导读:本文包含了耐热内切纤维素酶论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:耐热纤维素酶,离子层析,纯化工艺,酶学性质
耐热内切纤维素酶论文文献综述
聂立影,郑春阳[1]（2013）在《来自Pyrococcus horikoshii的极端耐热β-1,4-内切纤维素酶的分离纯化与酶学性质》一文中研究指出耐热纤维素酶具有广泛的应用前景,本研究室在利.用大肠杆菌表达来自Pyrococcus horikoshii的极端耐热β-1,4-内切纤维素酶基础上,建立了包括热处理、DEAE Sepharose Fast Flow阴离子层析的纯化工艺,分离纯化获得单一组分的重组极端耐热β-1,4-内切纤维素酶(EGPh),SDS-PAGE测定该酶纯度大于90%,以CMC-Na为底物,DNS法测定比活22.3 U/mg,活性收率为73.3%,纯化倍数为45倍.酶学性质研究表明,该酶的分子量为43 KD,等电点(PI)为5.3,催化CMC-Na最适反应温度为95℃,最适反应pH为6.0,Km值为3.61±0.26 mg/ml.酶学稳定性研究表明EGPh在pH4.0～9.0、温度85℃下稳定.纯化的EGPh表现了极好的热稳定性,95℃时半衰期为8 h.(本文来源于《天津理工大学学报》期刊2013年04期）
高克学[2]（2009）在《蚀木链霉菌耐热内切纤维素酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达》一文中研究指出纤维素是地球上最丰富的可再生的自然生物资源,而来源于低成本的可再生性纤维素资源的生物制品和生物能源对于人类的可持续发展又是非常重要的,利用纤维素酶的降解作用进行纤维素的生物转化有着广阔的前景。随着基因工程技术的发展,利用基因工程技术将纤维素酶的基因克隆到细菌、酵母、真菌和植物中以期得到高比活力的重组型纤维素酶。放线菌可产生较为完整的纤维素酶体系,且很多是耐热的。由于酶的耐热性在生产中具有实用意义,所以耐热菌成为研究的热点。本试验克隆了蚀木链霉菌中的耐热纤维素酶基因,并在大肠杆菌中进行表达,以期得到产生高酶活力重组型纤维素酶的工程菌。根据从国际基因库(GenBank)中下载的多条纤维素酶基因序列设计简并引物,采用PCR方法扩增纤维素酶基因,将回收的基因片段连接到用pMD-18T载体上,进行测序分析。结果表明该全长肽基因读码框大小为1140bp,编码379个氨基酸。对氨基酸序列的在线分析表明,在N端具有信号肽。根据该纤维素酶基因的结构特征和信号肽分析,构建了全长基因和成熟肽的pET-28a重组载体,分别转化到受体菌大肠杆菌Rosetta(DE3),在IPTG诱导下进行表达。表达产物经SDS-PAGE电泳后,分别得到分子量为39 kD和42 kD左右的两条特异表达条带。收集诱导表达的菌体用PBS洗涤后,经反复冻融,采用DNS法对于处于不同位置的表达产物进行酶活力分析。发现含有重组质粒pET-28a/celKX-ns的工程菌所表达出来的蛋白主要是以包涵体形式存在,虽有部分可溶,但酶活性极低。而pET-28a/celKX表达的目的蛋白在破碎后的上清和培养基组分中的酶活都很高,分泌到培养基中的耐热内切纤维素酶占有活性的总酶量的80.3%,真正实现了胞外可溶性和有活性蛋白质高效的表达,优化诱导表达条件后,胞外酶活可达3.211IU/mL。表达产物酶学性质研究表明:表达产物反应的最适温度分别为55℃,最适pH分别为5.5。表达产物具有很好的热稳定性和pH稳定性。结果初步表明,重组的大肠杆菌产生的耐热中性内切纤维素酶为中性纤维素酶,具有较高的酶活力,在纺织工业潜在的应用价值。(本文来源于《河北农业大学》期刊2009-06-12）
刘淑艳,卢雪梅,段新源,高培基[3]（2005）在《中温纤维分解真菌尖镰孢Fusarium oxysporum的一种新的耐热内切纤维素酶》一文中研究指出纤维素是地球上最丰富的可再生性资源,其生物降解依靠多种纤维素酶的协同作用.纤维素酶是一个多组分的复杂体系,主要包括内切纤维素酶(endoglucanase, EC3.2.1.4)、外切纤维素酶(exoglucanase,EC3.2.1.91)和β-葡萄糖苷酶(glucosidases,EC3.2.1.21).内、外切纤维素酶的协同作用是纤维素彻底降解的关键因素.近年的研究表明,内切纤维素酶在棉纤维的生物抛光,提高纸浆的滤水性,打浆性和精提,废纸脱墨,增强洗涤剂的有效性和利用植物原料作为动物饲料等方面具有巨大的潜力. 酶应用的主要障碍之一就是其热稳定性,纤维材料的酶解糖化只有在60℃以上进行(本文来源于《中国资源生物技术与糖工程学术研讨会论文集》期刊2005-07-01）
耐热内切纤维素酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
纤维素是地球上最丰富的可再生的自然生物资源,而来源于低成本的可再生性纤维素资源的生物制品和生物能源对于人类的可持续发展又是非常重要的,利用纤维素酶的降解作用进行纤维素的生物转化有着广阔的前景。随着基因工程技术的发展,利用基因工程技术将纤维素酶的基因克隆到细菌、酵母、真菌和植物中以期得到高比活力的重组型纤维素酶。放线菌可产生较为完整的纤维素酶体系,且很多是耐热的。由于酶的耐热性在生产中具有实用意义,所以耐热菌成为研究的热点。本试验克隆了蚀木链霉菌中的耐热纤维素酶基因,并在大肠杆菌中进行表达,以期得到产生高酶活力重组型纤维素酶的工程菌。根据从国际基因库(GenBank)中下载的多条纤维素酶基因序列设计简并引物,采用PCR方法扩增纤维素酶基因,将回收的基因片段连接到用pMD-18T载体上,进行测序分析。结果表明该全长肽基因读码框大小为1140bp,编码379个氨基酸。对氨基酸序列的在线分析表明,在N端具有信号肽。根据该纤维素酶基因的结构特征和信号肽分析,构建了全长基因和成熟肽的pET-28a重组载体,分别转化到受体菌大肠杆菌Rosetta(DE3),在IPTG诱导下进行表达。表达产物经SDS-PAGE电泳后,分别得到分子量为39 kD和42 kD左右的两条特异表达条带。收集诱导表达的菌体用PBS洗涤后,经反复冻融,采用DNS法对于处于不同位置的表达产物进行酶活力分析。发现含有重组质粒pET-28a/celKX-ns的工程菌所表达出来的蛋白主要是以包涵体形式存在,虽有部分可溶,但酶活性极低。而pET-28a/celKX表达的目的蛋白在破碎后的上清和培养基组分中的酶活都很高,分泌到培养基中的耐热内切纤维素酶占有活性的总酶量的80.3%,真正实现了胞外可溶性和有活性蛋白质高效的表达,优化诱导表达条件后,胞外酶活可达3.211IU/mL。表达产物酶学性质研究表明:表达产物反应的最适温度分别为55℃,最适pH分别为5.5。表达产物具有很好的热稳定性和pH稳定性。结果初步表明,重组的大肠杆菌产生的耐热中性内切纤维素酶为中性纤维素酶,具有较高的酶活力,在纺织工业潜在的应用价值。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
耐热内切纤维素酶论文参考文献
[1].聂立影,郑春阳.来自Pyrococcushorikoshii的极端耐热β-1,4-内切纤维素酶的分离纯化与酶学性质[J].天津理工大学学报.2013
[2].高克学.蚀木链霉菌耐热内切纤维素酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达[D].河北农业大学.2009
[3].刘淑艳,卢雪梅,段新源,高培基.中温纤维分解真菌尖镰孢Fusariumoxysporum的一种新的耐热内切纤维素酶[C].中国资源生物技术与糖工程学术研讨会论文集.2005