导读:本文包含了人颗粒细胞论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:生长分化因子8,多囊卵巢综合征,芳香化酶,颗粒细胞
人颗粒细胞论文文献综述
王斯嘉[1]（2019）在《GDF-8在人颗粒细胞调控芳香化酶表达及参与PCOS发生的分子机制的研究》一文中研究指出生长分化因子8(Growth differentiation factor-8,GDF-8),又称为肌肉抑制素(Myostatin),是转化生长因子-β(Transforming growth factor-β,TGF-β)超家族成员之一。GDF-8在人体内广泛参与机体的各项生理功能,在女性生殖系统中也发挥重要作用,在人子宫和胎盘组织中均有表达,可能参与子宫肌瘤的发生、调控胎盘滋养外胚层细胞的增生和迁移。最新的研究表明,GDF-8在调控卵巢生殖活动中具有非常重要的生理作用,参与卵丘扩张及类固醇甾体激素生成的调节。多囊卵巢综合征(Polycystic ovarian syndrome,PCOS)是一种常见的女性内分泌疾病,常伴随生殖功能障碍和内分泌代谢紊乱。根据鹿特丹标准其发病率约为20%,占无排卵性不孕患者的30%-60%,是引起女性不孕的最常见疾病之一。PCOS主要临床表现为排卵障碍、多毛、座疮、肥胖以及代谢紊乱等;超声学改变为卵巢呈多囊样;而其主要的血清学表现则为高雄激素。目前,PCOS的发病机制尚未完全明确,有研究认为高雄激素是引起PCOS各种临床症状和代谢紊乱的主要因素。芳香化酶(Aromatase cytochrome,AROM),也被称为雌激素合成酶,是CYP19A1细胞色素P450超家族成员,是促进雄激素向雌激素转化的关键酶。研究发现AROM在PCOS患者颗粒胞中低表达,这可能是导致PCOS高雄激素症状发生和排卵障碍的关键因素。已有研究表明,GDF-8在人颗粒细胞中参与调控类固醇甾体激素生成过程中各类关键酶的表达,如孕激素生成的关键酶类固醇激素合成急性调节蛋白(Steroidogenic acute regulatory protein,StAR)和可调控卵泡卵丘扩张的正五聚蛋白3(Pentraxin-3,PTX3)等。2012年,Chen MJ等人研究发现PCOS患者血清中的GDF-8浓度高于正常人群,推测GDF-8有可能参与PCOS的发生发展。亦有研究表明,AROM在PCOS患者颗粒胞中低表达,可能是导致PCOS高雄激素症状发生和排卵障碍的关键因素。但目前关于GDF-8与PCOS发生发展的关系及在人颗粒细胞中对AROM具体的调节机制仍不明确。因此,本研究旨在发现GDF-8在人黄素化颗粒细胞中是否调控AROM的生成和分子机制以及在PCOS高雄激素发生发展中的作用方式。目的研究GDF-8在人颗粒细胞中调控AROM表达的分子机制及在PCOS高雄激素发生发展中的作用方式。方法本研究以人原代颗粒细胞为研究模型,探究GDF-8在AROM表达过程中的调控作用及GDF-8是否通过AROM参与PCOS高雄激素血症的发生。分别观察经GDF-8处理颗粒细胞1h、6h、12h、24h后以及通过50ng/mL及100ng/mL不同浓度的GDF-8处理颗粒细胞后,观察AROM mRNA和蛋白表达水平的变化,研究.GDF-8.对.AROM.的调控是否具有时间和剂量依赖性。使用实时逆转录荧光定量..PCR(Reverse transcription quantitative.real-time PCR,RT-qPCR).检测人黄素化颗粒细胞中.mRNA.的表达水平,使用Western Blot技术检测人黄素化颗粒细胞中蛋白的表达水平。为了验证GDF-8对AROM的调控过程是否通过激活ALK4/5上游信号通路进行,对人颗粒细胞给予.ALK4/5.的特异性受体抑制剂SB431542进行预处理,通过观察细胞中mRNA及蛋白水平的变化明确该抑制剂是否可抑制GDF-8对AROM的调控作用。为了验证GDF-8是否通过Smad2和Smad3下游信号通路参与AROM的调控过程,本研究使用GDF-8对颗粒细胞进行.处.理,检.测.细.胞.中.磷.酸.化.Smad2.和.Smad3.水平的变化。为了进一步确认在GDF-8对AROM的调控过程中Smads信号通路的关键作用,本研究使用Smad4.的SiRNA敲.除.颗..粒细.胞.中.内.源.性Smad4的表达,再观察GDF-8对AROM调控作用的改变。使用酶.联.免.疫.吸.附.测.定.试.验.法(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)检测.非POCS患者与PCOS患者卵泡液原液中GDF-8的浓度。用相同条件的GDF-8对PCOS患者的颗粒细胞进行处理,观察细胞中AROM mRNA和蛋白表达水平的改变,探究GDF-8在PCOS患者颗粒细胞中对AROM的调控作用。结果在人颗粒细胞中,GDF-8能够促进AROM的表达,且其作用具有时间和剂量依赖性。给予颗粒细胞ALK4/5通路受体抑制剂SB431542,发现其可抑制GDF-8对AROM的促进作用,提示了在GDF-8通过激活ALK4/5上游通路参与对AROM的调控作用。给予GDF-8处理颗粒细胞后,细胞内磷酸化Smad2/3的水平显着提高,提示GDF-8通过Smad2/3下游信号通路促进AROM的生成。通过使用Smad4的SiRNA敲除颗粒细胞中内源性Smad4的表达,结果示GDF-8对AROM的调控作用受到了抑制,提示GDF-8通过经典的Smads信号通路调控AROM的生成。使用ELISA检测非POCS患者与PCOS患者卵泡液原液中GDF-8的浓度,结果提示:在PCOS患者卵泡液中GDF-8的浓度显着高于非PCOS患者。用相同条件的GDF-8对PCOS患者的颗粒细胞进行处理,结果GDF-8在PCOS患者的颗粒细胞中明显抑制AROM mRNA和蛋白水平的表达。结论1、在人原代颗粒细胞中,GDF-8可促进AROM mRNA和蛋白水平的表达,且这一调控作用具有时间和剂量依赖性;2、GDF-8对AROM表达的调控是通过活化ALK4/5受体,进而激活经典Smad通路发生的;3、GDF-8在PCOS患者中高表达并抑制AROM的表达,可能与PCOS患者血清高雄激素发生有关。(本文来源于《郑州大学》期刊2019-05-01）
李怡然[2]（2019）在《褪黑素在人颗粒细胞调控StAR生成的机制研究》一文中研究指出性激素属于类固醇甾体类激素,主要包括雌激素、雄激素和孕激素,成年女性体内性激素的分泌呈现周期性变化。性激素的生成过程包括一系列复杂的酶促反应。在反应的第一个酶促步骤中,类胆固醇作为合成类固醇甾体类激素的原料之所以能够实现从线粒体外膜至线粒体内膜的转运,主要是受到了类固醇激素合成急性调节蛋白(Steroidogenic acute regulatory,StAR)的作用。这是甾体类激素生成的重要步骤,也是限速步骤。因此StAR被称为类固醇激素生成的限速酶。在此限速步骤之后,受到胆固醇侧链裂解酶(The cholesterol side-chain cleavage enzyme,P450scc)的作用,进入线粒体内的胆固醇则会转变为孕激素、雄激素和雌激素等性激素合成的前体物质——孕烯醇酮。褪黑素(N-乙酰-5-甲氧色胺,Melatonin)是由松果体分泌的一种吲哚类神经内分泌激素,参与很多重要的生理功能,并且能够调控与昼夜节律和生殖相关的多种中枢和外周活动。植物与动物中均存在褪黑素受体(Melatonin receptor,MT),在哺乳动物中已被克隆的褪黑素膜表面受体为MT1(又称Mel 1a)和MT2(又称Mel 1b),均为具有7个跨膜段的G蛋白耦联受体。褪黑素通过MT介导cAMP(cyclic adenosine monophosphate)、IP3及cGMP(cyclic guanosine monophosphate)信号转导通路参与相应的生理病理过程。生殖系统中褪黑素受体存在于子宫、卵巢和乳腺上皮细胞、黄素化的颗粒细胞。褪黑素具有抗氧化和抗凋亡的作用,在人卵泡液中高表达,能够刺激卵母细胞成熟促进因子的启动和胚泡的破裂。此外,它还参与下丘脑-垂体-性腺轴功能和生殖内分泌活动的调节。大量研究表明褪黑素对生殖系统的作用因物种种类、生理状态不同而表现出抑制、促进或无作用的多重性。生殖系统中已知的参与调控StAR表达的主要信号通路为cAMP-PKA(Cyclic adenosine monophosphate/Protein kinase A)信号通路。除此之外,也有很多其他的激素、生长因子或细胞因子可以通过激活不同的胞内信号通路参与调控StAR的表达。其中在颗粒细胞中LH/hCG(Luteinizing hormone/Human chorionic gonadotrophin)可以调控StAR的表达。表皮生长因子(Epidermal growth factor,EGF)相关家族因子及受体在生殖系统广泛分布,与多种生殖过程相关。其中体内及体外实验均已经证实,AREG(Amphiregulin)作为LH/hCG峰后卵泡液内表达量最多的EGF家族成员,具有LH样作用,即促进卵母细胞成熟、促进卵丘复合体(Cumulus oocyte complex,COC)扩张、通过调控环氧合酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2)的表达调控排卵的发生。已有的研究也证实了AREG同样在StAR的生成过程中起着重要的作用。其中,在人颗粒细胞中,AREG已被证实可以通过与表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)结合而活化ERK1/2信号通路上调StAR的表达。褪黑素及其受体在LH/hCG峰后也急速上升,且同样可以促进卵母细胞成熟、促进排卵。此外,褪黑素已被证实参与调控cAMP-PKA信号通路。但其是否影响StAR的表达以及褪黑素与AREG是否具有协调作用来一起参与调控StAR的表达尚不十分清楚。因此,本文旨在研究褪黑素是否参与调控StAR表达以及是否与AREG具有协调作用来一起参与调控StAR的表达,并进一步深入研究其中可能的作用机制。目的:证实在人颗粒细胞中,褪黑素是否参与调控StAR表达生成及其调控机制以及褪黑素是否与AREG具有协调作用可以一起参与调控StAR的表达及其中可能的作用机制。方法:我们以人原代颗粒细胞为研究模型,探究褪黑素是否参与调控StAR表达生成及其中相关的调控机制。主要通过实时荧光定量PCR(Real time-qPCR,RT-qPCR)和western blotting技术对颗粒细胞中RNA和蛋白的表达水平进行了检测。对卵泡液内褪黑素的浓度以及血清内孕激素的浓度进行了检测,分别应用了酶联免疫吸附实验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)、电化学发光免疫分析(Electrochemiluminescence immunoassay,ECLIA)的检测方法。结果:在人颗粒细胞中,褪黑素可以增强StAR表达,这种的上调作用具有时间与剂量依赖性且这种上调作用可被其受体抑制剂Luzindole所阻断;褪黑素可通过活化PKA/CREB信号通路调控StAR的表达,且这种调控作用可被PKA抑制剂H89所阻断;褪黑素可增强AREG作用下StAR的表达;褪黑素通过与EGFR结合活化ERK1/2信号通路增强AREG作用下StAR的表达;褪黑素对AREG的这种协同增强作用可被EGFR抑制剂AG1478所阻断;此外,卵泡液内褪黑素的浓度与hCG日、取卵日(Oocyte pick up,OPU)血清内孕激素的浓度存在正相关关系。结论:1.在人颗粒细胞中,褪黑素可通过与其受体MT结合活化PKA/CREB信号通路直接调控StAR的表达;2.在人颗粒细胞中,褪黑素可通过与EGFR结合活化ERK1/2信号通路协同增强AREG作用下的StAR表达;3.卵泡液内褪黑素的浓度与血清内孕激素的浓度呈正相关。(本文来源于《郑州大学》期刊2019-05-01）
何婧妍[3]（2017）在《TGF-β1在人颗粒细胞调控芳香化酶表达的作用及其调节机制》一文中研究指出转化生长因子-β(Transforming growth factorβ,TGF-β)超家族是一组结构上保守但功能多样化的蛋白,对于许多重要的生理活动都具有调节作用。TGF-β超家族在卵巢功能的调节中发挥着重要作用,包括窦卵泡的募集、类固醇激素的生成、卵泡的发育、排卵及黄素化等。而TGF-β1是TGF-β亚家族中非常重要的一员。研究表明,TGF-β1在生殖活动的调节中具有重要作用,对卵泡的发育和类固醇激素生成的过程均有重要作用。多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)是育龄期妇女常见的一种复杂的内分泌代谢异常疾病,临床表现主要有:月经稀发或闭经、多毛、痤疮、肥胖等。其最重要的内分泌特征是高雄激素血症,雄激素的代谢障碍可导致雄激素升高。雄激素的生成可受到多种因子的调节作用,比如胰岛素生长因子、肾素等。P450芳香化酶(P450 aromatase cytochrome,P450arom)是由CYP19基因编码的,是雄激素向雌激素转化过程中的关键的限速酶,在多种组织中均有表达,P450arom对于生物学动态平衡至关重要,因此,他们对于催化、电子传递和药物靶向是必不可少的。P450arom是CYP酶类,作为雌激素生物合成过程中的关键酶,P450arom的作用至关重要。许多生理活动,如葡萄糖体内平衡、脂质体内平衡、脑功能、滤泡生长、骨矿化,以及排卵过程的协调都与其有着密切的关系。P450arom表达的异常常被认为是PCOS患者排卵障碍和雄激素水平过高的重要原因之一。P450arom的表达可受多种因素的作用影响,如促性腺激素、类固醇激素受体等,此外,其基因的突变、功能丧失及其单核苷酸多态性均可导致P450arom的表达发生变化。目前,P450arom在PCOS患者中的表达水平其具体的具体调控机制尚不清楚。有研究表明,在PCOS大鼠卵巢中,TGF-βI型受体(TGF-βreceptor I,TβR I)和TGF-βⅡ型受体(TGF-βreceptorⅡ,TβRⅡ)mRNA的表达较正常组明显升高,在人体内,PCOS患者血清中TGF-β1的含量高于正常人,而TGF-β受体的水平则受到抑制,提示我们TGF-β1可能与PCOS的发病机制有关。也有研究表明,PCOS患者血清中雌激素浓度比正常人低,且颗粒细胞中P450arom的表达下降、活性受到抑制,认为其是PCOS患者高雄激素血症和排卵障碍的重要原因。在成骨细胞、THP-1细胞等中TGF-β促进P450arom的基因转录;胎儿肝细胞、皮肤成纤维细胞、人滋养层细胞及牛颗粒细胞中TGF-β1抑制P450arom基因的转录。而在人颗粒细胞中,TGF-β1对P450arom的作用及其具体的调节机制目前仍不清楚。因此,本实验旨在研究在人颗粒细胞中,TGF-β1对P450arom表达的调控作用及其分子机制。目的探究人颗粒细胞中TGF-β1对P450arom表达的调控作用及其调控的分子机制。方法我们的研究模型为人原代颗粒细胞,探究TGF-β1在P450arom表达过程中的调节作用及其调控机制。首先探究TGF-β1对P450arom是否具有调控作用。1、采用不同浓度TGF-β1处理颗粒细胞后,观察P450arom在RNA和蛋白水平上表达情况的改变以及细胞培养液中雌激素的水平,探究TGF-β1的最佳作用浓度;2、分别观察TGF-β1处理颗粒细胞3h、6h、12h、24h后P450arom在RNA和蛋白水平表达情况的改变以及细胞培养液中雌激素的水平,探究TGF-β1的最佳作用时间。使用逆转录实时定量PCR(Reverse transcription quantitative real-time PCR,RT-qPCR)以及western blotting技术分别检测颗粒细胞中RNA和蛋白的表达水平,使用电化学发光免疫分析法(Electrochemiluminescence Immunoassay,ECLIA)检测细胞培养液中雌激素的水平。为了验证TGF-β受体是否参与TGF-β对P450arom的调控过程,给予TβRI的特异性抑制剂SB431542对颗粒细胞进行预处理,观察是否可抑制TGF-β1对P450arom的调控作用。为了验证Smad2/3下游信号通路是否参与TGF-β1对P450arom的调控过程,我们检测TGF-β1对颗粒细胞中Smad2/3磷酸化水平的调节作用。为了进一步验证Smads信号通路在TGF-β1对P450arom的调控中的关键作用,观察TGF-β1对P450arom的mRNA和蛋白水平的调节作用的改变。结果在人颗粒细胞中,TGF-β1能够促进P450arom的表达,进而促进雌激素的生成,且10ng/ml TGF-β1处理24h效果最佳。给予TβRI的抑制剂SB431542,发现其可抑制TGF-β1对P450arom的促进作用,提示了TβRI在TGF-β1对P450arom的调控作用中是必须的。TGF-β1处理颗粒细胞后可使磷酸化Smad2/3的水平显着提高,提示了TGF-β1对P450arom的调节作用是通过Smad2/3下游信号通路来介导的。结果显示TGF-β1对P450arom的促进作用受到抑制,提示了TGF-β1对P450arom的调节作用确实是通过经典的Smads信号通路介导完成的。结论1.在人原代颗粒细胞中,10ng/ml的TGF-β1作用24h后能明显促进P450arom mRNA和蛋白水平的表达,进而促进雌激素的生成;2.人颗粒细胞中,TGF-β1通过与TβRI结合的方式,进而促进P450arom mRNA和蛋白水平的表达;3.在人颗粒细胞中,TGF-β1通过激活Smads信号通路来促进P450arom mRNA和蛋白水平的表达。(本文来源于《郑州大学》期刊2017-11-01）
纪艺珍[4]（2017）在《TGF-β1对人颗粒细胞细胞外基质相关基因表达及相关信号通路的调控作用研究》一文中研究指出转化生长因子1(transforming growth factor beta 1,TGF-β 1)通过影响始基卵泡库的维持、早期卵泡发育、颗粒细胞增殖与分化、卵母细胞成熟及胚胎着床在哺乳动物繁殖过程中发挥重要作用。但是TGF-β1是否参与人排卵前颗粒细胞增殖与分化的调节并不清楚。而颗粒细胞是支持卵细胞发育的重要细胞类型,影响卵泡启动、发育、成熟、排出及闭锁的全过程。因此,在目前的研究中,我们想确定TGF-β 1是否参与人颗粒细胞的增殖与分化及排卵过程。我们研究发现,TGF-β1可以促进人颗粒细胞细胞外基质相关基因PTX3、TNFAIP6的表达,并呈现时间效应和浓度效应。使用TGF-β 1抑制剂LY364947干扰TGF-β 1信号通路,TGF-β 1对PTX3、TNFAIP6的促进作用可以被抑制。ADAMTS-1是新近发现的含Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶,通过裂解versican参与排卵过程,ADAMTS-1缺陷可导致排卵障碍。因此我们想确定TGF-β 1能否通过调控ADAMTS-1及versican的表达而参与排卵过程。我们研究发现,TGF-β1可以抑制人颗粒细胞ADAMTS-1的表达,并呈现时间效应和浓度效应。使用TGF-β 1抑制剂LY364947可以部分恢复TGF-β 1对ADAMTS-1表达的抑制作用。TGF-β 1可以促进人颗粒细胞versican的表达,并呈现时间效应和浓度效应。使用TGF-β 1抑制剂LY364947干扰TGF-β 1信号通路,TGF-β 1对versican的促进作用可以被抑制。总之,我们的研究表明TGF-β 1可以通过smad2/smad3信号通路促进颗粒细胞细胞外基质的增殖,并通调节ADAMTS-1及versican参与排卵过程。第一部分 TGF-β1促进颗粒细胞中PTX3、TNFAIP6的表达目的:检测TGF-β 1对颗粒细胞中PTX3表达的调控。方法:选择行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗的患者12例,提取卵泡液中颗粒细胞进行体外培养,随机分成TGF-β 1、LY364947处理组和对照组,处理组分别加入1ng/m1、5ng/m1、10ng/m1 的TGF-β 1和 1uM的LY364947;时间对照组分别予以5ng/ml TGF-β 1处理Oh、6h、12h、24h、48h。通过qRT-PCR和western blotting技术检测各组PTX3、TNFAIP6在颗粒细胞的表达情况。结果:(1)qRT-PCR结果显示,TGF-β 1促进颗粒细胞PTX3、TNFAIP6 mRNA的表达,并呈现浓度梯度和时间效应。(2)western blot结果显示,TGF-β 1促进颗粒细胞PTX3、TNFAIP6蛋白的表达,并呈现浓度梯度和时间效应。结论:TGF-β 1促进颗粒细胞PTX3、TNFAIP6的表达。第二部分 TGF-β1抑制颗粒细胞中ADAMTS-1的表达目的:检测TGF-β 1对颗粒细胞中ADAMTS-1及versican表达的调控。方法:选择行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗的患者12例,提取卵泡液中颗粒细胞进行体外培养,随机分成TGF-β 1、LY364947处理组和对照组,处理组分别加入lng/ml、5ng/ml、10ng/ml 的TGF-β 1和 luM的LY364947;时间对照组分别予以5ng/ml TGF-β 1处理Oh、6h、12h、24h、48h。通过qRT-PCR和western blotting技术检测各组ADAMTS-1在颗粒细胞的表达情况。结果:(1)qRT-PCR结果显示,TGF-β 1抑制颗粒细胞ADAMTS-1 mRNA的表达,并呈现浓度梯度和时间效应。(2)western blot结果显示,TGF-β 1抑制颗粒细胞ADAMTS-1蛋白的表达,并呈现浓度梯度和时间效应。结论:TGF-β 1抑制颗粒细胞ADAMTS-1的表达。第叁部分 TGF-β 1促进颗粒细胞中versican的表达目的:检测TGF-β 1对颗粒细胞中versican表达的调控。方法:选择行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗的患者12例,提取卵泡液中颗粒细胞进行体外培养,随机分成TGF-β 1、LY364947处理组和对照组,处理组分别加入1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml 的TGF-β 1和 1uM的LY364947;时间对照组分别予以5ng/ml TGF-β 1处理Oh、6h、12h、24h、48h。通过qRT-PCR和western blotting技术检测各组versican在颗粒细胞的表达情况。结果:(1)qRT-PCR结果显示,TGF-β 1促进颗粒细胞versican mRNA的表达,并呈现浓度梯度和时间效应。(2)western blot结果显示,TGF-β 1促进颗粒细胞versican蛋白的表达,并呈现浓度梯度和时间效应。结论:TGF-β 1促进颗粒细胞versican的表达。(本文来源于《上海交通大学》期刊2017-05-09）
张暄琳,李毅,刘丽,王媛媛,徐凤琴[5]（2016）在《炎症因子对人颗粒细胞凋亡调控基因P53、Bax、Casepase-3、Bcl-2、Survivin表达的影响》一文中研究指出目的:探讨炎症因子对人颗粒细胞凋亡调控基因P53、Bax、Casepase-3、Bcl-2、Survivin表达的影响。方法:选择行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗的非多囊卵巢综合征(PCOS)患者50例,提取卵泡液中颗粒细胞进行体外培养,随机分为炎症因子处理组和对照组,处理组分别加入5nmol/L白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNFα),比较各组颗粒细胞的增殖速率及凋亡调控基因的表达是否存在差异。结果:IL-1、IL-6、TNFα处理组体外培养48小时后颗粒细胞增殖速率低于对照组(P<0.05);处理组促凋亡基因P53、Bax、Casepase-3的表达水平高于对照组(P<0.05),而抗凋亡基因Bcl-2、Survivin的表达水平低于对照组(P<0.05)。结论:炎症因子IL-1、IL-6、TNFα抑制人颗粒细胞增殖,并诱发颗粒细胞凋亡。(本文来源于《实用妇产科杂志》期刊2016年07期）
张永芳,王蒙蒙,李昕,王永峰,裴秀英[6]（2015）在《二甲双胍通过抑制核糖体40S小亚基S6K蛋白激酶(P70S6)调节体外人颗粒细胞胰岛素受体底物-1(IRS-1)的表达》一文中研究指出目的:探讨二甲双胍对核糖体40S小亚基S6K蛋白激酶(P70S6k)及胰岛素受体底物-1(IRS-1)蛋白及其ser307位点磷酸化表达的影响。方法:利用0.1 mmol/L二甲双胍体外连续作用多囊卵巢综合症(PCOS)患者黄素化颗粒细胞24 h为实验组,设未加二甲双胍培养的颗粒细胞为对照组。通过RT-PCR和Real-time PCR检测P70S6k和IRS-1的表达,细胞免疫荧光化学和Western blotting的方法检测P70S6k、p-thr389-P70S6k、IRS-1及p-ser307-IRS-1蛋白的表达。结果:Real-time PCR结果显示实验组P70S6k和IRS-1m RNA水平显着低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。细胞免疫荧光化学检测IRS-1和p-ser307-IRS-1蛋白在颗粒细胞胞质表达,P70S6k和p-thr389-P70S6k蛋白在细胞核表达。Western blotting法结果显示二甲双胍作用24 h前、后卵巢颗粒细胞P70S6k、p-thr389-P70S6k、IRS-1及p-ser307-IRS-1蛋白表达有统计学差异(P<0.05),灰度值分析显示添加二甲双胍组P70S6k、p-thr389-P70S6k蛋白表达显着升高,IRS-1及p-ser307-IRS-1蛋白表达显着下降(P<0.05)。结论:二甲双胍可抑制人颗粒细胞P70S6k的表达,并通过Akt/P70S6k/IRS途径调节IRS-1的表达,从而增加颗粒细胞胰岛素的敏感性。(本文来源于《生殖与避孕》期刊2015年03期）
方兰兰[7]（2015）在《EGF相关因子和TGF-β1对人颗粒细胞排卵相关基因表达及相关信号通路的调控作用研究》一文中研究指出第一部分研究背景排卵障碍是导致不孕症发生的一个重要因素。虽然很多动物实验已经证明表皮生长因子(Epidermal growth factor,EGF)相关生长因子,特指双调蛋白(Amphiregulin,AREG)、β细胞素(Betacellulin,BTC)和表皮调节素(Epiregulin,EREG),通过调控环氧合酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2)及其作用下的前列腺素E2(Prostaglandin E2,PGE2)的生成调节排卵的发生,但在人颗粒细胞未见相关研究。研究目的研究AREG、BTC和EREG在人颗粒细胞是否促进COX-2的表达及其作用下的PGE2的生成。研究方法采用SVOG细胞系研究AREG、BTC和EREG在人颗粒细胞排卵过程中的调节作用。SVOG细胞系是一株使用SV40T抗原转染人颗粒细胞得到的细胞系。分别采用RT-q PCR和western blotting进行m RNA和蛋白的检测。通过酶联免疫法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测培养液中的PGE2水平。结果外源性给予LH促进AREG、BTC、EREG、COX-2和PGE2的表达上调;使用EGF受体(EGF Receptor,EGFR)小干扰RNA(Small interfering RNA,si RNA)转染方法敲除EGFR阻断LH上调的COX-2表达及其作用下的PGE2的生成;AREG、BTC、EREG通过活化ERK1/2信号通路促进COX-2表达及其作用下的PGE2的生成,使用EGFR抑制剂或EGFR si RNA抑制EGFR活性或敲除内源性EGFR表达可以阻断这种上调作用。结论AREG,BTC和EREG通过活化ERK1/2信号通路促进人颗粒细胞COX-2的表达及其作用下的PGE2生成。第二部分研究背景COX-2及其作用下的PGE2是调控排卵发生的关键因素。转移生长因子-β(Transforming growth factor-beta,TGF-β)超家族不仅在卵巢组织分布广泛,而且在调控卵巢各种生理和病理过程中也具有重要作用。TGF-β1是TGF-β超家族的重要成员之一。虽然TGF-β1及其受体在人颗粒细胞上具有表达,而且颗粒细胞是调控排卵发生的重要部位,但截至目前,未见TGF-β1在人颗粒细胞是否促进COX-2表达及PGE2生成的相关报道。研究目的研究TGF-β1在人颗粒细胞是否促进COX-2的表达及其作用下的PGE2的生成。研究方法采用SVOG细胞系研究TGF-β1在人颗粒细胞排卵过程中的调节作用。SVOG细胞系是一株使用SV40T抗原转染人颗粒细胞得到的细胞系。分别采用RT-q PCR和western blotting进行m RNA和蛋白的检测。通过ELISA检测培养液中的PGE2水平。结果TGF-β1促进COX-2的表达和PGE2的生成。使用TβRI抑制剂或TβRI si RNA抑制TβRI活性或敲除内源性TβRI表达,可以阻断TGF-β1对COX-2表达和PGE2生成的促进作用。TGF-β1激活Smad2和Smad3信号通路,使用Smad2 si RNA或Smad3 si RNA抑制内源性Smad2和Smad3表达同样阻断TGF-β1对COX-2表达和PGE2生成的促进作用。结论TGF-β1激活Smad2/3信号通路促进人颗粒细胞COX-2的表达及其作用下的PGE2生成。第叁部分研究背景卵巢颗粒细胞参与调控孕激素的生成,在卵巢类固醇甾体激素生成的过程中具有重要意义。类固醇激素合成急性调节蛋白(Steroidogenic acute regulatory protein,St AR)是孕激素合成过程的限速酶。很多因子参与St AR的表达,其中TGF-β1是非常重要的一个生长因子,在卵泡发育各个阶段均有表达,在人卵泡液中也可以检测到,并且颗粒细胞上TGF-β1及其受体均有表达,但TGF-研究目的β1在调节St AR及孕激素生成中的作用却未可知。研究目的研究TGF-β1在人颗粒细胞是否调控St AR的表达及孕激素的生成。研究方法研究方法采用SVOG细胞系研究TGF-β1在人颗粒细胞排卵过程中的调节作用。SVOG细胞系是一株使用SV40T抗原转染人颗粒细胞得到的细胞系。分别采用RT-q PCR和western blotting进行m RNA和蛋白的检测。通过ELISA检测培养液中的孕激素水平。结果TGF-β1下调St AR的表达及孕激素的生成。使用TβRI抑制剂或TβRI si RNA转染方法抑制TβRI活性或敲除内源性TβRI表达,可以阻断TGF-β1对St AR和孕激素生成的抑制作用。TGF-β1分别激活Smad2/3信号通路和ERK1/2信号通路,其中Smad3和ERK1/2信号通路参与TGF-β1下调的St AR表达及孕激素的生成。结论TGF-β1通过激活Smad3和ERK1/2信号通路抑制人颗粒细胞St AR的表达及孕激素的生成,参与人卵巢类固醇甾体激素生成的调节过程。(本文来源于《郑州大学》期刊2015-03-01）
张丽丽[8]（2014）在《Robo1/2基因对小鼠生殖力和人颗粒细胞凋亡的影响》一文中研究指出Slit-Robo信号通路是一条广泛存在于从果蝇到人类几乎所有动物种类的古老信号通路。大量研究表明它参与动物体内多种生理与病理过程。2008年Dickinson等首次发现,Slit-Robo在人类成年卵巢有表达。本研究组的李江超在利用Robo1/2联合单敲(单等位基因敲除)小鼠进行肿瘤病理学研究的过程中发现,与野生型小鼠相比,Robo1/2联合单敲的小鼠的产仔率显着提高,强烈提示Slit-Robo信号通路与哺乳动物的生殖能力紧密相关。有关Slit-Robo信号通路对哺乳动物的生殖能力的影响鲜见文献报道。在本研究中,我们系统对比了Robo1/2联合单敲小鼠与野生型小鼠的卵巢大小、卵巢重量以及始基卵泡数量,并通过体外受精的方法全面比较了两组小鼠的卵母细胞存活状况、受精状况以及早期胚胎发育状况。同时,我们采用人类颗粒细胞siRNA干扰Robo1/2基因的方法观察了Robo1/2基因对人卵丘颗粒细胞凋亡状况的影响,为探索基于Robo基因干预人类生殖保护的新方法提供理论依据。1993年,Seeger等首次在于果蝇体内发现Robo基因是一个跨膜受体的编码基因。1999年,科学家们发现,在果蝇体内Slit蛋白是Robo受体的配体,并且发现在神经系统的发育过程中,Slit-Robo之间的相互作用在轴突导向方面起着进化保守的作用。以后的大量研究表明,Slit-Robo信号通路在机体的各个组织、各项功能中发挥着重要作用。Robo蛋白(亦称Robo受体)是一种跨膜蛋白受体,由Robo基因因编码,在哺乳动物体内Robo受体共分为4种,即Robo1,2,3,4[4,5]。Robol-3受体由5个Ig功能区、3个纤维黏连蛋白功能区、1个跨膜片段和1个胞内片段组成,其中胞内片段为4个保守的模体,即CCO, CC1, CC2, CC3[6]。Robo4与上述受体类型不同的是只有2个Ig功能区,其余部分一致。Robo1和Robo2在成熟个体的多数组织和器官中均有表达,但主要表达在发育中的神经系统,Robo3只表达于发育中的中枢神经系统,而Robo4则表达于内皮细胞中。Slit蛋白是Robo受体的配体,它由富亮氨酸重复序列、表皮生长因子样重复序列、1个层黏连蛋白G-样区域和1个C-末端半胱氨酸构成。哺乳动物Slit蛋白分为3种亚型,即Slit1、Slit2和Slit3, Slitl仅存在于神经系统,Slit2和Slit3除了存在于神经系统外亦可表达于其它的细胞类型,如心脏、血管等。Slit配体通过N端的D2(第二亮氨酸重复区)区与Robo受体的Ig1-2结合,硫酸乙酰蛋白聚糖能稳定Slit-Robo,形成Slit-Robo-Heparin复合体。Slit-Robo家族参与了多种生理和病理过程,包括：(1)神经系统轴突导向作用；(2)参与血管形成,调节成熟血管的功能；(3)调控哺乳动物心脏腔室形态的发生过程；(3)调控肌细胞生成,白细胞趋化反应以及血管平滑肌的迁移；(4)可以激活细胞凋亡蛋白,参与诱导细胞凋亡。近年来有关Slit-Robo信号通路的研究多集中在肿瘤领域,Slit和Robo之间通过相互作用来调节肿瘤发展过程中的关键环节,包括肿瘤浸润、转移、血管生成以及凋亡。但是有关Slit-Robo信号通路对肿瘤的作用还存在争议,大多数的研究表明,Robol (3p12), Slit2(4p15.2), Slit3(5q34-35)以及Slitl(10q23.3-24)已成为肿瘤抑制基因候选基因,对其进行敲除或者进行启动区域甲基化可以抑制人类肿瘤(包括颈椎肿瘤等)。但是与之相反的是,王彪等在多个肿瘤细胞中未发现Slit2高表达,并且发现肿瘤细胞能够分泌Slit2,它可以结合血管内皮细胞上的Robol受体,吸引血管内皮细胞向肿瘤内迁移,从而诱导肿瘤的新生血管形成,并促使肿瘤快速生长,通过Robol胞外区的特异性抗体R5阻断Slit2/Robol信号,则可使肿瘤血管密度明显降低和肿瘤体积显着缩小。2008年,Dickinson等首次发现,Slit-Robo信号通路存在于人类成年卵巢中。并且在随后的研究中发现,在卵巢的发育过程中Slit-Robo信号通路的受体水平能够伴随卵巢的发育得以调节,并且在卵泡发育阶段Robo基因表达上调,Robol主要表达于卵泡的前颗粒细胞,少量表达于卵母细胞,Robo2、Robo4和Slit2表达于发育中始基卵泡中的卵母细胞。在卵巢的发育过程中,Slit-Robo信号通路存在于卵泡形成阶段。当Slit-Robo表达上调时,处于增值状态的卵母细胞的数量反而显着降低。上述研究揭示,Slit-Robo可能与哺乳动物卵巢储备的调控相关。这是目前仅见于文献报道的关于Slit-Robo信号通路与卵巢储备相关性的研究,关于Slit-Robo信号通路对生殖力的具体影响尚未见相关报道。颗粒细胞在整个生殖系统中发挥着十分重要的作用,它位于卵巢中卵母细胞透明带周围,以缝隙连接的方式与卵母细胞相连,发挥着重要的支持和保护卵母细胞的作用,影响卵母细胞的发育。Host等研究证明,卵丘颗粒细胞凋亡与卵母细胞成熟、单精子胞质内显微注射后成熟卵母细胞受精状况以及胚胎评分状况相关。Raman等的研究也说明,卵丘颗粒细胞的凋亡状态与卵子的发育潜能相关。Dickinson等的研究表明,Slit-Robo通过增强细胞凋亡以及上调caspase-3来参与小鼠黄体的生成,Robo1和Robo2表达于黄体颗粒细胞和黄体纤维样细胞,阻断Slit-Robo信号通路可以增强黄体细胞迁移,减少凋亡。目前,尚无有关Slit-Robo信号通路与卵丘颗粒细胞的关联性研究。在本研究中,我们利用基因联合单敲观察Robo1/2基因对小鼠卵巢大小和重量、始基卵泡数量、卵母细胞存活状况、卵母细胞受精能力及早期胚胎发育潜能等的影响；利用siRNA干扰的方法观察Robo1/2联合基因沉默对人类卵丘颗粒细胞凋亡状况的影响。初步研究了Robo1和Robo2基因对生殖力的影响,为建立基因生物靶向的女性生殖保护进行了前期探索。研究目的1.研究Robo1/2联合单敲对小鼠卵巢发育和卵巢储备的影响；2.研究Robo1/2联合单敲对小鼠卵母细胞存活状况、受精能力及其早期胚胎发育潜能的影响；3. Robo1/2联合基因沉默后,人类卵丘颗粒细胞的凋亡状况。研究方法1.小鼠体外受精及胚胎培养实验：实验组为Robo1/2联合单敲母鼠,对照组为野生型(Wild Type, WT)母鼠,配种公鼠为WT小鼠,排除因公鼠个体差异对精子质量的影响,针对母鼠进行超排卵,首先腹腔注射10IU的PMSG,48小时后再腹腔注射1OIU的hCG,于hCG注射后10-16小时,颈部脱臼处死母鼠,打开腹部,将母鼠的生殖器官全部取出,分离卵巢和输卵管,在体视镜下操作,获得卵母细胞-卵丘复合物,然后进行体外受精,胚胎培养,通过观察其受精及胚胎发育状况,比较实验组和对照组母鼠的卵母细胞受精能力及胚胎发育潜能,于此同时,观察和测量Robo1/2联合单敲母鼠的左侧卵巢大小、重量和组织学特征。2.人类卵丘颗粒细胞鉴定：收集在广东省人民医院生殖医学科进行辅助生殖技术治疗的、符合纳入标准的不孕患者的卵丘颗粒细胞,采用镜下采集、PBS洗涤、透明质酸酶消化、高糖DMEM培养等方法,进行人类卵丘颗粒细胞的采集和培养,与此同时进行鉴定,鉴定方法包括镜下观察、苏木素-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色、促卵泡生成素受体(follicle-stimulating hormone receptor, FSHR)兔抗人多克隆抗体免疫组化染色,细胞增殖能力检测(CCK-8法)。3. Robo1/2联合基因沉默：将培养的卵丘颗粒细胞分为叁组,即siRNA干扰组(即实验组)、Mock组和空白对照组,于卵丘颗粒细胞培养后24h进行干扰,干扰后24h换液,继续培养24小时后胰酶消化,获得颗粒细胞。4. Western Blot:提取实验组、Mock组和空白对照组中颗粒细胞的蛋白质,检测其中Robo1/2蛋白的表达。5.流式细胞凋亡检测：人卵丘颗粒细胞siRNA干扰后,继续培养24h,胰酶消化,获得颗粒细胞,上机前标记抗体(采用Annexin V/PI凋亡检测试剂盒),在流式细胞仪上进行细胞的凋亡检测。结果1. Robo1和Robo2基因联合单敲对小鼠卵巢发育的影响：通过对Robo1和Robo2基因联合单敲母鼠和野生型母鼠的左侧卵巢大小、重量和卵巢切片,我们发现,与野生型小鼠相比,Robo1和Robo2基因联合单敲母鼠的卵巢大,卵巢重量显着增高,卵巢组织切片中始基卵泡的数量偏多。这说明,Robo1和Robo2基因联合单敲有利于卵巢发育和卵巢储备。2. Robo1和Robo2基因联合单敲对小鼠卵母细胞存活状况、受精能力及早期胚胎发育潜能的影响：与对照组相比,实验组卵母细胞存活率、受精率和6-8细胞胚胎形成率均有所增加,但无统计学意义,这说明Robo1/2联合单敲可能有利于小鼠的卵母细胞质量,受精能力和早期胚胎发育,但影响并不显着。3.人卵丘颗粒细胞分离、原代培养及鉴定：(1)镜下观察：颗粒细胞培养6-8h后开始贴壁生长,状态良好,但生长速度较慢,于2d达到增殖高峰,细胞之间以丝状突起连接,于5-7d后细胞开始纤维样变形,随后逐渐退化死亡；(2)HE染色：人卵丘颗粒细胞形态正常,成梭形或星形,边界不规则且明显,大小均一,细胞核染色显着,较大,呈椭圆形或圆形,核仁显着深染,细胞质染色较浅,透光性好,边界清楚,内含丰富的空泡样结构,细胞表面存在深染的颗粒样物质,细胞存在轴突样结构,细胞中间以丝状轴突相互连接；(3)CCK-8法测定卵丘颗粒细胞增殖曲线：颗粒细胞6h后开始贴壁生长,于2d达到增殖高峰,6-7d细胞开始较为快速地退化；(4)FSHR兔抗人多克隆抗体免疫组化染色：人卵丘颗粒细胞胞浆呈棕褐色,核仁蓝色,特异性较为显着。4. Robo1/2联合基因沉默：转染后24h镜下观察发现,Mock组颗粒细胞变圆,收缩,细胞间距变大,细胞表面有较多黑色颗粒状物质,培养液中有漂浮的细胞,实验组、空白对照组组细胞生长状况正常。叁组细胞中,Mock组的细胞凋亡较为严重,这表示转染试剂具有一定的细胞毒性,Robo1/2联合基因沉默可能会减少人卵丘颗粒细胞凋亡。5. Western Blot分析：与空白对照组和Mock组相比,实验组Robo1和Robo2条带均减弱,说明已经成功干预了人卵丘颗粒细胞中Robo1和Robo2蛋白的表达,siRNA转染后,实验组Robo1和Robo2蛋白表达降低。6.流式细胞凋亡检测：与Mock组相比,实验组人卵丘颗粒细胞的凋亡率显着降低,存在统计学差异,而实验组与空白对照组之间的凋亡率不存在统计学差异。以上结果说明转染试剂对人卵丘颗粒细胞有一定的细胞毒性作用,能够促进细胞的凋亡,当进行Robo1/2转染后,细胞可能有一定的抗凋亡作用。结论1. Robo1/2联合单敲可能有利于小鼠卵巢发育和卵巢储备；2. Robol/2联合单敲可能对小鼠卵母细胞质量以及其受精能力和胚胎质量没有显着影响；3. Robo1/2联合基因沉默可能有利于降低人卵丘颗粒细胞的凋亡。(本文来源于《南方医科大学》期刊2014-05-10）
叶婧,丁婷,杜小芳,罗爱月,杨书红[9]（2012）在《不同分离方法对人颗粒细胞体外培养的影响》一文中研究指出目的探讨人颗粒细胞不同分离方法的比较。方法取体外受精-胚胎移植(IVF-ET)采卵时的卵泡液,用裂解法、密度梯度离心法、酶解法分离纯化及原代培养人卵巢颗粒细胞。比较不同的分离方法获得的颗粒细胞数量、形态及早期培养的影响。结果 75%红细胞裂解液得到的颗粒细胞数较密度梯度离心法、酶解法得到细胞数多(P<0.01,P<0.001);叁种方法对分离的颗粒细胞活性比较无(本文来源于《中华医学会第十次全国妇产科学术会议妇科内分泌会场（妇科内分泌学组、绝经学组、计划生育学组）论文汇编》期刊2012-11-02）
董毅飞,张昌军,罗清炳,江胜芳,张征[10]（2011）在《人颗粒细胞共培养对牛卵母细胞体外成熟及孤雌激活的影响》一文中研究指出为了探讨人颗粒细胞共培养对牛卵母细胞体外成熟及孤雌激活的影响,将穿刺获得的牛卵母细胞随机分为试验组和对照组,试验组以人颗粒细胞作为滋养层与牛卵母细胞在体外成熟液中共培养,对照组仅使用与试验组相同的体外成熟液培养,观察并比较两组的极体排出率、孤雌激活囊胚形成率。结果发现,试验组的极体排出率(72.35%)显着高于对照组的极体排出率(52.86%)(P<0.01);经过孤雌激活后,试验组的囊胚形成率为12.82%,对照组为4.76%,两组之间无显着性差异(P>0.05)。说明人颗粒细胞可以作为牛卵母细胞体外成熟时的滋养层,两者共培养可以提高牛卵母细胞体外培养的核成熟率。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2011年01期）
人颗粒细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
性激素属于类固醇甾体类激素,主要包括雌激素、雄激素和孕激素,成年女性体内性激素的分泌呈现周期性变化。性激素的生成过程包括一系列复杂的酶促反应。在反应的第一个酶促步骤中,类胆固醇作为合成类固醇甾体类激素的原料之所以能够实现从线粒体外膜至线粒体内膜的转运,主要是受到了类固醇激素合成急性调节蛋白(Steroidogenic acute regulatory,StAR)的作用。这是甾体类激素生成的重要步骤,也是限速步骤。因此StAR被称为类固醇激素生成的限速酶。在此限速步骤之后,受到胆固醇侧链裂解酶(The cholesterol side-chain cleavage enzyme,P450scc)的作用,进入线粒体内的胆固醇则会转变为孕激素、雄激素和雌激素等性激素合成的前体物质——孕烯醇酮。褪黑素(N-乙酰-5-甲氧色胺,Melatonin)是由松果体分泌的一种吲哚类神经内分泌激素,参与很多重要的生理功能,并且能够调控与昼夜节律和生殖相关的多种中枢和外周活动。植物与动物中均存在褪黑素受体(Melatonin receptor,MT),在哺乳动物中已被克隆的褪黑素膜表面受体为MT1(又称Mel 1a)和MT2(又称Mel 1b),均为具有7个跨膜段的G蛋白耦联受体。褪黑素通过MT介导cAMP(cyclic adenosine monophosphate)、IP3及cGMP(cyclic guanosine monophosphate)信号转导通路参与相应的生理病理过程。生殖系统中褪黑素受体存在于子宫、卵巢和乳腺上皮细胞、黄素化的颗粒细胞。褪黑素具有抗氧化和抗凋亡的作用,在人卵泡液中高表达,能够刺激卵母细胞成熟促进因子的启动和胚泡的破裂。此外,它还参与下丘脑-垂体-性腺轴功能和生殖内分泌活动的调节。大量研究表明褪黑素对生殖系统的作用因物种种类、生理状态不同而表现出抑制、促进或无作用的多重性。生殖系统中已知的参与调控StAR表达的主要信号通路为cAMP-PKA(Cyclic adenosine monophosphate/Protein kinase A)信号通路。除此之外,也有很多其他的激素、生长因子或细胞因子可以通过激活不同的胞内信号通路参与调控StAR的表达。其中在颗粒细胞中LH/hCG(Luteinizing hormone/Human chorionic gonadotrophin)可以调控StAR的表达。表皮生长因子(Epidermal growth factor,EGF)相关家族因子及受体在生殖系统广泛分布,与多种生殖过程相关。其中体内及体外实验均已经证实,AREG(Amphiregulin)作为LH/hCG峰后卵泡液内表达量最多的EGF家族成员,具有LH样作用,即促进卵母细胞成熟、促进卵丘复合体(Cumulus oocyte complex,COC)扩张、通过调控环氧合酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2)的表达调控排卵的发生。已有的研究也证实了AREG同样在StAR的生成过程中起着重要的作用。其中,在人颗粒细胞中,AREG已被证实可以通过与表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)结合而活化ERK1/2信号通路上调StAR的表达。褪黑素及其受体在LH/hCG峰后也急速上升,且同样可以促进卵母细胞成熟、促进排卵。此外,褪黑素已被证实参与调控cAMP-PKA信号通路。但其是否影响StAR的表达以及褪黑素与AREG是否具有协调作用来一起参与调控StAR的表达尚不十分清楚。因此,本文旨在研究褪黑素是否参与调控StAR表达以及是否与AREG具有协调作用来一起参与调控StAR的表达,并进一步深入研究其中可能的作用机制。目的:证实在人颗粒细胞中,褪黑素是否参与调控StAR表达生成及其调控机制以及褪黑素是否与AREG具有协调作用可以一起参与调控StAR的表达及其中可能的作用机制。方法:我们以人原代颗粒细胞为研究模型,探究褪黑素是否参与调控StAR表达生成及其中相关的调控机制。主要通过实时荧光定量PCR(Real time-qPCR,RT-qPCR)和western blotting技术对颗粒细胞中RNA和蛋白的表达水平进行了检测。对卵泡液内褪黑素的浓度以及血清内孕激素的浓度进行了检测,分别应用了酶联免疫吸附实验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)、电化学发光免疫分析(Electrochemiluminescence immunoassay,ECLIA)的检测方法。结果:在人颗粒细胞中,褪黑素可以增强StAR表达,这种的上调作用具有时间与剂量依赖性且这种上调作用可被其受体抑制剂Luzindole所阻断;褪黑素可通过活化PKA/CREB信号通路调控StAR的表达,且这种调控作用可被PKA抑制剂H89所阻断;褪黑素可增强AREG作用下StAR的表达;褪黑素通过与EGFR结合活化ERK1/2信号通路增强AREG作用下StAR的表达;褪黑素对AREG的这种协同增强作用可被EGFR抑制剂AG1478所阻断;此外,卵泡液内褪黑素的浓度与hCG日、取卵日(Oocyte pick up,OPU)血清内孕激素的浓度存在正相关关系。结论:1.在人颗粒细胞中,褪黑素可通过与其受体MT结合活化PKA/CREB信号通路直接调控StAR的表达;2.在人颗粒细胞中,褪黑素可通过与EGFR结合活化ERK1/2信号通路协同增强AREG作用下的StAR表达;3.卵泡液内褪黑素的浓度与血清内孕激素的浓度呈正相关。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
人颗粒细胞论文参考文献
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[4].纪艺珍.TGF-β1对人颗粒细胞细胞外基质相关基因表达及相关信号通路的调控作用研究[D].上海交通大学.2017
[5].张暄琳,李毅,刘丽,王媛媛,徐凤琴.炎症因子对人颗粒细胞凋亡调控基因P53、Bax、Casepase-3、Bcl-2、Survivin表达的影响[J].实用妇产科杂志.2016
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