导读:本文包含了小电导钙激活型钾通道论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:糖尿病,二甲双胍,SK通道,PKC
小电导钙激活型钾通道论文文献综述
刘长河[1]（2019）在《二甲双胍调节2型糖尿病大鼠心房2型和3型小电导钙激活钾通道蛋白表达的信号通路研究》一文中研究指出目的:2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)是一种复杂的、异质性多基因疾病,以高血糖和胰岛素抵抗为特征。目前T2DM在全世界普遍流行,可引起多种代谢紊乱,导致多种心血管并发症,如心律失常、心肌病、冠状动脉粥样硬化和心力衰竭等,增加心房颤动(atrial fibrillation,AF)等房性心律失常的发生风险。预防和治疗T2DM相关的心血管并发症是目前临床上亟需解决的问题。AF作为一种复杂的电生理变化导致的功能性紊乱,是T2DM导致的临床上的重要并发症之一,可增加患者的死亡率。目前认为心房离子通道重构是AF发生的主要原因。但由于重构机制复杂,糖尿病诱发AF的病理生理机制尚未完全阐明,AF的治疗也一直是临床上的难点之一。因此,全面了解各类离子通道在糖尿病心房的重构机制对于糖尿病导致的心律失常的治疗具有重要的意义。多项研究表明,二甲双胍(metformin,Met)作为治疗糖尿病的一线药物,在改善糖、脂代谢和胰岛素抵抗的的基础上可以减少糖尿病患者发生AF的风险,被证实有独立于降糖作用之外的减轻机体氧化应激和炎症反应的作用,但分子机制尚不完全清楚。现已证实发生AF的重要基础就是心房离子通道重构。然而,二甲双胍对糖尿病心房离子通道重构影响的研究较少,其分子机制尚不清楚。近年来研究发现,小电导钙激活钾通道(small conductance calcium-activated potassium channels,SK channels)重构与AF的发生密切相关。SK通道广泛存在于心肌细胞膜,参与动作电位的形成,在调节心肌细胞去极化及维持心脏正常电活动中起着重要作用。我们先前研究发现二甲双胍可调节T2DM大鼠心房SK通道离子电流及其两个亚型SK2、SK3的mRNA和蛋白表达,但信号分子机制尚不明确。蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)/细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)信号通路和烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸氧化酶4(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase 4,NOX4)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38MAPK)信号通路在心血管系统广泛存在,对调节心脏电生理和功能发挥着重要作用。糖尿病时存在的高血糖能激活心肌PKC/ERK和NOX4/p38MAPK信号通路,促进多种炎症因子的释放,导致机体损伤。有研究证实二甲双胍在体内可抑制PKC/ERK和NOX4/p38MAPK信号通路的活化,阻断炎症介质的释放,发挥对机体的保护作用。然而,该信号通路是否参与T2DM大鼠心房SK2、SK3通道的调控以及二甲双胍是否通过该信号通路调节SK2、SK3通道蛋白需进一步的研究来证实。我们这个研究的目的是验证二甲双胍是否通过PKC/ERK和NOX4/p38MAPK信号通路来调节T2DM大鼠心房SK2、SK3通道蛋白的表达,以期为阐明糖尿病心房的部分离子通道重构机制以及为糖尿病所致AF的防治提供理论依据。研究方法:健康雄性Wistar大鼠,采用高脂高糖饮食联合腹腔注射小剂量链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)的方法构建2型糖尿病大鼠模型。4周后(空腹一夜)断尾采血测量空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)及空腹胰岛素(fasting insulin,FINS),计算出胰岛素敏感指数(insulin sensitivity index,ISI),同时行腹腔糖耐量实验,筛选出空腹血糖≥11.1mmol/L且伴有ISI降低的大鼠为成模组用于后续实验。对照组(Con,n=8)同步腹腔注射等体积的枸橼酸缓冲液及采血检测FBG及FINS。所有成模大鼠随机分为2组:未经治疗的T2DM组(DM,n=8);二甲双胍治疗组(Met)。Met组给予二甲双胍300mg/kg/d灌胃8周;Con组和DM组均给予等量生理盐水灌胃8周。最后2周,Met组内随机分为以下几组:单纯二甲双胍治疗组(Met,n=8)、腹腔注射PKC激动剂佛波醇(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)组(PMA,n=8)、尾静脉注射ERK激动剂重组人表皮细胞生长因子(recombinant human epidermal cell growth factor,rh-EGF)组(EGF,n=8)、皮下注射烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸氧化酶(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase,NOX)抑制剂二苯基氯化碘盐(dibenziodoliumchloride,DPI)组(DPI,n=8)和尾静脉注射p38MAPK激动剂茴香霉素(anisomycin)组(AN,n=8)。PMA组给予腹腔注射PMA[2ug/kg,隔日一次,溶解于二甲基亚砜(Dimethyl sulfoxide,DMSO)中];EGF组给于尾静脉注射rh-EGF(10ug/kg,每日一次,溶解于蒸馏水中);DPI组给于皮下注射DPI(1mg/kg,每日一次,溶解于DMSO中);AN组给于尾静脉注射茴香霉素(5mg/kg,隔日一次,溶解于无菌磷酸盐缓冲液中);Con、DM及Met组分别同步注射等量液体作为对照步骤。最后处死大鼠,快速分离心房组织,小心去除脂肪和疏松结缔组织。采用酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)的方法使用PKC激酶活性检测试剂盒检测相关组别大鼠心房组织PKC的活性。采用实时聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-PCR)的方法检测相关组别心房SK2、SK3、NOX4、p38MAPK和ERK1/2的mRNA表达水平。采用蛋白印迹(Western blot)的方法检测相关组别SK2、SK3、NOX4、pERK、p-p38MAPK蛋白的表达水平。采用免疫组化(immunohistochemistry,IHC)的方法检测相关组别SK2、SK3的蛋白表达水平。结果:1、通过8周的高脂高糖饮食联合腹腔注射小剂量STZ(30mg/kg)的方法可以构建稳定的T2DM大鼠模型,具有2型糖尿病典型的代谢紊乱特征。我们观察到与对照组相比,T2DM模型大鼠的体重(body weight,BW)明显降低(P<0.01);FBG及FINS水平明显升高(P<0.01);经计算得出的ISI较对照组明显降低(P<0.01);腹腔糖耐量实验中的血糖也较对照组明显增加(P<0.01)。综合以上实验结果,可以看出大鼠模型有胰岛素抵抗、血糖升高及糖耐量减低等典型的T2DM特征。2、我们采用RT-PCR的方法检测了Con、DM和Met各组心房组织的SK2、SK3、NOX4、p38MAPK和ERK1/2的mRNA表达水平。相比于对照组,T2DM大鼠心房SK2 mRNA表达明显降低(P<0.01),SK3及NOX4 mRNA表达明显升高(P<0.01),而p38MAPK和ERK1/2的mRNA表达无变化;8周的二甲双胍治疗可明显上调SK2 mRNA的表达(P<0.01)、下调SK3 mRNA(P<0.05)和NOX4 mRNA的表达(P<0.01)。3、采用ELISA的方法检测了Con、DM、Met和PMA各组心房组织的PKC活性水平。采用Western blot和IHC的方法检测了Con、DM、Met、PMA和EGF各组心房组织SK2、SK3和pERK蛋白的表达水平。相比于对照组,DM组大鼠心房PKC活性明显升高(P<0.01),pERK表达明显增加(P<0.01),SK2蛋白表达明显下降(P<0.01),SK3蛋白表达明显升高(P<0.01)。相比于DM组,8周的二甲双胍治疗可明显抑制心房的PKC活性(P<0.01),降低pERK表达(P<0.01),同时上调SK2蛋白表达(P<0.01)、下调SK3蛋白表达(P<0.05)。相比于Met组,尾静脉注射ERK激动剂rh-EGF在明显提升pERK的同时(P<0.01),进一步抑制了SK2蛋白的表达(P<0.05)、提升了SK3蛋白的表达(P<0.01);尾静脉注射PKC激动剂PMA在明显提升PKC活性的同时(P<0.01),同步提升了pERK的表达(P<0.05),进一步抑制了SK2蛋白的表达(P<0.01)、提升了SK3蛋白的表达(P<0.05)。4、采用Western blot和IHC的方法检测了Con、DM、Met、DPI和AN各组心房组织SK2、SK3、NOX4和p-p38MAPK蛋白的表达水平。相比于对照组,T2DM大鼠心房NOX4及p-p38MAPK的蛋白表达明显升高(P<0.01),SK2蛋白表达下降(P<0.01),SK3蛋白表达升高(P<0.01)。8周的二甲双胍治疗显着降低了NOX4及p-p38MAPK的蛋白表达水平(P<0.01),同时上调了SK2蛋白的表达(P<0.01)、下调了SK3蛋白的表达。相比于Met组,尾静脉注射p38MAPK激动剂anisomycin在明显提升p-p38MAPK表达的同时(P<0.01),同时抑制了SK2蛋白的表达(P<0.01)、提升了SK3蛋白的表达(P<0.05);皮下注射NOX抑制剂DPI明显抑制了NOX4的表达(P<0.01),进一步提升了SK2蛋白的表达(P<0.05)、抑制了SK3蛋白的表达(P<0.05),并且同时下调了p-p38MAPK的表达(P<0.01)。结论:1、T2DM大鼠心房SK2通道蛋白发生了下调、SK3通道蛋白发生了上调,二甲双胍可以反向调节SK2、SK3通道蛋白的异常表达。2、PKC/ERK及NOX4/p38MAPK信号通路参与介导了T2DM大鼠心房SK2蛋白的下调、SK3蛋白的上调。3、长期的二甲双胍治疗通过抑制PKC/ERK及NOX4/p38MAPK信号通路部分修复了SK2、SK3离子通道蛋白的重构。(本文来源于《中国医科大学》期刊2019-05-01）
余奕言,何容芳,于风旭,范学慧,张娟[2]（2018）在《小电导钙激活钾通道在人心房中的增龄性变化》一文中研究指出目的研究增龄对人心房肌小电导钙激活钾(SK2)通道的影响。方法选取3个不同年龄阶段:<40岁(n=22)、40～60岁(n=34)和>60岁(n=18)窦性心律(SR)患者为研究对象,于体外循环手术中获取患者右心耳组织。急性酶分离方法分离单个人心房肌细胞,全细胞膜片钳技术检测不同年龄患者心房SK2通道电流的差异。Western blot和qRT-PCR检测不同年龄患者心房组织SK2通道蛋白和基因的表达变化。结果采用该急性酶分离方法可获得细胞完整、横纹清晰、有电生理活性的心房肌细胞;<40岁患者组(n=18)与40～60岁患者组(n=8)相比,SK2通道电流无明显变化(P>0.05),与<40岁患者组(n=8)相比,>60岁患者组(n=10)SK2通道电流明显增加(-130mV,P<0.01);与40～60岁患者组(n=8)相比,>60岁患者组(n=10)SK2通道电流也增加且差异有统计学意义(-130mV,P<0.01)。分别与<40岁(n=12)和40～60岁患者组(n=18)相比,>60岁患者组(n=10)SK2通道蛋白表达和基因表达均明显增加(P<0.05)。结论随着年龄的增加,人心房组织中SK2通道电流、基因和蛋白表达水平均明显增加,增龄导致的SK2通道重构可能参与了心房颤动的病理生理过程。(本文来源于《重庆医学》期刊2018年33期）
余奕言[3]（2018）在《血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）对心房肌细胞小电导钙激活钾通道（SK2）作用机制研究》一文中研究指出目的:肾素-血管紧张素-醛固酮系统(Renin-Angiotensin-Aldosterone System,RAAS)的激活与房颤(Atrial Fibrillation,AF)的发生密切相关,是导致心房电重构和结构重构的作用机制之一。而小电导钙激活钾通道(Small conductance calcium-activated potassium channels,SK通道)尤其是SK2作为SK通道中最重要的亚型与房颤的发生和发展密切相关。研究表明在快速起搏的犬模型上,SK通道的阻滞剂NS8593显着降低AF的发生率和房颤持续时间。本课题组前期结果也表明,在快速起搏的犬模型上,快速起搏组(pacing组)血清及左房组织血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)浓度升高,pacing+AngⅡ组房颤的诱发率也明显增加,而pacing+AngⅡ+缬沙坦(Valsartan)组可明显抑制这一作用,SK通道阻断剂NS8593可明显抑制pacing+AngⅡ组房颤的诱发率和持续时间。因此推测AngⅡ可能通过影响SK2通道来参与房颤的发生发展,但其分子机制还不清楚。方法:(1)检测AngⅡ对大鼠心房组织及细胞SK2通道基因和蛋白的表达变化:(1)采用微量渗透压泵的方式泵入AngⅡ(200ng/kg/min,持续14天),建立AngⅡ慢性处理的大鼠模型,14天后取出心房组织,用qRT-PCR检测KCNN2基因的表达,用Western blotting技术检测SK2蛋白的表达变化;(2)采用胰蛋白酶联合Ⅱ型胶原酶的方法分离乳大鼠心房肌细胞,并随机分为control组、1.5μM AngⅡ组、1.5μM AngⅡ+10μM Valsartan(AngⅡ 1型受体阻滞剂)组、1.5μM AngⅡ+10μM PD123319(AngⅡ 2型受体阻滞剂)组,处理72h后分别用qRT-PCR及Western blotting检测SK2基因和蛋白表达的变化;(2)生物素法提取膜蛋白检测Ang Ⅱ对乳鼠心房肌细胞膜上SK2通道蛋白以及表达在HEK293T细胞系上的SK2通道膜蛋白的影响。(3)免疫共沉淀法检测表达在HEK293T细胞系上SK2通道蛋白与AT1R或AT2R之间的相互作用关系。(4)细胞免疫荧光结合全内反射成像技术检测AngⅡ对乳鼠心房肌细胞上SK2通道蛋白转运的影响。(5)流式细胞术检测AngⅡ对表达在HEK293T细胞系上的SK2通道蛋白转运的影响。(6)通过全细胞膜片钳技术检测AngⅡ(1.5uM)对单独表达SK2、共表达SK2+AT1R和共表达SK2+AT2R的细胞系CHOK1-SK2-GFP上的SK2通道电流幅度的差异。结果:(1)AngⅡ增加大鼠心房组织和心房肌细胞SK2通道基因和蛋白的表达:(1)AngⅡ增加SD大鼠心房组织KCNN2基因的表达(n=7,P<0.05),同时也明显增加SK2通道总蛋白的表达(n=7,P<0.01);(2)1.5μM AngⅡ增加乳大鼠心房肌细胞KCNN2通道基因的表达(n=5,P<0.01),且10μM Valsartan可抑制这一效应(n=5,P<0.01);1.5μM AngⅡ上调乳鼠心房肌细胞SK2通道蛋白的表达(n=5,P<0.01),同样可被10μM Valsartan所逆转(n=5,P<0.01);(2)AngⅡ增加SK2通道膜蛋白的表达:(1)1.5μM AngⅡ增加乳鼠心房肌组织SK2通道膜蛋白的表达(n=6,P<0.01),且可被10μM Valsartan所逆转(n=5,P<0.05)。(2)在SK2和AT1R共表达的HEK293T细胞系上,1.5μM AngⅡ增加SK2通道膜蛋白的表达(n=5,P<0.05);而在SK2和AT2R共表达的HEK293T细胞系上,1.5μM AngⅡ并不引起SK2通道膜蛋白的增加(n=4,P>0.05)。(3)SK2与AT1R之间存在蛋白间相互作用:在共表达SK2和AT1R或共表达SK2和AT2R的HEK293T细胞系上,通过免疫共沉淀检测SK2与AT1R/AT2R之间的相互作用发现SK2与AT1R之间存在蛋白间相互作用,而SK2与AT2R之间的相互作用不明显。(4)1.5μM AngⅡ促进SK2通道向膜上转运:(1)1.5μM AngⅡ促进乳鼠心房肌细胞上SK2通道蛋白的转运;(2)在共表达SK2和AT1R的HEK293T细胞中,1.5μM AngⅡ可促进SK2向膜上的转运(n=3,P<0.01);而在共表达SK2和AT2R的HEK293T细胞中,1.5μM AngⅡ对SK2蛋白向膜上的转运没有明显的影响(n=3,P>0.05);在单独表达SK2的HEK293T细胞中,1.5μM AngⅡ对SK2向膜上的转运也没有明显的影响(n=3,P>0.05)。(5)AngⅡ对SK2通道电流幅度的影响:(1)1.5μM AngⅡ可增加转染了AT1R的CHOK1-SK2-GFP细胞系上的SK2通道电流幅度;(2)1.5μM AngⅡ对转染了AT2R的CHOK1-SK2-GFP细胞系上的SK2通道电流幅度没有明显的影响;(3)1.5μM AngⅡ对没有转染受体的CHOK1-SK2-GFP细胞系中的SK2通道电流幅度也没有明显影响。结论:RAAS激活与房颤的发生密切相关,AngⅡ可通过AT1受体增加SK2通道蛋白向膜上转运,表现为I_(SK)增加。AngⅡ上调SK2通道参与了心房电重构过程,这可能是房颤发生和维持的机制之一。(本文来源于《西南医科大学》期刊2018-05-01）
付茜[4]（2018）在《二甲双胍对GK大鼠心房结构和小电导钙激活钾通道治疗作用的研究》一文中研究指出目的:随着糖尿病(diabetes mellitus,DM)患者人数与日俱增。其中2型糖尿病(diabetes mellitus type 2,T2DM)约占所有确诊糖尿病例数的90-95%,且T2DM的患病率和发病率在全球亦增长迅速,这使得其相关的心血管疾病的风险也相应增加。虽然冠状动脉疾病及其相关心血管事件是最常见的糖尿病心血管并发症,但心脏电生理系统也是糖尿病损害的重要靶点。尽管罹患糖尿病的患者每天都在不断增加,但我们对糖尿病和心房电生理之间的关系至今仍未透彻地了解。最近,全基因组关联分析研究(Genome-wide association study,GWAS)得出了一种房颤相关的新焦点——小电导钙激活钾通道(small conductance calcium activated potassium channels,SK channels)。SK通道已被证实其在心脏组织中表达~([13]),且分布存在显着的房室差异,在心房的表达量远优于心室。SK通道是一种在收缩过程中激活的外向电流,进而参与心脏动作电位(action potential,AP)的复极化。由于细胞内钙离子的激活,使得SK通道在房颤(atrial fibrillation,AF)等快速性心电活动中扮演着尤为重要的角色。此外,多种房颤模型的研究结果均表明SK通道极大可能参与了心房电重构并起到至关重要的作用。然而SK通道是如何介导T2DM相关的房性心律失常,这一问题仍是未知的。二甲双胍(metformin,Met)是治疗T2DM的一线药物,近年来Met的抗心律失常作用逐渐被认识。然而对于T2DM相关的心房SK通道功能受损的现象,Met是否具有逆转效应仍未可知。综上本研究旨在评估,T2DM的慢性期,GK大鼠心房肌细胞SK通道是否存在病理性改变,如果是这样,通过12周的Met治疗是否具有逆转效应。研究方法:1、研究二甲双胍对GK大鼠心房组织的影响:10-11周龄健康雄性GK、Wistar大鼠,适应性饲养1周后(动物12周龄时),通过检测空腹血糖、空腹胰岛素、腹腔糖耐量实验,鉴定GK大鼠是否成模(T2DM模型)稳定。将成模的GK大鼠随机分为2组:(1)GK组(GK);(2)GK+Met组(Met)。Wistar大鼠作为本实验研究的对照组,综上本实验共有3个实验分组:(1)对照组(Con);(2)GK组(GK);(3)GK+Met组(Met)。随后检测各项理化指标,心房肌的形态结构,并统计心房纤维化百分比。2、研究二甲双胍对GK大鼠小电导钙激活钾通道表达的作用:通过Real-time PCR和Western blot方法检测3组大鼠心房组织SK通道的mRNA和蛋白的表达情况。3、研究二甲双胍对GK大鼠心房小电导钙激活钾通道电流及动作电位的作用:全细胞膜片钳分别在电压钳和电流钳的模式下记录3组中心房肌细胞I_(SK)以及动作电位相关参数的变化情况。结果:1、与Con组相比,GK组的空腹血糖和空腹胰岛素值明显升高(P<0.01,P<0.05)、糖耐量明显减低(P<0.05);而且其心房肌细胞形态异常,间质纤维化程度增加,经Met治疗后上述改变明显改善。2、与Con组相比,GK组KCa2.2的mRNA和蛋白表达水平分别降低了62.98%(P<0.01)和52.10%(P<0.01);KCa2.3的mRNA和蛋白表达水平分别升高了2.81±0.5倍(P<0.01)和1.98±0.5倍(P<0.01)。与GK组相比,通过12周的Met治疗,KCa2.2的mRNA和蛋白表达水平分别升高了2.38±0.5倍(P<0.05)和1.75±0.5倍(P<0.01),而且KCa2.3的mRNA和蛋白表达水平分别降低了的59.43%(P<0.05)和54.55%(P<0.01)。KCa2.1的mRNA和蛋白表达水平在各组之间无统计学差异(P>0.05)。3、在-40mV,GK组大鼠的I_(SK)电流密度较Con组降低67.34%,Met组I_(SK)电流密度是GK组的1.98±0.5倍,(P<0.01)。同Con组相比,GK组动作电位50%复极化时间(50%repolarization time,APD50)和90%复极化时间(90%repolarization time,APD90)均明显延长(分别为3.44±0.5倍、1.78±0.5倍,P<0.01);Met组APD50、APD90分别较GK组缩短67.07%、57.03%,(P<0.01)。另外,各组动作电位振幅(action potential amplitude,APA)和静息电位(resting potential,RP)无明显差异(P>0.05)。然而T2DM会导致APD的延长,这是多种离子通道的综合作用,我们通过加入SK通道特异性阻滞剂Apamin(100pM,15min),前后对比APD的变化,来模拟SK通道在维持心房动作电位时程中独立作用。加入Apamin后,Con组APD50、APD90分别延长了25%和28%;Met组APD50、APD90分别延长了9%和13%;而GK组无明显变化。证实了T2DM极大程度削弱了SK通道的功能,通过Met的治疗可改善这一现象。结论:1、GK大鼠的疾病状态与人类T2DM相似,是一种稳定、权威的T2DM模型;此外,Met能够改善GK大鼠的代谢紊乱、炎症改变和心房结构的损伤。2、Met能够上调GK大鼠心房KCa2.2的表达降低,抑制GK大鼠心房肌细胞KCa2.3的表达升高,而对KCa2.1的表达几乎无影响。3、Met能够显着地改善GK大鼠心房肌细胞跨膜I_(SK)电流密度的降低,并抑制动作电位时程(action potential duration,APD)的延长,然而对于心房肌细胞APA和RP无明显影响;此外,KCa2.2这一蛋白亚型在SK通道跨膜电流中起主导作用。(本文来源于《中国医科大学》期刊2018-03-01）
冯桂荣,钟国强,蒋智渊,温丽娜,黎珊珊[5]（2017）在《microRNA-155在慢性心房颤动心房3型小电导钙激活钾通道重构中的作用》一文中研究指出目的:初步探讨microRNA-155(miR-155)在慢性心房颤动(房颤)中3型小电导钙激活钾通道(SK3)重构中的作用。方法:将67例心脏瓣膜病外科手术患者分为房颤组(31例)和窦律组(36例),利用实时荧光定量PCR分别检测两组患者右心耳miR-155与SK3mRNA表达水平,免疫印迹法检测SK3蛋白表达水平;分别利用miR-155mimic和miR-155inhibitor干预人心肌细胞系(AC16细胞系),观察其对AC16细胞SK3mRNA和蛋白表达水平的影响。结果:房颤组右心耳miR-155表达水平较窦律组显着上调(1.292±0.261︰0.310±0.161,P<0.01)。房颤组右心耳SK3mRNA表达水平与窦律组无显着差异(0.855±0.295︰0.917±0.253,P>0.05),但房颤组右心耳SK3蛋白表达水平较窦律组显着下调(0.182±0.043︰0.302±0.064,P<0.01)。两组患者右心耳miR-155表达水平与SK3蛋白表达水平呈负相关(r=-0.735,P<0.01)。miR-155 mimic减少AC16细胞SK3蛋白表达,而miR-155inhibitor则增加SK3蛋白表达,但两者均对SK3mRNA的表达无影响。结论:慢性房颤患者右心房miR-155表达上调,可能通过下调SK3表达水平,参与房颤的发生与维持。(本文来源于《临床心血管病杂志》期刊2017年07期）
倪雅娟,张京文,白鸿远,杨国栋,马爱群[6]（2017）在《小电导钙激活钾通道SK2在容量超负荷心力衰竭大鼠窦房结表达的改变》一文中研究指出目的观察小电导钙激活钾通道SK2通道在心力衰竭(HF)大鼠窦房结组织中表达的改变。方法以腹主动脉-下腔静脉穿刺造瘘术建立容量超负荷心力衰竭大鼠模型(n=7),假手术对照组(SO)大鼠切开腹腔,穿刺腹主动脉,但不造成腹主动脉-下腔静脉之间的瘘(n=7)。于术后8周通过超声心动图测定左心室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)、左心室短轴缩短率(left ventricular fraction shortening,LVFS)、左心室收缩末内径(left ventricular end-systolic diameter,LVEDs)、左心室舒张末内径(left ventrieular end-diastolic diameter,LVEDd),并于取材时测定心脏质量/体质量(heart weight/body weight),评价心脏结构与功能改变。分离大鼠窦房结细胞以免疫荧光染色法观察SK2通道蛋白的表达,同时取材窦房结组织,提取组织蛋白,行Western blot测定比较心衰大鼠窦房结组织SK2通道表达的改变情况。结果超声心动图结果显示,心力衰竭大鼠心脏收缩功能与舒张功能明显减低[LVEDd(mm):SO 5.91±0.36 vs HF 11.15±0.91,P<0.01;LVEDs(mm):SO 2.89±0.28 vs HF 7.89±0.70,P<0.01;LVEF(%):SO 87.10±1.63 vs HF 62.10±2.57,P<0.01;LVFS(%):SO51.27±2.03 vs HF 30.05±1.66,P<0.01],心脏质量/体质量明显增大(SO 244.19±36.87 vs HF 593.21±28.72,P<0.01)。单细胞免疫荧光染色结果示SK2通道表达于两组大鼠窦房结细胞膜上,Western blot定量分析结果示心力衰竭组大鼠窦房结组织SK2通道蛋白表达水平较假手术组明显减低(0.22±0.10 vs 0.31±0.16,P<0.05)。结论 SK2通道在心力衰竭大鼠窦房结组织中表达明显下调。(本文来源于《山西医科大学学报》期刊2017年07期）
冯桂荣[7]（2017）在《MicroRNA-155调控3型小电导钙激活钾通道在慢性心房颤动心房电重构的作用》一文中研究指出背景和目的 心房颤动(房颤)是临床上最常见的快速型心律失常,心房电重构是主要作用机制之一。3型小电导钙激活钾通道(small conductance calcium activated potassium channel 3,SK3)属于小电导钙激活钾通道家族的亚型之一,已证实在心房肌细胞中有丰富表达,主要参与心肌细胞动作电位的复极时程,其功能异常在房颤的发病中起着重要的作用。microRNA是一类高度保守性的内源性非编码小分子RNA,通过与靶基因mRNA的3’-非编码区(3’-untranslated region,3’-UTR)结合,对靶基因的表达进行转录后水平的调节。研究表明相关micro RNA可通过调控其靶基因离子通道在心房表达水平,参与房颤心房电重构,但目前多集中于钙离子通道和内向整流性钾离子通道调控的研究,对于SK3的研究相对较少。生物信息学预测表明,编码SK3的KCNN3是microRNA-155(miR-155)调控的靶基因之一。miR-155在冠心病、高血压、心肌肥厚、心力衰竭等多种疾病起调控作用,已证实miR-155在房颤患者心房中表达上调。本研究通过检测风湿性心脏瓣膜病合并房颤患者右心耳组织miR-155和SK3表达,并利用miR-155 mimic和miR-155 inhibitor寡核苷酸干预人心肌细胞,构建miR-155过表达和低表达人心肌细胞模型,初步探讨miR-155在房颤心房SK3离子通道重构的作用。方法 收集因风湿性心脏瓣膜病进行外科换瓣手术患者的右心耳组织67例,根据心电图或动态心电图分为房颤组(31例),窦律组(36例);利用实时荧光定量PCR(Real time quantity PCR,RT-qPCR)分别检测两组患者右心耳miR-155表达水平,免疫组化检测SK3在右心耳组织的表达分布;分别利用RT-qPCR和免疫印迹法(Western blot,WB)检测SK3 mRNA、蛋白表达水平;分别利用化学合成寡核苷酸miR-155 mimic和miR-155 inhibitor干预人心肌细胞系(AC16细胞系),构建mi R-155过表达和低表达模型,继续培养48小时后,利用RT-qPCR和WB分别检测干预后各组细胞SK3 mRNA和SK3蛋白表达水平,观察miR-155过表达和低表达对AC16细胞SK3 mRNA和蛋白表达水平的影响。结果 (1)房颤组右心耳miR-155表达水平较窦律组显着上调(1.292±0.261vs 0.310±0.161,P<0.01)。(2)房颤组右心耳SK3 mRNA表达水平与窦律组无显着差异(0.855±0.295vs 0.917±0.253,P>0.05),但房颤组右心耳SK3蛋白表达水平较窦律组显着下调(0.182±0.043 vs0.302±0.064,P<0.01)。(3)两组患者右心耳miR-155表达水平与SK3蛋白表达水平呈负相关(r=-0.735,P<0.01)。(4)体外细胞干预实验显示,miR-155 mimic或miR-155 inhibitor两者均对SK3 m RNA的表达无影响,但miR-155可在蛋白水平影响SK3表达,miR-155 mimic显着减少AC16细胞SK3蛋白表达,而miR-155 inhibitor则显着增加SK3蛋白表达。结论 房颤患者心房miR-155表达上调,可能通过下调心房SK3蛋白表达水平参与心房电重构,在房颤的发生与维持起作用。(本文来源于《广西医科大学》期刊2017-05-01）
张悦[8]（2017）在《小电导钙激活钾通道SK3在叁叉神经病理性疼痛中作用研究》一文中研究指出目的:神经细胞膜上离子通道的结构与功能改变与疼痛的发生密切相关。研究表明编码小电导钙激活钾离子通道3(small conductance Ca~(2+)activated K+channels,SK3)的KCNN3基因的多聚谷氨酞胺重复序列CAG多态性和偏头痛有关,并证明脑干中SK3通道表达降低。而偏头痛与叁叉神经痛(trigeminal neuralgia,TN)具有相似的疼痛传导通路,由此推测SK3通道可能存在于叁叉神经节(trigeminal ganglion,TG)并参与了TN的发生。本研究拟探讨:(1)SK3通道是否存在于正常大鼠叁叉神经节;(2)大鼠TN模型叁叉神经节SK3通道表达变化;(3)SK3通道激活剂和抑制剂对TN大鼠痛阈的影响。旨在为TN的治疗提供新的靶点。方法:1.正常大鼠叁叉神经节SK3通道表达研究:10只健康成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠,体重200-250g,麻醉后断头处死取肝脏、TG及背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)行Western blot及PCR,比较SK3通道在肝脏、TG及DRG蛋白水平和m RNA水平的表达差异。2.大鼠TN模型叁叉神经节SK3通道表达变化研究:40只健康成年雄性SD大鼠,体重200-250g,按照随机数字法分为两组:手术组(I组,n=20)和假手术组(S组,n=20),I组经颧骨下入路暴露并结扎眶下神经建立眶下神经慢性缩窄环术(chronic constriction injury of infraorbital branch of the trigeminal nerve,ION-CCI)致TN模型,S组用同样的方法仅暴露眶下神经而不结扎。两组随机各抽取5只分别于术前及术后1、5、10、15、30、45、60天行痛阈测定。术后15天两组各取15只断头取TG经免疫荧光、Western blot、PCR行SK3通道蛋白检测。3.SK3通道激活剂Cy PPA和抑制剂apamin对大鼠TN痛阈影响:60只健康成年雄性SD大鼠,体重200-250g,按照随机数字法分为两组:手术组(I组,n=30)和假手术组(S组,n=30),按照上述实验方法建立TN模型。术后15天两组各取30只大鼠利用经眶下孔注射达TG的方法注射不同剂量的SK3通道激活剂和抑制剂,根据注射药物种类及剂量不同分为C1、C2、C3、A、AC、NS共6组:激活剂Cy PPA20μg(C1组,5只),50μg(C2组,5只),100μg(C3组,5只)各0.1ml;抑制剂apamin2μg(0.1ml)(A组,5只);Cy PPA100μg+apamin2μg(AC组,5只)0.2ml和0.9%生理盐水(NS组,5只)0.1ml。并于注射前(T0)及注射后20min(T1)、40min(T2)、60min(T3)、80min(T4)、100min(T5)、120min(T6)行痛阈测定。结果:1.正常大鼠TG中SK3通道表达情况:Western blot结果显示SK3通道在正常大鼠TG表达,并且TG中SK3通道表达量较肝脏弱(P=0.018),较DRG节强(P=0.037),差异有统计学意义(P<0.05);PCR结果显示SK3通道m RNA在TG表达,与肝脏比较表达量低(P=0.000),与DRG比较表达量高(P=0.000),差异有统计学意义(P<0.05)。2.术前及术后痛阈变化:组内比较:I组术前大鼠面部机械痛阈13±2.74g,术后第1天痛阈增高(21±2.02g),与术前比较有统计学意义(P=0.000)。术后第5天(16.4±1.67g)降低,到术后第15天(0.09±0.06g)最低,差异有统计学意义(P=0.000)。术后30天一直到术后60天痛阈开始逐渐恢复(6.8±1.28g),差异有统计学意义(P=0.002)。S组痛阈术前及术后各时点差异均无统计学意义(P>0.05)。组间比较:T0、T1、T2时间点两组痛阈变化无统计意义(P>0.05);其余各时间点间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。3.大鼠TN模型叁叉神经节SK3通道表达:术后15天SK3通道免疫荧光结果显示I组的表达较S组低;Western blot结果显示I组SK3蛋白表达较S组显着降低(P=0.036)。PCR结果显示I组SK3蛋白表达较S组显着降低(P=0.012)4.SK3通道激活剂Cy PPA和抑制剂apamin对大鼠TN影响:组间比较:各组注射前痛阈无统计学差异(P>0.05)。注射药物后20min:与NS组比较,大鼠痛阈随着激活剂的增加而相应的增高,其中C2组,C3组痛阈增加明显;C3组高于其余各组(P<0.05),其余各组间差异均无统计学意义(P>0.05);注射药物后40min:C2、C3组高于NS组、A组,C3组高于AC组(P<0.05),其余各组间无统计学差异(P>0.05)。注射药物后60min,80min:C2、C3组高于其余各组,差异具有统计学意义(P<0.05),其余各组间均无统计学差异(P>0.05)。注射药物后100min:C3组痛阈高于C1、A、AC组(P<0.05),其余各组间无统计学差异(P>0.05)。注射药物后120min:C2、C3组高于NS组、A组,差异有统计学意义(P<0.05);其余各组间痛阈无统计学差异(P>0.05)。组内比较:NS组各时间点痛阈变化无统计学差异(P>0.05);C1组:T3、T4、T5均高于其余各时间点,其中T4最高,与T3、T5比较差异有统计学意义(P<0.05)。C2组:T3高于T0和T1,其余各组间无统计学差异。C3组:T3高于其余各时间点,差别有统计学意义(P<0.05),其余各时间点无统计学差异(P>0.05)。A组:术后各时间点均低于T0,差异有统计学意义(P<0.05)。AC组:各时间点间两两比较均无统计学差异(P>0.05)。假手术组各组各时间点间痛阈无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:1.SK3通道存在于正常大鼠叁叉神经节;2.大鼠眶下神经结扎诱导TN可使叁叉神经节SK3通道表达降低;3.术后15天TN大鼠注射SK3通道激活剂Cy PPA大鼠痛阈在注射后20-60 min随剂量的增加而增高,80-120 min逐渐降低;注射SK3通道抑制剂apamin大鼠痛阈在注射后20-60 min逐渐降低,80-120 min逐渐升高。注射激活剂Cy PPA后再注射抑制剂较只注射抑制剂组痛阈高。提示SK3通道可能作为研究叁叉神经痛的潜在靶点。(本文来源于《西南医科大学》期刊2017-05-01）
王笑宇[9]（2017）在《血管紧张素Ⅱ对房颤患者心房肌小电导钙激活钾通道的作用和机制研究》一文中研究指出目的:临床常见的快速性房性心律失常——心房颤动(atrial fibrillation,AF),可并发于各种心脏病,能引起心功能不良、心室律(率)紊乱、血栓形成。严重者导致肺栓塞、脑动脉栓塞,卒中发病率、病死率上升。房颤的发病机制极为复杂,导致其治疗效果欠佳。弄清房颤的发病机制,将为房颤的治疗提供有力的理论依据。心房电重构是AF的重要发病机制,表现为:心肌细胞动作电位时程缩短,对频率顺应性降低。心肌细胞的动作电位时程由膜上各种离子通道活动决定,因而离子通道成为预防和治疗AF的潜在理想靶点。小电导钙激活钾通道(Small Conductance Ca~(2+)-activated K~+channels,SK)在心肌细胞上广泛表达,心房表达明显高于心室。该通道对膜电位改变不敏感,但对钙浓度的改变高度敏感。目前研究证实肾素-血管紧张素-醛固酮系统活性的增强与AF密切关联。抑制内源性的血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的作用可防止犬心房快速起搏导致的心房肌有效不应期的缩短,另有研究显示AngⅡ参与了多种离子通道的电重构过程,AngⅡ还可导致细胞钙超载。我们推测AngⅡ通过改变胞内钙浓度影响SK通道电流,从而参与AF的电重构。然而AngⅡ是否对SK通道有调节作用,及其可能的作用机制目前还不清楚。本实验采用实时定量PCR技术、免疫印迹技术(Western blotting)检测人心房肌AT1和AT2受体的基因和蛋白表达变化,采用全细胞膜片钳技术(Whole-cell patch clamp technique)记录sk通道,探寻af时sk通道电流的变化及angii对sk通道的调控作用机制,为目前房颤的治疗策略提供新的思路。方法:(一)电生理实验将10例(细胞总数n=16)手术患者的心肌组织按照心电图的结果和病历资料分为窦性心律组(sr)4例(细胞总数n=8)和心房颤动组(af)6例(细胞总数n=8)。改良的分离法得到单个人心房肌细胞,采用全细胞膜片钳技术记录通道电流。观察指标(1)人心房肌细胞sk通道基本特点;(2)比较sr组和af组sk通道电流密度及其占混合电流的百分比;(3)angii对sr组和af组sk通道电流的作用。(二)实时荧光定量pcrsr组10例,af组10例。检测两组患者心房肌at1r、at2r基因mrna的表达水平。(叁)免疫印迹技术sr组13例,af组13例。检测人心房肌at1r、at2r蛋白的表达变化。结果:(1)sk通道电流的特点人心房肌细胞sk通道电流内向整流,apamin能特异性阻断该通道。(2)比较两组sk通道电流在-130mv~-80mv钳制电压下,两组sk通道电流密度差别有统计学意义。在-130mv,sr组:(-2.17±0.16)pa/pf,af组:(-9.26±0.43)pa/pf(nsr=4,naf=3,p<0.05);sk通道电流在混合电流中所占的比例sr组:(29.36±2.8)%,af组:(45.35±4.3)%(nsr=4,naf=3,p<0.05)。结果显示,无论是sk通道电流密度还是在混合电流中所占的比例,af组都多于sr组。(3)angii对两组sk通道电流的作用1μmol/langii可减少两组sk通道电流密度及其在混合电流中的比例。在-130mv,angii对sk通道电流抑制比为sr组:(22.06±1.6)%,af组:(40.07±1.3)%(nsr=4,naf=5,p<0.05),结果显示angii对sk电流的抑制作用af组大于sr组。(4)两组at1r,at2r基因mrna的变化sr组AT_1R 2~(-ΔΔCt)值:(0.75±0.28),AF组AT_1R 2~(-ΔΔCt)值(0.50±0.29)(nSR=5,nAF=5,p>0.05)。表明AF组AT_1R基因mRNA水平变化无统计学差异;SR组AT2R 2~(-ΔΔCt)值:(1.99±0.56),AF组AT2R 2~(-ΔΔCt)值:(0.73±0.49)(nSR=5,nAF=5,p<0.01)表明AF组AT2R基因mRNA水平明显下调。(5)两组AT1,AT2受体蛋白表达量的变化SR组的AT_1R蛋白表达量:(0.22±0.08),AF组的AT_1R蛋白表达量(0.13±0.10)(nSR=6,nAF=6,p>0.05),表明AF时AT_1R蛋白表达水平无统计学差异;SR组的AT2R蛋白表达量:(0.51±0.12),AF组的AT2R蛋白表达量:(0.19±0.16)(nSR=7,nAF=7,p<0.05),表明AF时AT2R蛋白表达水平下调。结论:(1)本实验记录到了SK通道电流,证实人心房肌细胞存在SK通道。(2)AF患者心房肌细胞内可能出现钙离子浓度增加,导致SK通道电流密度增加。(3)AF时,AngⅡ增加更易出现复极化末期膜电位震荡引发的心律失常。(本文来源于《西南医科大学》期刊2017-05-01）
王笑宇,范忠才,李妙龄[10]（2017）在《小电导钙激活钾通道在心房颤动发病机制中作用的研究进展》一文中研究指出心房颤动(atrial fibrillation,AF)是临床最为常见的快速性心律失常之一。2004年我国大规模流行病学研究发现,30岁以上AF总患病率为0.61%,随年龄增加房颤的发病率逐渐增加[1]。AF可伴随多种心脏疾病(高血压、先天性心脏病、风湿性瓣膜病),增加心脏压力或心房扩张而促进AF的发生和维持。AF的持续易于引发脑卒中、心力衰竭等严重并发症进而降低生活质量,甚至危及生命。然而,由于其病理生理机制还(本文来源于《西南医科大学学报》期刊2017年02期）
小电导钙激活型钾通道论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的研究增龄对人心房肌小电导钙激活钾(SK2)通道的影响。方法选取3个不同年龄阶段:<40岁(n=22)、40～60岁(n=34)和>60岁(n=18)窦性心律(SR)患者为研究对象,于体外循环手术中获取患者右心耳组织。急性酶分离方法分离单个人心房肌细胞,全细胞膜片钳技术检测不同年龄患者心房SK2通道电流的差异。Western blot和qRT-PCR检测不同年龄患者心房组织SK2通道蛋白和基因的表达变化。结果采用该急性酶分离方法可获得细胞完整、横纹清晰、有电生理活性的心房肌细胞;<40岁患者组(n=18)与40～60岁患者组(n=8)相比,SK2通道电流无明显变化(P>0.05),与<40岁患者组(n=8)相比,>60岁患者组(n=10)SK2通道电流明显增加(-130mV,P<0.01);与40～60岁患者组(n=8)相比,>60岁患者组(n=10)SK2通道电流也增加且差异有统计学意义(-130mV,P<0.01)。分别与<40岁(n=12)和40～60岁患者组(n=18)相比,>60岁患者组(n=10)SK2通道蛋白表达和基因表达均明显增加(P<0.05)。结论随着年龄的增加,人心房组织中SK2通道电流、基因和蛋白表达水平均明显增加,增龄导致的SK2通道重构可能参与了心房颤动的病理生理过程。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
小电导钙激活型钾通道论文参考文献
[1].刘长河.二甲双胍调节2型糖尿病大鼠心房2型和3型小电导钙激活钾通道蛋白表达的信号通路研究[D].中国医科大学.2019
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[4].付茜.二甲双胍对GK大鼠心房结构和小电导钙激活钾通道治疗作用的研究[D].中国医科大学.2018
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[8].张悦.小电导钙激活钾通道SK3在叁叉神经病理性疼痛中作用研究[D].西南医科大学.2017
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[10].王笑宇,范忠才,李妙龄.小电导钙激活钾通道在心房颤动发病机制中作用的研究进展[J].西南医科大学学报.2017