导读:本文包含了抗体编码论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:拟南芥,顶端弯钩,HOOKLESS1,早花
抗体编码论文文献综述
郭佳[1]（2019）在《拟南芥HOOKLESS1基因的功能研究及其编码蛋白的抗体制备》一文中研究指出双子叶植物种子在黑暗中萌发时,为了使植物快速穿破土壤见光并进行光合作用,形成顶端弯钩结构来保护植物幼嫩分生组织不受损害。顶端弯钩的形成受生长素、赤霉素和乙烯等激素以及光照等外界环境条件的复杂调控。研究表明乙烯应答基因HOOKLESS1对顶端弯钩的形成具有调控作用。此外,拟南芥HLS1基因还参与调控生长素的分布和糖响应基因的表达以及植物免疫。本研究以拟南芥HLS1基因为研究对象,以HLS1突变体hls1-1和Salk_136528c为材料,对HLS1基因进行克隆和功能的研究。得出以下实验结果:(1)通过对不同环境的T2代转基因植物进行GUS组织化学染色,结果显示HLS1主要在植物新生组织和器官中表达。通过拟南芥WT叶肉细胞原生质体转化实验对HLS1进行亚细胞定位发现HLS1定位在细胞核和晚期内体,推测HLS1与内体参与的生物学途径有关。系统进化树和蛋白序列比对分析发现HLS1的生物学功能具有较强保守型。(2)构建二元表达载体,以HLS1基因突变体hls1-1和Salk_136528c为遗传背景,农杆菌转化法过表达HLS1建立回复系。对回复系的研究发现,过表达HLS1可以使hls1-1和Salk_136528c顶端弯钩缺失、早花以及碳饥饿诱导衰老下的早衰表型均回复为野生型,说明HLS1参与调控顶端弯钩的形成和植物叶片衰老。(3)构建pET28a-HLS1原核表达载体,转化到BL21(DE3),用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导获得重组蛋白HLS1-His。镍柱亲和纯化重组蛋白后免疫家兔获得抗HLS1血清,利用抗原亲和纯化抗血清获得HLS1多克隆抗体,并在HLS1转基因株系中检测HLS1的表达。成功制备拟南芥HLS1多克隆抗体,为HLS1在植物发育中的功能研究奠定基础。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2019-06-01）
王媛媛,侯彩玲,王志民[2]（2018）在《基于戊二醛的氨基微球上DNA编码和抗体蛋白固定》一文中研究指出用戊二醛和EDC/sulfo-NHS分别活化表面修饰了氨基和羧基的微球,在2种微球上分别固定相等摩尔浓度的氨基标记的发卡DNA和未经修饰的人TNF α捕获抗体,结果表明戊二醛的交联效果优于EDC/sulfo-NHS。从而选择戊二醛为交联剂将Cy3标记的发卡DNA和未经修饰的藻红蛋白(RPE)分别固定到微米球表面并进行了荧光观察,再通过调整蛋白和DNA的比例将FAM标记的发卡DNA和RPE同时固定到微米球上并观察荧光,为实现用DNA序列编码的微米球上多种生物标志物酶联免疫吸附检测奠定了基础。用RPE为荧光标记物采用双抗体夹心法在微球上进行荧光免疫反应,为商品化诊断试剂的研究提供一定的参考。(本文来源于《上海交通大学学报(农业科学版)》期刊2018年05期）
马素贞,王涛,龙慧玲,国果,杨阳[3]（2018）在《家蝇u93基因编码蛋白多克隆抗体的制备与鉴定》一文中研究指出目的:制备特异性的u93基因编码蛋白的多克隆抗体。方法:采用原核表达技术,体外诱导表达u93重组蛋白;采用蛋白免疫法,以纯化的重组蛋白为抗原免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体;用ELISA法检测多克隆抗体效价,运用Western-blot方法对u93多克隆抗体的纯度和特异性进行分析。结果:制备的兔抗u93重组蛋白多克隆抗体效价为1∶4 000,Western-blot结果显示该多克隆抗体能特异性识别u93重组蛋白。结论:成功制备u93基因编码蛋白的多克隆抗体。(本文来源于《贵州医科大学学报》期刊2018年09期）
何玲玲[4]（2018）在《人巨细胞病毒UL146基因编码蛋白vCXCL-1的重组表达及其多克隆抗体的制备和鉴定》一文中研究指出人巨细胞病毒(HCMV)是一种典型的β疱疹病毒,因其在人体内可长期潜伏感染而成为最危害人类健康的病毒之一。HCMV具有多种免疫逃避机制逃避宿主的免疫应答从而在体内传播和扩散。HCMV的UL146基因是HCMV的UL/b’区的一个开放阅读框(ORF),编码一种有助于病毒潜伏和扩散的α趋化因子vCXCL-1。然而由于缺少一些研究工具如vCXCL-1蛋白的抗体,这些分子机制并没有很详细的研究。为了进一步研究vCXCL-1进行免疫逃避的机制,本研究制备了针对vCXCL-1的多克隆抗体,为UL146在HCMV潜伏中所扮演的角色研究提供了有效的工具。本文主要通过原核表达人巨细胞病毒UL146基因编码蛋白vCXCL-1免疫新西兰大白兔的方法来制备多克隆抗体,方法如下:(1)HCMV Towne UL146基因全长的克隆构建:首先以HCMV BAC Towne文库为模板扩增出HCMV Towne UL146基因全长,将UL146全长基因经双酶切插入到原核表达载体pET32a(+)中,将载体与目的片段经T4连接酶连接后导入大肠杆菌DH5α中进行克隆,对构建好的克隆菌提取质粒进行双酶切和测序鉴定。(2)重组质粒的原核诱导表达:将构建成功的重组质粒pET32a(+)-UL146导入到大肠杆菌BL21(DE3)宿主表达菌中加入诱导剂进行诱导表达,优化出重组蛋白在原核细胞中表达的最佳温度、诱导剂浓度和时间,并用Western blot方法分析重组蛋白在原核中的表达形式。(3)重组蛋白的纯化:在优化好的条件下将重组蛋白进行大量诱导表达,分离出菌体经超声破碎后用8 M尿素溶解,将溶解后的蛋白经镍柱分离纯化,并将纯化后的蛋白进行透析除盐,用SDS-PAGE凝胶电泳结合灰度扫描分析纯化后的蛋白的纯度。(4)多克隆抗体的制备及鉴定:以纯化后的蛋白作为免疫抗原,经超滤浓缩和蛋白定量后采用皮下多点注射法免疫新西兰大白兔,获得抗血清,将符合效价的抗血清进行纯化得到纯度较高的多克隆抗体,并用Western blot定性检测多克隆抗体。(5)多克隆抗体的应用:用anti-vCXCL-1兔多克隆抗体作为一抗,用Western blot法检测病毒天然蛋白vCXCL-1在细胞中的表达情况,用间接免疫荧光法检测病毒天然蛋白vCXCL-1在细胞中的定位情况。通过以上方法获得的结果如下:(1)HCMV Towne UL146基因全长的克隆构建:成功从HCMV BAC Towne文库中扩增出HCMV Towne UL146基因全长,将UL146全长基因插入到原核表达载体pET32a(+)的两个限制性酶切位点Sal I和BamH I之间构建克隆,阳性克隆经双酶切鉴定和测序鉴定正确。(2)重组质粒的原核诱导表达:将测序正确的pET32a(+)-UL146重组质粒成功导入至大肠杆菌BL21(DE3)宿主表达菌后,经诱导条件优化,确定重组蛋白在原核细胞中诱导表达的最佳温度为20℃,最佳诱导剂浓度为0.5 mM,最佳诱导时间为10 h,并确定重组蛋白在原核细胞中以包涵体的形式表达。(3)重组蛋白的纯化:重组蛋白经镍柱纯化后经SDS-PAGE凝胶电泳并结合灰度扫描分析出蛋白纯度较高,达80%以上,可用于动物免疫。(4)多克隆抗体的制备及鉴定:免疫后获得的抗血清经ELISA测定,效价达100,000,经Western blot分析,anti-vCXCL-1多克隆抗体可定性检测vCXCL-1重组蛋白。(5)多克隆抗体的应用:经Western blot分析,anti-vCXCL-1多克隆抗体可检测病毒天然蛋白vCXCL-1在细胞中的表达;经间接免疫荧光分析,anti-vCXCL-1多克隆抗体可检测病毒天然蛋白vCXCL-1在细胞中的定位。综上,本实验成功构建pET32a(+)-UL146重组质粒,将其导入BL21(DE3)宿主菌诱导表达,经条件优化,成功获得以包涵体形式存在的高表达量的重组蛋白,重组蛋白经镍柱纯化后获得高纯度的重组蛋白并将其作为免疫兔子的抗原,经数次免疫后获得高效价的抗血清,将抗血清进行纯化获得高质量的多克隆抗体,对获得的多克隆抗体进行定性分析表明成功获得anti-vCXCL-1多克隆抗体,并且该抗体可用于检测病毒天然蛋白vCXCL-1在细胞中的表达和定位。(本文来源于《暨南大学》期刊2018-06-30）
李博[5]（2018）在《广谱识别PRRS病毒单克隆抗体在ELISA法中检测病毒的应用及编码序列测定》一文中研究指出猪繁殖与呼吸综合征(PRRS,俗称猪蓝耳病)是严重危害全世界生猪养殖产业的疫病。多年来PRRSV在我国长期且大范围流行并且已经造成极为严重的经济损失。本研究的目的就是利用抗PRRSV M蛋白的单克隆抗体、通过捕获PRRSV抗原来确立一种ELISA检测技术,主要用于PRRS的诊断和监测,同时对该单克隆抗体进行纯化和轻链重链编码序列测定并与Pub Med上已公布的小鼠抗体编码基因进行比对。结果主要包括以下几方面:1、通过对纯化后单抗亚型鉴定,该单抗亚型为IgG2b,而后用Protein G Resin层析柱来纯化Ig G。纯化后的PRRSV Anti-M-Mab凝胶电泳图中条带清楚且无杂带,说明纯化后的Anti-M-Mab纯度较高,杂蛋白较少。另外,对杂交瘤细胞进行基因组测序,结果验证该单克隆抗体为胚系基因所编码,序列比对显示其整体编码序列与胚系可变区基因的同源性高达99%,无体细胞突变和亲和力成熟的过程。2、将SD16,GD-HD,JXA1,VR2332,VR2385,CH1a,NADC30L-Lik分别接种于易感细胞Mac145,通过IFA用杂交瘤上清检测上述毒株,结果可知上述7种毒株均可与Anti-M-Mab杂交瘤上清特异性结合,故可得出Anti-M-Mab具有广谱识别PRRSV毒株的特性。基于以上结论,后进行了SD16与Anti-M-Mab的间接ELISA实验,从而进一步验证ELISA方法的可行性。3、由于双抗夹心ELISA可直接捕获病毒且敏感度高,故建立一种双抗夹心ELISA检测PRRSV方法。前期对ELISA条件进行摸索,基于该阶段结果,用SD16,GD-HD,JXA1,VR2332,VR2385,CH1a毒株进行实验,结果表明均可特异性结合。随后依次进行病毒倍比稀释,在TCID50=10-6/0.1m L水平上特异性显着,效果良好,可应用于实验室PRRSV检测诊断。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2018-05-01）
郑树城,李莹莹,王庆,曾伟伟,王英英[6]（2018）在《鲤疱疹病毒3型ORF136基因编码蛋白多克隆抗体的制备与鉴定》一文中研究指出为了对鲤疱疹病毒3型(Cyprinid herpesvirus 3,CyHV-3)ORF136基因编码蛋白进行功能研究和血清学诊断,本实验通过对ORF136基因推导的第31~157位氨基酸序列进行PCR扩增,并与原核载体pET-32a(+)连接,转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态后进行IPTG诱导表达,将纯化后的重组蛋白免疫新西兰白兔(Oryctolagus cuniculus)以制备ORF136多克隆抗体,运用Western blot和间接免疫荧光技术对抗体进行鉴定。结果表明,重组融合表达蛋白大小与预期一致,约为35 kD,且主要分布在包涵体中。Western blot分析显示,免疫兔后获得的纯化ORF136多克隆抗体能特异性识别纯化的CyHV-3和感染CyHV-3的KS细胞;间接免疫荧光分析进一步表明ORF136多抗能识别感染CyHV-3的KS细胞。ORF136多克隆抗体的制备为ORF136蛋白功能研究和CyHV-3血清学诊断方法的建立提供了重要基础。(本文来源于《中国水产科学》期刊2018年01期）
赵萍,贾东升,郭剑光,魏太云[7]（2017）在《水稻条纹花叶病毒编码结构蛋白的抗体制备与检测》一文中研究指出水稻条纹花叶病毒(Rice stripe mosaic virus,RSMV),属于弹状病毒科质型弹状病毒属的一个新种,由电光叶蝉以持久增殖型方式传播。该病毒共编码2个非结构蛋白P3和P6,以及5个结构蛋白:核衣壳蛋白(N)、糖蛋白(G)、核糖核酸聚合酶(L)、磷酸化蛋白(P)和基质蛋白(M)。由于是2017年首次报道的新病毒,目前对该病毒由介体昆虫传播的机制尚不清楚。为了便于研究RSMV在介体昆虫体内的侵染机制,本研究首先通过原核表达N、P、M、G蛋白,并免疫注射小鼠制备了N、P、M、G蛋白的多克隆抗体。通过Western blot检测,N、P、M、G蛋白均可在RSMV侵染的昆虫体内检测到特异性蛋白条带。随后对抗血清进行纯化,并交联荧光素。通过免疫荧光标记检测RSMV侵染的电光叶蝉消化道组织,共聚焦显微镜观察发现N、P抗体可特异性标记电光叶蝉消化道内的病毒,表明N和P抗体可用于昆虫体内病毒的免疫荧光标记检测;而M和G抗体不能特异性标记RSMV编码的蛋白,相关抗体仍需改变方法进行重新制备。针对N和P抗体,笔者通过免疫荧光标记方法对实验室饲毒条件下电光叶蝉的带毒率进行检测,发现饲毒后6天的电光叶蝉带毒率高达60%以上,RT-PCR方法也验证了该检测结果。综合以上研究结果,本研究制备的N和P抗体可用于检测病毒在介体昆虫体内的分布,并可用于昆虫带毒率的检测,为解析RSMV与介体昆虫间的互作机制和病害田间检测奠定了基础。(本文来源于《中国植物病理学会2017年学术年会论文集》期刊2017-07-25）
陈江曼,李永刚,王佳美,佟伟,任雨舒[8]（2016）在《人致病性呼肠孤病毒M3编码蛋白纯化及多克隆抗体制备》一文中研究指出目的根据构建的人致病性纳尔逊海湾病毒(NBVs)M3基因片段质粒,纯化融合蛋白制备NBVs M3多克隆抗体。方法利用构建的纳尔逊海湾病毒(NBVs)M3基因质粒Pris His MB-M3,转化至大肠埃希菌(E.coil)BL21(DE3)感受态细胞中,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,产物经过镍柱亲和层析法获得Pris His MB-M3融合蛋白;将纯化的融合蛋白作为抗原免疫家兔,获得NBVs M3多克隆抗体;蛋白免疫印迹检测(Western blot)蛋白准确性以及多克隆抗体抗性。结果 SDS-PAGE电泳考马斯亮蓝染色检测显示:25℃、IPTG浓度为0.3 mmol/L,诱导12 h,Pris His MB-M3融合蛋白表达量最高;在咪唑浓度为MCAC-20、MCAC-40条件时洗脱下目的蛋白。用纯化的融合蛋白免疫家兔制备抗体,Western blot验证成功制备出NBVs M3多克隆抗体。结论成功获得了灵敏性及特异性较高的纳尔逊海湾病毒(NBVs)M3多克隆抗体,为进一步研究该病毒的致病性提供了很高的应用价值。(本文来源于《中国现代医学杂志》期刊2016年18期）
王玮,管利萍,张静,侯岁稳[9]（2016）在《拟南芥DELLA蛋白编码基因RGA和GAI的原核表达和多克隆抗体制备》一文中研究指出通过聚合酶链反应方法扩增了RGA和GAI两个拟南芥DELLA蛋白基因,并将其克隆到pGEX-4T-3原核表达载体上,转化大肠杆菌Rosetta菌株,利用异丙基硫代半乳糖苷诱导表达了分子量为90 kD的GST-RGA和分子量为85 kD的GST-GAI融合蛋白,这两种融合蛋白均以包涵体的形式存在.将包涵体直接作为抗原免疫新西兰白兔,制备出多克隆抗体血清,血清效价超过1:400 000.WB分析结果表明这两种抗体可以特异性识别拟南芥RGA和GAI蛋白,为进一步研究DELLA蛋白的调控机制奠定了基础.(本文来源于《兰州大学学报(自然科学版)》期刊2016年03期）
庞战军,周君桂[10]（2015）在《葡萄胎病理相关基因F10编码蛋白单克隆抗体的制备与应用》一文中研究指出目的构建原核质粒表达葡萄胎相关新基因F10重组蛋白,分离纯化制备其单克隆抗体,并鉴定其生物学特性。方法用逆转录聚合酶链反应法从成人组织中扩增F10编码序列,将其克隆到p ET28a原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)内进行诱导表达F10基因重组蛋白。以纯化后的重组蛋白免疫Balb/c小鼠制备单克隆抗体。ELISA法检测杂交瘤细胞分泌F10单克隆抗体的效价和类型,免疫组织化学染色检测F10蛋白在葡萄胎及胎盘组织中的表达,鉴定制备F10单克隆抗体的特异性。结果成功构建了p ET28a/F10原核表达质粒并获得高纯度的重组F10蛋白。筛选出3株能稳定分泌抗F10蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞系,其效价比高达1∶7.2×105,免疫球蛋白类型均为Ig G1类。免疫组织化学染色显示该抗体能特异结合葡萄胎及胎盘绒毛组织中的F10蛋白,且葡萄胎组织中F10蛋白的表达显着高于正常胎盘组织。结论表达及纯化的重组F10蛋白纯度高,免疫原性强。以此为抗原制备的抗F10蛋白的单克隆抗体效价高、特异性强,可用于F10功能的进一步研究。(本文来源于《免疫学杂志》期刊2015年02期）
抗体编码论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
用戊二醛和EDC/sulfo-NHS分别活化表面修饰了氨基和羧基的微球,在2种微球上分别固定相等摩尔浓度的氨基标记的发卡DNA和未经修饰的人TNF α捕获抗体,结果表明戊二醛的交联效果优于EDC/sulfo-NHS。从而选择戊二醛为交联剂将Cy3标记的发卡DNA和未经修饰的藻红蛋白(RPE)分别固定到微米球表面并进行了荧光观察,再通过调整蛋白和DNA的比例将FAM标记的发卡DNA和RPE同时固定到微米球上并观察荧光,为实现用DNA序列编码的微米球上多种生物标志物酶联免疫吸附检测奠定了基础。用RPE为荧光标记物采用双抗体夹心法在微球上进行荧光免疫反应,为商品化诊断试剂的研究提供一定的参考。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
抗体编码论文参考文献
[1].郭佳.拟南芥HOOKLESS1基因的功能研究及其编码蛋白的抗体制备[D].西北农林科技大学.2019
[2].王媛媛,侯彩玲,王志民.基于戊二醛的氨基微球上DNA编码和抗体蛋白固定[J].上海交通大学学报(农业科学版).2018
[3].马素贞,王涛,龙慧玲,国果,杨阳.家蝇u93基因编码蛋白多克隆抗体的制备与鉴定[J].贵州医科大学学报.2018
[4].何玲玲.人巨细胞病毒UL146基因编码蛋白vCXCL-1的重组表达及其多克隆抗体的制备和鉴定[D].暨南大学.2018
[5].李博.广谱识别PRRS病毒单克隆抗体在ELISA法中检测病毒的应用及编码序列测定[D].西北农林科技大学.2018
[6].郑树城,李莹莹,王庆,曾伟伟,王英英.鲤疱疹病毒3型ORF136基因编码蛋白多克隆抗体的制备与鉴定[J].中国水产科学.2018
[7].赵萍,贾东升,郭剑光,魏太云.水稻条纹花叶病毒编码结构蛋白的抗体制备与检测[C].中国植物病理学会2017年学术年会论文集.2017
[8].陈江曼,李永刚,王佳美,佟伟,任雨舒.人致病性呼肠孤病毒M3编码蛋白纯化及多克隆抗体制备[J].中国现代医学杂志.2016
[9].王玮,管利萍,张静,侯岁稳.拟南芥DELLA蛋白编码基因RGA和GAI的原核表达和多克隆抗体制备[J].兰州大学学报(自然科学版).2016
[10].庞战军,周君桂.葡萄胎病理相关基因F10编码蛋白单克隆抗体的制备与应用[J].免疫学杂志.2015