导读:本文包含了绿色荧光蛋白细胞论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:脂肪干细胞,慢病毒,增强型绿色荧光蛋白,多向分化
绿色荧光蛋白细胞论文文献综述
张瑶瑶,吴国民,张潇毅,王琳,肖艳菊[1]（2019）在《慢病毒携带增强型绿色荧光蛋白基因标记大鼠脂肪干细胞及体内示踪研究》一文中研究指出目的探讨慢病毒携带增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)标记大鼠脂肪干细胞(ADSCs)最适感染复数,检测EGFP-ADSCs干细胞特性及体内活性。方法提取培养大鼠脂肪干细胞,流式细胞仪表型鉴定及成骨、成脂、成软骨多向诱导分化。采用携带增强型绿色荧光蛋白基因的慢病毒载体(Lentivirus-EGFP)以不同的感染复数MOI=0、1、5、10、25、50转染ADSCs,流式细胞仪测转染率,筛选合适MOI。CCK8测转染后ADSCs的增殖能力。EGFP-ADSCs成骨、成脂、成软骨诱导后分别行碱性磷酸酶、油红O及阿尔新蓝染色检测。将标记后的细胞注射到大鼠皮下,术后1,2,4w取材行冰冻切片荧光观察及免疫组织化学染色,观察EGFP-ADSCs在体内的表达情况。结果 CD90阳性表达,CD34阴性表达,脂肪干细胞向成骨、成脂、成软骨分化。MOI=0、1、5、10、25、50的转染率分别是0.12%、3.62%、42.4%、66.6%、90.4%、98.0%。CCK8法测转染组(MOI=25)与未转染组(MOI=0)细胞增殖能力无明显差别。EGFP-ADSCs经诱导后仍向成骨、成脂、成软骨分化。1w,2w,4w见细胞于移植部位。结论慢病毒介导的EGFP基因标记大鼠脂肪干细胞最适感染复数为25,且不影响干细胞活性及多向分化潜能,可以成为标记脂肪干细胞的理想方法。(本文来源于《现代口腔医学杂志》期刊2019年05期）
李伟伟,衣启君,赵国光[2]（2019）在《高压氧促进了绿色荧光蛋白标记神经干细胞在局灶性脑缺血大鼠脑组织中迁移》一文中研究指出目的探讨高压氧(HBO)对绿色荧光蛋白(GFP)标记神经干细胞(NSCs)在局灶性脑缺血大鼠脑组织迁移的影响。方法清洁级雄性SD大鼠39只,体重250～300 g,随机分为3组(n=13):神经干细胞移植组(NSCs组)、高压氧+神经干细胞移植组(HBO+NSCs组)、常压氧+神经干细胞移植组(Cyy+NSCs组)。各组按改进的Longa法制作大脑中动脉阻塞模型,各组均缺血1.5 h后再灌注。再灌注24 h后,各组经侧脑室注射GFP标记的NSCs悬液(浓度1×10~6/μL)。侧脑室注射后2 h,HBO+NSCs组开始每天1 h的高压氧(HBO)治疗,Cyy+NSCs组则常压下吸95%的氧气,NSCs组仅吸空气,各组治疗连续7天。第9天,处死大鼠。收集海马标本,检测各组大鼠海马caspase-3及脑源性神经营养因子(BDNF)与血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达量,并行脑组织冰冻切片,荧光显微镜下观察细胞的迁移情况。结果与NSCs组相比,HBO+NSCs组和Cyy+NSCs组海马caspase-3含量减少(P<0.05),但与Cyy+NSCs组相比,HBO+NSCs组海马caspase-3含量明显降低(P<0.05)。与NSCs组相比,HBO+NSCs组和Cyy+NSCs组海马BDNF和VEGF的表达量升高,但与HBO+NSCs组相比,Cyy+NSCs组海马BDNF和VEGF的表达量明显降低(P<0.05)。与NSCs组相比,HBO+NSCs组和Cyy+NSCs组缺血区GFP-阳性细胞数升高;但与HBO+NSCs组相比,Cyy+NSCs组缺血区GFP-阳性细胞数明显下降(P<0.05)。结论 HBO可以更好的促进GFP-标记的NSCs在MCAO模型大鼠脑组织内的迁移,其促迁移机制可能与HBO可以促进BDNF和VEGF的分泌、抑制新生细胞的凋亡有关。(本文来源于《泰山医学院学报》期刊2019年09期）
朱慧,朱文侠,黄广智,马小娜[3]（2019）在《携载增强型绿色荧光蛋白基因慢病毒标记小鼠脐带间充质干细胞示踪方法》一文中研究指出目的探讨慢病毒载体介导增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorecent protein,eGFP)转染小鼠脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UCMSCs)的最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI)。方法通过组织贴壁法得到mUCMSCs;用生长增殖曲线、成骨、成软骨及成脂分化进行鉴定;以MOI为50、100、150、200携载eGFP的慢病毒载体介导转染mUCMSC,倒置显微镜下观察荧光表达,确定荧光表达率最高的MOI组。结果 eGFP慢病毒以MOI=150转染mUCMSC,效率较高,可直接用于体内示踪。结论用小鼠脐带可以分离出mUCMSCs,MOI=150时携载eGFP的慢病毒传染mUCMSCs效果最好。(本文来源于《延安大学学报(医学科学版)》期刊2019年03期）
王福科,张红,杨桂然,肖渝,何川[4]（2019）在《携载增强型绿色荧光蛋白基因慢病毒转染骨髓间充质干细胞示踪方法》一文中研究指出目的本实验研究旨在研究使用携带增强型绿色荧光蛋白(enhanced Green Fluorescent Protein,eGFP的慢病毒转染骨髓间充质干细胞(bone marrowmesenchymal stem cell,BMSCs)的方法,用于解决组织工程骨研究中种子细胞分化、增殖过程中的示踪问题。方法用携带eGFP的慢病毒转染第3代BMSCs,用流式细胞仪检测转染率,获得稳定表达eGFP的BMSCs,并通过描绘生长曲线来判定对BMSCs增殖性能的影响。结果当MOI值为70时,经eGFP慢病毒转染后的BMSCs能够得到活性较好、转染率高的eGFP-BMSCs;转染后各细胞生长曲线呈"S"形,MOI=70与MOI=0时细胞增殖最好,MOI=100会对BMSCs增殖造成影响。结论 MOI=70时携载eGFP基因慢病毒转染BMSC效果最好。(本文来源于《昆明医科大学学报》期刊2019年05期）
刘传苗,李红俊,杨天华,杨小淮,李正红[5]（2019）在《建立稳定高效表达绿色荧光蛋白和小鼠白血病抑制因子的STO细胞系》一文中研究指出目的:建立表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)和小鼠白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)的细胞系,并尝试使用其作为饲养层培养小鼠胚胎干细胞(ESC)。方法:构建含有GFP、mLIF和嘌呤霉素抗性基因的慢病毒粒子,并感染STO小鼠成纤维细胞系,筛选得到稳定表达GFP和mLIF基因的细胞系(STO-GFP-mLIF);通过Western blot和ELISA方法检测STO-GFP-mLIF细胞中LIF基因的表达水平;经不同浓度(5,10,15,20μg/ml)丝裂霉素C处理不同时间(1.5,2.5,3,3.5 h)制备饲养层,并观察细胞在饲养层上增殖情况。将小鼠胚胎干细胞在丝裂霉素C处理过的STO-GFP-mLIF上培养,观察细胞集落生长情况。结果:STO-GFP-mLIF细胞中LIF蛋白表达水平上调(P <0.01);丝裂霉素C抑制STO-GFP-mLIF细胞增殖的最佳浓度及作用时间为10μg/ml与3 h,且小鼠胚胎干细胞可在该饲养层上发育成典型的"鸟巢"状干细胞集落。结论:成功获得了稳定表达绿色荧光蛋白和小鼠LIF基因,同时可维持小鼠胚胎干细胞未分化状态的STO-GFP-mLIF细胞系。(本文来源于《中国实验血液学杂志》期刊2019年02期）
李琦,邹志余,杨瑞泽,邓洪利,张蕊[6]（2019）在《慢病毒载体介导增强型绿色荧光蛋白筛选稳定转染的兔骨髓间充质干细胞》一文中研究指出目的分离、培养并鉴定兔骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells, BMSCs),探讨慢病毒载体介导增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein, eGFP)感染兔BMSCs的最佳条件,筛选稳定转染的兔BMSCs。方法通过全骨髓贴壁法获得兔BMSCs;茜素红、甲苯胺蓝及油红O染色对BMSCs成骨、成软骨及成脂分化进行鉴定;免疫荧光组化染色检测CD44及CD90的表达;不同浓度嘌呤霉素筛选BMSCs的最小致死浓度;以感染复数(multiplicity of infection, MOI)为50、100、150、200的慢病毒载体介导eGFP转染BMSCs,倒置显微镜下观察荧光表达,并用嘌呤霉素筛出稳定转染系。结果当MOI为150,慢病毒载体介导eGFP感染兔BMSCs效率最高;嘌呤霉素筛选稳定转染兔BMSCs的最适质量浓度是1.0μg/mL。结论成功培养了兔BMSCs,用慢病毒介导的GFP标记了兔BMSCs并筛选出了稳定转染的兔BMSCs,建立了一个简便有效的干细胞标记方法,为BMSCs在动物体内实验标记示踪奠定了基础。(本文来源于《西安交通大学学报(医学版)》期刊2019年04期）
韦伟,黄灵绣,宋光辉,邹少晗,李百加[7]（2019）在《利用绿色荧光蛋白示踪干细胞在大鼠瘢痕子宫模型内分布的研究》一文中研究指出目的观察移植骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)在大鼠瘢痕子宫模型内的分布情况,建立可供动态观察的瘢痕子宫模型。为今后进一步研究改善瘢痕子宫功能的方法提供一定实验基础,以及了解BM-MSCs对瘢痕子宫的修复作用。方法利用梯度密度离心结合贴壁培养法分离和培养BM-MSCs,传代至第4代用流式细胞技术对其进行检测,之后利用腺病毒-绿色荧光蛋白标记干细胞。建立大鼠瘢痕子宫模型,经尾静脉注射经标记的干细胞悬液,观察干细胞在子宫切口部位的分布以及愈合情况。结果子宫切口部位可见移植后的干细胞聚集,并能减轻瘢痕愈合。结论腺病毒—绿色荧光蛋白标记技术可以示踪干细胞在活体内的分布,移植干细胞在一定程度上能减轻子宫的瘢痕愈合,促进修复。(本文来源于《中国妇幼保健》期刊2019年05期）
曲丽媛,李梦文,李振明,潘希贵,王鑫[8]（2019）在《脐血间充质干细胞经转染绿色荧光蛋白后治疗SCID小鼠烫伤的创面效应示踪》一文中研究指出目的利用该实验室先期已建成的人脐血源间充质干细胞株(FUCB-MSCs),标记上增强型绿色荧光蛋白(EGFP),以对烫伤SCID小鼠行外源性FUCB-MSCs移植治疗的创面区进行移植效应示踪。方法FUCB-MSCs经腺病毒转染标记GFP;建立深Ⅱ度烫伤SCID小鼠模型,将小鼠随机分为低剂量移植组、高剂量移植组和空白对照组,每组6只,每只2个创面,共12个创面,分别将转染后的GFP-MSCs按照0.2mL 1×106个、0.2mL 2×106个以及等体积培养基通过尾静脉注射的方式进行创面移植。移植9d后取各组创面组织行冰冻切片HE染色,比较各组创面面积和创面细胞数,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达和创面修复损伤情况。结果 FUCB-MSCs经逆转录病毒感染后,48h荧光显微镜下可见到EGFP表达,阳性率在80%以上,且6周后仍能观察到GFP稳定表达,移植后创面部位可观察到人源性GFP阳性表达,移植3周后荧光未见衰减;移植标记了GFP的FUCB-MSCs后SCID小鼠未出现排斥反应,低剂量组、高剂量组与对照组比较,在创面面积和细胞数上差异均有统计学意义(P<0.05),可提示尾静脉移植注射的GFP-FUCB-MSCs参与了创面愈合。结论利用GFP对人脐血源间充质干细胞移植治疗过程中的标记示踪,表明烫伤后外源性FUCB-MSCs可通过SCID小鼠血液循环系统,迁移聚集到烫伤创面持续参与修复。(本文来源于《国际检验医学杂志》期刊2019年04期）
王震,李玉蕾,周培岚,苏瑞斌,傅风华[9]（2019）在《α_(2B)-肾上腺素能受体与增强型绿色荧光蛋白标记的活化T细胞核因子2共表达稳转细胞株的构建》一文中研究指出目的建立能够稳定表达α_(2B)-肾上腺素能受体(α_(2B)-AR)和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标记的活化T细胞核因子2(NFAT2)(EGFP-NFAT2)的稳转细胞株。方法构建具有潮霉素(Hydro)抗性的pcDNA3.1α_(2B)-AR重组质粒(pcDNA3.1-Hygro-α_(2B)-AR),转染至表达EGFP-NFAT2的U2OS细胞(U2OS-EGFP-NFAT2细胞),使用Hygro 200 mg·L~(-1)压力筛选10 d后,进行NFAT2核转位实验筛选细胞株并用Z’因子法评价细胞模型的可靠性,采用实时定量PCR和Western蛋白印迹法,检测α_(2B)-AR的mRNA和蛋白表达水平,选择α_2-AR的激动剂盐酸右美托咪啶(DMED)和拮抗剂盐酸阿替美唑(ATI)通过NFAT2核转位实验评价α_(2B)-AR的功能活性。结果成功构建重组质粒pc DNA3.1-Hygro-α_(2B)-AR后,稳定转染至U2OS-EGFP-NFAT2细胞,采用NFAT2核转位实验筛选发现,编号12的细胞株相对核转位指数为0.445,活性最高;3次独立实验中,Z’因子分别为0.664,0.533和0.634。实时定量PCR结果显示,编号12的细胞株α_(2B)-AR mRNA表达水平是U2OS-EGFP-NFAT2细胞株的140倍,表达显着增加(P<0.01),且在20代次内表达稳定。Western蛋白印迹结果显示,编号12的细胞株出现明显的α_(2B)-AR蛋白条带,而U2OS-EGFP-NFAT2细胞中未检测到α_(2B)-AR蛋白表达。DMED可以浓度依赖性地提高该细胞株的核转位水平[EC_(50)=(2.616±0.121)nmol·L~(-1)],ATI可以浓度依赖性地对抗DMED的作用[IC_(50)=(89.05±0.22)nmol·L~(-1)]。结论成功构建了共表达α_(2B)-AR与EGFP-NFAT2的稳转细胞株,可用于靶向α_(2B)-AR化合物的筛选和受体分子机制的研究。(本文来源于《中国药理学与毒理学杂志》期刊2019年02期）
李慧琳,谢小燕,王思涵,韩毅,范增[10]（2018）在《逆转录病毒介导的稳定表达E4orf1和绿色荧光蛋白的胎肝窦内皮细胞株的建立》一文中研究指出目的:为构建优化的内皮细胞用于造血干细胞(HSCs)的支持培养,通过逆转录病毒载体系统建立稳定表达腺病毒E4区开放读框1(E4orf1)和绿色荧光蛋白(GFP)的人胎肝窦内皮细胞(HFLSECs)株。方法:利用Plat-A细胞将质粒MSCV-N E4orf1和p MX-GFP分别包装为逆转录病毒,共同感染HFLSECs,将原代培养的HFLSECs和转基因的HFLSECs分别在含有0.5、1、2、4μg/m L嘌呤霉素的EGM-2培养基中培养,以测试最适药物筛选浓度,药筛1周后通过流式细胞分选获得稳定转染E4orf1的GFP~+HFLSECs(E4orf1-GFP/HFLSECs)。通过密度梯度离心法从脐带血中分离单个核细胞,利用免疫磁柱分选获得CD34~+造血干/祖细胞(HSPCs),以E4orf1-GFP/HFLSECs作为饲养层联合SCF、TPO、Flt-3L等3种基础造血相关因子进行体外扩增和半固体造血细胞集落培养。结果:0.5μg/m L嘌呤霉素在5 d内即能完全杀死HFLSECs,而转基因的HFLSECs可以正常存活,以此药物浓度加压筛选1周,后续通过流式分选GFP阳性细胞,阳性率为90.5%,在E4orf1-GFP/HFLSECs饲养层支持下,人脐带血来源的CD34~+细胞15 d扩增了360倍,是单纯细胞因子悬浮培养组的2.2倍,且扩增后的HSPCs在体外仍具有多种造血集落形成能力。结论:该细胞株的建立将为构建造血干细胞体外培养体系及研究造血细胞的发育分化提供适宜的微环境。(本文来源于《生物技术通讯》期刊2018年04期）
绿色荧光蛋白细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的探讨高压氧(HBO)对绿色荧光蛋白(GFP)标记神经干细胞(NSCs)在局灶性脑缺血大鼠脑组织迁移的影响。方法清洁级雄性SD大鼠39只,体重250～300 g,随机分为3组(n=13):神经干细胞移植组(NSCs组)、高压氧+神经干细胞移植组(HBO+NSCs组)、常压氧+神经干细胞移植组(Cyy+NSCs组)。各组按改进的Longa法制作大脑中动脉阻塞模型,各组均缺血1.5 h后再灌注。再灌注24 h后,各组经侧脑室注射GFP标记的NSCs悬液(浓度1×10~6/μL)。侧脑室注射后2 h,HBO+NSCs组开始每天1 h的高压氧(HBO)治疗,Cyy+NSCs组则常压下吸95%的氧气,NSCs组仅吸空气,各组治疗连续7天。第9天,处死大鼠。收集海马标本,检测各组大鼠海马caspase-3及脑源性神经营养因子(BDNF)与血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达量,并行脑组织冰冻切片,荧光显微镜下观察细胞的迁移情况。结果与NSCs组相比,HBO+NSCs组和Cyy+NSCs组海马caspase-3含量减少(P<0.05),但与Cyy+NSCs组相比,HBO+NSCs组海马caspase-3含量明显降低(P<0.05)。与NSCs组相比,HBO+NSCs组和Cyy+NSCs组海马BDNF和VEGF的表达量升高,但与HBO+NSCs组相比,Cyy+NSCs组海马BDNF和VEGF的表达量明显降低(P<0.05)。与NSCs组相比,HBO+NSCs组和Cyy+NSCs组缺血区GFP-阳性细胞数升高;但与HBO+NSCs组相比,Cyy+NSCs组缺血区GFP-阳性细胞数明显下降(P<0.05)。结论 HBO可以更好的促进GFP-标记的NSCs在MCAO模型大鼠脑组织内的迁移,其促迁移机制可能与HBO可以促进BDNF和VEGF的分泌、抑制新生细胞的凋亡有关。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
绿色荧光蛋白细胞论文参考文献
[1].张瑶瑶,吴国民,张潇毅,王琳,肖艳菊.慢病毒携带增强型绿色荧光蛋白基因标记大鼠脂肪干细胞及体内示踪研究[J].现代口腔医学杂志.2019
[2].李伟伟,衣启君,赵国光.高压氧促进了绿色荧光蛋白标记神经干细胞在局灶性脑缺血大鼠脑组织中迁移[J].泰山医学院学报.2019
[3].朱慧,朱文侠,黄广智,马小娜.携载增强型绿色荧光蛋白基因慢病毒标记小鼠脐带间充质干细胞示踪方法[J].延安大学学报(医学科学版).2019
[4].王福科,张红,杨桂然,肖渝,何川.携载增强型绿色荧光蛋白基因慢病毒转染骨髓间充质干细胞示踪方法[J].昆明医科大学学报.2019
[5].刘传苗,李红俊,杨天华,杨小淮,李正红.建立稳定高效表达绿色荧光蛋白和小鼠白血病抑制因子的STO细胞系[J].中国实验血液学杂志.2019
[6].李琦,邹志余,杨瑞泽,邓洪利,张蕊.慢病毒载体介导增强型绿色荧光蛋白筛选稳定转染的兔骨髓间充质干细胞[J].西安交通大学学报(医学版).2019
[7].韦伟,黄灵绣,宋光辉,邹少晗,李百加.利用绿色荧光蛋白示踪干细胞在大鼠瘢痕子宫模型内分布的研究[J].中国妇幼保健.2019
[8].曲丽媛,李梦文,李振明,潘希贵,王鑫.脐血间充质干细胞经转染绿色荧光蛋白后治疗SCID小鼠烫伤的创面效应示踪[J].国际检验医学杂志.2019
[9].王震,李玉蕾,周培岚,苏瑞斌,傅风华.α_(2B)-肾上腺素能受体与增强型绿色荧光蛋白标记的活化T细胞核因子2共表达稳转细胞株的构建[J].中国药理学与毒理学杂志.2019
[10].李慧琳,谢小燕,王思涵,韩毅,范增.逆转录病毒介导的稳定表达E4orf1和绿色荧光蛋白的胎肝窦内皮细胞株的建立[J].生物技术通讯.2018