导读:本文包含了不动杆菌脂肪酶论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:约氏不动杆菌,低温碱性脂肪酶,分离纯化,洗涤性能
不动杆菌脂肪酶论文文献综述
刘金辉,张杰,姜岩,王海宽[1]（2016）在《约氏不动杆菌LP28低温碱性脂肪酶分离纯化及洗涤性能分析》一文中研究指出对菌株LP28发酵产的低温碱性脂肪酶进行了分离纯化,菌体发酵液经过离心、硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换及Sephadex G-75凝胶过滤等步骤处理,比活力达76.66 U/mg,纯化倍数达36.16倍,回收率为14%。菌株LP28所产的脂肪酶洗涤性能分析显示,洗涤温度在30℃、p H 8.0、加酶量为100 U、洗涤剂添加量为0.25%时,其洗涤效果最佳,去油率达35%。且该酶对多种底物具有特异性,并对蛋白酶及市售洗衣粉也具有一定的稳定性。说明Acinetobacter johnsonii LP28脂肪酶具有洗涤剂添加剂应用前景。(本文来源于《应用化工》期刊2016年09期）
谢万勇[2]（2014）在《产抗辐射不动杆菌脂肪酶的重组毕赤酵母发酵条件优化》一文中研究指出随着基因工程和发酵工程等生物技术的不断发展，微生物脂肪酶在各行各业中都得到了广泛应用。而毕赤酵母作为一种能够高效表达外源蛋白的真核表达系统，可以高效表达外源微生物脂肪酶，为其工业化生产提供基础。抗辐射不动杆菌脂肪酶（Achetobacter radioresistens lipase，ARL)作为一种碱性脂肪酶，有良好的催化特性。但由于其野生菌表达量低，而限制了其工业化生产和进一步的推广应用。本文对已经成功表达抗辐射不动杆菌脂肪酶的重组毕赤酵母发酵条件进行优化以期寻找出其中关键因素，并对其机理进行探索。实验主要进行了以下几个方面的研究：（1）在10L发酵罐水平探讨了甲醇诱导期间培养pH对重组毕赤酵母发酵产ARL的影响，从实验结果可以看出诱导pH为6时最利于重组毕赤酵母发酵产酶；（2）在3L罐水平上探讨了甲醇诱导期间培养温度对重组毕赤酵母发酵产ARL的影响，实验结果发现甲醇诱导期间培养温度为20℃时最有利于重组毕赤酵母发酵产ARL；并通过对发酵过程中相关参数的检测发现相比于诱导温度为30℃时，胞内AOX比活力、ATP比浓度、细胞存活率别提高了74%、115%、11%，而胞外蛋白酶活力则下降了47%。（3）在对甲醇诱导期间培养pH和温度对重组毕赤酵母发酵产ARL的影响进行了探讨后，又对其甲醇补料策略进行了探讨，主要包括恒定甲醇补料速率探讨和甘油甲醇混合补料探讨，从实验结果可以看出在单独甲醇补料时，恒定甲醇补料速率为6gL-1h-1时重组毕赤酵母产酶效果最好，比通过控制补料速率使溶氧维持在20-30%的补料策略提高了39%；在甘油甲醇混合补料实验探究中，实验结果表明，适当的甘油浓度可有效提高重组毕赤酵母表达ARL的产量，当混合碳源中甘油质量浓度为12%时，重组毕赤酵母发酵产ARL水平最高达到1.3104U/mL，相对于单独甲醇补料时的提高了70%；同时通过对发酵过程中相关参数的测定发现相比于单独甲醇补料胞内AOX比活力、ATP比浓度和细胞存活率分别提高了57%、88%和10%，而胞外蛋白酶则下降了28%。论文首次对表达ARL的重组毕赤酵母发酵条件进行优化，探索出合适的发酵工艺，同时通过对发酵过程中相关参数的测定和监测，解析了关键影响因素的作用机理，解决了毕赤酵母发酵过程中普遍存在的溶氧限制、蛋白酶的表达降解目的蛋白、发酵后期细胞存活率低等问题，为ARL的工业化生产提供技术和理论指导。(本文来源于《华南理工大学》期刊2014-06-01）
张业宏[3]（2014）在《约氏不动杆菌产低温碱性脂肪酶的分离纯化和菌株改造》一文中研究指出脂肪酶是一种特殊的酯键水解酶,它可作用于甘油叁酯的酯键,使甘油叁酯降解为甘油二酯、单甘油酯、甘油和脂肪酸,还能催化水解脂、进行酯交换、酯合成等反应,广泛应用于油脂加工、食品、医药、日化等工业,是重要的工业用酶之一。低温碱性脂肪酶可在低温与常温下较好地发挥活性,在洗涤剂工业有良好的应用前景。本课题对实验室保藏的脂肪酶产生菌株Acinetobacter johnsonii G23的发酵培养基进行了优化,使其更适合后期的分离纯化,并采用离子交换层析对A. johnsonii G23产脂肪酶进行了分离纯化,优化了该脂肪酶纯化工艺条件,并得到相关纯化酶,为获得其氨基酸序列以及其定向改造和构效关系研究奠定了基础,同时还研究了该脂肪酶的基本酶学性质,并通过离子诱变的手段提高菌株产酶活力。对A. johnsonii G23优化后的发酵培养基成分为(w/v)：可溶性淀粉1%、大豆蛋白胨1.5%、K2HPO40.4%、MgSO40.04%、CaCl20.05%、PVA-大豆油2%、pH8.5。同时对A. johnsonii G23所产脂肪酶进行了分离纯化,发酵液经过离心、抽滤、硫酸铵沉淀、透析、超滤管浓缩、Hitrap Q HP阴离子交换层析等步骤处理后,SDS-PAGE电泳确定酶分子量为40kDa左右,比活力达90.25U/mg,纯化倍数达29.59倍,回收率达到13%。A. johnsonii G23所产脂肪酶酶学性质研究显示确定该脂肪酶最适作用温度是25℃,最适作用pH为8.0,属于低温碱性脂肪酶；热稳定性和耐碱能力良好；另外,该脂肪酶对氧化剂和洗衣粉添加成分稳定。实验表明,该脂肪酶在低浓度的有机溶剂下仍能保留一定的酶活,但是在有机溶剂浓度较高的情况下,耐受力变弱。N+注入诱变A. johnsonii G23后,获得了多株正突变株,其中突变株H-21的酶活力为20.92U/mL,比出发菌株G23酶活提高了153.8%,传代5次后,显示突变株能够稳定传代。(本文来源于《天津科技大学》期刊2014-03-01）
韩双艳,赵小兰,林小琼,郑穗平,林影[4]（2013）在《抗辐射不动杆菌碱性脂肪酶基因在毕赤酵母中的表达》一文中研究指出本研究将来自抗辐射不动杆菌CMC-1的碱性脂肪酶基因去掉信号肽,经密码子优化及全基因合成后克隆到pPICZαA载体,构建了重组质粒pPICZαA-ARL,质粒线性化后转化毕赤酵母X33,筛选得到分泌表达碱性脂肪酶的重组毕赤酵母X33/pPICZαA-ARL。摇瓶发酵液上清酶活最高达65 U/mL,初步研究了该脂肪酶的酶学性质,其最适作用温度为50℃,最适pH为9.0,最适底物是对硝基苯酚辛酸酯。(本文来源于《现代食品科技》期刊2013年07期）
赵小兰[5]（2013）在《抗辐射不动杆菌碱性脂肪酶在毕赤酵母的高效表达》一文中研究指出脂肪酶是一种水解长链甘油叁酯的生物酶，在医药，化妆品，皮革，洗涤剂，食品、香水以及其他有机合成工业都有广泛的应用。近几十年来，随着世界资源的日益短缺以及人们环境保护意识的逐渐加强，生物酶制剂因绿色无污染在工业应用中受到关注。目前，脂肪酶相对于传统的化学催化剂的生产成本仍然偏高，这已成为其工业化应用的主要瓶颈。因此，在了解脂肪酶催化特性的基础上，通过基因工程手段来提高脂肪酶表达水平，是开发新品种脂肪酶以及实现其工业化应用的重要途径。本研究以毕赤酵母表达系统为平台，在来源于抗辐射不动杆菌CMC-1脂肪酶基因已在毕赤酵母成功表达并探索其脱墨潜力的基础上，采用了N端延伸短肽、多拷贝、共表达HAC1s叁种手段来提高该脂肪酶基因在毕赤酵母的表达水平，并研究了每种方法对重组菌相关的性质的影响：1.在目的基因N端添加延伸短肽EEAEAEAEPK增加分泌效率,构建了质粒pPICZαA-epARL并获得重组酵母GS115/pPICZαA-epARL，分泌酶活由原来的65U/mL提高到最高104U/mL(以对硝基辛酸酯为底物)，不同单拷贝转化子提高在12%-60%之间。酶活性质研究表明，短肽对ARL最适温度、pH及其稳定性均无影响。2.本研究利用串联表达盒手段构建含有多拷贝ARL基因的质粒来增加基因量，构建了质粒pPICZαA-(epARL)n（n=1,2,3,4）并获得最高19拷贝的一系列重组菌。其中一株17拷贝菌株，其摇瓶水平下获得最大酶活为192U/mL。在拷贝数小于7的重组菌中，摇瓶发酵酶活随着拷贝数提高而提高，但在拷贝数大于等于7的重组菌中，酶的产量不再随着拷贝数的增加提高。3.在7,9,17,19拷贝的重组菌中转入胞内表达质粒pPICZA-HAC1s，诱导表达未折迭蛋白响应因子HAC1s。共表达HAC1s对多拷贝重组菌酶活有30%-40%的提高，重组菌摇瓶水平下最高产酶为275U/mL。重组菌的转录水平显示，共表达HAC1S后KAR2、SEC53、CNE1等折迭、糖基化修饰相关的基因在转录水平均有明显的上调。KAR2作为UPR的标志基因，在共表达HAC1s后RNA水平上调说明共表达HAC1s引起UPR响应上调，同时，KAR2与蛋白折迭相关，CNE1和SEC53与蛋白糖基化有关，这叁个基因的RNA水平上调说明共表达HAC1s提高了蛋白折迭和糖基化修饰的效率，从而达到提高分泌表达的作用；17-2,19拷贝ARL的RNA水平降低说明共表达HAC1s缓解了来自转录的压力。(本文来源于《华南理工大学》期刊2013-06-01）
郑小梅[6]（2012）在《不动杆菌脂肪酶与其特异折迭酶的相互作用与功能研究》一文中研究指出微生物脂肪酶(E.C.3.1.1.3)以独特的底物特异性、温度稳定性、碱性稳定性、抗蛋白酶解、有机溶剂稳定性与对映异构选择性等特性，被广泛应用于洗涤剂、食品、油脂加工、药物合成、化妆品和造纸等工业中。微生物脂肪酶已成为工业用脂肪酶的重要来源，但由于脂肪酶基因受到较为严谨的调控，限制了脂肪酶产生菌的发酵水平的提升。脂肪酶的高效重组表达也面临一些问题，如重组脂肪酶可能对宿主产生毒性；过量表达会产生包涵体；高效表达会对宿主细胞代谢产生不利影响而限制了表达量的积累等。细菌脂肪酶折迭机理的探究，在脂肪酶异源表达效率的提高与生产菌株的改造等实际应用中发挥着重要的作用。本论文中我们着重研究了来源于不动杆菌的脂肪酶及其特异折迭酶的功能以及两者之间的蛋白互作，以揭示依赖于脂肪酶特异折迭酶的脂肪酶的蛋白折迭机制。不动杆菌Acinetobacter sp. XMZ-26（菌种保藏号为ACCC05422）为本实验室从冰川土样中分离获得的。利用基因组文库与TAIL-PCR的相结合的方法从其基因组中克隆到含有脂肪酶与脂肪酶特异折迭酶编码基因的新操纵子(lif26/lip26)，脂肪酶基因(lip26)位于折迭酶基因(lif26)的上游（GenBank数据库登录号分别为GQ227699与GQ227701）。脂肪酶Lip26属于脂肪酶亚家族I.1，折迭酶Lif26属于脂肪酶特异折迭酶的第叁家族，与已知脂肪酶和折迭酶的最高一致性是来源于Acinetobacter sp. SY-01的LipA与LipB (Lif)，其一致性分别为46.4与37.3%，这表明它们均是新的脂肪酶与特异折迭酶，且操纵子lif26/lip26具有新颖性。无信号肽的脂肪酶Lip26与无N-末端疏水跨膜螺旋的Lif26在大肠杆菌E. coli中进行了异源表达。重组Lip26表达为无脂肪酶活性的包涵体，但用尿素变性后可在纯化的重组Lif26的辅助下经体外稀释复性获得有活性的构象。复性Lip26的酶学性质检测表明Lip26在55°C与pH9.0的条件下作用于对硝基酚豆蔻酸酯表现出最高活性；具有较宽的底物谱，可水解具有不同碳链长度的对硝基酚酯类底物；Ca2+、Mn2+与Ba2+等离子均可明显促进Lip26的活性；在许多水溶性的有机溶剂与一些去污剂存在下，Lip26仍可保持较好的活性。脂肪酶特异折迭酶Lif26不仅可体外辅助Lip26的复性，在体内通过与Lip26的共表达使其表达为有活性的可溶性蛋白。Lif26是以立体分子伴侣的方式为Lip26提供折迭所必须的信息，使其可跨越能障在较短的时间内完成折迭。利用GST pull-down实验与酵母双杂交的方法从体外与体内共同验证了Lif26与Lip26之间存在直接的相互作用。同时，采用酵母双杂交的方法鉴定了不同来源的脂肪酶与折迭酶的互作，结果表明Lif26与假单胞杆菌的Lip4没有蛋白相互作用，同时假单胞杆菌的Lif4与Lip26也没有蛋白相互作用，也无法辅助Lip26的折迭，这说明折迭酶对脂肪酶的作用是具有种属特异性。为了进一步揭示Lip26与Lif26的互作机制，以来源于Burkholderia glumae的Lif-LipA复合体的结构(PDB ID：2ES4)为模板，对Lif26-Lip26复合体进行同源模建与优化。结果显示，Lif26由11个α-螺旋组成以夹钳的形式环绕在脂肪酶Lip26周围，在N-末端与C-末端存在N-末端结构域(α1-α3)与C-末端结构域(α9-α11)，两末端结构域之间有延伸的水平臂(α4-α8)连接。通过将Lif4与Lif26的不同模块进行模块替换实验发现中间模块（水平臂）与C-末端结构域(α9-α11)可能参与决定种属特异性，而N-末端结构域(α1-α3)对种属特异性影响不大。Lif26的缺失实验也表明C-末端结构域尤其是最后一个α-螺旋α11是Lif26与Lip26发生蛋白互作所必须的。通过计算机辅助设计建立了一个鉴定蛋白互作关键氨基酸的系统方法，即首先同源模拟目标蛋白的叁维结构，利用分子动力学模拟与互作能量计算相结合的方法筛选互作可能的关键氨基酸，再对选定的位点进行定点突变与定点饱和突变，鉴定出起重要作用的关键氨基酸及其所发挥的功能。利用这个方法我们鉴定出参与和Lip26互作的Lif26关键氨基酸为位于C-末端α11的Arg332。定点饱和突变表明，Arg332是不能被替换的非常保守氨基酸，它可与Lip26的Glu112形成较强的离子键，决定Lif26与Lip26互作的特异性。并且在Lif26的空间结构中，位于Arg332周围的氨基酸如位于C-末端α9的Trp288也必须为芳香族的氨基酸，可与Arg332形成阳离子-π键以稳定Arg332的构象，而有利于与Lip26的互作。(本文来源于《中国农业科学院》期刊2012-06-01）
张搏[7]（2008）在《响应面法优化醋酸钙不动杆菌菌株23的脂肪酶产酶条件》一文中研究指出采用响应面法对醋酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus)菌株23的发酵产脂肪酶培养基进行优化实验。实验首先考察该菌株产酶所需的最适碳源和氮源,然后用Plackett-Burman法设计实验确定影响产酶的主要影响因素,用最陡爬坡实验逼近最大响应区域,最后通过Box-Behnken方法进行二次回归分析得到最佳的产酶条件为:营养肉汤18.4%、蛋白胨9.18%、吐温800.52%、K2HPO40.2%,橄榄油1%,MgSO40.05%,CaCl20.05%,FeSO40.1%。在该优化条件下,发酵液的脂肪酶活力可以达到15.2U/ml,比优化前提高3倍。(本文来源于《广西科学》期刊2008年04期）
施巧琴,陈若莹,许晴怡,吴松刚[8]（1992）在《醋酸钙不动杆菌产生的耐热碱性脂肪酶的研究》一文中研究指出从福建省福州市郊区土壤中分离筛选到一株活力强的作用温度高的碱性脂肪酶野生型菌株:醋酸钙不动杆菌 F-1903。该菌产酶培养基组成(%):大豆粉2.0、玉米浆1.0、糊精1.0、磷酸氢二钾0.5、硝酸钠0.5.产酶最适条件:发酵培养基起始 pH9.0,温度26℃,周期28小时。酶作用最适温度54℃,最适 pH9.2。Ca~(2+)对酶有激活作用,EDTA 有抑制作用。(本文来源于《微生物学报》期刊1992年06期）
不动杆菌脂肪酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
随着基因工程和发酵工程等生物技术的不断发展，微生物脂肪酶在各行各业中都得到了广泛应用。而毕赤酵母作为一种能够高效表达外源蛋白的真核表达系统，可以高效表达外源微生物脂肪酶，为其工业化生产提供基础。抗辐射不动杆菌脂肪酶（Achetobacter radioresistens lipase，ARL)作为一种碱性脂肪酶，有良好的催化特性。但由于其野生菌表达量低，而限制了其工业化生产和进一步的推广应用。本文对已经成功表达抗辐射不动杆菌脂肪酶的重组毕赤酵母发酵条件进行优化以期寻找出其中关键因素，并对其机理进行探索。实验主要进行了以下几个方面的研究：（1）在10L发酵罐水平探讨了甲醇诱导期间培养pH对重组毕赤酵母发酵产ARL的影响，从实验结果可以看出诱导pH为6时最利于重组毕赤酵母发酵产酶；（2）在3L罐水平上探讨了甲醇诱导期间培养温度对重组毕赤酵母发酵产ARL的影响，实验结果发现甲醇诱导期间培养温度为20℃时最有利于重组毕赤酵母发酵产ARL；并通过对发酵过程中相关参数的检测发现相比于诱导温度为30℃时，胞内AOX比活力、ATP比浓度、细胞存活率别提高了74%、115%、11%，而胞外蛋白酶活力则下降了47%。（3）在对甲醇诱导期间培养pH和温度对重组毕赤酵母发酵产ARL的影响进行了探讨后，又对其甲醇补料策略进行了探讨，主要包括恒定甲醇补料速率探讨和甘油甲醇混合补料探讨，从实验结果可以看出在单独甲醇补料时，恒定甲醇补料速率为6gL-1h-1时重组毕赤酵母产酶效果最好，比通过控制补料速率使溶氧维持在20-30%的补料策略提高了39%；在甘油甲醇混合补料实验探究中，实验结果表明，适当的甘油浓度可有效提高重组毕赤酵母表达ARL的产量，当混合碳源中甘油质量浓度为12%时，重组毕赤酵母发酵产ARL水平最高达到1.3104U/mL，相对于单独甲醇补料时的提高了70%；同时通过对发酵过程中相关参数的测定发现相比于单独甲醇补料胞内AOX比活力、ATP比浓度和细胞存活率分别提高了57%、88%和10%，而胞外蛋白酶则下降了28%。论文首次对表达ARL的重组毕赤酵母发酵条件进行优化，探索出合适的发酵工艺，同时通过对发酵过程中相关参数的测定和监测，解析了关键影响因素的作用机理，解决了毕赤酵母发酵过程中普遍存在的溶氧限制、蛋白酶的表达降解目的蛋白、发酵后期细胞存活率低等问题，为ARL的工业化生产提供技术和理论指导。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
不动杆菌脂肪酶论文参考文献
[1].刘金辉,张杰,姜岩,王海宽.约氏不动杆菌LP28低温碱性脂肪酶分离纯化及洗涤性能分析[J].应用化工.2016
[2].谢万勇.产抗辐射不动杆菌脂肪酶的重组毕赤酵母发酵条件优化[D].华南理工大学.2014
[3].张业宏.约氏不动杆菌产低温碱性脂肪酶的分离纯化和菌株改造[D].天津科技大学.2014
[4].韩双艳,赵小兰,林小琼,郑穗平,林影.抗辐射不动杆菌碱性脂肪酶基因在毕赤酵母中的表达[J].现代食品科技.2013
[5].赵小兰.抗辐射不动杆菌碱性脂肪酶在毕赤酵母的高效表达[D].华南理工大学.2013
[6].郑小梅.不动杆菌脂肪酶与其特异折迭酶的相互作用与功能研究[D].中国农业科学院.2012
[7].张搏.响应面法优化醋酸钙不动杆菌菌株23的脂肪酶产酶条件[J].广西科学.2008
[8].施巧琴,陈若莹,许晴怡,吴松刚.醋酸钙不动杆菌产生的耐热碱性脂肪酶的研究[J].微生物学报.1992