导读:本文包含了斑等蝎论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:钾离子通道阻断剂,Im58,原核表达,蛋白纯化
斑等蝎论文文献综述
尹世金,兰珍,李羽欣[1]（2013）在《海南斑等蝎钾通道阻断剂Im58的克隆、表达、纯化和鉴定》一文中研究指出为表达钾离子通道阻断剂Im58,设计了4条搭桥PCR引物,通过overlap PCR的方法扩增出蝎毒肽Im58DNA全长片段,选用表达载体pGEX-4T-1,将测序正确的克隆转化至大肠杆菌E.coli/Rosetta(DE3)中.通过检测不同诱导时间和IPTG浓度下融合蛋白的表达量,筛选出最优表达条件.表达蛋白经IPTG诱导后,融合蛋白再经GSH亲和层析柱纯化,将洗脱液经超滤浓缩脱盐、纯化后得GST-Im58融合蛋白,蛋白用小肠激酶酶切后通过RP-HPLC C18柱分离获得色谱纯的蝎毒肽.蝎毒肽通过Tricine系统的SDS-PAGE蛋白质电泳鉴定重组多肽的分子量大小和纯度,并由MALDI-TOF-MS来精确测定重组多肽的分子量.结果表明:Im58阳性克隆子证明成功构建了Im58原核表达载体,Tricine系统的SDS-PAGE蛋白质电泳和MALDI-TOF-MS鉴定Im58多肽表达纯化成功.(本文来源于《中南民族大学学报(自然科学版)》期刊2013年02期）
兰珍[2]（2013）在《海南斑等蝎钾通道阻断剂Im58的克隆、表达、纯化和鉴定》一文中研究指出蝎作为生存了四亿多年的古老物种之一，在漫长的进化过程中产生了具有以多肽和蛋白为活性物质的蝎毒液。这些蝎毒液对蝎子捕获猎物和防御天敌起着重要的作用。蝎毒液的活性物质一般是由20-80个氨基酸组成，大多数能与细胞膜上的离子通道结合，据报道当前有100000多种蝎毒肽，它们能与将近350种的膜通道亚型相互作用，其中最为人们清楚的是钠、钾、钙、氯离子通道。离子通道是细胞不停地进行新陈代谢活动，不断和外部环境进行物质和能量交换的中间桥梁。当编码离子通道的基因发生突变或表达异常时，会使通道的功能出现不同程度的削弱或增强，使之无法调节细胞膜的兴奋性和转运膜内外多种离子，从而导致机体整体生理功能的紊乱，出现离子通道疾病。由于离子通道疾病的出现近年来离子通道也成为药物研究的新靶标。在众多离子通道中钾离子通道是目前发现种类最多，作用最复杂的离子通道。钾离子通道存在绝大多数动植物甚至是单细胞的原核生物中，它在生理活动中行使着重要的功能，当编码钾离子通道的基因发生基因突变或者蛋白结构异常则会导致钾离子通道疾病发生。现已发现的钾离子通道的疾病与神经、心脏和肌肉等器官有关。本文研究的内容与Kv1.3钾通道相关的自身免疫疾病有联系。研究表明当人体发生自身免疫反应时会有大量的T细胞激活、增殖和分化，而T细胞表面Kv1.3钾通道数目的激增与自身免疫疾病密切相关。因此Kv1.3通道就成为了治疗自身免疫疾病的新靶标。寻找特异性选择性的Kv1.3钾通道抑制剂就成了当前治疗自身免疫疾病医药的热点。本文从海南斑等蝎的毒腺组织cDNA文库，分离到蝎毒肽Im58基因，其包含一个180bp的开放阅读框(ORF),编码60个氨基酸，包括22个残基的信号肽和38个残基的成熟肽。Im58多肽的二级结构是由一个α螺旋和3个β折叠通过3对二硫键连接构成。根据Im58多肽的cDNA序列，通过overlap PCR扩增得到Im58目的序列。然后经过酶切和连接转化成功构建蝎毒肽Im58的重组表达载体pGEX-4T-1-Im58，提取重组质粒转化入大肠杆菌E.coli/Rosetta(DE3)，用IPTG诱导表达GST-Im58融合蛋白。运用GSH柱亲和层析纯化GST-Im58融合蛋白，然后超滤脱盐浓缩，利用小肠激酶（EK酶）酶切GST-Im58融合蛋白，最后采用RP-HPLC分离纯化Im58多肽，获得色谱纯Im58多肽，利用MALDI-TOF-MS测定其分子量。利用大肠杆菌表达技术获得Im58多肽后，采用电生理实验测定Im58对电压门控钾通道Kv1.2和Kv1.3的活性。结果表明，100nM左右的Im58多肽只能阻断大约30%的Kv1.2通道电流，而10nM左右的Im58多肽能明显的阻断超过半数Kv1.3通道电流，半数抑制浓度IC50值为2.3±0.83nM。Im58多肽对Kv1.3通道的良好抑制性，表明了Im58多肽能成为一个新型的Kv1.3通道阻断剂，为自身免疫疾病医药的开发提供了一个新的希望。为了弄清Im58与Kv1.3通道的作用机制，本文利用SWISS-MODEL模拟了Im58的3D结构，也通过在线Blast比对了Im58与α-KTx家族毒素。结果表明Im58拥有经典的功能二聚体，它是由一个赖氨酸和其相距6左右的芳香族氨基酸组成。因此Im58最有可能是采用赖氨酸堵孔的方式和Kv1.3通道作用。为了验证这个猜想，今后我们还会继续对Im58进行设计和改造，彻底阐明Im58与Kv1.3通道相互作用的分子机制。(本文来源于《中南民族大学》期刊2013-04-18）
斑等蝎论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
蝎作为生存了四亿多年的古老物种之一，在漫长的进化过程中产生了具有以多肽和蛋白为活性物质的蝎毒液。这些蝎毒液对蝎子捕获猎物和防御天敌起着重要的作用。蝎毒液的活性物质一般是由20-80个氨基酸组成，大多数能与细胞膜上的离子通道结合，据报道当前有100000多种蝎毒肽，它们能与将近350种的膜通道亚型相互作用，其中最为人们清楚的是钠、钾、钙、氯离子通道。离子通道是细胞不停地进行新陈代谢活动，不断和外部环境进行物质和能量交换的中间桥梁。当编码离子通道的基因发生突变或表达异常时，会使通道的功能出现不同程度的削弱或增强，使之无法调节细胞膜的兴奋性和转运膜内外多种离子，从而导致机体整体生理功能的紊乱，出现离子通道疾病。由于离子通道疾病的出现近年来离子通道也成为药物研究的新靶标。在众多离子通道中钾离子通道是目前发现种类最多，作用最复杂的离子通道。钾离子通道存在绝大多数动植物甚至是单细胞的原核生物中，它在生理活动中行使着重要的功能，当编码钾离子通道的基因发生基因突变或者蛋白结构异常则会导致钾离子通道疾病发生。现已发现的钾离子通道的疾病与神经、心脏和肌肉等器官有关。本文研究的内容与Kv1.3钾通道相关的自身免疫疾病有联系。研究表明当人体发生自身免疫反应时会有大量的T细胞激活、增殖和分化，而T细胞表面Kv1.3钾通道数目的激增与自身免疫疾病密切相关。因此Kv1.3通道就成为了治疗自身免疫疾病的新靶标。寻找特异性选择性的Kv1.3钾通道抑制剂就成了当前治疗自身免疫疾病医药的热点。本文从海南斑等蝎的毒腺组织cDNA文库，分离到蝎毒肽Im58基因，其包含一个180bp的开放阅读框(ORF),编码60个氨基酸，包括22个残基的信号肽和38个残基的成熟肽。Im58多肽的二级结构是由一个α螺旋和3个β折叠通过3对二硫键连接构成。根据Im58多肽的cDNA序列，通过overlap PCR扩增得到Im58目的序列。然后经过酶切和连接转化成功构建蝎毒肽Im58的重组表达载体pGEX-4T-1-Im58，提取重组质粒转化入大肠杆菌E.coli/Rosetta(DE3)，用IPTG诱导表达GST-Im58融合蛋白。运用GSH柱亲和层析纯化GST-Im58融合蛋白，然后超滤脱盐浓缩，利用小肠激酶（EK酶）酶切GST-Im58融合蛋白，最后采用RP-HPLC分离纯化Im58多肽，获得色谱纯Im58多肽，利用MALDI-TOF-MS测定其分子量。利用大肠杆菌表达技术获得Im58多肽后，采用电生理实验测定Im58对电压门控钾通道Kv1.2和Kv1.3的活性。结果表明，100nM左右的Im58多肽只能阻断大约30%的Kv1.2通道电流，而10nM左右的Im58多肽能明显的阻断超过半数Kv1.3通道电流，半数抑制浓度IC50值为2.3±0.83nM。Im58多肽对Kv1.3通道的良好抑制性，表明了Im58多肽能成为一个新型的Kv1.3通道阻断剂，为自身免疫疾病医药的开发提供了一个新的希望。为了弄清Im58与Kv1.3通道的作用机制，本文利用SWISS-MODEL模拟了Im58的3D结构，也通过在线Blast比对了Im58与α-KTx家族毒素。结果表明Im58拥有经典的功能二聚体，它是由一个赖氨酸和其相距6左右的芳香族氨基酸组成。因此Im58最有可能是采用赖氨酸堵孔的方式和Kv1.3通道作用。为了验证这个猜想，今后我们还会继续对Im58进行设计和改造，彻底阐明Im58与Kv1.3通道相互作用的分子机制。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
斑等蝎论文参考文献
[1].尹世金,兰珍,李羽欣.海南斑等蝎钾通道阻断剂Im58的克隆、表达、纯化和鉴定[J].中南民族大学学报(自然科学版).2013
[2].兰珍.海南斑等蝎钾通道阻断剂Im58的克隆、表达、纯化和鉴定[D].中南民族大学.2013