王红伟（河南中医学院基础医学院河南郑州450003）
【中图分类号】R743【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2010)30-0036-02
【摘要】本文通过揭示针刺对脑缺血再灌注大鼠模型细胞凋亡的影响，得出结论：针刺“百会”、“风府”及“曲池”、“足三里”可以促进受伤神经元的恢复,有较好的抗脑缺血再灌注后神经元凋亡的作用。
【关键词】脑缺血再灌注脑细胞凋亡针刺大鼠
近年来有关细胞凋亡与缺血性脑血管病的研究引起了人们的广泛关注。本实验以线栓法阻断一侧大脑中动脉造成局灶性脑缺血再灌注的动物模型,从缺血区脑细胞凋亡的变化以及针刺的干预作用等方面进行系列动态研究,深入揭示急性脑缺血病发生发展的病理规律及针刺对缺血性脑病的治疗机制。
1材料和方法
1.1实验动物Wistar大鼠,体重(200±20)g,由郑州大学实验动物中心提供。常规饲养。
1.2实验分组实验分为3个实验组,每实验组分两时间段(再灌注48h,再灌注72h),每组每时间段取10只Wistar大鼠:(1)假手术组:仅做颈部血管分离手术,暴露血管2h后缝合消毒伤口;(2)对照组:做右侧大脑中动脉尼龙线栓塞2h后,拔线,结扎血管,缝合消毒创口,再灌注48h或72h,不做针刺治疗,常规饮食护理;(3)针刺治疗组:做右侧大脑中动脉尼龙线栓塞2h后再灌注,缝合消毒伤口,再灌注1h,即对“百会”、“风府”及“曲池”、“足三里”等穴位行毫针针刺治疗,每穴留针40min,每10min提插捻转30s增加针刺效应,以后每天分别于上午及下午针刺2次。48h或72h后处死动物。
1.3脑缺血模型制备方法每组取健康Wistar大鼠10只,雌雄各半,10%水合氯醛腹腔注射麻醉(300mg·kg-1)，用改良血管内栓线技术制造大鼠局灶性脑缺血与再灌注模型。常规去毛和消毒后,颈部正中切口,暴露右侧颈总动脉,分离、结扎并切断颈外动脉,在其残端剪一小口,插入尖端用火烧圆的单尼龙丝线,轻推尾端使之由颈外动脉通过分叉部进入颈内动脉,由入口计算长度约18mm,栓塞右大脑中动脉。栓塞2h后拉出尼龙线至颈外动脉,结扎残端,使血流再灌注。缝合切口后,表面消毒并涂抹先锋霉素粉末。动物保温常规喂养48h或72h。以缺血再灌注后出现不能伸左前肢;行走时向左侧转圈;爬板实验时,总是落向左侧;提尾实验左前肢内收,头弯向左上。凡有上述3项体征者方可选入后续实验。
1.4针刺方法定位取穴按《实验针灸学》。缺血再灌注1h后,剃除相应穴位处的鼠毛,碘酊消毒,每次用0.5寸长毫针(1cm)针刺相应穴位2～3mm或5～7mm,留针40min,每10min行针1次。以后每天分别于上午及下午针刺2次。
1.5取材及脑细胞凋亡的观察再灌注48h或72h后断头处死动物,快速取缺血侧脑,在冰皿上自嗅结节前缘4mm处做冠状切片,厚度4mm,投入中性缓冲福尔马林固定液中固定24h,常规脱水,浸蜡,包埋。用原位末端标记(TUNEL方法)技术观察缺血区脑细胞凋亡的变化及针刺的干预作用。
1.6判定标准细胞核中出现棕黄色颗粒为TUNEL标记阳性细胞,即凋亡细胞。采用显微镜计数法(10目镜×40物镜),观察每个高倍视野的凋亡细胞数,每只大鼠随机取3张切片,每张切片随机观察6个视野。
1.7统计学处理数据采用奔腾Ⅳ计算机和SPSS11.0统计分析软件处理,采用双侧检验,检验水准采用α=0.05,计数资料采用χ2检验。
2结果
与假手术组、针刺治疗组相比,对照组大鼠脑梗死体积、神经元缺失明显(P<0.01)。对照组、针刺治疗组大鼠大脑皮层均存在神经元凋亡,但针刺治疗组与对照组相比,脑梗死体积明显缩小(P<0.01),阳性神经元数目明显减少(P<0.01)。
3讨论
中医学认为,中风是由于风中经络,或中脏腑后病情好转而经络气血仍阻滞不通所致,西医认为是脑血管栓塞或出血所致[1]。传统医学认为,曲池穴是阳明经血气汇合之处,针刺之可加速血运,疏导经络。足三里是足阳明胃经之穴,针刺之可调脾胃,升清降浊,促运化祛除痰浊,培补中宫,回阳固脱,在脑血管病可改善脑循环。风池属胆经,针刺之可平息肝风,疏解脑府之风邪,健脑宁神,通调七窍。百会穴有开窍醒神、升阳固脱之功,临床施以灸法对气不摄血、气虚升提无力或中气不足、元阳脱陷之证效果较好。
近年来有关细胞凋亡与缺血性脑血管病的研究引起了人们的广泛关注。人们正在探索以抗神经元凋亡方法治疗脑缺血,寻找神经元凋亡抑制剂。但目前的抗凋亡药物有较大副作用。而传统的针刺方法具有双向调节作用,安全性较高。
本次实验证实了针刺“百会”、“风府”及“曲池”、“足三里”可以促进受伤神经元的恢复,有较好的抗脑缺血再灌注后神经元凋亡的作用,为临床针刺治疗缺血性脑病提供了理论依据[2]。
参考文献
[1]周志申.通络法在治疗中风中的应用[J].河南中医,2004,24(2):56.
[2]戴珍.针灸与康复配合治疗中风偏瘫[J].河南中医,2004,24(9):66.