本文主要研究内容
作者王俊伟,陈芳洲,库旭钢,李畅,何启盖（2019）在《基于PCV3-Cap蛋白间接ELISA检测方法的建立及临床应用》一文中研究指出：为了建立一种敏感和特异的猪圆环病毒3型(PCV3)抗体检测方法,对PCV3-Cap蛋白抗原表位预测发现其抗原表位多聚集在C端(羧基端),而N端前33氨基酸为核定位序列。以截断N端前120个氨基酸后的PCV3ORF2序列为靶基因,设计引物。以PCV3阳性病料为模板,PCR扩增截短的ORF2基因,并将其克隆至pET-30a载体构建重组质粒,并转染至大肠杆菌E.coli BL21感受态细胞,获得重组菌后选择最佳诱导表达条件,采用Ni-NTA亲和层析柱纯化表达产物。以纯化后的重组Cap蛋白作为包被抗原,建立PCV3间接ELISA (indirectELISA)诊断方法,并初步用于临床样品检测。结果:从阳性病料中扩增出大小为285bp的PCV3ORF2基因片段,重组质粒经双酶切和测序鉴定构建成功。采用1mmol·L-1 IPTG诱导,在37℃条件下培养6h重组菌,重组蛋白获最佳表达。Western blot结果表明,该重组蛋白与PCV3阳性血清具有较好的反应原性。ELISA的最佳包被抗原质量浓度为1μg·mL-1,待检血清最佳稀释度为1∶20,酶标抗体最佳工作浓度为1∶5 000。阳性判定值为S/P≥0.273。批内和批间系数均小于10%,表明该方法具有较好的重复性。PCV2阳性血清用本方法检测为阴性,表明该方法有较好的特异性。检测采集的439份临床猪血清,PCV3抗体阳性检出率为60.59%(266/439)。结果表明,本研究建立了一种快速、简便、敏感、特异的猪圆环病毒3型(PCV3)抗体检测方法。
Abstract
wei le jian li yi chong min gan he te yi de zhu yuan huan bing du 3xing (PCV3)kang ti jian ce fang fa ,dui PCV3-Capdan bai kang yuan biao wei yu ce fa xian ji kang yuan biao wei duo ju ji zai Cduan (suo ji duan ),er Nduan qian 33an ji suan wei he ding wei xu lie 。yi jie duan Nduan qian 120ge an ji suan hou de PCV3ORF2xu lie wei ba ji yin ,she ji yin wu 。yi PCV3yang xing bing liao wei mo ban ,PCRkuo zeng jie duan de ORF2ji yin ,bing jiang ji ke long zhi pET-30azai ti gou jian chong zu zhi li ,bing zhuai ran zhi da chang gan jun E.coli BL21gan shou tai xi bao ,huo de chong zu jun hou shua ze zui jia you dao biao da tiao jian ,cai yong Ni-NTAqin he ceng xi zhu chun hua biao da chan wu 。yi chun hua hou de chong zu Capdan bai zuo wei bao bei kang yuan ,jian li PCV3jian jie ELISA (indirectELISA)zhen duan fang fa ,bing chu bu yong yu lin chuang yang pin jian ce 。jie guo :cong yang xing bing liao zhong kuo zeng chu da xiao wei 285bpde PCV3ORF2ji yin pian duan ,chong zu zhi li jing shuang mei qie he ce xu jian ding gou jian cheng gong 。cai yong 1mmol·L-1 IPTGyou dao ,zai 37℃tiao jian xia pei yang 6hchong zu jun ,chong zu dan bai huo zui jia biao da 。Western blotjie guo biao ming ,gai chong zu dan bai yu PCV3yang xing xie qing ju you jiao hao de fan ying yuan xing 。ELISAde zui jia bao bei kang yuan zhi liang nong du wei 1μg·mL-1,dai jian xie qing zui jia xi shi du wei 1∶20,mei biao kang ti zui jia gong zuo nong du wei 1∶5 000。yang xing pan ding zhi wei S/P≥0.273。pi nei he pi jian ji shu jun xiao yu 10%,biao ming gai fang fa ju you jiao hao de chong fu xing 。PCV2yang xing xie qing yong ben fang fa jian ce wei yin xing ,biao ming gai fang fa you jiao hao de te yi xing 。jian ce cai ji de 439fen lin chuang zhu xie qing ,PCV3kang ti yang xing jian chu lv wei 60.59%(266/439)。jie guo biao ming ,ben yan jiu jian li le yi chong kuai su 、jian bian 、min gan 、te yi de zhu yuan huan bing du 3xing (PCV3)kang ti jian ce fang fa 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自畜牧兽医学报的王俊伟,陈芳洲,库旭钢,李畅,何启盖，发表于刊物畜牧兽医学报2019年02期论文，是一篇关于猪圆环病毒型论文,基因论文,蛋白论文,原核表达论文,检测论文,畜牧兽医学报2019年02期论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自畜牧兽医学报2019年02期论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。