导读:本文包含了柠檬酸载体论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:花生,AhFRDL1基因功能,柠檬酸运输载体,铁转运
柠檬酸载体论文文献综述
邱巍[1]（2017）在《花生柠檬酸转运载体AhFRDL1基因的克隆与功能研究》一文中研究指出铝和铁在地壳中含量最多的两种金属元素。但是这两种元素对植物生长产生影响各不相同:在低pH值的酸性土壤A13+被活化,对植物生长具有毒害作用;而铁却是植物生长必须的微量元素。因此,为了抵抗铝毒胁迫又能高效的吸收利用土壤铁,植物进化出不同的分子生理机制。MATE家族的柠檬酸转运载体是植物解铝毒或铁长距离运输机制的关键因子。目前发现的柠檬酸转运载体,或调控根尖分泌柠檬酸解铝毒,或调控木质部分泌柠檬酸参与铁的长距离运输,其中只有HvMATE在大麦铝抗性品种才同时具备以上两种生物学功能,所以在大麦中不具普遍性。本研究在大田作物花生(Arachis hypogaeaL.)中发现一个柠檬酸转运载体基因,不仅具有促进铁从根系向地上部运输的功能,而且还具有促进根系抗铝毒胁迫生物学功能,通过电生理、基因定位和花生根系RNAi毛根转化试验研究表明:1.在花生根系中通过同源克隆获得AhFRDL1基因,进化树分析表明该基因属于M4TE家族,其编码的蛋白含有12个跨膜结构域。在烟草叶片表皮细胞的亚细胞定位结果表明该基因编码一个质膜蛋白。AhFRDL1基因在非洲爪蛙卵母细胞中表达,显着促进细胞向胞外分泌柠檬酸,表明花生AhFRDL1基因是编码柠檬酸转运载体的跨膜运输基因。2.花生缺铁7天强烈诱导根系和地上部AhFRDL1基因表达上调。通过原位杂交和GUS组织学定位,发现该基因主要表达于根系中柱鞘和地上部(茎和新叶)的韧皮部中,且在缺铁花生根中的表达加强,表达范围由中柱鞘细胞扩散到内皮层细胞。利用RNAi在花生根系沉默AhFRDL1基因,显着抑制木质部柠檬酸和新叶活性铁的浓度,新叶出现更严重的缺铁黄化症状。这些结果表明,柠檬酸转运载体AhFRDL1基因在花生根系中柱鞘表达,调控木质部柠檬酸分泌,从而促进根系铁向地上部运输,从分子和生理水平证明了该基因在促进花生根系铁向地上部转移的过程中发挥了重要的作用。3.该基因在花生根系明显的受铝毒诱导表达。80 μM铝浓度处理24 h的花生根尖,AhFRDL1基因表达显着上调,同时根系分泌的柠檬酸浓度显着升高。AhFRDL1基因在根系的表达部位受铝诱导,表达范围由中柱鞘细胞扩散至根尖皮层和表皮细胞。在爪蛙卵母细胞的电生理研究也表明,AhFRDL1蛋白分泌柠檬酸的活性受外界铝诱导上升。因此,柠檬酸转运载体AhFRDL1基因受铝诱导在根尖表达,促进根系分泌柠檬酸,显着提高花生根系抗铝毒的能力。4.花生AhFRDL1基因在与铁性状相关(鲁花11)和铝抗性相关(鲁花14,大白沙)的花生品种都显着的受缺铁和铝毒诱导表达,从而使得木质部和根系分泌的柠檬酸浓度增加,提高了花生在不同环境的抵抗缺铁和耐铝毒的生理生态适应性。综上所述,AhFRDL1基因同时具有调控铁从根系向地上部转移和抗铝毒的生物学功能,两种功能的实现可能受AhFRDL1基因启动子区域发现的缺铁和加铝特异诱导转录因子的调控。而且该基因的表达调控主要发生在与抗缺铁或耐铝毒的品种中,这将为通过分子育种培育优良抗性品种提供重要的理论依据和技术支撑。(本文来源于《中国农业大学》期刊2017-06-01）
裴秀英,杨华,郝方,高玉婧,吴自荣[2]（2010）在《结核分枝杆菌异柠檬酸裂解酶aceA基因表达载体的构建及重组蛋白研究》一文中研究指出目的构建结核分枝杆菌异柠檬酸裂解酶aceA基因表达载体,获得纯化蛋白,并对蛋白结构、分子量及性质进行研究。方法经PCR扩增得到结核分枝杆菌异柠檬酸裂解酶基因aceA并将其亚克隆至pET28a(+)表达载体,获得重组质粒pET28a(+)-aceA。将重组质粒转化大肠杆菌BL-21(DE3)plysS感受态细胞,用IPTG诱导表达。重组蛋白以Ni-NTA agarose亲和层析柱进行纯化。以时实波长扫描对重组蛋白的酶活性进行测定分析,通过圆二色及质谱分析对其结构及分子质量进行测定。结果以0.1mmmol/L的IPTG在25℃诱导6h后可溶性重组AceA蛋白的含量最高。经SDS-PAGE分析,在分子量为90kDa处出现新生的蛋白条带。该重组蛋白的异柠檬酸裂解酶比活力为0.423μmol·mg~(-1)·min~(-1)。重组蛋白经LC/MS鉴定,测得相对分子质量为89660Da。经圆二色仪分析,重组AceA的二级结构中相对有32.4%的α螺旋,27.5%β转角,40.1%无规卷曲。结论本研究成功构建结核分枝杆菌异柠檬酸裂解酶aceA基因原核表达载体,并获得纯度较高的纯化蛋白。对其结构性质的研究为抗结核药物的筛选奠定了基础。(本文来源于《首届中国临床微生物学大会（宁波会议）暨《医学参考报》微生物学与免疫学论坛论文汇编》期刊2010-11-13）
胡清泉,王奇峰,李昆志,陈丽梅,玉永雄[3]（2009）在《烟草柠檬酸合成酶基因的克隆及其光诱导型植物表达载体的构建》一文中研究指出紫花苜蓿为多年生优质豆科牧草。我国南方地区酸性土壤分布比较广,铝害比较严重,限制了紫花苜蓿在南方地区的推广利用。提高有机酸合成酶基因的表达活性,增加有机酸的合成与分泌,有利于增强植物的耐铝性。本研究根据Genebank中已知的烟草柠檬酸合成酶(Citrate Synthase,cs)基因的序列,通过RT-PCR从烟草总RNA中扩增cs基因的cDNA,亚克隆于T载体得到重组载体pMD18-cs,对pMD18-cs中的插入片断进行核酸序列分析确认为cs基因的cDNA全长。用光诱导型启动子(Rubisco,小亚基的启动子)和双元载体pPZP211构建了cs基因的光诱导型植物表达载体pPZP211-PrbcS-cs,为利用基因工程手段提高紫花苜蓿耐铝毒能力,促进其在南方地区推广利用奠定了物质基础。(本文来源于《草业学报》期刊2009年04期）
杨华[4]（2006）在《结核分枝杆菌异柠檬酸裂解酶aceA基因原核表达载体的构建及融合蛋白的研究》一文中研究指出目的结核分枝杆菌长期处于持续感染状态已成为目前在全世界范围内消灭结核病的最大阻碍之一。异柠檬酸裂解酶(ICL)是结核分枝杆菌在体内持续感染时所进行的乙醛酸途径中的关键酶,对结核分枝杆菌在巨噬细胞内生存及持续感染起着重要的作用。编码异柠檬酸裂解酶的基因有两个:icl和aceA,我们已经成功地克隆表达了icl基因,并对其表达的重组酶进行了深入的研究。本研究拟克隆结核分枝杆菌异柠檬酸裂解酶的aceA基因,并构建表达重组体,通过表达条件的优化,获得AceA可溶性蛋白。纯化该蛋白,并对其结构、分子量及性质等进行研究,为以异柠檬酸裂解酶为靶点的抗结核药物筛选奠定基础。方法根据aceA基因编码序列设计引物,并在引物中设计HindⅢ和BamHI酶切位点,以MTB基因组为模板,PCR扩增编码异柠檬酸裂解酶的aceA基因,并将其克隆入pUC18质粒进行扩增,再亚克隆入原核表达载体pET28a(+),构建pET28a(+)-aceA重组体;用重组体转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS菌,在IPTG诱导下进行表达;表达产物经SDS-PAGE鉴定,再经镍离子螯合型琼脂糖凝胶亲和层析柱纯化,以获得纯化的结核分枝杆菌异柠檬酸裂解酶重组蛋白;以时实波长扫描对重组蛋白的酶活性进行测定分析,通过圆二色及质谱分析对其结构及分子质量进行测定。结果以MTB基因组DNA为模板,以Pfu Tag DNA聚合酶扩增得到2.3kb的片段,并克隆入pUC18质粒;经测序证实与GenBank中的aceA基因序列一致。进而构建出pET28a(+)-aceA表达质粒,该重组质粒能在大肠杆菌BL21(DE3)plysS中高效表达;以0.1mM的IPTG诱导6hrs后重组蛋白表达量最高。表达蛋白以可溶性非包涵体形式存在于胞浆中,经Ni-NTA琼脂糖亲和柱一步纯化得到了90KD左右的纯化蛋白产物。通过酶学方法检测该重组蛋白证明其具有异柠檬酸裂解酶活性;重组蛋白经高效液相色谱及质谱鉴定,测得相对分子质量为89660Da。经圆二色仪分析,重组ICL的二级结构中相对有32.4 %的α螺旋,27.5%β转角,40.1 %无规卷曲。结论本研究成功地克隆表达并纯化了具有生物学活性的结核分枝杆菌异柠檬酸裂解酶AceA蛋白,并对其分子质量,结构及酶活性进行了研究。该研究对于结核病药物靶点的研究有着重要的价值,为结核病的治疗及抗结核药物的开发奠定了基础。(本文来源于《宁夏医学院》期刊2006-04-01）
柠檬酸载体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的构建结核分枝杆菌异柠檬酸裂解酶aceA基因表达载体,获得纯化蛋白,并对蛋白结构、分子量及性质进行研究。方法经PCR扩增得到结核分枝杆菌异柠檬酸裂解酶基因aceA并将其亚克隆至pET28a(+)表达载体,获得重组质粒pET28a(+)-aceA。将重组质粒转化大肠杆菌BL-21(DE3)plysS感受态细胞,用IPTG诱导表达。重组蛋白以Ni-NTA agarose亲和层析柱进行纯化。以时实波长扫描对重组蛋白的酶活性进行测定分析,通过圆二色及质谱分析对其结构及分子质量进行测定。结果以0.1mmmol/L的IPTG在25℃诱导6h后可溶性重组AceA蛋白的含量最高。经SDS-PAGE分析,在分子量为90kDa处出现新生的蛋白条带。该重组蛋白的异柠檬酸裂解酶比活力为0.423μmol·mg~(-1)·min~(-1)。重组蛋白经LC/MS鉴定,测得相对分子质量为89660Da。经圆二色仪分析,重组AceA的二级结构中相对有32.4%的α螺旋,27.5%β转角,40.1%无规卷曲。结论本研究成功构建结核分枝杆菌异柠檬酸裂解酶aceA基因原核表达载体,并获得纯度较高的纯化蛋白。对其结构性质的研究为抗结核药物的筛选奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
柠檬酸载体论文参考文献
[1].邱巍.花生柠檬酸转运载体AhFRDL1基因的克隆与功能研究[D].中国农业大学.2017
[2].裴秀英,杨华,郝方,高玉婧,吴自荣.结核分枝杆菌异柠檬酸裂解酶aceA基因表达载体的构建及重组蛋白研究[C].首届中国临床微生物学大会（宁波会议）暨《医学参考报》微生物学与免疫学论坛论文汇编.2010
[3].胡清泉,王奇峰,李昆志,陈丽梅,玉永雄.烟草柠檬酸合成酶基因的克隆及其光诱导型植物表达载体的构建[J].草业学报.2009
[4].杨华.结核分枝杆菌异柠檬酸裂解酶aceA基因原核表达载体的构建及融合蛋白的研究[D].宁夏医学院.2006
标签：花生; AhFRDL1基因功能; 柠檬酸运输载体; 铁转运;