导读:本文包含了骨髓来源的间充质干细胞论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:初诊急性髓系白血病,骨髓微环境,间充质干细胞,HL-60细胞
骨髓来源的间充质干细胞论文文献综述
宁红梅,王军,苏永锋,徐晨,扈江伟[1]（2019）在《初诊急性髓系白血病患者来源的骨髓间充质干细胞通过调节Caspase-3/survivin抑制DNR诱导的HL-60细胞凋亡》一文中研究指出目的:探讨急性髓系白血病(AML)患者的骨髓微环境在化疗耐药中的作用,观察骨髓间充质干细胞(MSC)对柔红霉素(DNR)诱导的AML细胞HL-60凋亡的影响,并探索其初步作用机制。方法:分别将健康供者和初诊AML患者来源的骨髓MSC与HL-60细胞共培养,不同的实验组添加或者不添加DNR,采用流式细胞术检测AnnexinⅤ/PI标记的HL-60细胞凋亡;通过瑞氏-吉姆萨染色观察各组HL-60细胞形态,统计原始和分化细胞所占的比例;采用Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9和Survivin的表达情况。结果:流式细胞术显示,健康供者MSC以及初诊AML患者来源MSC分别与HL-60细胞共培养未见HL-60细胞的凋亡情况有显着变化。加入DNR后,HL-60细胞凋亡率为(49. 57±7. 44)%,健康供者MSC共培养加药组和初诊AML患者来源的MSC共培养加药组凋亡率显着降低,分别为(30. 72±4. 05)%(P <0. 01)和(22. 99±4. 08)%(P <0. 01),但健康供者MSC组与初诊AML患者来源MSC组对DNR诱导HL-60细胞凋亡的抑制作用无统计学差别(P> 0. 05)。瑞氏-吉姆萨染色结果显示,初诊AML患者来源MSC共培养的HL-60细胞绝大多数处于原始状态,极少见到细胞分化。初诊AML患者来源MSC共培养组中,DNR引起的细胞凋亡和分化明显减少,HL-60细胞大多数处于原始状态。Western blot检测结果表明,初诊AML患者来源MSC和健康供者MSC共培养组的HL-60细胞内Caspase-3活性剪切均较HL-60细胞单独培养组下降,且初诊AML患者来源MSC组显着降低。此外,初诊AML患者来源MSC和健康供者MSC共培养的HL-60细胞Survivin的表达较单独药物作用组表达更高,且初诊AML患者来源MSC组表达显着增高。结论:初诊的AML患者骨髓中存在的MSC与健康人骨髓MSC可以抑制DNR诱导的HL-60细胞凋亡,其作用机制可能与抑制了HL-60细胞内Caspase-3活性,提高了Survivin的表达有关。(本文来源于《中国实验血液学杂志》期刊2019年06期）
傅小媚,霍然,邓赛,林潮金,范景皓[2]（2019）在《脂多糖刺激的骨髓间充质干细胞来源外泌体改善小鼠心肌梗死后炎症和纤维化》一文中研究指出目的:探讨脂多糖(LPS)刺激下的骨髓间充质干细胞(BMSCs)来源的外泌体对小鼠心肌梗死(MI)后的治疗作用。方法:流式成像细胞分析术鉴定BMSCs的表面标记分子,油红O和茜素红染色于镜下观察成骨成脂分化能力。LPS刺激BMSCs 48 h,提取细胞培养上清外泌体,用透射电镜和粒度分析仪捕捉其形态和粒径大小,流式细胞术和Western blot检测特异性表面标记分子及蛋白表达。建构小鼠MI模型并予以外泌体心脏局部注射,利用心脏超声、组织病理切片和PCR评价治疗结果。结果:分离的BMSCs表达CD29、CD44、CD90、CD73、CD105,未表达HLA-DR、CD14、CD34、CD45,具有成骨成脂分化能力。Western blot检测到外泌体表达Alix、HSP70、Flotillin-1蛋白,流式成像仪检测到外泌体膜表面的CD63、CD9和CD81标记分子,粒径众数为69.2 nm。LPS刺激下BMSCs产生的外泌体注射小鼠心脏后,与PBS注射的MI对照组比较,心脏超声评价7天和28天的射血分数(EF)和短轴缩短率(FS)都显着增大(P<0.01,P<0.05),在第28天的舒张末期容积(LVEDV)和收缩末期容积(LVESV)均显着减小(P<0.05),Masson染色显示纤维化面积减小(P<0.01),PCR检测到炎症因子IL-6、IL-1β、转化生长因子β(TGF-β)和趋附因子CCL2表达减少,CX3CL1表达增多,术后第14天最为明显。结论:LPS刺激的BMSCs来源外泌体可以改善小鼠MI后心肌收缩功能和纤维化,降低炎症因子表达量。(本文来源于《中国临床药理学与治疗学》期刊2019年08期）
宁红梅,王军,苏永锋,徐晨,扈江伟[3]（2019）在《初诊急性髓系白血病患者来源的骨髓间充质干细胞调节HL-60细胞的增殖、细胞周期和免疫表型》一文中研究指出目的:探讨急性髓系白血病(AML)患者的骨髓微环境在发病过程中的作用及AML患者间充质干细胞(MSC)对HL-60细胞的增殖、细胞周期和免疫表型的影响。方法:分离初诊AML患者骨髓MSC,将其和HL-60细胞共培养,以3H-TdR掺入法检测MSC对HL-60细胞增殖的影响,应用流式细胞术检测HL-60的细胞周期和免疫表型。结果:3H-TdR掺入法的结果表明,初诊AML患者骨髓MSC显着抑制HL-60增殖,并且具有良好的量效关系(r=0. 998)。细胞周期分析结果显示,MSC使HL-60细胞更多的阻滞在G0/G1期。免疫表型分析结果表明,与单独培养的HL-60细胞相比,与正常MSC和患者MSC共培养的HL-60细胞CD11a的阳性率均显着下降,分别为(50. 80±10. 41)%vs (36. 23±8. 82)%(P <0. 05)和(50. 80±10. 41)%vs (16. 93±9. 25)%(P <0. 001),患者MSC共培养组和正常MSC共培养组之间也存在显着差异(16. 93±9. 25)%vs (36. 23±8. 82)%(P <0. 001)。同样,与正常MSC和患者MSC共培养的HL-60细胞CD154表达也显着降低,分别为(65. 67±11. 91)%vs (39. 85±12. 11)%(P <0. 01)和(65. 67±11. 91)%vs (17. 18±9. 29)%(P <0. 001),且与患者MSC共培养组CD154表达降低更明显(39. 85±12. 11)%vs (17. 18±9. 29)%(P <0. 05)。CD54的表达未见改变。结论:初诊的AML患者骨髓中存在的MSC具有与健康人骨髓MSC相似的调节HL-60增殖、细胞周期和免疫表型的能力,其抑制CD11a和CD154的能力更强于健康人骨髓MSC。(本文来源于《中国实验血液学杂志》期刊2019年04期）
宁红梅,王军,苏永锋,徐晨,扈江伟[4]（2019）在《初诊急性髓系白血病患者来源的骨髓间充质干细胞成骨分化能力增强》一文中研究指出目的:探讨急性髓系白血病(AML)患者骨髓微环境对间充质干细胞(MSC)生物学特性的影响。方法:从初诊的AML患者骨髓中分离得到MSC,在倒置显微镜下观察细胞形态,采用流式细胞术测定其免疫学表型,MTT法检测其增殖能力,以成骨、成脂肪和成软骨诱导检测MSC的多向分化能力。结果:从初诊AML病患者骨髓中分离得到的MSC呈现出经典的成纤维细胞样形态;其细胞表面高表达CD29,CD44,CD73,CD105和HLA-ABC,低表达CD14,CD31,CD34,CD45,CD80,CD86和HLA-DR。与健康人骨髓MSC相比,其增殖能力未见显着差别,但是其成骨细胞分化的能力显着增强。结论:初诊的AML患者骨髓中存在的MSC具有与健康人骨髓MSC相似的细胞形态、免疫表型和增殖能力,但是其成骨分化能力显着增强。(本文来源于《中国实验血液学杂志》期刊2019年04期）
秦阳阳,王琪,洪艳[5]（2019）在《小鼠骨髓间充质干细胞来源的外泌体对小鼠肝Kupffer细胞极化的影响》一文中研究指出近年来研究证实间充质干细胞(MSC)来源外泌体(exosomes)移植治疗炎症性疾病可促进损伤修复,但具体机制尚未明确。肝内巨噬细胞(Kupffer细胞)的极化是影响肝内免疫微环境和肝脏病理变化的重要因素。本实验通过peccol分离法获得Kupffer细胞,加入脂多糖(LPS)刺激使其向M1型转化,分离纯化鉴定小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow(本文来源于《中国解剖学会2019年年会论文文摘汇编》期刊2019-08-18）
李松,梁万茹,王占义,尹航,房殿吉[6]（2019）在《人自体来源骨髓间充质干细胞治疗下颌骨放射性骨坏死疾病初步研究》一文中研究指出背景放射性治疗后下颌骨放射性骨坏死疾病发生率较高。目的人体自身来源干细胞治疗放射性骨坏死疾病的可行性。方法髂骨抽取骨髓行离心分离,取干细胞层,一部分与球状人工骨混合回植患者骨坏死区域,另一部分体外分离培养并行干细胞鉴定,定期行术后检查。结果与结论术后1个月口腔内原创口区组织愈合良好,无异常分泌物渗出,黏膜表面无充血红肿,无排异反应。术后3个月大体观察,瘘管消失。自体干细胞回植下颌骨坏死部位,对骨创恢复起到一定的作用。(本文来源于《临床医药文献电子杂志》期刊2019年54期）
范德生,甄蕾,汪黎明[7]（2019）在《miRNA-31对糖尿病小鼠来源骨髓间充质干细胞体外成骨分化的影响》一文中研究指出目的:探讨miRNA-31这一微小RNA对糖尿病小鼠来源骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外成骨分化的影响。方法:采用高糖高脂饮食加链脲佐菌素腹腔注射诱导建立Ⅱ型糖尿病小鼠模型,造模8周后,在体外原代分离培养BMSCs,检测其miRNA-31和成骨分化情况,并与正常对照组比较。再将糖尿病小鼠来源的BMSCs体外分别转染miRNA-31模拟物和miRNA-31抑制剂,再检测比较2种BMSCs的体外成骨分化能力。结果:糖尿病小鼠造模成功8周后,micro CT检测结果显示与正常对照组小鼠相比,模型组小鼠明显骨密度降低,呈现典型骨质疏松。将糖尿病小鼠来源BMSCs体外培养后,发现与对照组相比,其成骨分化能力降低,miRNA-31表达升高。而转染miRNA-31抑制剂后可部分解除糖尿病微环境对BMSCs成骨分化的抑制。结论:糖尿病微环境下BMSCs高表达miRNA-31,并可抑制BMSCs的成骨分化。(本文来源于《口腔颌面外科杂志》期刊2019年03期）
涂超,程芳[8]（2019）在《人骨髓来源间充质干细胞外泌体与肿瘤生长的关系》一文中研究指出已知间充质干细胞参与肿瘤微环境的形成并与肿瘤细胞相互作用。然而,间充质干细胞对肿瘤细胞生长的潜在功能性影响目前仍存在争议。本研究从人骨髓来源的间充质干细胞外泌体的角度,研究骨髓间充质干细胞对人骨肉瘤和人胃癌细胞生长的分子机制。在补充10%胎牛血清和1%青霉素-链霉素的完全DMEM/F12培养基中分离培养人骨髓来源的间充质干细胞,收获含有外泌体的细胞上清液并离心。在添加/不添加Hedgehog通路的小分子抑制剂GANT-61的情况下,分别用人骨髓来源的间充质干细胞的外泌体处理骨肉瘤(MG63)和胃癌细胞(SGC7901)。通过Transwell侵袭测定、划痕迁移测定和CCK-8测试来测量细胞活力。结果表明:人骨髓来源的间充质干细胞分泌的外泌体通过激活Hedgehog信号通路促进MG63和SGC7901细胞生长。Hedgehog信号通路的抑制剂GANT-61显着抑制了外泌体对肿瘤生长的促进作用。本研究为Hedgehog信号通路在人骨髓来源的间充质干细胞分泌的外泌体中诱导肿瘤进展提供了理论依据。(本文来源于《基因组学与应用生物学》期刊2019年06期）
陈思[9]（2019）在《骨髓来源间充质干细胞在良性气道狭窄中的应用前景及治疗机制初探》一文中研究指出研究目的良性气道狭窄是一种威胁生命的呼吸系统疾病。近年来,随着危重症医学和呼吸支持技术水平的提高,以及肺移植等手术的开展和普及,良性气道狭窄的发生率逐渐增高。当前,良性气道狭窄的治疗手段及疗效均有限,治疗主要包括:手术切除狭窄段及断端吻合、球囊扩张、冷冻治疗、热消融(YAG或CO_2激光、电凝、氩气刀)治疗、支架置入及局部/系统应用类固醇。以手术治疗为金标准,但受狭窄段长度及患者心肺基础情况的限制,并不适用于所有患者;介入治疗的再狭窄率高且需要定期气管镜随访。良性狭窄的主要发病机制是气道粘膜损伤和由成纤维细胞主导的异常修复~([1,2])。该疾病通常始于(感染或非感染因素导致的)气道粘膜大面积损伤,可伴随局部出血或血管淤血、伴不同程度的炎症反应(炎症细胞募集和炎症介质释放),气道粘膜继而出现水肿、坏死、脱落、溃疡,可合并病原体感染。然后,成纤维细胞大量募集和增殖,炎性细胞趋化及浸润,新生毛细血管血管形成,共同构成新鲜的肉芽组织。最后阶段是气道重塑,成纤维细胞分泌大量胶原纤维,造成胶原沉积,肉芽组织老化脱水,成纤维细胞变成具有收缩表现的肌成纤维细胞,发生组织挛缩及瘢痕狭窄。成纤维细胞的主要来源:邻近纤维结缔组织中的成纤维细胞迁移、上皮间质化(EMT)及外周血循环纤维细胞等。我们作出大胆猜想:如若从病变早期即引入治疗手段,促进粘膜修复和减轻炎症,是否可以从根源上缓解或避免肉芽组织过度增生。间充质干细胞(MSCs)兼具促进组织修复及抗炎功能,是治疗的绝佳选择。间充质干细胞(MSCs)是成体干细胞的一种,来源于发育早期中胚层,具有高度自我更新、多向分化潜能。MSCs治疗疾病有多种机制:分化代替、旁分泌、外泌体及线粒体转移。骨髓是MSCs的重要来源之一,本课题组在骨髓来源间充质干细胞(BMMSCs)研究相关领域积累了丰富的经验。为了研究BMMSCs在良性气管狭窄治疗中的潜力,我们建立了尼龙刷刮擦良性气管狭窄的SD大鼠模型,应用BMMSCs作为局部治疗,并对治疗前景和机制进行初步探索。研究方法首先我们采用全骨髓贴壁法进行SD大鼠BMMSCs的原代培养,通过流式细胞技术对BMMSCs进行表型鉴定,并进行(成骨、成脂)诱导分化鉴定。采用链蛋白酶冷消化法进行SD大鼠气管-支气管上皮细胞(TBECs)的原代培养,并进行纯度鉴定。细胞鉴定后,通过Transwell小室构建SD大鼠BMMSCs与TBECs共培养体系,体外划痕实验探索BMMSCs对上皮修复的作用。用人来源BMMSCs与正常人来源支气管上皮细胞(NHBE)重复上述共培养-划痕实验。其次,我们以220g-300g体重的雄性Sprague Dawley大鼠为研究对象,通过尼龙刷刮擦机械性损伤气道粘膜的方式,建立良性气管狭窄的SD大鼠模型,观察造模后大鼠的症状体征及生存情况。并通过HE染色及Masson染色,探索造模后不同时间点气管组织的病理变化。而后在粘膜机械损伤的局部应用1×10~6BMMSCs,通过体内实验探索BMMSCs对良性气道狭窄治疗的可行性。将SD大鼠分为3组:伪手术组、狭窄模型组(尼龙刷刮擦机械损伤)和BMMSCs治疗组(尼龙刷刮擦机械损伤+BMMSCs局部治疗),自然死亡的动物即时收集样本,其余存活动物于造模后第22天统一处死。收集气管组织,固定于4%磷酸盐缓冲的多聚甲醛,HE染色后观察病理改变,并分析评估管腔大小、测算狭窄指数。另取SD大鼠重复造模及BMMSCs治疗,通过HE染色与PAS染色探索造模+BMMSCs局部治疗后不同时间点上皮组织的修复情况。最后部分探索了BMMSCs促进上皮修复及预防肉芽组织增生的机制。我们通过CFSE荧光染料标记BMMSCs,机械损伤及BMMSCs ~(CFSE)治疗4天后对气管组织进行冰冻切片、泛角蛋白免疫荧光染色,观察BMMSCs是否能够通过直接分化替代的方式来修复上皮结构。另取SD大鼠分为3组:伪手术组、狭窄模型组(尼龙刷刮擦机械损伤)和BMMSCs治疗组(尼龙刷刮擦机械损伤+BMMSCs局部治疗),第四天处死并收集新鲜外周血及气管组织。气管组织进行RNA提取,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),用实时聚合酶链反应(qPCR)检查各细胞因子表达水平。由于肉芽组织主要成分为成纤维细胞,而循环纤维细胞为成纤维细胞主要来源之一,本研究还应用流式细胞学对不同组外周血循环纤维细胞百分比进行检测。结果一、大鼠来源细胞实验部分:划痕后以DMEM无血清培养基培养,对照组上皮细胞平均迁移速度为(19.82±5.43)μm/hr,BMMSCs共培养组为(59.42±2.976)μm/hr,p=0.0002,差异有统计学意义。人来源细胞实验部分:DMEM无血清培养基培养,单纯划痕组经过16h培养后,划痕愈合速度为(37.91±2.79)μm/hr,MSCs共培养组划痕愈合速度为(67.60±8.51)μm/hr,p<0.0001;大气道上皮细胞完全培养基重复划痕实验,对照组上皮细胞平均迁移速度为(83.92±4.91)μm/hr,BMMSCs共培养组为(124.2±5.55)μm/hr,p<0.0001。共培养体系-划痕实验证实BMMSCs可加速上皮细胞迁移及修复。二、成功建立尼龙刷刮擦良性气管狭窄的SD大鼠模型,尼龙刷机械刮擦可严重损伤气道上皮、引起肉芽组织显着增生及气管狭窄。造模第8天,大鼠生存率为0,气管几乎完全被新生肉芽组织闭塞,而对照组无死亡事件。造模后d2、4、6、8天的气管组织呈不同期病理改变,与文献报道的组织损伤修复过程相仿。叁、伪手术组狭窄指数为(5.55±2.71)%,狭窄模型组为(55.87±8.76)%,BMMSCs治疗组为(11.12±4.80)%,伪手术组与机械损伤组间狭窄度差异有统计学意义,p<0.0001;伪手术组与BMMSCs治疗组间狭窄度差异无统计学意义;机械损伤组与BMMSCs治疗组间狭窄度差异有统计学意义,p<0.0001。21天存活率伪手术组100%,机械损伤组0%,BMMSCs治疗组80%。BMMSCs局部应用可促进损伤后的上皮修复,改善肉芽形成从而减轻气道阻塞,大大降低狭窄指数,提高存活率。四、BMMSCS(CFSE绿色荧光标记)与修复后的上皮(泛角蛋白染色红色荧光)信号不重合,提示BMMSCs促进上皮修复并非通过直接分化替代的方式。伪手术组大鼠外周血循环纤维细胞为(0.85±0.34)%,狭窄模型组尼龙刷刮擦后,循环纤维细胞数量增加至(4.92±1.74)%,BMMSCs治疗组循环纤维细胞显着低于狭窄模型组(2.04±0.68)%。其中伪手术组与狭窄模型组(p=0.002)、MSC治疗组与狭窄模型组(p=0.0037)间差异有统计学意义,而BMMSCs治疗组与伪手术组间差异无统计学意义(p=0.2385)。qPCR结果提示转移生长因子β1、白细胞介素1、Collagen III、肿瘤坏死因子α在造模后第四天显着升高,BMMSCs治疗组与之相比显着降低,提示BMMSCs治疗后局部促炎因子表达量下降。结论我们成功地构建了良性气道狭窄的动物模型,操作简便,造模效果可靠,重复性好,可作为研究良性气管狭窄发生发展机制和检测治疗效果的新工具。我们通过体外共培养-划痕实验证实,BMMSCs可加速上皮修复;动物实验结果提示,气道机械损伤后,局部应用BMMSCs能够降低损伤局部炎症因子的表达,加速上皮组织修复,抑制肉芽过度增殖,可有效改善气道狭窄情况,或可作为临床上良性气管狭窄治疗的新方向。(本文来源于《中国人民解放军海军军医大学》期刊2019-05-01）
张锐毅[10]（2019）在《骨髓间充质干细胞来源外泌体对大鼠脊髓损伤后周细胞活化及血脊髓屏障的影响》一文中研究指出背景与目的脊髓损伤(Spinal Cord Injury,SCI)是由外伤、缺血、感染、免疫、肿瘤、饮酒等因素导致的脊髓或马尾神经的损伤,往往造成瘫痪、感觉异常、尿便障碍、神经痛、呼吸困难、性功能障碍等暂时或永久性的损伤节段以下神经功能障碍。在全世界范围内,自1995年以来,脊髓损伤在世界各国的发病率约从每年10.4/百万到83/百万不等,我国约每年新增脊髓损伤患者60000例。其中,绝大多数脊髓损伤患者是由于交通事故、高空坠落、暴力伤害等外伤所致,而此类创伤性脊髓损伤往往遗留永久性神经功能障碍,致残率极高,对于个人和家庭生活的幸福以及国家和社会的安宁繁荣都带来了极大的负担。全世界范围内的各大科研院所、医疗机构也都在动用大量人力物力持续不断地投入脊髓损伤相关的研究,以期寻找更为有效的治疗方法,帮助更多患者恢复健康。而在众多有前景的研究方向中,干细胞相关的治疗手段无疑是帮助脊髓损伤患者减少急性期损害、促进神经功能恢复的明日之星,具有较大的研究价值与潜力。在诸多应用于脊髓损伤的干细胞移植实验治疗中,间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells,MSCs)因其来源多样、便于获取、易于培养、能够分泌多种保护性神经营养因子且具有一定的分化能力,成为应用最为广泛的干细胞之一,在治疗过程中也取得了一定的效果。但直接移植MSCs仍存在诸如存活时间较短、难以抵达损伤区域、排异反应、过敏反应、癌变可能、异常分化、难以大量重复应用等弊端。另有研究表明,移植干细胞的旁分泌作用在其治疗功能中占据主导地位,而其分化成神经元和神经胶质细胞的数量十分有限。因此,应用由MSC主动分泌的包含多种DNA、RNA、蛋白质及神经营养因子的直径约40~100nm的均一囊泡,即MSC来源外泌体进行SCI的治疗,不仅能避免细胞移植的弊端,还能够根据需要调控、筛选并批量生产具有特定功能的外泌体。因此,应用MSC来源的外泌体治疗脊髓损伤具有更加广阔的前景,也具有更大的科研和临床价值。周细胞(Pericyte,PC)在许多生理和病理生理过程中起着关键作用,其对各种器官系统地血管稳定性具有重要意义,如中枢神经系统的血脑屏障(Blood brain barrier,BBB)、血脊髓屏障(Blood spinal cord barrier,BSCB)和冠状动脉的分支等,更重要的是,周细胞与中枢神经系统的微血管内皮细胞、神经胶质细胞、神经元共同组成了神经血管单元。通过调节中枢神经系统内毛细血管直径以及微血管灌注,周细胞调节和维持着血脑屏障的正常功能。中枢神经系统内周细胞的缺失将会引起血脑屏障破坏、神经炎症及动脉瘤的形成。此外,有研究表明周细胞具有向周围细胞和细胞基质分泌生长因子和营养因子的功能。在脊髓损伤时,脊髓微血管周细胞的损坏、缺失、迁移将引起血脊髓屏障破坏,加剧炎症和水肿;其异常分化可能加剧瘢痕生成,影响预后;其异常的旁分泌功能可能提高血脊髓屏障的通透性。因此,周细胞在脊髓损伤以及中枢神经系统疾病中扮演了关键角色,然而对于周细胞的认识还较浅,关于其功能与机制的研究相对较少,亟待进一步探索,有望成为诸多疾病的治疗新靶点。本研究通过试剂盒法提取骨髓间充质来源外泌体(Bone marrow mesenchymal stem cell-exosome,BMSC-exo),原位注射于SCI大鼠模型的损伤部位,在组织学和行为学观察移植外泌体对周细胞覆盖率、血脑屏障稳定性以及神经功能恢复的影响。在体外细胞模型中,观察外泌体治疗后对内皮屏障的作用,并对其潜在的分子机制进行初步探索。材料与方法:全骨髓培养法分离BMSCs后于适宜条件下进行培养及传代,使用外泌体提取试剂盒提取外泌体,透射电镜、粒径分析、流式细胞术鉴定外泌体。外泌体原位注射于SCI大鼠,7天时进行步态分析后取材进行免疫荧光染色观察PDGFβ、CD31、NFκB等,evens blue检测血脑屏障通透,western blot测定组织匀浆中紧密连接蛋白。将外泌体加入TNFα处理的大鼠脊髓原代周细胞,Luminex assay检测其对周细胞分泌细胞因子的影响。将周细胞培养基上清加入大鼠脊髓血管内皮细胞,观察其对内皮屏障的影响。结果1.由大鼠骨髓提取的骨髓间充质干细胞利用western blot检测呈CD90+,CD34-。2.由大鼠骨髓间充质干细胞分离出的外泌体电镜下呈大小相对均一的类圆形或圆形模型结构,直径约40-100nm,western blot示CD9+,CD63+。3.术后28天时,BBB评分及步态分析示治疗组后肢运动功能恢复较损伤组好,其组间差异存在统计学意义。4.术后7天取材的脊髓标本示治疗组血脊髓屏障通透性较低,内皮紧密连接蛋白水平较高,周细胞覆盖率较高,与损伤组之间的差异有统计学意义。5.由大鼠脊髓提取的原代脊髓血管周细胞经免疫阳光染色示α-SMA+,PDGFRβ+;细胞免疫荧光显示PKH26标记的外泌体进入周细胞。6.经氧糖剥夺预处理的周细胞培养基上清较对照组具有更高的VEGF水平,将其加入大鼠血管内皮细胞,内皮屏障功能相较于对照组减退,差异具有统计学意义。结论BMSCs来源的外泌体能够通过影响脊髓损伤动物模型中损伤区域周细胞的活化与分泌作用,稳定血脊髓屏障,减轻神经功能功能损害,改善预后。(本文来源于《郑州大学》期刊2019-05-01）
骨髓来源的间充质干细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:探讨脂多糖(LPS)刺激下的骨髓间充质干细胞(BMSCs)来源的外泌体对小鼠心肌梗死(MI)后的治疗作用。方法:流式成像细胞分析术鉴定BMSCs的表面标记分子,油红O和茜素红染色于镜下观察成骨成脂分化能力。LPS刺激BMSCs 48 h,提取细胞培养上清外泌体,用透射电镜和粒度分析仪捕捉其形态和粒径大小,流式细胞术和Western blot检测特异性表面标记分子及蛋白表达。建构小鼠MI模型并予以外泌体心脏局部注射,利用心脏超声、组织病理切片和PCR评价治疗结果。结果:分离的BMSCs表达CD29、CD44、CD90、CD73、CD105,未表达HLA-DR、CD14、CD34、CD45,具有成骨成脂分化能力。Western blot检测到外泌体表达Alix、HSP70、Flotillin-1蛋白,流式成像仪检测到外泌体膜表面的CD63、CD9和CD81标记分子,粒径众数为69.2 nm。LPS刺激下BMSCs产生的外泌体注射小鼠心脏后,与PBS注射的MI对照组比较,心脏超声评价7天和28天的射血分数(EF)和短轴缩短率(FS)都显着增大(P<0.01,P<0.05),在第28天的舒张末期容积(LVEDV)和收缩末期容积(LVESV)均显着减小(P<0.05),Masson染色显示纤维化面积减小(P<0.01),PCR检测到炎症因子IL-6、IL-1β、转化生长因子β(TGF-β)和趋附因子CCL2表达减少,CX3CL1表达增多,术后第14天最为明显。结论:LPS刺激的BMSCs来源外泌体可以改善小鼠MI后心肌收缩功能和纤维化,降低炎症因子表达量。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
骨髓来源的间充质干细胞论文参考文献
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