导读:本文包含了小豆蔻明论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:肝癌,小豆蔻明,凋亡,STAT3
小豆蔻明论文文献综述
杨宇[1]（2019）在《小豆蔻明抗肝癌的多重效应及其机制的研究》一文中研究指出背景:肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是消化系统最常见的恶性肿瘤之一,同时也是导致癌症相关死亡的第二大原因。中国是肝癌发病率最高的国家。HCC是一种典型的炎症相关性癌症,约90%的HCC与病毒性肝炎、过量饮酒、NAFLD或NASH所致的慢性肝炎有关。HCC的主要治疗手段为手术、放疗、化疗等。然而由于HCC起病隐匿,就诊时多数患者已经失去最佳的手术时机。此外,以外科手术为主的治疗模式效果并不尽如人意,对于传统的化疗药物,HCC具有耐药性,并且除了耐药性,化疗所造成的副作用也是严重肝病患者难以承受的。因此寻找有效的药物治疗方法成为当下研究的热点,而新的化疗策略将重点放在具有更少副作用的药物上。从天然植物中提取的物质由于副作用少以及抗肿瘤作用强而被视作潜在的抗肿瘤药物,近年来备受关注。小豆蔻明(cardamonin,CAR)是一种主要存在于姜科山姜属植物草豆蔻种子中的黄酮类单体。CAR具有多种生物活性,包括具有抗炎、扩张血管、降血糖、抗感染、抗动脉粥样硬化、预防心肌梗死后心室重建、降低氧化应激水平、降低肝脏缺血再灌注损伤等作用。此外,在多发性骨髓瘤、肺癌、直肠癌、胶质母细胞瘤、乳腺癌、鼻咽癌、前列腺癌、卵巢癌中,CAR都可发挥不同程度的抗肿瘤效应。CAR在不同的肿瘤中具有不同的抗肿瘤效应,包括抑制肿瘤细胞的增殖,迁移和侵袭能力,诱导肿瘤细胞凋亡,自噬以及周期阻滞等。由于CAR具有明显的抗肿瘤作用,近年来受到广泛关注。然而CAR在HCC中的作用及其具体机制,还没有被系统研究。目的:通过研究CAR作用下,肝癌细胞活力、增殖能力、迁移能力、侵袭能力、细胞周期以及凋亡水平的变化,明确CAR在HCC中的作用,同时探讨其具体的作用机制。方法:1、采用CCK-8实验检测不同浓度CAR(10、20、30、40、50μM)和不同作用时间(6、12、24、36、48 h)对肝癌细胞QGY-7701、Hep G2活力的影响。2、采用克隆形成实验检测不同浓度CAR(20、30、40μM)对QGY-7701、Hep G2增殖能力的影响。3、采用划痕实验检测30μM CAR对QGY-7701、Hep G2迁移能力的影响。4、采用Transwell侵袭实验检测30μM CAR对QGY-7701、Hep G2侵袭能力的影响。5、采用流式细胞技术检测不同浓度CAR(20、30、40μM)对QGY-7701、Hep G2细胞周期的影响。6、采用光镜和荧光显微镜观察30μM CAR处理后QGY-7701、Hep G2细胞形态及细胞核形态的改变。7、采用流式细胞技术检测不同浓度CAR(20、30、40μM)对QGY-7701、Hep G2凋亡的影响。8、采用Western blot检测不同浓度CAR(20、30、40μM)作用下,QGY-7701、Hep G2凋亡相关蛋白cleaved caspase 3、cleaved PARP、Bax、Bcl-2的变化情况。9、采用Western blot检测不同浓度CAR(20、30、40μM)作用下,Hep G2中signal transducer and activator of transcription 3(STAT3)磷酸化水平变化情况。10、采用q PCR检测30μM CAR对Hep G2细胞STAT3下游基因RACGAP1、TGF-β、cyclin D1、cyclin E2、MMP-2、MMP-9基因表达量的影响。11、采用q PCR检测STAT3信号通路抑制剂Stattic对Hep G2细胞RACGAP1、TGF-β、MMP-2、MMP-9基因表达量的影响。12、采用克隆形成实验、划痕实验、Transwell侵袭实验、流式细胞技术检测Stattic对Hep G2细胞增殖、迁移、侵袭能力以及凋亡的影响。13、采用Western blot检测不同浓度CAR(20、30、40μM)作用下,Hep G2细胞c-Jun N-terminal kinase(JNK)信号通路的变化情况。14、采用流式细胞技术、Western blot检测JNK信号通路抑制剂SP600125对CAR诱导Hep G2细胞凋亡的影响。15、采用Western blot检测JNK信号通路与STAT3信号通路之间的上下级关系。结果:1、CAR可以抑制QGY-7701、Hep G2的细胞活力,并且呈剂量与时间依赖性。2、CAR可以抑制QGY-7701、Hep G2的增殖、迁移以及侵袭能力。3、CAR对QGY-7701、Hep G2的细胞周期无明显影响。4、CAR通过上调促凋亡蛋白、下调抗凋亡蛋白的表达诱导QGY-7701、Hep G2凋亡。5、CAR通过抑制STAT3信号通路,下调RACGAP1、TGF-β、MMP-2、MMP-9的表达进而抑制Hep G2增殖、迁移和侵袭能力。6、CAR通过激活JNK信号通路进而诱导Hep G2凋亡。7、JNK信号通路激活可负向调节STAT3磷酸化水平。结论:1、CAR可明显抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭能力并诱导肝癌细胞凋亡。2、CAR通过激活JNK信号通路诱导肝癌细胞凋亡。3、激活的JNK信号通路负向调节STAT3磷酸化水平,进而降低RACGAP1、TGF-β、MMP-2、MMP-9基因表达从而抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭能力。(本文来源于《吉林大学》期刊2019-05-01）
岳育杨[2]（2019）在《小豆蔻明诱导黑色素瘤M14凋亡及其机制的研究》一文中研究指出目的:黑色素瘤是最具侵袭性的皮肤肿瘤,在过去的几十年中,黑色素瘤的发病率一直在增加。特别是皮肤黑色素瘤占全世界新发恶性肿瘤病例的1.6%,且发病率在世界上以每年2-7%的速率增长。传统的疗法如外科手术、化疗、放疗的治疗效果仍然不理想,因此研究人员致力于寻找对肿瘤细胞影响大并对正常细胞毒性最小的药物。近年来,中草药有效成分的作用越来越受到全世界的关注,其对肿瘤作用的研究是肿瘤研究领域的新方向。小豆蔻明作为草豆蔻的种子中提取的生物碱类单体成分,具有广泛的生物活性和抗肿瘤作用。目前,研究已证实小豆蔻明对多种肿瘤细胞具有抑制作用,但仍无小豆蔻明针对黑色素瘤细胞作用的研究。本研究主要通过小豆蔻明处理黑素瘤M14细胞系,观察其对M14细胞增殖、凋亡及相关凋亡蛋白的影响,探讨其可能的机制。方法:1.细胞培养。将黑色素瘤M14细胞培养于含10%胎牛血清的1640培养基,放入37℃,5%CO2的培养箱中培养。2.使用MTS法检测小豆蔻明对黑色素瘤M14细胞增殖的影响。实验设3组:空白对照组只加培养基无细胞无小豆蔻明,阴性对照组为有含细胞的培养基且无小豆蔻明,实验组为含有细胞的培养基,培养基加有以下浓度的小豆蔻明(30、60、90、120μmol/L),每组6个复孔。培养24h,48h,72h后加入MTS检测小豆蔻明对黑色素瘤M14细胞增殖活力的影响,计算不同浓度药物浓度下细胞的存活率。3.应用流式细胞术检测小豆蔻明对黑色素瘤M14细胞凋亡的影响。实验设2组:阴性对照组为含有细胞的培养基且无小豆蔻明,实验组为含有细胞的培养基,培养基加有以下浓度的小豆蔻明(30、60、90μmol/L)。培养24小时后进行检测。4.应用实时荧光定量PCR法(Real-time quantitative PCR,RT-q PCR)检测测经小豆蔻明药物处理后的M14细胞凋亡相关基因(BAX和BCL2)在mRNA水平的表达。实验设2组阴性对照组为含有细胞的培养基且无小豆蔻明,实验组为含有细胞的培养基,培养基加有以下浓度的小豆蔻明(30、60、90μmol/L)。培养24小时后提取RNA进行检测。5.应用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测经小豆蔻明药物处理后的凋亡相关蛋白(BAX,BCL2,Cleaved Caspase8,Cleaved Caspase9、Cleaved PARP以及P65)的表达情况。实验设2组:阴性对照组为含有细胞的培养基且无小豆蔻明,实验组为含有细胞的培养基,培养基加有以下浓度的小豆蔻明(30、60、90μmol/L)。培养24小时后提取蛋白进行检测。结果:1.MTS结果显示,经过不同浓度的小豆蔻明处理24h后黑色素瘤M14细胞的存活率分别为(87.9±4.2)%,(78.2±2.4)%、(70.1±2.2)%、(44.0±3.2)%,通过两两比较,各实验组与阴性对照组间的差异具有统计学意义(P<0.05);小豆蔻明处理48小时的存活率分别为(76.0±1.6)%、(35.5±2.2)%、(32.0±1.3)%、(23.5±1.7)%,经两两比较,各实验组与阴性对照组间的差异具有统计学意义(P<0.05);小豆蔻明处理72小时的存活率分别为(40.1±1.3)%、(34.6±2.3)%、(23±2.2)%、(18.3±2.0)%,经两两比较,各实验组与阴性对照组间的差异具有统计学意义(P<0.05)。2.流式细胞术结果显示浓度不同的小豆蔻明处理黑色素瘤M14细胞24小时后细胞凋亡情况,随着小豆蔻明剂量的增加,Annexin V阳性细胞(早期凋亡细胞与晚期凋亡细胞之和)的比例也在逐步增加。3.RT-qPCR结果显示,浓度不同的小豆蔻明处理黑色素瘤M14细胞24小时,在mRNA水平BAX基因的表达量依次为1.595±0.141,2.201±0.388,2.411±0.442,阴性对照组为1.002±0.087,经两两比较对照组与30μmol/L,60μmol/L,90μmol/L组间差异差异具有统计学意义(P<0.05),其余各组之间差异无统计学意义(P>0.05);在mRNA水平BCL2基因的表达量依次为0.755±0.044,0.617±0.004,0.536±0.074,阴性对照组为1.008±0.180,经两两比较阴性对照组与60μmol/L、90μmol/L组间差异有统计学意义(P<0.05),其余各组之间差异无统计学意义(P>0.05)。4.Western blot结果显示:黑色素瘤M14细胞经不同浓度的小豆蔻明处理24h,BAX蛋白表达量依次为0.0.326±0.017,0.585±0.013,0.643±0.005,阴性对照组为0.307±0.008,经过两两比较各实验组与阴性对照组之间差异均有统计学意义(P<0.05);BCL2蛋白表达量依次为0.501±0.007,0.465±0.011,0.409±0.01,阴性对照组为0.537±0.007,经过两两比较各实验组与阴性对照组之间差异均有统计学意义(P<0.05);Cleaved Caspase 8蛋白表达量依次为0.592±0.023,0.872±0.022,0.949±0.0259,阴性对照组为0.437±0.003,经过两两比较各实验组与阴性对照组之间差异均有统计学意义(P<0.05);Cleaved Caspase 9蛋白表达量依次为0.666±0.013,0.915±0.013,0.979±0.007阴性对照组为0.507±0.014,经过两两比较各实验组与阴性对照组之间差异均有统计学意义(P<0.05);Cleaved PARP蛋白表达量依次为0.320±0.006,0.900±0.025,0.979±0.009,阴性对照组为0.175±0.003,经过两两比较各实验组与阴性对照组之间差异均有统计学意义(P<0.05);P65蛋白表达量依次为0.720±0.006,0.630±0.008,0.439±0.003,阴性对照组为0.811±0.011,经过两两比较各实验组与阴性对照组之间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:1.在一定浓度和时间范围内,小豆蔻明对黑色素瘤M14细胞具有明显的增殖抑制作用,且呈时间-剂量依赖性。2.在一定浓度和时间范围内,小豆蔻明可诱导黑色素瘤M14细胞凋亡,且随着浓度的升高,诱导凋亡作用越显着。3.小豆蔻明诱导黑色素瘤M14细胞的凋亡作用可能与内源性和外源性凋亡通路有关。(本文来源于《河北医科大学》期刊2019-03-01）
李伟,黄燕芬,金丽霞,金波,谭佳宁[3]（2018）在《小豆蔻明对C3H10T1/2细胞成脂分化影响的作用机制》一文中研究指出目的:探讨小豆蔻明抑制C3H10T1/2细胞成脂分化的作用机制。方法:观察C3H10T1/2细胞成脂过程形态学变化,采用MTS法、油红O染色法、GAP-PAP酶法检测小豆蔻明对C3H10T1/2细胞增殖、成脂分化以及胞内甘油叁酯含量的影响,采用RT-PCR与Western Blot技术检测小豆蔻明对C3H10T1/2细胞PPARγ、C/EBPα和FABP4 m RNA以及蛋白表达的影响。结果:60、80、100μmol/L小豆蔻明能够显着抑制C3H10T1/2细胞存活率(P<0.01);5、10、30μmol/L小豆蔻明能够抑制C3H10T1/2细胞脂滴的形成,从而抑制成脂分化;5、10、30μmol/L小豆蔻明能够显着降低细胞中甘油叁酯的含量(P<0.05,P<0.01);10、30μmol/L小豆蔻明能够显着下调PPARγ、C/EBPα和FABP4 m RNA的表达(P<0.05,P<0.01);5、10、30μmol/L小豆蔻明能够显着降低成脂关键转录因子PPARγ、C/EBPα和成脂分化标志因子FABP4蛋白的表达(P<0.05,P<0.01)。结论:小豆蔻明通过下调PPARγ、C/EBPα、FABP4 m RNA以及蛋白表达抑制细胞成脂分化并降低胞内甘油叁酯含量。(本文来源于《中华中医药杂志》期刊2018年06期）
向彩琼[4]（2018）在《小豆蔻明抑制IL-6诱导多发性骨髓瘤U266细胞恶性生物学行为的作用及机制》一文中研究指出目的:对小豆蔻明抑制IL-6诱导人多发性骨髓瘤U266细胞恶性生物学行为的作用及机制进行研究。为小豆蔻明治疗多发性骨髓瘤提供客观实验依据,以期中药提取物与化疗药同时应用能达到减少多发性骨髓瘤的并发症,提高疾病缓解率和病人的总生存期。方法:选用多发性骨髓瘤U266细胞进行培养,①用不同浓度的IL-6(10ng/ml、20ng/ml、40ng/ml)分别作用 U266 细胞不同时间点,CCK8法检测骨髓瘤细胞的增殖情况,筛选出最佳浓度的IL-6;Western blot法检测IL-6对STAT3磷酸化及STAT3下游基因Bcl-2、VEGF、cyclin D1蛋白的表达情况。②分为对照组,IL-6组,IL-6+12.5μM小豆蔻明组,IL-6+25.0 μM小豆蔻明组,IL-6+50.0 μM小豆蔻明组分别作用U266细胞不同时间点。CCK8法检测骨髓瘤细胞的增殖情况;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检骨髓瘤细胞的凋亡率;Western blot法检测STAT3及STAT3下游基因Bcl-2、VEGF、cyclin D1蛋白的表达。结果:1.CCK-8法检测结果显示:①IL-6能促进U266细胞的增值。不同浓度的IL-6处理U266细胞后增值率与对照组相比,差异均有统计学意义(p<0.01),10 ng/ml 的 IL-6 作用 U266 24h、48h、72h 后,其增值率分别为 2.53%、7.15%、11.17%;20 ng/ml 的 IL-6 作用 U266 24h、48h、72h 后,其增值率分别为 12.13%、15.01%、17.09%;40 ng/ml 的 IL-6 作用 U266 24h、48h、72h 后,其细胞增值率分别为 13.32%、15.46%、17.54%。最佳浓度为20 ng/ml。②小豆蔻明对IL-6诱导的U266细胞增值具有抑制作用,呈明显的时间、剂量依赖性。IL-6+12.5μM小豆蔻明作用U26624h、48h、72h 后,其抑制率分别为 15.63%、44.05%、49.47%;IL-6+25.0μM小豆蔻明作用U266 24h、48h、72h后,其抑制率分别为20.75%、57.72%、69.15%;IL-6+50μM小豆蔻明作用U266 24h、48h、72h后,其抑制率分别为 21.49%、68.63%、76.15%。2.Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测骨髓瘤细胞的凋亡率:①小豆蔻明呈时间、剂量依赖性促进多发性骨髓瘤细胞凋亡。对照组处理U266细胞24h后凋亡率为5.01%,12.5 μM小豆蔻明处理U266细胞24h后凋亡率16.87%,25.0 μM小豆蔻明处理24h后凋亡率为35.74%,50 μM小豆蔻明处理24h后凋亡率为59.63%。以上处理后细胞凋亡率与对照组相比,差异均有统计学意义(p<0.01)。②IL-6能降低细胞凋亡率,但小豆蔻明能对抗IL-6的抗凋亡作用,增加细胞凋亡率。不同组别分别作用U266细胞24h后,对照组凋亡率为4.93%,IL-6组的凋亡率为3.78%;IL-6+12.5 μM小豆蔻明组的凋亡率为12.67%,IL-6+25.0 μM小豆蔻明组的凋亡率为31.35%;IL-6+50.0 μM小豆蔻明组将凋亡率提高到51.64%。加药组与对照组凋亡率相比差异有统计学意义(p<0.01)。3.Western blot检测结果显示:①IL-6能活化STAT3,随着IL-6浓度的增加,STAT3磷酸化水平逐渐逐渐升高;同时IL-6能促使STAT3下游基因产物Bcl-2、VEGF、cyclin D1的表达;②小豆蔻明可以抑制IL-6所诱导的U266细胞STAT3的活化,下调STAT3下游基因产物Bcl-2、VEGF、cyclin D1的表达,随着浓度的增加作用越来越明显。结论:小豆蔻明能够抑制IL-6诱导的多发性骨髓瘤U266细胞恶性生物学行为,其机制可能为小豆蔻明通过调节IL-6/STAT3通路,下调多发性骨髓瘤细胞Bcl-2、Cyclin Dl、VEGF的表达,从而抑制多发性骨髓瘤细胞增殖,促进细胞凋亡。(本文来源于《湖北中医药大学》期刊2018-05-24）
李金穗[5]（2018）在《小豆蔻明抑制mTOR抑制剂耐药肿瘤细胞增殖及其机制研究》一文中研究指出目的1明确小豆蔻明(cardamonin,CAR)抑制mTOR抑制剂[雷帕霉素(Rapamycin,RAP)或(AZD8055,AZD)]耐药HeLa细胞及MCF-7细胞增殖的作用。2探讨CAR抑制RAP或AZD耐药细胞增殖的作用机制。方法1药物浓度递增法构建耐RAP或AZD的HeLa细胞和MCF-7细胞采用药物浓度递增法,在体外对HeLa及MCF-7细胞进行诱导筛选,构建RAP耐药细胞(HeLa/RAP、MCF-7/RAP)或AZD耐药细胞(HeLa/AZD、MCF-7/AZD),经RAP与AZD细胞毒性试验及Western blot鉴定耐药程度。2有限稀释法获取单细胞源性子代细胞亚克隆3细胞培养在常规培养条件下(37℃、5%CO_2、10%胎牛血清、100μg·mL~(-1)链霉素及100 U·mL~(-1)青霉素),1640培养液培养HeLa系列细胞(HeLa、HeLa/RAP、HeLa/AZD),High-glucose DMEM培养液培养MCF-7系列细胞(MCF-7、MCF-7/RAP、MCF-7/AZD)。保持细胞单层贴壁生长,待细胞长至80%~90%融合时,加入适量0.25%胰蛋白酶消化传代。4分组与给药4.1细胞分组:HeLa细胞组(HeLa)、MCF-7细胞组(MCF-7)、RAP耐药细胞组(HeLa/RAP、MCF-7/RAP)、AZD耐药细胞组(HeLa/AZD、MCF-7/AZD)。4.2给药分组:比较各药对克隆形成及迁移作用的影响时细胞分别设立空白对照组(NC)、RAP(30、300、3000 nM)组、AZD(30、300、3000 nM)及CAR(10、30μM)组;蛋白表达检测时设空白对照组(NC)、RAP(3、30、300nM)组、AZD(3、30、300 nM)及CAR(10、30μM)组。5测定指标及方法5.1倒置显微镜观察细胞的形态及生长状况。5.2 MTT法检测RAP、AZD、CAR的细胞毒性及绘制细胞生长曲线。5.3平板克隆形成实验比较RAP、AZD、CAR对细胞克隆形成能力的影响。5.4划痕实验检测RAP、AZD、CAR对细胞迁移能力的作用。5.5 Western blot检测β-链蛋白(β-catenin)、ABC跨膜转运蛋白(Multi-drug resistance protein 1,MDR1)、mTOR信号通路关键蛋白(AKT、p-AKT、S6K1、p-S6K1、4E-BP1、p-4E-BP1、mTOR、p-mTOR)及mTORC1特异性结合蛋白(Raptor)的表达。结果1成功构建RAP耐药细胞(HeLa/RAP、MCF-7/RAP)或AZD耐药细胞(HeLa/AZD、MCF-7/AZD),且均获得了单细胞源性子代细胞亚克隆。HeLa/RAP、HeLa/AZD、MCF-7/RAP及MCF-7/AZD的耐药指数分别为5.89、24.90、68.24及21.23。耐药细胞的增殖活力及细胞克隆形成能力均有所下降。2 CAR具有抑制RAP耐药细胞或AZD耐药细胞增殖的作用。CAR对非耐药细胞及耐药细胞的半数抑制浓度无明显差异,但能抑制耐药细胞的克隆形成(P<0.01)。3 CAR能显着抑制耐药细胞的迁移能力(P<0.01),并且耐药细胞高表达β-catenin,CAR能浓度依赖的下调β-catenin的表达(P<0.01)。4 CAR显着抑制耐药细胞的mTOR、S6K1蛋白磷酸化,同时抑制Raptor总蛋白表达(P<0.01)。5耐药细胞均高表达MDR1,CAR能显着抑制该蛋白的表达(P<0.01)。结论1 CAR抑制RAP耐药细胞(HeLa/RAP、MCF-7/RAP)、AZD耐药细胞(HeLa/AZD、MCF-7/AZD)的增殖及迁移。2 HeLa与MCF-7细胞对RAP及AZD耐药其机制可能与MDR1蛋白的高表达有关。3 CAR对mTOR抑制剂耐药HeLa和MCF-7细胞发挥抗增殖作用的机制可能与降低mTORC1特异性结合蛋白Raptor表达及抑制mTOR信号通路蛋白的磷酸化、下调β-catenin蛋白与MDR1的表达有关。(本文来源于《福建医科大学》期刊2018-05-01）
郑丽萍[6]（2017）在《Raptor介导小豆蔻明抑制氨基酸激活mTORC1的研究》一文中研究指出目的1明确Raptor(regulatory associated protein of m TOR)在氨基酸信号调控mTORC1(mammalian target of rapamycin complex 1)活性中的作用;2探讨小豆蔻明(cardamonin,CAR)抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖是否与抑制氨基酸介导的mTORC1活化有关。方法1 sh RNA干扰SKOV3细胞Raptor蛋白表达构建的Raptor-sh RNA慢病毒表达载体,感染人卵巢癌SKOV3细胞,经嘌呤霉素筛选感染细胞,Western Blot鉴定Raptor干扰效果。2细胞培养人卵巢癌SKOV3细胞以及Lv-Raptor-sh RNA感染SKOV3细胞常规培养(37℃、5%CO2)在加入10%胎牛血清、100μg·m L-1链霉素及100 U·m L-1青霉素的High-glucose DMEM培养液中,保持细胞单层贴壁生长,待细胞长至80%~90%融合时,加入适量0.25%胰蛋白酶消化传代。3分组3.1 SKOV3细胞分为空白组[NC(Normal condition)组]、CAR组(Cardamonin:10、30μM)、阳性对照药雷帕霉素组(Rapamycin,RAP:0.1μM)及AZD组(AZD8055:0.1μM)。检测mTORC1相关蛋白表达;3.2 SKOV3细胞[检测m TOR和LAMP2(lysosomeassociated membrane protein)共定位、mTORC1活性及细胞增殖]和Lv-Raptor-sh RNA感染SKOV3细胞(检测细胞增殖)分别设立NC组、CAR组(10、30μM)、氨基酸饥饿组(-AA,150 min)、氨基酸刺激组(+AA,150 min),以及氨基酸刺激的同时分别加入RAP(0.1μM)、AZD(0.1μM)和CAR(10、30μM)组;3.3 SKOV3细胞和Lv-Raptor-sh RNA感染SKOV3细胞分别设立NC组、氨基酸饥饿组(-AA,150 min)、氨基酸刺激组(+AA,150 min)、氨基酸刺激同时加入CAR(30μM)组。测定m TOR和LAMP2共定位以及mTORC1信号通路活性。4测定指标及方法4.1倒置显微镜观察细胞的形态及生长状况;4.2荧光显微镜观察慢病毒感染SKOV3细胞效率;4.3 MTT法检测细胞增殖;4.4激光共聚焦显微镜观察m TOR和LAMP2共定位;4.5 Western Blot法检测m TOR、p-m TOR、Raptor、4E-BP1、p-4E-BP1、S6K1、p-S6K1蛋白表达。结果1 CAR显着抑制氨基酸诱导的SKOV3细胞增殖(P<0.01)。2 CAR显着抑制SKOV3细胞的m TOR、S6K1蛋白磷酸化,同时抑制Raptor总蛋白表达(P<0.05)。3重组慢病毒表达载体测序无误;Lv-Raptor-sh RNA组和阴性对照组SKOV3细胞经嘌呤霉素加药筛选后,其荧光表达率均在95%以上,且Lv-Raptor-sh RNA组SKOV3细胞Raptor表达显着低于正常对照组和阴性对照组(P<0.01)。4 CAR显着抑制氨基酸诱导的SKOV3细胞及Lv-Raptor-sh RNA感染SKOV3细胞增殖,但对前者作用更明显(P<0.01)。5 CAR抑制氨基酸诱导SKOV3细胞的m TOR溶酶体定位和m TOR、S6K1蛋白磷酸化(P<0.05)。6 Lv-Raptor-sh RNA感染SKOV3细胞中m TOR溶酶体定位显着降低;经CAR处理后,慢病毒感染SKOV3细胞中m TOR溶酶体定位进一步降低(P<0.05)。7 Lv-Raptor-sh RNA感染SKOV3细胞中m TOR和S6K1磷酸化水平显着降低;CAR明显抑制氨基酸刺激条件下SKOV3细胞和Lv-Raptor-sh RNA感染SKOV3细胞m TOR、S6K1蛋白磷酸化,且对前者抑制更强;经CAR处理后,慢病毒感染SKOV3细胞Raptor表达进一步降低(P<0.05)。结论1 CAR抑制SKOV3细胞增殖的作用与降低Raptor表达有关;2 Raptor介导CAR抑制氨基酸诱导的mTORC1活性。(本文来源于《福建医科大学》期刊2017-05-01）
林美玲[7]（2017）在《小豆蔻明对人淋巴细胞分泌细胞因子IL-2水平的影响》一文中研究指出目的考察小豆蔻明对人淋巴细胞分泌白细胞介素-2水平的影响,探讨其作为无免疫抑制作用的细胞增殖抑制剂的可能性。方法分离健康人静脉血淋巴细胞,制得淋巴细胞混悬液,实验细胞按正常培养及植物血凝素刺激培养后,分别加入不同药物小豆蔻明、雷帕霉素、环孢素、槲皮素、葛根素、黄豆苷元及黄芩苷进行干预,采用ELISA法测定人淋巴细胞因子白细胞介素-2的分泌水平。结果对于植物血凝素诱导的人淋巴细胞增殖反应,低剂量小豆蔻明促进白细胞介素-2的分泌,高剂量小豆蔻明具有明显的抑制作用。结论小豆蔻明是一种潜在的细胞增殖抑制剂,具有较大的研究和应用前景。(本文来源于《海峡药学》期刊2017年02期）
李金穗,牛培广,史道华[8]（2016）在《小豆蔻明及其衍生物抗肿瘤作用的研究进展》一文中研究指出小豆蔻明(cardamonin,CAR)的化学结构为2’,4’-二甲基-6’-甲氧基查尔酮,是一种主要存在于姜科山姜属植物草豆蔻种子中的黄酮类单体,生物活性广泛。由于其具有抗肿瘤作用,近年来倍受关注,并已有系列衍生物被合成。研究表明,CAR对多形性胶质母细胞瘤、Lewis肺癌、乳腺癌、结肠癌和前列腺癌等肿瘤细胞的生长均有抑制作用,其作用机制涉及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)通路、核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)信号通路、谷氨酰胺转氨酶2、内源性凋亡途径、信号转导与转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、细胞自噬、β-catenin和细胞周期调控等。本文主要对CAR及其衍生物的抗肿瘤作用及其机制进行综述。(本文来源于《肿瘤》期刊2016年10期）
阮贤妹[9]（2016）在《小豆蔻明降低群体感应抑制铜绿假单胞菌毒力及生物被膜形成的研究》一文中研究指出目的群体感应系统(quorum sensing system,QSS)为铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)重要信号传导系统之一。PA中绿脓菌素、胞外蛋白水解酶、弹性蛋白酶、鼠李糖脂等多种毒力因子的分泌和生物被膜的形成均受QS系统调控,而自身诱导调控系统Las/Rhl在QS系统中占主导地位。小豆蔻明(cardamonin,Car)是否通过调控lasR/rhlR的表达,从而抑制PA的毒力产生与生物被膜形成有待证实。本研究探讨Car对PA毒力因子表达及生物被膜形成的抑制作用及其可能机制。方法1细菌培养采用经典平板划线法活化并分离单克隆菌落,挑取单克隆菌落接种于LB、MH、PTSB液体培养基中,于恒温摇床内150 rpm,35℃有氧培养。培养铜绿假单胞菌为0.5麦氏浓度(1×108 cfu·m L~(-1))。2分组与给药设立正常对照组、0.5%二甲亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)溶剂对照组及Car组(32,16,8μg·m L~(-1))。3测定指标及方法3.1光密度法测定PA绿脓菌素的表达(OD_(540)/OD_(600))、胞外蛋白水解酶的表达(D/OD_(600))、弹性蛋白酶的表达(OD_(490)/OD_(600))、鼠李糖脂的表达(OD_(421)/OD_(600));3.2结晶紫染色法测定BF形成(OD_(570));3.3 RT-PCR法检测las R/rhl R基因的表达。结果1 Car 64μg·m L~(-1)抑制PA的生长,Car(32,16,8μg·m L~(-1))无明显影响,因而选定Car(32,16,8μg·m L~(-1))作为毒力因子测定实验浓度;2 Car(32,16,8μg·m L~(-1))均可抑制PA绿脓菌素表达以及弹性蛋白酶、胞外蛋白水解酶、鼠李糖脂的产生(P<0.05);3 Car(32,16,8μg·m L~(-1))可抑制PA生物被膜的形成(P<0.05);4 Car(32,16,8μg·m L~(-1))可降低lasR、rhlR基因的表达(P<0.05)。结论Car(32,16,8μg·m L~(-1))抑制PA生物被膜形成及毒力因子产量的作用可能与调控PA的QS系统lasR、rhlR表达有关。(本文来源于《福建医科大学》期刊2016-05-01）
邓锐,邹毓兰,吕海涛[10]（2015）在《微波辅助提取草豆蔻中山姜素和小豆蔻明工艺研究》一文中研究指出利用微波辅助提取法,采用单因素和正交试验对草豆蔻中山姜素和小豆蔻明的提取工艺进行优化,确定最佳工艺条件为:100%乙醇、12倍溶剂用量、提取时间12 min、微波功率800 W,提取2次,山姜素和小豆蔻明的提取率分别为8.73 mg/g和0.99 mg/g。所选取的提取工艺提取效率高、稳定,为草豆蔻的药物综合利用提供了依据。(本文来源于《食品工业》期刊2015年10期）
小豆蔻明论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:黑色素瘤是最具侵袭性的皮肤肿瘤,在过去的几十年中,黑色素瘤的发病率一直在增加。特别是皮肤黑色素瘤占全世界新发恶性肿瘤病例的1.6%,且发病率在世界上以每年2-7%的速率增长。传统的疗法如外科手术、化疗、放疗的治疗效果仍然不理想,因此研究人员致力于寻找对肿瘤细胞影响大并对正常细胞毒性最小的药物。近年来,中草药有效成分的作用越来越受到全世界的关注,其对肿瘤作用的研究是肿瘤研究领域的新方向。小豆蔻明作为草豆蔻的种子中提取的生物碱类单体成分,具有广泛的生物活性和抗肿瘤作用。目前,研究已证实小豆蔻明对多种肿瘤细胞具有抑制作用,但仍无小豆蔻明针对黑色素瘤细胞作用的研究。本研究主要通过小豆蔻明处理黑素瘤M14细胞系,观察其对M14细胞增殖、凋亡及相关凋亡蛋白的影响,探讨其可能的机制。方法:1.细胞培养。将黑色素瘤M14细胞培养于含10%胎牛血清的1640培养基,放入37℃,5%CO2的培养箱中培养。2.使用MTS法检测小豆蔻明对黑色素瘤M14细胞增殖的影响。实验设3组:空白对照组只加培养基无细胞无小豆蔻明,阴性对照组为有含细胞的培养基且无小豆蔻明,实验组为含有细胞的培养基,培养基加有以下浓度的小豆蔻明(30、60、90、120μmol/L),每组6个复孔。培养24h,48h,72h后加入MTS检测小豆蔻明对黑色素瘤M14细胞增殖活力的影响,计算不同浓度药物浓度下细胞的存活率。3.应用流式细胞术检测小豆蔻明对黑色素瘤M14细胞凋亡的影响。实验设2组:阴性对照组为含有细胞的培养基且无小豆蔻明,实验组为含有细胞的培养基,培养基加有以下浓度的小豆蔻明(30、60、90μmol/L)。培养24小时后进行检测。4.应用实时荧光定量PCR法(Real-time quantitative PCR,RT-q PCR)检测测经小豆蔻明药物处理后的M14细胞凋亡相关基因(BAX和BCL2)在mRNA水平的表达。实验设2组阴性对照组为含有细胞的培养基且无小豆蔻明,实验组为含有细胞的培养基,培养基加有以下浓度的小豆蔻明(30、60、90μmol/L)。培养24小时后提取RNA进行检测。5.应用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测经小豆蔻明药物处理后的凋亡相关蛋白(BAX,BCL2,Cleaved Caspase8,Cleaved Caspase9、Cleaved PARP以及P65)的表达情况。实验设2组:阴性对照组为含有细胞的培养基且无小豆蔻明,实验组为含有细胞的培养基,培养基加有以下浓度的小豆蔻明(30、60、90μmol/L)。培养24小时后提取蛋白进行检测。结果:1.MTS结果显示,经过不同浓度的小豆蔻明处理24h后黑色素瘤M14细胞的存活率分别为(87.9±4.2)%,(78.2±2.4)%、(70.1±2.2)%、(44.0±3.2)%,通过两两比较,各实验组与阴性对照组间的差异具有统计学意义(P<0.05);小豆蔻明处理48小时的存活率分别为(76.0±1.6)%、(35.5±2.2)%、(32.0±1.3)%、(23.5±1.7)%,经两两比较,各实验组与阴性对照组间的差异具有统计学意义(P<0.05);小豆蔻明处理72小时的存活率分别为(40.1±1.3)%、(34.6±2.3)%、(23±2.2)%、(18.3±2.0)%,经两两比较,各实验组与阴性对照组间的差异具有统计学意义(P<0.05)。2.流式细胞术结果显示浓度不同的小豆蔻明处理黑色素瘤M14细胞24小时后细胞凋亡情况,随着小豆蔻明剂量的增加,Annexin V阳性细胞(早期凋亡细胞与晚期凋亡细胞之和)的比例也在逐步增加。3.RT-qPCR结果显示,浓度不同的小豆蔻明处理黑色素瘤M14细胞24小时,在mRNA水平BAX基因的表达量依次为1.595±0.141,2.201±0.388,2.411±0.442,阴性对照组为1.002±0.087,经两两比较对照组与30μmol/L,60μmol/L,90μmol/L组间差异差异具有统计学意义(P<0.05),其余各组之间差异无统计学意义(P>0.05);在mRNA水平BCL2基因的表达量依次为0.755±0.044,0.617±0.004,0.536±0.074,阴性对照组为1.008±0.180,经两两比较阴性对照组与60μmol/L、90μmol/L组间差异有统计学意义(P<0.05),其余各组之间差异无统计学意义(P>0.05)。4.Western blot结果显示:黑色素瘤M14细胞经不同浓度的小豆蔻明处理24h,BAX蛋白表达量依次为0.0.326±0.017,0.585±0.013,0.643±0.005,阴性对照组为0.307±0.008,经过两两比较各实验组与阴性对照组之间差异均有统计学意义(P<0.05);BCL2蛋白表达量依次为0.501±0.007,0.465±0.011,0.409±0.01,阴性对照组为0.537±0.007,经过两两比较各实验组与阴性对照组之间差异均有统计学意义(P<0.05);Cleaved Caspase 8蛋白表达量依次为0.592±0.023,0.872±0.022,0.949±0.0259,阴性对照组为0.437±0.003,经过两两比较各实验组与阴性对照组之间差异均有统计学意义(P<0.05);Cleaved Caspase 9蛋白表达量依次为0.666±0.013,0.915±0.013,0.979±0.007阴性对照组为0.507±0.014,经过两两比较各实验组与阴性对照组之间差异均有统计学意义(P<0.05);Cleaved PARP蛋白表达量依次为0.320±0.006,0.900±0.025,0.979±0.009,阴性对照组为0.175±0.003,经过两两比较各实验组与阴性对照组之间差异均有统计学意义(P<0.05);P65蛋白表达量依次为0.720±0.006,0.630±0.008,0.439±0.003,阴性对照组为0.811±0.011,经过两两比较各实验组与阴性对照组之间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:1.在一定浓度和时间范围内,小豆蔻明对黑色素瘤M14细胞具有明显的增殖抑制作用,且呈时间-剂量依赖性。2.在一定浓度和时间范围内,小豆蔻明可诱导黑色素瘤M14细胞凋亡,且随着浓度的升高,诱导凋亡作用越显着。3.小豆蔻明诱导黑色素瘤M14细胞的凋亡作用可能与内源性和外源性凋亡通路有关。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
小豆蔻明论文参考文献
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