本文主要研究内容
作者彭梦华（2019）在《田鼠巴贝斯虫过氧化物氧化还原酶Prx1氨基酸突变对其功能的影响》一文中研究指出：巴贝斯虫是一种寄生于哺乳动物红细胞的顶复门原虫,病原体主要通过蜱叮咬、输血、器官移植和胎盘垂直传播。田鼠巴贝斯虫是人病兽共患的巴贝斯虫病,感染后导致红细胞溶解,黄疸,溶血性贫血,缓解性发热和肾功能不全,死亡率为10%。巴贝斯虫病被认为是一种新发的威胁全球健康的疾病,但缺少高效方便的治疗药物,因此,需要研究药物及其靶标分子。巴贝斯虫生活在富含氧的红细胞中,产生大量的活性氧（ROS）,会破坏生物大分子,为了抵消这种影响,寄生虫自身存在一系列的抗氧化分子,如硫氧还蛋白,过氧化物氧化还原酶和超氧化物歧化酶等。为了研究抗氧化分子的药物靶标潜力,本实验室前期已经克隆了过氧化物氧化还原酶prx1全长基因序列,并对其进行了重组表达,获得了纯化的重组蛋白,验证了其基本功能。本项研究将对该分子的关键活性位点进行突变,研究其结构与功能的关系。1.应用q-PCR方法检测小鼠感染后不同天数的巴贝斯虫的prx1表达水平,发现prx1表达水平在感染的2-7d是缓慢增加的,第8d达到峰值后又迅速下降。表明该分子与感染过程密切相关。2.根据生物信息学分析,确定了prx1第50位半胱氨酸、第170位半胱氨酸的关键作用,设计包含突变位点的引物,以实验室已构建成功的pET-30a（+）-BmPrx1质粒为模板,进行PCR,得到第50位半胱氨酸、第170位半胱氨酸以及两个位点同时突变的突变体质粒。将这三个突变质粒转化至BL21感受态细胞中,进行原核重组表达。采用his标签纯化蛋白的方式得到了浓度较高的蛋白。在还原性SDS-PAGE中,野生型、C50S、C170S、C50S-C170S蛋白均为单体形式,大小为23kDa,在非还原性SDS-PAGE中,野生型、170S为二聚体形式,C50S和C50SC170S为单体形式,因此第50位半胱氨酸对其Prx1二聚体的形成至关重要。3.研究了氨基酸突变对其抗氧化活性的影响,MFO体系中Fe3+会对导致pBluescript质粒出现缺刻现象,野生型prx1能够保护pBluescript质粒在MFO体系中免受氧化损伤的影响,第50位半胱氨酸突变后丧失保护pBluescript质粒免受氧化损伤的能力,而第170位半胱氨酸对这一功能没有影响。在硫氰酸铁法测Prx1催化过氧化氢的能力当中,第170位半胱氨酸突变导致其反应速率降低,第170位半胱氨酸突变和第50位和第170位半胱氨酸同时突变导致其Prx1丧失了催化H2O2的能力,第50位半胱氨酸对prx1催化h2o2的能力至关重要。Prx1具有过氧化物酶活性,第50位和第170位半胱氨酸突变后其活性都基本丧失,因此,这两个位点的半胱氨酸对其过氧化物酶活性都至关重要。4.prx1蛋白能够与DNA结合,保护DNA不被核酸酶降解。蛋白分子伴侣活性检测:Prx1蛋白能够抑制MDH的聚集现象,且抑制具有Prx1浓度依赖性。第50位半胱氨酸和第170位半胱氨酸突变后,仍然能够抑制MDH的聚集现象,可能其突变位点不是其执行分子伴侣功能的活性位点。上述结果表明,田鼠巴贝斯虫的过氧化物氧化还原酶Prx1与虫体抗氧化功能密切相关,同时具有分子伴侣功能。结构上第50位和第170位半胱氨酸是酶活性关键位点,但与伴侣功能无关。第50位半胱氨酸对其Prx1二聚体的形成至关重要。这些研究结果,对于阐明该分子的生物学功能和发现药物靶点具有重要意义。
Abstract
ba bei si chong shi yi chong ji sheng yu bu ru dong wu gong xi bao de ding fu men yuan chong ,bing yuan ti zhu yao tong guo pi ding yao 、shu xie 、qi guan yi zhi he tai pan chui zhi chuan bo 。tian shu ba bei si chong shi ren bing shou gong huan de ba bei si chong bing ,gan ran hou dao zhi gong xi bao rong jie ,huang da ,rong xie xing pin xie ,huan jie xing fa re he shen gong neng bu quan ,si wang lv wei 10%。ba bei si chong bing bei ren wei shi yi chong xin fa de wei xie quan qiu jian kang de ji bing ,dan que shao gao xiao fang bian de zhi liao yao wu ,yin ci ,xu yao yan jiu yao wu ji ji ba biao fen zi 。ba bei si chong sheng huo zai fu han yang de gong xi bao zhong ,chan sheng da liang de huo xing yang （ROS）,hui po huai sheng wu da fen zi ,wei le di xiao zhe chong ying xiang ,ji sheng chong zi shen cun zai yi ji lie de kang yang hua fen zi ,ru liu yang hai dan bai ,guo yang hua wu yang hua hai yuan mei he chao yang hua wu qi hua mei deng 。wei le yan jiu kang yang hua fen zi de yao wu ba biao qian li ,ben shi yan shi qian ji yi jing ke long le guo yang hua wu yang hua hai yuan mei prx1quan chang ji yin xu lie ,bing dui ji jin hang le chong zu biao da ,huo de le chun hua de chong zu dan bai ,yan zheng le ji ji ben gong neng 。ben xiang yan jiu jiang dui gai fen zi de guan jian huo xing wei dian jin hang tu bian ,yan jiu ji jie gou yu gong neng de guan ji 。1.ying yong q-PCRfang fa jian ce xiao shu gan ran hou bu tong tian shu de ba bei si chong de prx1biao da shui ping ,fa xian prx1biao da shui ping zai gan ran de 2-7dshi huan man zeng jia de ,di 8dda dao feng zhi hou you xun su xia jiang 。biao ming gai fen zi yu gan ran guo cheng mi qie xiang guan 。2.gen ju sheng wu xin xi xue fen xi ,que ding le prx1di 50wei ban guang an suan 、di 170wei ban guang an suan de guan jian zuo yong ,she ji bao han tu bian wei dian de yin wu ,yi shi yan shi yi gou jian cheng gong de pET-30a（+）-BmPrx1zhi li wei mo ban ,jin hang PCR,de dao di 50wei ban guang an suan 、di 170wei ban guang an suan yi ji liang ge wei dian tong shi tu bian de tu bian ti zhi li 。jiang zhe san ge tu bian zhi li zhuai hua zhi BL21gan shou tai xi bao zhong ,jin hang yuan he chong zu biao da 。cai yong hisbiao qian chun hua dan bai de fang shi de dao le nong du jiao gao de dan bai 。zai hai yuan xing SDS-PAGEzhong ,ye sheng xing 、C50S、C170S、C50S-C170Sdan bai jun wei chan ti xing shi ,da xiao wei 23kDa,zai fei hai yuan xing SDS-PAGEzhong ,ye sheng xing 、170Swei er ju ti xing shi ,C50She C50SC170Swei chan ti xing shi ,yin ci di 50wei ban guang an suan dui ji Prx1er ju ti de xing cheng zhi guan chong yao 。3.yan jiu le an ji suan tu bian dui ji kang yang hua huo xing de ying xiang ,MFOti ji zhong Fe3+hui dui dao zhi pBluescriptzhi li chu xian que ke xian xiang ,ye sheng xing prx1neng gou bao hu pBluescriptzhi li zai MFOti ji zhong mian shou yang hua sun shang de ying xiang ,di 50wei ban guang an suan tu bian hou sang shi bao hu pBluescriptzhi li mian shou yang hua sun shang de neng li ,er di 170wei ban guang an suan dui zhe yi gong neng mei you ying xiang 。zai liu qing suan tie fa ce Prx1cui hua guo yang hua qing de neng li dang zhong ,di 170wei ban guang an suan tu bian dao zhi ji fan ying su lv jiang di ,di 170wei ban guang an suan tu bian he di 50wei he di 170wei ban guang an suan tong shi tu bian dao zhi ji Prx1sang shi le cui hua H2O2de neng li ,di 50wei ban guang an suan dui prx1cui hua h2o2de neng li zhi guan chong yao 。Prx1ju you guo yang hua wu mei huo xing ,di 50wei he di 170wei ban guang an suan tu bian hou ji huo xing dou ji ben sang shi ,yin ci ,zhe liang ge wei dian de ban guang an suan dui ji guo yang hua wu mei huo xing dou zhi guan chong yao 。4.prx1dan bai neng gou yu DNAjie ge ,bao hu DNAbu bei he suan mei jiang jie 。dan bai fen zi ban lv huo xing jian ce :Prx1dan bai neng gou yi zhi MDHde ju ji xian xiang ,ju yi zhi ju you Prx1nong du yi lai xing 。di 50wei ban guang an suan he di 170wei ban guang an suan tu bian hou ,reng ran neng gou yi zhi MDHde ju ji xian xiang ,ke neng ji tu bian wei dian bu shi ji zhi hang fen zi ban lv gong neng de huo xing wei dian 。shang shu jie guo biao ming ,tian shu ba bei si chong de guo yang hua wu yang hua hai yuan mei Prx1yu chong ti kang yang hua gong neng mi qie xiang guan ,tong shi ju you fen zi ban lv gong neng 。jie gou shang di 50wei he di 170wei ban guang an suan shi mei huo xing guan jian wei dian ,dan yu ban lv gong neng mo guan 。di 50wei ban guang an suan dui ji Prx1er ju ti de xing cheng zhi guan chong yao 。zhe xie yan jiu jie guo ,dui yu chan ming gai fen zi de sheng wu xue gong neng he fa xian yao wu ba dian ju you chong yao yi yi 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自上海师范大学的彭梦华，发表于刊物上海师范大学2019-06-17论文，是一篇关于田鼠巴贝斯虫论文,过氧化物氧化还原酶论文,抗氧化功能论文,分子伴侣功能论文,上海师范大学2019-06-17论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自上海师范大学2019-06-17论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
标签：田鼠巴贝斯虫论文; 过氧化物氧化还原酶论文; 抗氧化功能论文; 分子伴侣功能论文; 上海师范大学2019-06-17论文;