导读:本文包含了日本乙型脑炎论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:猪,日本乙型脑炎病毒,细小病毒,复合PCR
日本乙型脑炎论文文献综述
吕玉金,吴凤笋,刘胜利,李文刚[1]（2019）在《猪日本乙型脑炎及猪细小病毒复合PCR检测方法的建立》一文中研究指出根据GenBank上登录的日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)与猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)参考基因序列,设计合成2对特异性引物,在建立优化单项PCR检测方法的基础上,建立了PPV-JEV复合PCR检测方法,可扩增出预期的238 bp和152 bp特异性片段。该方法敏感性高、稳定性好、特异性强,临床样品检测结果与单项PCR检测结果符合率100%,该方法适合JEV和PPV的联合检测和鉴别诊断。(本文来源于《江苏农业科学》期刊2019年19期）
王双双,赵红梅,周丹娜,蔡行,耿超[2]（2019）在《日本乙型脑炎病毒NS3蛋白的真核表达及鉴定》一文中研究指出为了探讨日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)的复制机制及其蛋白与宿主蛋白的相互作用关系,试验以GenBank中收录的JEV HW1株NS3基因序列为模板设计引物,经PCR扩增获得NS3基因序列后,采用ClonExpress克隆技术将NS3基因连接到真核表达载体p EGFP-C3上,将得到的产物pEGFP-C3-NS3送生工生物工程(上海)股份有限公司测序;使用X-tremeGENE HP DNA Transfection Reagent体外转染幼地鼠肾细胞(BHK21细胞),观察24 h后应用Western-blot和IFA法进行鉴定。结果表明:PCR克隆获得的基因片段大小约为1 370 bp,NS3基因片段与HW1株同源性为100%; BHK21细胞密度在70%～80%时质粒转染效果最佳,质粒质量与转染试剂体积的比例为1∶3; Western-blot鉴定融合蛋白成功表达,分子质量约为79 ku; IFA鉴定融合蛋白成功表达,24 h为转染高峰期,绿色荧光最强,pEGFP-C3-NS3与NS3阳性血清反应显红色荧光。说明在BHK21细胞中成功表达出NS3蛋白。(本文来源于《黑龙江畜牧兽医》期刊2019年17期）
耿超,赵红梅,周丹娜,蔡行,王双双[3]（2019）在《日本乙型脑炎病毒NS5rdrp蛋白的真核表达及鉴定》一文中研究指出为了探究日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)的复制机理和研制以JEV复制复合体为靶标的药物,试验以GenBank中收录的JEV HW1株基因序列为模板,设计针对NS5rdrp的特异性引物,提取JEV RNA,反转录得到cDNA,以其为模板使用PCR方法克隆得到NS5rdrp基因片段;利用T4DNA连接酶构建重组质粒pcDNA3.1-NS5rdrp,并对产物测序;提取去除内毒素的重组质粒,用转染试剂X-tremeGENE HP DNA Transfection Reagent转染BHK21细胞,转染24 h后观察结果;最后利用Western-blot技术检测NS5rarp蛋白的表达情况。结果表明:PCR扩增得到大小约为920 bp的NS5rdrp基因片段;测序结果经NCBI上BLAST比对分析,克隆得到的NS5rdrp基因与HW1株的同源性为100%;转染时细胞的最佳密度区间为70%～80%,转染试剂与转染质粒的比例为3∶1;经过Western-blot检测,重组质粒在细胞内正常表达,NS5rdrp蛋白的分子质量约为37 ku。说明试验通过真核表达成功获得NS5rdrp蛋白。(本文来源于《黑龙江畜牧兽医》期刊2019年15期）
王珂[4]（2019）在《日本乙型脑炎病毒感染介导血脑屏障通透性改变的机制研究》一文中研究指出乙型脑炎(Japanese encephalitis,JE)是由日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)引起的急性的蚊虫传播人畜共患病。乙型脑炎的主要特点是中枢神经系统(Central nervous system,CNS)广泛的炎症,并伴随着血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)完整性的破坏。虽然在病理学上,乙型脑炎病毒感染导致急性脑炎和血脑屏障的破坏,但是其机制仍不清楚。本研究利用JEV感染的体内和体外模型,探讨了JEV感染导致血脑屏障破坏的机制。结果显示,JEV感染小鼠后,在外周只有第1天和第2天能检测到少量残余的病毒,随后无法检测到病毒,说明外周的病毒很快被清除;在中枢神经系统中,JEV感染后第2天就能检测到病毒,在第4天病毒载量急剧增加,第5天基本达到顶点。血脑屏障通透性检测发现,通透性的极显着增加发生在JEV感染后第4天。以上结果说明乙型脑炎病毒在外周器官中未大量复制,部分病毒在未改变血脑屏障通透性的情况下入侵中枢神经系统,并在中枢神经系统中大量复制,引起血脑屏障的破坏,最终导致小鼠死亡。在脑组织中,IP-10、IFN-γ、IL-6和CCL4的表达量在感染后第1天就有极显着的增加,而CCL2和CCL3的表达量在第3-4天开始有显着增加。CCL5的表达量在JEV感染的第3天有约15-20倍的增加;而TNF-α表达量在第4天有极显着的增加。利用小鼠脑微血管内皮细胞系bEnd.3作为血脑屏障单层细胞模型的体外研究发现,乙型脑炎病毒感染小鼠的脑匀浆上清无论乙型脑炎病毒是否灭活,均能破坏内皮细胞的完整性,证实了是炎性因子而不是乙型脑炎病毒自身增加了血脑屏障的通透性。本课题首先进行了IFN-γ中和实验,以探究在本实验模型中IFN-γ对血脑屏障的破坏。结果显示,中和IFN-γ之后能够明显减少JEV感染情况下紧密连接蛋白的表达下调,说明IFN-γ在破坏血脑屏障过程中发挥重要作用。进一步实验发现中和IFN-γ是通过减少紧密连接蛋白的表达下调来维持血脑屏障的完整性。考虑到IP-10在感染后第1天就有极高的表达量,随后一直维持高表达,是乙型脑炎病毒感染后中枢神经系统中变化最早且最显着的因子。IP-10中和实验显示中和IP-10能够减轻血脑屏障的破坏,减少紧密连接蛋白的表达下调,说明IP-10和IFN-γ均位于JEV感染诱导的细胞因子网络的中心。通过检测乙型脑炎病毒感染小鼠后IP-10在脑组织中的表达发现星形胶质细胞是乙型脑炎病毒感染后IP-10的主要来源,神经元和小胶质细胞也能产生部分IP-10。利用小鼠脑微血管内皮细胞系bEnd.3的研究发现IP-10并没有破坏内皮细胞的完整性,因此推测IP-10是通过调节其他炎性因子的表达,进而破坏血脑屏障的完整性。通过分析IP-10与其他炎性因子表达及血脑屏障破坏时空关系,发现TNF-α极有可能位于IP-10下游。进一步用IP-10和乙型脑炎病毒处理星形胶质细胞,均能在处理后的细胞上清中检测到较高水平TNF-α,而中和IP-10之后能够明显下调TNF-α的表达,说明IP-10通过自分泌或旁分泌的途径作用于星形胶质细胞,从而产生TNF-α。TNF-α是通过改变内皮细胞的跨内皮通透性,调节内皮细胞紧密连接蛋白的表达和转位,进而影响血脑屏障内皮细胞的通透性。进一步研究发现,乙型脑炎病毒感染能够诱导星形胶质细胞上调表达IP-10的受体CXCR3。IP-10与受体CXCR3结合之后,能够激活MAPK信号通路。IP-10主要激活并磷酸化JNK(c-Jun N-terminal kinase),使其下游的立即早期转录因子c-Jun磷酸化,进而诱导TNF-α的表达。而TNF-α直接破坏血脑屏障的完整性,外周免疫细胞更容易进入中枢神经系统并能引起中枢胶质细胞的活化,最终强烈的炎性风暴导致了小鼠的死亡。综上所述,乙型脑炎病毒感染主要是通过诱导炎性因子,导致血脑屏障完整性的破坏,进而引起动物的死亡。乙型脑炎病毒感染产生的IFN-γ能够直接增加血脑屏障的通透性,而产生的IP-10并不直接作用于血脑屏障内皮细胞,而是通过诱导下游的炎性因子来增加血脑屏障的通透性。在中枢神经系统中,星形胶质细胞是IP-10的主要来源。IP-10通过结合其受体CXCR3,激活JNK-c-Jun信号通路,进而诱导TNF-α的表达。而TNF-α是通过改变内皮细胞紧密连接蛋白的表达与胞内分布来调控血脑屏障的通透性。阐明IP-10/TNF-α细胞因子网络诱导的BBB破坏能够为黄病毒科其他致脑炎病毒的发病机制提供借鉴,也能够为BBB相关的CNS疾病的治疗提供潜在的治疗靶点。(本文来源于《华中农业大学》期刊2019-06-01）
张静[5]（2019）在《日本乙型脑炎病毒感染对CD8+ T细胞免疫应答的影响》一文中研究指出日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)是黄病毒属的一种蚊媒病毒,是急性病毒性脑炎和流行性脑炎的常见病因。世界上大约60%的人口居住在JEV流行地区。由于全球变暖,病毒继续传播到以前未受影响的地区。JEV感染机体后大部分的病毒能被机体的免疫系统清除,但有少量病毒能够逃逸机体的免疫反应并穿越血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)进入到中枢神经系统(central nervous system,CNS)。基于以上原因,本课题对JEV逃逸适应性免疫反应的机制进行了研究。首先,本研究采用尾静脉注射JEV于6-8周龄C57BL/6小鼠中。RT-PCR检测小鼠脾脏中MHCⅠ类抗原加工相关基因的表达情况;流式检测小鼠脾脏中树突状细胞以及巨噬细胞表面MHCⅠ类分子的变化;流式检测骨髓来源的巨噬细胞中MHCⅠ类抗原加工相关基因的表达情况。结果表明JEV P3强毒株感染引起脾脏中MHCⅠ类抗原加工相关基因的表达下调;JEV P3强毒株感染引起小鼠脾脏中树突状细胞以及巨噬细胞表面MHCⅠ类分子的表达上调,同时引起骨髓来源的巨噬细胞中抗原加工相关基因的表达上调,可能有助于CD8~+T细胞的活化。其次,流式检测树突状细胞、巨噬细胞和CD8~+T细胞上共刺激分子的表达情况。结果显示树突状细胞、巨噬细胞和CD8~+T细胞上共活化分子和共抑制性分子的表达上调,通过这些抑制性分子的相互作用,可能影响CD8~+T细胞的活化。最后,体内流式检测CD8~+T细胞效应功能的变化和CD8~+T细胞的比例变化以及体外杀伤实验检测CD8~+T细胞的杀伤功能。结果表明JEV P3强毒株感染引起CD8~+T细胞的活化和效应功能的增强,但是CD8~+T细胞的比例显着减少,这可能会影响CD8~+T细胞的免疫应答。综上所述,JEV P3强毒株感染导致CD8~+T细胞的活化及杀伤功能的增强,但引起CD8~+T细胞比例显着减少,可能从个体水平上影响细胞免疫应答及介导病毒逃逸。该研究有助于更好的理解JEV感染过程中免疫逃逸的机制,为相关研究提供借鉴。(本文来源于《华中农业大学》期刊2019-06-01）
杨洋[6]（2019）在《日本乙型脑炎病毒感染中CD209A、CD209B对树突状细胞功能的影响》一文中研究指出日本乙型脑炎(Japanese Encephalitis,JE)是由日本乙型脑炎病毒(Japanese Encephalitis Virus,JEV)引起的一种人畜共患病,简称乙脑。JEV是黄病毒属的成员之一,主要通过库蚊传播。虽然JEV疫苗已广泛使用,但迄今,其传播范围仍然在不断扩大。为了研究JEV的致病机理并为日本乙型脑炎提供更好的治疗方法,本研究以DC-SIGN(Dendritic Cell-Specific Intercellular adhesion molecule-3-Grabbing Non-integrin,DC-SIGN)家族为切入点,以小鼠为感染模型,探究在JEV感染后DC-SIGN发挥的免疫功能。基于前期RNA测序结果,我们利用JEV P3强毒株和SA14-14-2疫苗株感染小鼠第3天的脾脏样品,对DC-SIGN家族中表达有变化的3个成员DC-SIGN(CD209A)、DC-SIGNR1(CD209B)和DC-SIGNR2(CD209C)进行了验证。相对于对照组小鼠,CD209A在P3感染小鼠脾脏中的CD11c~+树突状细胞、F4-80~+巨噬细胞上表达显着降低,而CD209B在P3感染小鼠脾脏中的CD11c~+树突状细胞上表达显着升高。然后探究了小鼠骨髓来源树突状细胞(Bone Marrow-Derived Dendritic Cells,BMDCs)上CD209A、CD209B的表达情况。在体外诱导培养BMDCs成熟过程中,CD209A、CD209B的表达呈现上升的趋势。通过构建稳定表达CD209A或CD209B的DC2.4细胞系,检测了CD209A、CD209B对JEV复制的影响以及对DCs功能的影响。结果提示过表达CD209A后促进了JEV复制,而过表达CD209B对JEV的复制没有影响;体外混合淋巴细胞培养显示,DC2.4细胞过表达CD209A或CD209B后促进了EL-4细胞的增殖。综上所述,体内实验证实JEV感染机体后,树突状细胞上的CD209A显着下调;体外实验显示DC2.4细胞过表达CD209A后,促进了JEV的复制,说明JEV感染机体后,树突状细胞通过下调CD209A保护细胞免于JEV的感染。此外,DC2.4细胞过表达CD209A或CD209B后和EL-4细胞共培养,结果显示都促进了EL-4细胞的增殖,说明CD209A和CD209B对适应性免疫应答发挥一定的调节功能。该研究为进一步探究DC-SIGN免疫调节功能奠定了基础,也为日本乙型脑炎的治疗提供了潜在的药物靶点。(本文来源于《华中农业大学》期刊2019-06-01）
白卓芳[7]（2019）在《日本乙型脑炎病毒NS3抑制miR-466d-3p表达的研究》一文中研究指出日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)是一种属于黄病毒科黄病毒属的噬神经性病毒,主要通过侵入中枢神经系统引起神经炎症。该病毒引起的日本乙型脑炎(Japanese encephalitis,JE)是一种严重危害公共卫生的人畜共患传染病,致死率达到25%左右。本研究通过MicroRNA基因芯片和MicroRNA测序分析,发现在JEV感染期间小鼠脑组织和神经母瘤细胞中大部分miRNA表达下调;利用miRDB和TargetScan分析发现miR-466d-3p靶向作用IL-1β,并通过体外转染miR-466d-3p的模拟物和抑制剂进一步确定了miR-466d-3p与IL-1β的靶向关系;本研究构建了JEV所有非结构蛋白真核表达质粒,通过转染小鼠的小胶质细胞和神经母瘤细胞发现NS3能够抑制miR-466d-3p等miRNA的表达,证明NS3抑制宿主miRNA表达的功能。综上所述,乙脑病毒NS3能够有效抑制宿主miR-466d-3p等miRNA的表达,进而促进神经炎症的发生。(本文来源于《内蒙古大学》期刊2019-06-01）
郭倩妤,石远菊,汤德元,叶丽,杨伟[8]（2019）在《一例梅花鹿布氏杆菌和日本乙型脑炎混合感染的诊断》一文中研究指出2018年3月17日,贵州省某梅花鹿场的梅花鹿(Cervus nippon)出现关节肿大、下颌肿大、睾丸单侧肿胀,还伴有严重的跛行等症状。采集4份该发病梅花鹿的血样送检。检测结果表明,通过虎红平板凝集试验2份血样检测出了布氏杆菌感染,4份血样经RT-PCR均扩增出了JEV NS1部分基因的特异性条带,PCR产物测序结果分析显示,4份梅花鹿血样的JEV NS1基因(GZ-015、GZ-019、GZ-022、GZ-039)间的核苷酸同源性分别为99. 9%、99. 3%、99. 4%,与强毒株SA-14、国内外的疫苗株及四川、吉林等地的JEV分离株之间核苷酸同源性为99%以上,GZ-015、GZ-019、GZ-022、GZ-039与强毒株SA-14、弱毒株、国内外的疫苗株及四川、吉林等地的JEV分离株处于同一个较大的遗传进化分支。(本文来源于《野生动物学报》期刊2019年02期）
郭倩妤,胡玲玲,汤德元,曾智勇,王彬[9]（2018）在《猪日本乙型脑炎疫苗毒株致病的诊断分析》一文中研究指出为了查清某猪场猪只出现睾丸肿大、发亮、萎缩等现象的原因,试验采用RT-PCR扩增、细胞接种试验、动物接种试验、分子生物学等方法对送检的精液和睾丸样品进行诊断研究。结果表明:RT-PCR扩增能检出乙型脑炎病毒(JEV)特异性核酸阳性条带;用该毒株接种单层BHK-21细胞,可使细胞发生病变,但不致死乳鼠;与SA14-14-2疫苗株相比,在该毒株E基因序列上279位(蛋氨酸→赖氨酸)和447位(天冬氨酸→甘氨酸)氨基酸发生突变,氨基酸位点的突变致使毒株毒力增强,从而导致该猪场公猪出现睾丸肿大等临床症状。(本文来源于《黑龙江畜牧兽医》期刊2018年20期）
杨伟,韦冠东,汤德元,曾智勇,黄涛[10]（2018）在《日本乙型脑炎病毒强、弱毒株非结构蛋白NS1、NS2A和NS1-NS2A诱导小鼠CD4~+T细胞应答的研究》一文中研究指出为了解日本乙型脑炎病毒(JEV)强、弱毒株非结构蛋白的免疫效果,笔者分析了JEV强、弱毒株非结构蛋白NS1、NS2A和NS1-2A真核表达的差异。通过观察JE减毒活疫苗(SA14-14-2株)和JEV贵州分离株(GZ株)分别在BHK-21细胞上出现的CPE,并收集强、弱毒株的细胞悬液,提取总RNA,分别设计6对特异性引物,应用RT-PCR技术扩增非结构蛋白NS1、NS2A和NS1-2A的编码基因,构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-NS1r、pcDNA3.1(+)-NS2Ar、pcDNA3.1(+)-NS1-2Ar、pcDNA3.1(+)-NS1q、pcDNA3.1(+)-NS2Aq和pcDNA3.1(+)-NS1-2Aq,将构建成功的6种真核表达质粒免疫健康小鼠,最后采集小鼠的血液和组织分别进行JEV抗体检测和细胞免疫水平检测。研究结果显示:JEV GZ强毒株与JEV SA14-14-2弱毒株能在BHK21细胞上增殖并产生CPE现象;构建的6种真核表达质粒免疫小鼠后经血常规和T淋巴亚群检测可以极显着或显着增加CD4+和CD8+细胞的含量。表明JEV强毒株非结构蛋白所诱导的细胞免疫略优于弱毒株非结构蛋白诱导的细胞免疫,但差异不明显。本研究结果可为日本乙型脑炎病毒的病原基础研究提供参考。(本文来源于《畜牧兽医学报》期刊2018年08期）
日本乙型脑炎论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为了探讨日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)的复制机制及其蛋白与宿主蛋白的相互作用关系,试验以GenBank中收录的JEV HW1株NS3基因序列为模板设计引物,经PCR扩增获得NS3基因序列后,采用ClonExpress克隆技术将NS3基因连接到真核表达载体p EGFP-C3上,将得到的产物pEGFP-C3-NS3送生工生物工程(上海)股份有限公司测序;使用X-tremeGENE HP DNA Transfection Reagent体外转染幼地鼠肾细胞(BHK21细胞),观察24 h后应用Western-blot和IFA法进行鉴定。结果表明:PCR克隆获得的基因片段大小约为1 370 bp,NS3基因片段与HW1株同源性为100%; BHK21细胞密度在70%～80%时质粒转染效果最佳,质粒质量与转染试剂体积的比例为1∶3; Western-blot鉴定融合蛋白成功表达,分子质量约为79 ku; IFA鉴定融合蛋白成功表达,24 h为转染高峰期,绿色荧光最强,pEGFP-C3-NS3与NS3阳性血清反应显红色荧光。说明在BHK21细胞中成功表达出NS3蛋白。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
日本乙型脑炎论文参考文献
[1].吕玉金,吴凤笋,刘胜利,李文刚.猪日本乙型脑炎及猪细小病毒复合PCR检测方法的建立[J].江苏农业科学.2019
[2].王双双,赵红梅,周丹娜,蔡行,耿超.日本乙型脑炎病毒NS3蛋白的真核表达及鉴定[J].黑龙江畜牧兽医.2019
[3].耿超,赵红梅,周丹娜,蔡行,王双双.日本乙型脑炎病毒NS5rdrp蛋白的真核表达及鉴定[J].黑龙江畜牧兽医.2019
[4].王珂.日本乙型脑炎病毒感染介导血脑屏障通透性改变的机制研究[D].华中农业大学.2019
[5].张静.日本乙型脑炎病毒感染对CD8+T细胞免疫应答的影响[D].华中农业大学.2019
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[7].白卓芳.日本乙型脑炎病毒NS3抑制miR-466d-3p表达的研究[D].内蒙古大学.2019
[8].郭倩妤,石远菊,汤德元,叶丽,杨伟.一例梅花鹿布氏杆菌和日本乙型脑炎混合感染的诊断[J].野生动物学报.2019
[9].郭倩妤,胡玲玲,汤德元,曾智勇,王彬.猪日本乙型脑炎疫苗毒株致病的诊断分析[J].黑龙江畜牧兽医.2018
[10].杨伟,韦冠东,汤德元,曾智勇,黄涛.日本乙型脑炎病毒强、弱毒株非结构蛋白NS1、NS2A和NS1-NS2A诱导小鼠CD4~+T细胞应答的研究[J].畜牧兽医学报.2018