导读:本文包含了分离卵泡论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:卵泡刺激素受体,pGEX-4T-1,胞外区,纳米抗体
分离卵泡论文文献综述
李玲霞,吴锦艳,曹小安,冯倩,杜国玉[1]（2018）在《卵泡刺激素受体FSHR234纳米抗体的分离纯化及多克隆抗体的制备》一文中研究指出【背景】卵泡刺激素受体(Follicle-stimulating hormone receptor,FSHR)在人体成熟破骨细胞及单核细胞表面表达,成为阻断卵泡刺激素(FSH)作用的潜在靶点,制备亲和力较高的FSHR抗体已成为靶向治疗FSH相关疾病的切入点。【目的】构建FSHR重组载体获得表达量较高的可溶性蛋白,进一步制备骆驼多克隆抗体及其纳米抗体。【方法】利用XhoⅠ和Bam HⅠ双酶切重组质粒p ET30a-FSHR234,将目的基因fshr构建于p GEX-4T-1载体并进行原核表达,利用Western blot及ELISA检测目的蛋白的配体结合能力。免疫新疆双峰驼制备骆驼多克隆抗体,并利用噬菌体展示技术筛选获得FSHR纳米抗体。细胞免疫化学法检测FSHR抗体在coav-3的表达情况。【结果】构建了pGEX-4T-1-FSHR234重组质粒,获得了表达量较高的FSHR234可溶性蛋白;并构建了5株FSHR纳米抗体,鉴定出一株结合能力较强的纳米抗体,命名为VHH-3F9。【结论】制备的骆驼FSHR多克隆抗体效价达1:128 000,筛选获得的VHH-3F9纳米抗体能与FSHR234具有较高的结合性,且两者均能表达于coav-3细胞表面。(本文来源于《微生物学通报》期刊2018年11期）
王玉恒,索朗斯珠,强巴央宗,徐业芬,牛家强[2]（2018）在《西藏林芝地区牦牛卵泡颗粒细胞体外分离培养和形态观察》一文中研究指出旨在建立牦牛卵泡颗粒细胞模型以研究牦牛生殖生理机制。从林芝市牛屠宰场采集牦牛卵巢,并采用口吸管法在体视显微镜下分离卵巢表面直径为2~5 mm卵泡内的颗粒细胞,用于体外培养。结果表明:原代颗粒细胞培养12~48 h时处于潜伏期,此时细胞刚刚贴壁并且黏附不牢固,增殖分化速度较慢;培养72~96 h时,细胞进入指数增殖期,此时细胞多呈放射状,增殖分化速度最快;培养144 h时形成颗粒细胞单层;然而传代颗粒细胞生长速度较快,48 h后细胞进入指数增殖期,72 h后颗粒细胞生长至培养皿的90%左右,形成颗粒细胞单层。(本文来源于《畜牧与兽医》期刊2018年05期）
丁强,李亚新,陈玉林[3]（2017）在《山羊卵巢卵泡液中外泌体分离鉴定及其对颗粒细胞的影响》一文中研究指出引言/目的外泌体(exosome)是由细胞向胞外分泌的囊泡状小体,并广泛分布于唾液、血浆、乳汁、尿液等体液当中。外泌体可携带多种蛋白质、mR NA、mi RNA,参与细胞通讯、细胞迁移、血管新生和肿瘤细胞生长等过程。卵泡液中包含了由卵子、颗粒细胞以及膜细胞分泌的核酸、蛋白质、代谢分泌物以及离子等混合物,血液和卵泡间存在屏障。卵泡液内外泌体的研究将有助于更好地理解卵母细胞与卵泡微环境之间的信号传导、相互作用的机制,也可以通过检测外泌体中不同RNA、蛋白质及细胞因子等成分,更好地了解卵母细胞生长发育、(本文来源于《2017年全国养羊生产与学术研讨会暨养羊学分会第七次全国会员代表大会论文集》期刊2017-08-18）
杜江,辛玲,郭颖,周芳,于和鸣[4]（2015）在《人卵泡液抑制素B的分离与鉴定》一文中研究指出目的探讨人卵泡液抑制素B(INH-B)的分离纯化方法。方法收集25例育龄期女性成熟卵泡液,分别用乙腈、丙酮、乙醇3种试剂处理样品,富集低丰度蛋白,经蛋白浓度测定和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,比较3种方法对高丰度蛋白去除效果。再通过二乙基氨乙基(DEAE)阴离子交换柱和蛋白质等电点分离法分离目的蛋白。结果采用乙腈沉淀法能去除卵泡液样品中约88.7%的高丰度蛋白。并用乙腈富集、阴离子交换柱分离、等电点分离的"叁步分离法"分离人卵泡液后,INH-B蛋白回收率为38.7%,等电点为4.55。结论乙腈沉淀法是一种较为有效的去除样品中高丰度蛋白、富集低丰度蛋白的方法。乙腈富集、阴离子交换柱分离、等电点分离的"叁步分离法"能初步纯化获得人体天然INH-B蛋白分子粗制品,纯化回收率达38.70%。(本文来源于《生殖医学杂志》期刊2015年09期）
杜江[5]（2015）在《人精液和卵泡液中抑制素B（INH-B）的分离纯化与鉴定研究》一文中研究指出研究背景：血清抑制素B(INH-B)的检测在男性不育症的诊治中已逐渐得到广泛的应用。一般认为INH-B更能直接反映睾丸的生精功能,并具有无创性的优点,可作为评价男性生育力的重要指标,诸如预测非阻塞性无精症患者行睾丸穿刺能否获得精子的参考依据。目前国际国内应用的血清INH-B检测试剂盒几乎全是英国DSL公司的产品,且价格昂贵。DSL公司以Groome NP实验室的雄厚研究基础为支撑,将其研究结果成功转化。查阅文献凡INH-B研究所用的抗体最初都是该实验室惠赠。在90's年代开发出第一代INH-B ELISA检测试剂盒,在2000年又改进推出第二代产品。本研究课题的立项源于市场的需求,因国内尚无自主知识产权的INH-B检测试剂盒,在某试剂公司的要求下进行合作开发国产化产品。研究目的：制备高特异性、高亲和力的单克隆抗体是研发的核心问题。因此,本研究将集中开展INH-B单抗制备的关键步骤与必要条件的探索。研究表明,男性体内IN的重要生理活性形式为INH-B,其组装过程大部分在生精细胞内完成,然后释放到循环系统和精液中。女性卵泡液中INH-B的含量为几十ng/ml～几百ng/ml,比血液及精液中的含量高约103倍本实验拟尝试从人精液和/或人卵泡液中分离纯化INH-B,为单抗的筛选提供天然抗原分子。由于对人精液和卵泡液中INH-B的研究相对薄弱,更多的研究资料来源于动物,因此本研究还将对其存在形式和理化性质获得更直接的资料。主要目的有叁个：1.探索人精液和卵泡液中INH-B的有效分离纯化方法。2.鉴定人精液和卵泡液中INH-B的可能分子存在形式。3.扩大人卵泡液中蛋白质组成的信息资料。研究路线与方法：1.目的蛋白的富集：采用人精液和卵泡液为研究材料,分别利用乙腈、丙酮、乙醇叁种有机溶剂沉淀法去除样品中的高丰度蛋白,富集低丰度蛋白INH-B,以及利用饱和硫酸铵分级沉淀方法,比较四种方法对于低丰度目的蛋白INH-B的富集效果。以INH-B ELISA检测盒的结果为依据,跟踪监测并比较四种方法对于低丰度目的蛋白INH-B的富集效果。2.选用DEAE-Sephadex A-50阴离子交换柱和羟基磷灰石柱层析、肝素亲和柱方法,分离初步富集的样品以进一步纯化。同样方法监测并比较叁种方法对于样品的分离纯化效果。3.利用蛋白质等电点分离法(Rotofor System)对富集样品和柱分离样品分别做等电分离比较,以确定柱分离步骤的有效性,同时鉴定INH-B的等电点。4.利用免疫共沉淀(CO-IP)和Western-blot方法寻找阳性条带,利用质谱分析方法鉴定样品中INH-B的α、βB两个亚基的分子存在形式及成熟卵泡液中部分蛋白质的组成。研究结果：1.由于精液特殊的粘稠性(含大量的精胶蛋白),在对其进行有机溶剂蛋白沉淀和饱和硫酸铵分级沉淀的过程中,去除精胶蛋白的同时会损失大部分的INH-B。因此,经多次实验验证后,我们放弃了对于精液中INH-B的分离纯化和鉴定研究。2.卵泡液样品经丙酮、乙醇、乙腈处理后分别可清除60.9%、46.3%、88.7%的高丰度蛋白,同时乙腈法能回收61.8%的INH-B。3.通过比较肝素亲和柱方法、DEAE-Sephadex A-50阴离子交换柱和羟基磷灰石柱层析叁种方法,其中第二种方法最稳定,并且能回收样品中83.2%的INH-B。4.乙腈沉淀处理的卵泡样品中仍有较多的杂蛋白,因此,经DEAE-Sephadex A-50阴离子交换柱处理后的样品比直接用乙腈沉淀样品做Rotofor System分离的效果要好。其中,INH-B的回收率为75.3%,卵泡液中INH-B的pI在4.55左右。5.通过质谱方法,鉴定出六种成熟卵泡液中存在的蛋白质,分别是载脂蛋白D(Apolipoprotein D)、载脂蛋白A(Apolipoprotein A)、载脂蛋白M(ApolipoproteinM)、视黄醇结合蛋白4 (Retinol-binding protein 4)、甲状腺素运载蛋白(Transthyretin OS)、SERPINA1蛋白Alpha型抗胰蛋白酶(SERPINA1 Isoform 2 of Alpha-1-antitrypsin)。结论：1.卵泡液是INH-B研究的最合适材料。同时,利用乙腈法处理卵泡原液去除高丰度蛋白是最有效的方法并能保留较多的INH-B。2.使用人卵泡液为实验材料,利用INH-B本身的生化性质,通过乙腈富集、阴离子交换柱分离、等电点分离的“叁步分离法”,初步纯化获得人体卵泡液中天然INH-B蛋白分子粗制品,纯化回收率达38.7%,并较准确鉴定出其在人体中的等电点为4.55。3.利用现有的商品化抗体并没有鉴定出在精液和卵泡液中INH-B的分子存在形式。但经多个步骤纯化已经获得相对含量较高的INH-B粗制品,该产物能否满足作为抗原供筛选单抗之用,有待进一步研究。4.利用质谱方法明确鉴定了成熟卵泡液中部分蛋白质组成,六种分子。(本文来源于《北京协和医学院》期刊2015-05-01）
张耀君[6]（2014）在《小鼠腔前卵泡分离方法的研究》一文中研究指出哺乳动物卵巢皮质中含有大量的腔前卵泡,但90%在发育过程中会不断闭锁退化。开发和利用这一潜在的种质资源具有重要的实用价值,因此对腔前卵泡进行体外培养显得尤为重要,有效地将腔前卵泡分离出来是进行体外培养的第一步。虽然有关啮齿类动物的分离体系研究已取得了一定进展,但由于各试验条件的不同,分离体系仍存在许多问题,由于家畜卵巢组织的结构致密,纤维化程度比较高,问题更突出。因此,许多学者对腔前卵泡的分离进行了长期(本文来源于《黑龙江畜牧兽医》期刊2014年17期）
罗阳,杨向群,李佳琛,甘霏霏,田菁燕[7]（2014）在《新生小鼠卵巢组织的玻璃化冻存、移植及分离卵泡的体外成熟培养初步研究》一文中研究指出目的:系统地探索新生小鼠卵巢组织的玻璃化冻存建立卵巢库,移植和分离卵泡以及体外成熟培养的实验方法。方法:对1日龄小鼠卵巢组织进行冻存,解冻复苏和同种肾包膜下移植,从卵巢移植物种中进行卵泡分离和体外成熟培养。结果:①采用平衡液(ES)处理25min,玻璃化液(VS)处理3min方案冻存的卵巢组织具有更高比例的形态完整卵泡,其完整原始卵泡率均值达96.6%,显着性高于实验中其它四组方案(P<0.05);②在分别移植2周和4周后回收卵巢移植物,发现二者的卵巢回收率无显着差异(P>0.05),但移植4周组的卵泡回收数目要明显高于2周组(P<0.05);③在培养基中添加适量的自体血清(10%,V/V)能显着提高卵子的体外成熟率,培养12h后对照组中生发泡破裂(GVBD)发生率为(34.74±4.26)%,添加血清后提高至(54.60±3.37)%,成熟的MⅡ期卵子获得率从(43.17±1.31)%升高至(57.75±5.31)%,有显着性差异(P<0.05)。结论:通过该实验较好地建立了卵巢组织的玻璃化冻存、移植和卵泡分离以及体外成熟培养的实验方法。(本文来源于《现代生物医学进展》期刊2014年13期）
张悦,陈文铭,谢迟迟,谢双双,孙君慧[8]（2014）在《豚鼠卵巢组织片和分离的窦前卵泡玻璃化冷冻效果比较》一文中研究指出目的 :比较分析不同玻璃化冷冻配方对豚鼠卵巢组织片和单个窦前卵泡形态、存活率及体外发育能力的影响。方法:取5周龄雌性豚鼠卵巢,实验分新鲜对照组、组织片A液毒性组、组织片B液毒性组、卵泡A液毒性组和卵泡B液毒性组,及相应的冻融组,即组织片A液冻融组、组织片B液冻融组、卵泡A液冻融组、卵泡B液冻融组,共9组行毒性试验和冷冻保存。各组卵巢组织片行HE染色形态学观察,分离窦前卵泡经锥虫蓝染色活力测试并行体外培养。结果:A液冻融组和B液冻融组豚鼠卵巢组织片HE染色光镜观察可见大部分卵泡形态正常,A液组和B液组异常窦前卵泡数与新鲜对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);在分离的窦前卵泡锥虫蓝染色活力测试中,冻融卵巢组织片A组的卵泡复苏率(为66.1%)显着低于(P<0.05)冻融卵泡B液组(为78.5%)和新鲜对照组(为87.5%);其余组别之间差异无统计学意义。体外培养卵泡发育情况组织片冷冻组比卵泡冷冻组差,以A液组尤甚,第6天存活卵泡数目不足(为20.0%),与新鲜对照组(为60.0%)及卵泡B液冻融组(为50.0%)相比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:玻璃化冷冻法能较好地冷冻保存豚鼠卵巢组织片和分离的窦前卵泡,而单个豚鼠窦前卵泡玻璃化冷冻优于卵巢组织片的玻璃化冷冻;B液较A液更适合豚鼠卵巢卵泡的玻璃化冷冻保存。窦前卵泡的体外培养证明玻璃化冷冻复苏卵泡具有一定的继续发育能力。(本文来源于《温州医科大学学报》期刊2014年04期）
田勇,石良艳,赖志文,沈薇,杨书红[9]（2012）在《未成年小鼠卵巢卵泡膜间质细胞分离培养与鉴定》一文中研究指出目的建立一种简单有效的分离未成年小鼠卵巢卵泡膜间质细胞的新方法 ,并对分离细胞进行培养和鉴定。方法选取未成年C57BL/6小鼠(21-25d)的卵巢组织,在体式显微镜下分离干净周围组织并去包膜,用机械法去除颗粒细胞,将残余组织在LSP培养基清洗两次后用胶原酶Ⅳ-DNase(4g/L胶原酶,10g/L DNase和10g/L BSA溶于M199培养液)在37℃,5%CO2培养箱中消化分离卵泡膜间质细(本文来源于《中华医学会第十次全国妇产科学术会议妇科内分泌会场（妇科内分泌学组、绝经学组、计划生育学组）论文汇编》期刊2012-11-02）
汪建红,陈静波,海丽且木[10]（2012）在《塔里木马鹿腔前卵泡分离方法比较》一文中研究指出以分离获得的腔前卵泡数量、正常卵泡率和72h体外培养存活率为指标,比较了酶消化法、梳刮法和剪碎法3种不同方法分离塔里木马鹿Cervus elaphus yarkandensis腔前卵泡的效果。结果表明:在卵巢数目相同的情况下,以酶消化法平均获得的腔前卵泡数最多,梳刮法次之,剪碎法最少,3种不同分离方法获得腔前卵泡数量之间存在极显着差异(P<0.01);梳刮法和剪碎法分离获得的腔前卵泡正常率均极显着高于酶消化法(P<0.01);梳刮法和剪碎法分离获得的腔前卵泡在体外培养24h、48h和72h后的存活率极显着和显着高于酶消化法(培养24h、48h后,P<0.01;培养72h后,P<0.05)。由此可见,梳刮法是塔里木马鹿腔前卵泡更有效的分离方法。(本文来源于《四川动物》期刊2012年04期）
分离卵泡论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
旨在建立牦牛卵泡颗粒细胞模型以研究牦牛生殖生理机制。从林芝市牛屠宰场采集牦牛卵巢,并采用口吸管法在体视显微镜下分离卵巢表面直径为2~5 mm卵泡内的颗粒细胞,用于体外培养。结果表明:原代颗粒细胞培养12~48 h时处于潜伏期,此时细胞刚刚贴壁并且黏附不牢固,增殖分化速度较慢;培养72~96 h时,细胞进入指数增殖期,此时细胞多呈放射状,增殖分化速度最快;培养144 h时形成颗粒细胞单层;然而传代颗粒细胞生长速度较快,48 h后细胞进入指数增殖期,72 h后颗粒细胞生长至培养皿的90%左右,形成颗粒细胞单层。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
分离卵泡论文参考文献
[1].李玲霞,吴锦艳,曹小安,冯倩,杜国玉.卵泡刺激素受体FSHR234纳米抗体的分离纯化及多克隆抗体的制备[J].微生物学通报.2018
[2].王玉恒,索朗斯珠,强巴央宗,徐业芬,牛家强.西藏林芝地区牦牛卵泡颗粒细胞体外分离培养和形态观察[J].畜牧与兽医.2018
[3].丁强,李亚新,陈玉林.山羊卵巢卵泡液中外泌体分离鉴定及其对颗粒细胞的影响[C].2017年全国养羊生产与学术研讨会暨养羊学分会第七次全国会员代表大会论文集.2017
[4].杜江,辛玲,郭颖,周芳,于和鸣.人卵泡液抑制素B的分离与鉴定[J].生殖医学杂志.2015
[5].杜江.人精液和卵泡液中抑制素B（INH-B）的分离纯化与鉴定研究[D].北京协和医学院.2015
[6].张耀君.小鼠腔前卵泡分离方法的研究[J].黑龙江畜牧兽医.2014
[7].罗阳,杨向群,李佳琛,甘霏霏,田菁燕.新生小鼠卵巢组织的玻璃化冻存、移植及分离卵泡的体外成熟培养初步研究[J].现代生物医学进展.2014
[8].张悦,陈文铭,谢迟迟,谢双双,孙君慧.豚鼠卵巢组织片和分离的窦前卵泡玻璃化冷冻效果比较[J].温州医科大学学报.2014
[9].田勇,石良艳,赖志文,沈薇,杨书红.未成年小鼠卵巢卵泡膜间质细胞分离培养与鉴定[C].中华医学会第十次全国妇产科学术会议妇科内分泌会场（妇科内分泌学组、绝经学组、计划生育学组）论文汇编.2012
[10].汪建红,陈静波,海丽且木.塔里木马鹿腔前卵泡分离方法比较[J].四川动物.2012