Vero细胞,而后进行MDRV感染试验,同时做好对应的阴性对照组和阳性对照组,24 h后收样。通过Real-time RT-PCR和Westren-Blot方法分别测定细胞内番鸭呼肠孤病毒p10.8基因拷贝数和σA蛋白表达量。结果显示:(1)使用M-β-CD0.8mM、1.6mM、3.2mM等药物浓度预处理DF-1/Vero细胞30 min后,感染]MDRV,同时设置对应的阴性对照组和阳性对照组。处理结果显示:在DF-1/Vero细胞中,相对于阳性对照组而言,随着M-β-CD药物浓度的增加,在细胞内MDRV的p10.8基因拷贝数和σA蛋白表达量有显着的下降趋势。这说明病毒在细胞内的复制量与M-β-CD浓度呈负相关。(2)使用 CPZ 4 μM、8 μM、16 μnM 预处理 DF-1/Vero 细胞 30 min后,感染MDRV,同时设置对应的阴性对照组和阳性对照组。处理结果显示:在DF-1/Vero细胞中,相对于阳性对照组,虽然不同浓度的药物浓度都使细胞内病毒的p10.8基因拷贝数和σA蛋白表达量下降,但是细胞内的病毒量不随药物浓度的不同而有所不同,说明细胞内的病毒复制量与药物浓度无明显的相关性。(3)使用 Dynasore 15.5 nM、31 nM、62 nM 预处理 DF-1/Vero 细胞30min后,感染MDRV同时,设置对应的阴性对照组和阳性对照组。处理结果显示:与在DF-1/Vero细胞中,在使用Dynasore后,用药组的细胞内病毒的p10.8基因拷贝数和σA蛋白表达量比阳性对照组呈显着性下降,且不同浓度的药物之间,细胞内病毒的p10.8基因拷贝数和σA蛋白表达量也相差显着。这说明病毒在细胞内的复制受到Dynasore的影响。(4)在DF-1细胞中,药物预处理组与只感染病毒的阳性对照组相比,使用M-β-CD和Dynasore两个药物处理后,细胞内病毒p10.8基因拷贝数和σA蛋白表达量随着药物浓度的增加显着性下降;而CPZ预处理后对MDRV入侵细胞没有明显影响;在加入M-β-CD和Dynasore的CPZ + M-β-CD和CPZ + Dynasore两个试验组中,细胞内的病毒量也呈显着性下降;在M-β-CD + Dynasore组中,细胞内的病毒量则为极显着性下降;在Vero细胞亦可以得到相同结果,这说明了病毒入侵DF-1/Vero细胞需要小窝蛋白和发动蛋白的参与。(5)通过免疫荧光标记MDRVσA蛋白和小窝蛋白-1,结果显示:随着时间的增加,病毒由膜外逐渐被转移至细胞核周围,以及少部分病毒则进入到细胞核内。综上所述:MDRV通过小窝蛋白介导的内吞途径侵入DF-1/Vero细胞。3.初步探究细胞骨架对番鸭呼肠孤病毒入胞的影响通过使用不同浓度的微管抑制剂Nocodazole和微丝抑制剂Cytochalasin D来预处理细胞后感染MDRV,同时设置阴性对照组和阳性对照组,24 h后收集细胞,通过Real-time RT-PCR和Westren-Blot方法分别测定细胞内病毒p10.8基因拷贝数和σA蛋白表达量。结果显示病毒量随着Nocodazole浓度呈依赖性递减,说明微管也参与到病毒的入胞途径中。4.番鸭呼肠孤病毒在细胞内释放环境的初步探究在内吞小体中,病毒必须通过调节内吞体的pH值以激活病毒构象改变,否则会被呈递到溶酶体中降解。目前已知CRV在内吞体中需要低pH环境,但同属与禽正呼肠孤病毒的MDRV在细胞内释放pH环境尚不明确。已知NH4C1可以调节细胞内溶酶体的pH值,本试验通过使用不同浓度的NH4C1预处理细胞以在不同程度上改变内吞小体的酸性环境,随后感染MDRV,同时设置阴性对照组和阳性对照组,24 h后收样。分别检测细胞内病毒量的变化,来确认内吞体内pH值变化对病毒释放的影响。结果显示,随着药物浓度的增加,细胞内病毒p10.8基因拷贝数和σA蛋白表达量明显受到抑制,可推测MDRV需要在低pH值的环境下,促进病毒穿透细胞质膜并完成脱壳。结论:番鸭呼肠孤病毒通过小窝蛋白介导的且需要发动蛋白参与的内吞途径进入细胞,并在内体酸性环境中,完成病毒的脱壳和复制。(本文来源于《福建农林大学》期刊2018-04-01）
细胞内吞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
在之前的研究中,我们发现抗肿瘤药物LS-1-2F可以引起肿瘤细胞的空泡化现象。本文中研究了化合物LS-1-2F对大分子(包括荧光量子点、人血清白蛋白、单链RNA和单克隆抗体)内吞进入肿瘤细胞内的作用。通过激光共聚焦显微镜和流式细胞仪,研究发现LS-1-2F能促进这些大分子的内吞作用,对提高赫赛汀生物类似物内化效率的作用尤为显着。促进内吞将有助于提高耐药肿瘤细胞对液相药物的吸收效率,还有望促进纳米颗粒递送载体中药物的利用。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
细胞内吞论文参考文献
[1].张云.细菌毒素类似孔道形成蛋白调控细胞内吞溶酶体的功能和机制[C].中国毒理学会第九次全国毒理学大会论文集.2019
[2].杨燕燕,吉登波,杨思敏,余四旺,李中军.小分子药物LS-1-2F促进肿瘤细胞内吞大分子（英文）[J].JournalofChinesePharmaceuticalSciences.2019
[3].林珑,史岸冰.细胞内吞循环运输通路及其分子调控机制[J].遗传.2019
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[5].陈芳芳,张旭,谭红黎,桂亚萍,余为一.鸡恒定链协助抗原肽结合MHCⅡ类分子并进入细胞内吞体[J].畜牧兽医学报.2019
[6].陈芳芳,张旭,林海彬,谭红黎,刘雪兰.恒定链载体协助抗原肽结合MHCⅡ类分子并进入细胞内吞体[C].第十叁届全国免疫学学术大会摘要汇编.2018
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[8].李逸群.鲆鲽鱼IgM~+B细胞内吞作用及其调控机制研究[D].中国科学院大学(中国科学院海洋研究所).2018
[9].王润生,刘义灏,毛克亚.磁性纳米颗粒细胞内吞评价方法研究及进展[J].中国组织工程研究.2018
[10].蔡栋灵.番鸭呼肠孤病毒入侵DF-1/Vero细胞内吞机制的研究[D].福建农林大学.2018