导读:本文包含了通用半抗原论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:农药多残留,双簇农药通用结构人工抗原,宽谱特异性抗体,噬菌体展示技术
通用半抗原论文文献综述
李艳玲[1]（2013）在《噬菌体展示肽库筛选农药通用结构半抗原的肽模拟物及其在农药多残留免疫检测中的应用研究》一文中研究指出有机磷农药(Organophosphorus pesticides,Ops)是含磷的有机化合物,具有高效的杀虫能力,已被广泛地应用于农业生产中,但其大量使用后对人、动物和环境产生的危害也日益严重。为了保证食品安全和质量,建立快速而灵敏的Ops检测方法一直备受关注。目前有机磷农药残留检测通常采用仪器分析法、酶抑制法和免疫分析法。免疫分析法因其具有简单快速、价格低廉、高通量、灵敏度高、特异性强以及适合现场筛选等优点,已被广泛应用于农药残留检测。但目前免疫检测技术在农药单残留的检测上应用较多,而在农药多残留检测的运用上受到限制,困扰这一问题的关键是方法的检测谱窄、灵敏度不足。本研究引入分子设计理念,设计能最大程度突出和保留磷酸酯类和硫代磷酸酯类有机磷农药的两种通用结构半抗原,将它们依次偶联到同一载体蛋白上制备双簇通用结构人工抗原,在此基础上制备“宽谱特异性”的抗体;以纯化的宽谱多抗或单抗为配基,利用噬菌体展示肽库,筛选有机磷农药通用结构半抗原的肽模拟物,建立异源ELISA,提高检测灵敏度,为进一步建立检测谱宽、灵敏度高的农药多残留免疫检测方法提供科学依据。研究结果和主要结论如下:(1)通用结构半抗原的合成与鉴定本研究根据磷酸酯类有机磷农药和硫代磷酸酯类有机磷农药的共性结构,分别合成通用半抗原PM,PS,PO,并通过核磁共振氢谱分析进行结构鉴定。(2)双簇通用结构人工抗原的合成将结构特征明显的二甲基硫代磷酸酯类农药通用半抗原(PM或PS)和二乙基磷酸酯类农药通用半抗原(PO或DPA)通过重氮化法(含有氨基的半抗原)或活性酯法(含有羧基的半抗原),按照偶联比由小到大依次连接到载体蛋白上制备了双簇通用结构免疫原 PM-DPA-BSA,PS-DPA-BSA,PM-PO-BSA 和 PO-PS-BSA;分别制备了四种单簇包被原PM-OVA、DPA-OVA、PO-OVA和PS-OVA以及四种双簇包被原DPA-PM-OVA、PS-DPA-OVA、PO-PS-OVA和DPA-PM-OVA,用于检测各种抗体的效价。(3)宽谱多克隆抗体和单克隆抗体的制备及其淘选研究用制备的四种双簇通用结构免疫原免疫新西兰大白兔,成功制备了能够识别多种农药的高效价兔宽谱多克隆抗体PAbPMDPA,PAbPSDPA,PAbPMPO和PAbPOPS,经Protein G亲和层析法纯化后,采用间接竞争ELISA法分别测试四种多抗对相应农药的灵敏度,进行抗体的淘选,结果表明,PAbPMPO和PAbPOPS这两种抗体对磷酸酯类和硫代磷酸酯类有机磷农药均有较好的识别能力,可用来进行间接竞争ELISA条件的优化。用制备的四种双簇通用结构免疫原免疫BABL/c小鼠,经过细胞融合,成功筛选到能够分泌抗POPS抗体的细胞,经间接竞争ELISA检测,发现单克隆抗体MAb POPS-4A7对甲基对硫磷和对氧磷的识别效果最好,经Protein G亲和层析柱纯化后,进行间接竞争ELISA条件的优化。(4)有机磷农药多残留免疫检测技术的建立采用间接竞争EL1SA,分别以相应的农药作为竞争物,对PAbPMPO、PAbPOPS和MAb POPS叁种抗体的免疫分析条件进行了优化;在优化条件下建立了针对相应农药的标准抑制曲线、交叉反应以及样品回收率试验。结果表明:PAb PMPO-2对甲基对硫磷的IC50和IC20分别为0.819μg/mL和0.034μg/mL,对对氧磷的IC50和IC20分别为0.307μg/mL和0.009μg/mL;PAbPMPO-2对对氧磷、甲基对硫磷、苯线磷、倍硫磷、杀螟硫磷、叁唑磷、丙溴磷、甲拌磷、乙拌磷、溴硫磷、嘧啶磷和二嗪农等12种农药具有广谱的识别作用;其中,甲基对硫磷的样品添加回收率和变异系数分别为78.875-116.432%和1.328-7.976%,对氧磷的样品添加回收率和变异系数分别为77.432-103.651%和 1.878-7.745%。PAb POPS-1 对对氧磷的 IC50和 IC20分别为0.353μ/mL 和0.011μg/mL,对 PS 的 IC50和IC20分别为0.742μg/mL和0.025μg/mL;PAbPOPS-1对对氧磷、甲基对硫磷、苯线磷、丙溴磷、倍硫磷、乐果、杀螟硫磷、甲基毒死蜱、甲基嘧啶磷以及亚胺硫磷等10种农药具有广谱的识别作用;其中,甲基对硫磷的添加回收率和变异系数分别为81.2-105.5%和1.249-7.864%,对氧磷的样品添加回收率和变异系数分别为84.1-104.3%和1.403-7.389%。MAb POPS-4A7 对氧磷的 IC50 和 IC20 分别为 0.197ug/mL 和 0.008 ug/mL,对 PS 的IC50和 IC20 分别为 0.184ug/mL 和 0.007ug/mL;MAbPOPS-4A7 对对氧磷、苯线磷、丙溴磷、甲基对硫磷、杀螟硫磷、倍硫磷、甲基毒死蜱、甲基嘧啶磷、马拉硫磷、甲拌磷、乙拌磷、二嗪农、叁唑磷、毒死蜱、乙硫磷以及乐果等共16种农药表现了较高的交叉反应;其中,对氧磷的样品添加回收率和变异系数分别为82.4-92.3%和1.468-7.045%。(5)筛选有机磷农药通用结构半抗原的肽模拟物,建立Phage-ELISA异源检测方法本研究分别以PAb PO-PS多抗和MAb PO-PS单抗为靶分子,采用逐轮减少抗体包被浓度,提高Tween-20浓度,减少结合时间以及降低竞争物浓度等方式,从噬菌体随机展示环七肽库和噬菌体随机展示十二肽库中淘选农药通用结构的肽模拟物,结果表明,以PAb POPS-1多抗为靶分子,从噬菌体随机展示十二肽库中筛选到噬菌体克隆P12-8,建立了 Phage-ELISA的竞争抑制曲线,PAbPOPS-1对对氧磷的IC50和IC20分别为0.276μg/mL 和0.011μg/mL,对 PS 的 IC50和 IC20分别为0.209μg/mL 和0.009μg/mL;PAb POPS-1对对氧磷、苯线磷、丙溴磷、甲基对硫磷、杀螟硫磷、倍硫磷、甲基毒死蜱、马拉硫磷、甲拌磷、乙拌磷、二嗪农、叁唑磷、毒死蜱和乙硫磷等14种农药具有广谱的识别作用;对氧磷的样品添加回收率和变异系数分别为84.5-92.5%和1.382-6.826%。以MAbPOPS-4A7单抗为靶分子,从噬菌体随机展示十二肽库中筛选到噬菌体克隆P12-2,建立了 Phage-ELISA的竞争抑制曲线,4A7对对氧磷的IC50和IC20分别为0.096μg/mL和0.008μg/mL,对 PS 的 IC50和 IC20分别为0.062μg/mL 和0.006μg/mL;4A7对对氧磷、苯线磷、丙溴磷、甲基对硫磷、杀螟硫磷、倍硫磷、甲基毒死蜱、甲基嘧啶磷、马拉硫磷、乐果、甲拌磷、乙拌磷、二嗪农、叁唑磷、毒死蜱、乙硫磷、敌敌畏以及氧化乐果等18种农药具有广谱的识别作用;对氧磷的样品添加回收率和变异系数分别为85.6-92.6%和1.634-6.653%。(本文来源于《山东农业大学》期刊2013-06-10）
温万东,刘喜保,高履桐,杨润亚,祁志军[2]（2012）在《在离子液体中合成有机磷农药通用半抗原》一文中研究指出以离子液体[Bmim]Br为溶剂和催化剂,O,O-二烷基二硫代磷酸铵盐(1a,1b)与氯乙酸于45℃反应40min,合成了有机磷农药半抗原S-羧甲基-O,O-二乙基二硫代磷酸酯和S-羧甲基-O,O-二甲基二硫代磷酸酯,产率分别为97.9%和98.4%。1a和1b低温(<5℃)酸化后与丙烯酸在[Bmim]Br中于室温反应60 min,合成了两个有机磷农药半抗原S-羧乙基-O,O-二乙基二硫代磷酸酯和S-羧乙基-O,O-二甲基二硫代磷酸酯,产率分别为93.7%和94.2%。[Bmim]Br重复使用4次后依然保持较高的催化活性。(本文来源于《合成化学》期刊2012年05期）
刘贤进,颜春荣,刘媛,余向阳,张存政[3]（2008）在《有机磷杀虫剂通用结构半抗原的设计及广谱特异性抗体的制备》一文中研究指出【目的】制备针对有机磷农药的广谱特异性抗体,用于有机磷农药的免疫快速筛选检测。【方法】设计采用二乙基膦酸乙酸作为通用结构半抗原,用NHS-DCC法和EDC法合成两种人工抗原免疫新西兰大白兔制备抗血清。【结果】NHS-DCC法所制得抗血清的最高滴度为25600,EDC法合成的抗原制得的抗血清滴度最高为6400,均获得免疫应答。以二乙基膦酸乙酸为对象建立的间接竞争ELISA检测方法对二乙基膦酸乙酸最低检测浓度0.0035μg·ml-1,抑制中浓度I50为0.182μg·ml-1。经对12种常见磷酸酯类有机磷农药特异性检测反应试验,结果发现:所得抗体对毒死蜱、氧乐果、二嗪农、乙基对硫磷、丙溴磷、辛硫磷等农药有特异性反应,I50分别为0.12、0.21、0.24、0.78、0.97、3.8μg·ml-1。【结论】该检测技术可用于毒死蜱、氧乐果、二嗪农、乙基对硫磷、丙溴磷等药剂的快速定性或半定量检测。(本文来源于《中国农业科学》期刊2008年03期）
通用半抗原论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
以离子液体[Bmim]Br为溶剂和催化剂,O,O-二烷基二硫代磷酸铵盐(1a,1b)与氯乙酸于45℃反应40min,合成了有机磷农药半抗原S-羧甲基-O,O-二乙基二硫代磷酸酯和S-羧甲基-O,O-二甲基二硫代磷酸酯,产率分别为97.9%和98.4%。1a和1b低温(<5℃)酸化后与丙烯酸在[Bmim]Br中于室温反应60 min,合成了两个有机磷农药半抗原S-羧乙基-O,O-二乙基二硫代磷酸酯和S-羧乙基-O,O-二甲基二硫代磷酸酯,产率分别为93.7%和94.2%。[Bmim]Br重复使用4次后依然保持较高的催化活性。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
通用半抗原论文参考文献
[1].李艳玲.噬菌体展示肽库筛选农药通用结构半抗原的肽模拟物及其在农药多残留免疫检测中的应用研究[D].山东农业大学.2013
[2].温万东,刘喜保,高履桐,杨润亚,祁志军.在离子液体中合成有机磷农药通用半抗原[J].合成化学.2012
[3].刘贤进,颜春荣,刘媛,余向阳,张存政.有机磷杀虫剂通用结构半抗原的设计及广谱特异性抗体的制备[J].中国农业科学.2008
标签：农药多残留; 双簇农药通用结构人工抗原; 宽谱特异性抗体; 噬菌体展示技术;