导读:本文包含了缺陷病毒载体论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:趋化因子类,腺病毒科,RNA干扰,动脉粥样硬化
缺陷病毒载体论文文献综述
陈婷婷,曹园芝,熊玮,董少红[1]（2018）在《腺病毒载体构建小鼠趋化素基因缺陷性细胞系》一文中研究指出背景:趋化素在动脉粥样硬化中的表达水平上调,趋化素可能参与了动脉粥样硬化的病理过程。目的:应用腺病毒介导的RNA干扰技术,构建并有效沉默趋化素基因的表达体,为研究其对动脉粥样硬化机制奠定实验技术基础。方法:以小鼠趋化素基因mRNA序列作为干扰靶点,以腺病毒基因pCD316-ZsGreen-shRNA作为质粒载体,设计4组靶向趋化素基因的shRNA序列,构建靶向鼠趋化素的shRNA表达质粒,另构建不针对任何已知mRNA的阴性对照shRNA表达质粒,筛选出干扰效果最好的shRNA,并在293T细胞对腺病毒进行包装和滴度测定。体外培养小鼠黑色素瘤细胞B16F10,转染腺病毒形成趋化素基因缺陷性B16F10细胞,用qPCR和Western blot检测感染腺病毒后细胞中趋化素mRNA和蛋白水平。结果与结论:(1)PCR以及基因测序结果表明Chemerin shRNA腺病毒载体构建成功,腺病毒的滴度为2×10~(10) PFU/mL,pCD-shRNA4对趋化素基因的抑制效果最显着(P<0.001);(3)qPCR和Western检测B16F10细胞中趋化素mRNA水平和蛋白水平,结果显示Chemerin-shRNA4达到一定的敲低效果;(2)表明腺病毒介导的shRNA-Chemerin4可有效沉默B16F10中趋化素基因的表达。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2018年24期）
熊玮,董少红,张键,李江华,吴美善[2]（2015）在《慢病毒载体构建小鼠CMKLR1基因缺陷性血管平滑肌细胞系》一文中研究指出背景:趋化素在动脉粥样硬化时的表达水平上调,趋化素及其受体CMKLR1可能参与了动脉粥样硬化的病理过程。目的:建立CMKLR1基因缺陷性小鼠血管平滑肌细胞株。方法:以小鼠CMKLR1基因mR NA序列作为干扰靶点,设计3组靶向CMKLR1基因的shR NA序列,构建慢病毒载体,筛选出干扰最佳的shR NA,在293T细胞对慢病毒进行包装和滴度测定。体外培养小鼠血管平滑肌细胞,转染慢病毒形成CMKLR1基因缺陷性血管平滑肌细胞株,用real-time PCR检测感染慢病毒后细胞中CMKLR1 mR NA水平。结果与结论:基因测序结果表明慢病毒载体构建成功,慢病毒的滴度约为8.7×106 TU/m L,p LVX-sh RNA3对CMKLR1基因的抑制效果最显着(P<0.001)。将p LVX-shR NA3转染至血管平滑肌细胞中形成基因缺陷细胞株,用real time PCR血管平滑肌细胞中CMKLR1 mR NA水平,该细胞株中CMKLR1 mR NA水平显着下降(P<0.001),表明慢病毒介导的si RNA可有效沉默小鼠血管平滑肌细胞中CMKLR1基因的表达。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2015年20期）
张香玲[3]（2015）在《新型的基于基因组复制缺陷性仙台病毒载体的免疫原性疫苗平台的评价》一文中研究指出作者开发了一种以副黏病毒基因组复制缺陷性仙台病毒为基础的新型疫苗平台。这种仙台病毒载体可以表达插入到基因组的异源性基因。为了在体内验证这种新型方案,作者构建了针对呼吸道合胞病毒(RSV)和人乳头瘤病毒3型(PIV3)的联合疫苗候选物。本项研究比较了2种不同的展示异源性抗原的方法 :(i)RSV融合蛋白F,在转录单位中以分泌性蛋白形式被编码,在感染细胞中表达后可作(本文来源于《微生物学免疫学进展》期刊2015年01期）
徐春华,刘越,肖利民,邓圣泽,李东海[4]（2014）在《含HSV-TK基因及IL-18基因复制缺陷型腺病毒载体的构建和鉴定》一文中研究指出目的:分别构建含TK及IL-18基因的重组腺病毒载体,并进行鉴定。方法:通过DNA重组技术,构建含有目的基因的复制缺陷型腺病毒Ad CMV-TK及Ad CMV-IL-18;将上述重组腺病毒液感染293细胞,提取DNA,进行PCR鉴定;将病毒液感染293细胞,扩增病毒,用OD260法测定病毒滴度。结果:经PCR鉴定,鉴定正确的腺病毒命名为Ad CMV-TK及Ad CMV-IL-18,测定病毒滴度Ad CMV-TK=1.28×109 PFU/m L;Ad CMV-IL-18=1.28×109 PFU/m L。结论:成功构建了含HSV-TK基因及IL-18基因重组腺病毒载体,为肿瘤的基因治疗提供了理论依据及实验数据。(本文来源于《中国医学创新》期刊2014年36期）
刘梦颖,韩舟,吴海银,陈晨,沈芯如[5]（2014）在《一种活性缺陷型小鼠端粒酶催化亚基过表达慢病毒载体的构建及功能初步测定》一文中研究指出目的:构建含活性缺陷型小鼠端粒酶催化亚基(去除氨基酸702~712的mTERT,命名为mTERTΔ)基因的慢病毒载体,检测其表达和功能。方法:从先前构建的表达mTERT全长的pDC315-EGFP-mTERT质粒中,通过缺失突变PCR扩增小鼠mTERTΔ基因,构建真核表达载体GV287-EGFP/mTERTΔ。鉴定正确后将目的基因克隆入慢病毒载体pGC-LV,得重组载体pGC-LV/mTERTΔ-EGFP,采用Lipofectamine2000将其转染293T细胞,包装慢病毒颗粒LV-mTERTΔ-EGFP后感染神经干细胞和原代神经元,TRAP-PCR方法检测端粒酶活性,荧光显微镜观察目的片段表达和细胞增殖情况。结果:成功构建TERTΔ基因片段,测序证明重组慢病毒载体pGC-LV/mTERTΔ-EGFP构建成功。包装慢病毒颗粒LV-mTERTΔ-EGFP可以感染神经干细胞和神经元,端粒酶活性测试证明目的蛋白的端粒酶催化活性缺陷,抑制神经干细胞增殖,抑制内源性mTERT功能。结论:慢病毒载体LV-mTERT-EGFP构建成功,可以表达无活性mTERT片段。(本文来源于《南京医科大学学报(自然科学版)》期刊2014年06期）
林晓亮,姜云波,赵倩,殷小涛,田仁礼[6]（2013）在《携带p53AIP1基因的重组复制缺陷型腺病毒载体的构建、鉴定及其在人宫颈癌细胞系HeLa中的表达》一文中研究指出目的构建携带外源性p53调节的凋亡诱导蛋白1(p53AIP1)基因重组复制缺陷型腺病毒载体,观察其在HeLa细胞中的表达。方法设计针对p53AIP1基因序列并插入特定酶切位点的特异引物,通过PCR扩增p53AIP1基因序列,利用DNA重组技术将p53AIP1基因定向插入到腺病毒穿梭载体pDC316,构建穿梭质粒pDC316-p53AIP1;在LipofectamineTM2000介导下穿梭载体pDC316-p53AIP1和腺病毒骨架载体pBHGloxΔE1,3Cre共转染进HEK293细胞;通过Cre-loxP重组酶系统,使Shuttle质粒和辅助大质粒发生定点重组从而包装产生携带目的基因p53AIP1的复制缺陷型重组腺病毒(Ad-p53AIP1)。将Ad-p53AIP1和Ad-null按MOI=100感染HeLa细胞,应用Western blot法检测蛋白水平的表达。结果基因片段成功连入pDC316载体上,对所构建新载体分别行PCR扩增、酶切、测序鉴定,与预计一致。Western blot法检测证实,Ad-p53AIP1感染HeLa细胞后蛋白有表达。结论成功构建携带p53AIP1基因的重组复制缺陷型腺病毒载体,并且有较强的感染能力。(本文来源于《细胞与分子免疫学杂志》期刊2013年10期）
卓萌,唐余燕,余永胜,周丽芹,潘庆春[7]（2013）在《抗TNFα单链抗体复制缺陷型腺病毒载体的构建及表达》一文中研究指出目的:构建pAd/CMV/V5-DEST-TNFα-scFv重组腺病毒载体,通过病毒包装、纯化及滴定,获得高纯度高感染性的病毒液,并对TNFα-scFv进行表达、鉴定.方法:以携带TNFα-scFv基因的载体PUC57-Amp为模板,扩增TNFα-scFv目的基因,构建穿梭质粒pDONR221-TNFα-scFv,测序证实质粒含有目的基因.与骨架质粒pAd-CMV-V5-DEST腺病毒骨架载体进行同源重组,形成表达克隆pAd/CMV/V5-DEST-TNFα-scFv.表达克隆转染293细胞,包装重组腺病毒,并鉴定和病毒滴定.结果:TNFα-scFv基因成功克隆到腺病毒载体中,转染293细胞后成功包装出重组腺病毒,病毒滴度为2.5×1011TCID50/mL,Western blot检测到TNFα-scFv基因在293细胞中高水平表达.结论:成功构建了带有TNFα-scFv基因的重组腺病毒载体,为进一步研究提供实验基础.(本文来源于《世界华人消化杂志》期刊2013年22期）
管洁,邓瑶,文波,陈红,王文[8]（2013）在《整合缺陷型重组慢病毒载体构建及HCV重组假型慢病毒颗粒的制备与性状分析》一文中研究指出为提高慢病毒载体应用的安全性及改进HCV新型颗粒疫苗的制备,首先对传统的慢病毒叁质粒系统进行改造:将包装质粒pHR’CMVΔR8.2改造成整合缺陷型的包装质粒pHR’CMVΔR8.2D64E,并在体外感染实验验证其整合缺陷性;将转移质粒中的报告基因GFP替换成HCV的NS3基因,选用表达3种亚型(1a、1b、2a)HCV包膜E1E2的包膜质粒,用改造后的叁质粒系统制备了3种亚型(1a,1b,2a)的假型丙型肝炎病毒(HCV)整合缺陷型慢病毒颗粒,并用Western blot方法确定了颗粒上包膜蛋白的表达,通过电镜可观察到浓缩后的HCV慢病毒颗粒结构,HCV慢病毒颗粒感染Huh7细胞后可观察到转基因NS3的表达。为安全高效的慢病毒载体的应用及HCV假型颗粒疫苗研发提供了新的技术路线。(本文来源于《中国生物工程杂志》期刊2013年06期）
郝春秋,彭梅娟,谢玉梅,周云,魏欣[9]（2013）在《结缔组织生长因子基因RNA干扰复制缺陷型腺病毒载体的构建及鉴定》一文中研究指出目的:构建能介导结缔组织生长因子(CTGF)基因RNA干扰的复制缺陷型腺病毒表达载体。方法:以大鼠CTGF基因为靶序列,设计并合成含编码短发夹RNA序列的寡核苷酸,构建腺病毒穿梭质粒p-shuttle-CTGF,酶切及测序分析正确后,与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转染AD-293细胞,进行病毒包装,得到腺病毒载体Ad.H1-CTGF,用该载体感染HSC-T6细胞,观察其对CTGF基因表达抑制的效果。结果:构建的腺病毒穿梭质粒p-shuttle-CTGF经酶切、测序分析证实正确;包装的病毒载体滴度为4×1010PFU/mL,感染HSC-T6细胞后,Western印迹证实CTGF表达显着减少。结论:构建的腺病毒载体Ad.H1-CTGF可有效抑制HSC-T6中CTGF的表达,为抗纤维化研究提供了有力的工具。(本文来源于《生物技术通讯》期刊2013年01期）
翟登月,魏宁,朱幼玲,吴波娜,姜永军[10]（2011）在《四环素调控复制缺陷性疱疹病毒载体介导LacZ基因在原代培养神经元中的表达》一文中研究指出目的利用四环素调控复制缺陷性单纯疱疹病毒I型重组载体(QR9TO-LacZ)感染体外原代培养的大鼠皮层神经元,探讨其介导半乳糖苷酶(LacZ)基因的表达情况及基因调控效能;并检测该载体对神经元活力的影响。方法用RUL9-8细胞系扩增QR9TO-LacZ病毒株,收集后采用噬斑法测定病毒滴度;体外原代培养大鼠皮层神经元。将培养的原代神经元分为强力霉素(DOX)组和对照组。两组细胞均用QR9TO-LacZ转染,强力霉素组加入四环素衍生物强力霉素(0.5μg/ml),对照组加入等剂量空白对照液。同时根据感染复数(MOI),即MOI=3、5、10、30 PFU/cell,将两组培养细胞进一步分为亚组。病毒转染48h后行X-gal染色;光镜下观察神经元形态,随机选取10个高倍镜视野(×400),计算每高倍镜视野中平均蓝染细胞率,比较不同MOI病毒感染神经元的效率。采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测感染病毒48 h(MOI同上)后神经元的活性。结果在含有DOX的培养环境中,不同MOI亚组(3、5、10、30 PFU/cell)QR9TO-LacZ感染神经元出现蓝染细胞百分比分别为5.35%±0.84%、10.64%±1.92%、19.73%±2.87%、34.41%±2.58%;在无DOX的培养环境中,各亚组均未观察到蓝染细胞。上述MOI感染的神经元细胞存活率分别为:90.24%±8.16%、88.00%±5.69%、83.95%±3.82%、78.90%±5.49%。结论 QR9TO-LacZ载体能有效地将目的基因导入原代培养神经元中并表达;目的基因表达的开启受强力霉素调控;QR9TO-LacZ对体外原代培养神经元毒性较低。(本文来源于《临床和实验医学杂志》期刊2011年22期）
缺陷病毒载体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
背景:趋化素在动脉粥样硬化时的表达水平上调,趋化素及其受体CMKLR1可能参与了动脉粥样硬化的病理过程。目的:建立CMKLR1基因缺陷性小鼠血管平滑肌细胞株。方法:以小鼠CMKLR1基因mR NA序列作为干扰靶点,设计3组靶向CMKLR1基因的shR NA序列,构建慢病毒载体,筛选出干扰最佳的shR NA,在293T细胞对慢病毒进行包装和滴度测定。体外培养小鼠血管平滑肌细胞,转染慢病毒形成CMKLR1基因缺陷性血管平滑肌细胞株,用real-time PCR检测感染慢病毒后细胞中CMKLR1 mR NA水平。结果与结论:基因测序结果表明慢病毒载体构建成功,慢病毒的滴度约为8.7×106 TU/m L,p LVX-sh RNA3对CMKLR1基因的抑制效果最显着(P<0.001)。将p LVX-shR NA3转染至血管平滑肌细胞中形成基因缺陷细胞株,用real time PCR血管平滑肌细胞中CMKLR1 mR NA水平,该细胞株中CMKLR1 mR NA水平显着下降(P<0.001),表明慢病毒介导的si RNA可有效沉默小鼠血管平滑肌细胞中CMKLR1基因的表达。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
缺陷病毒载体论文参考文献
[1].陈婷婷,曹园芝,熊玮,董少红.腺病毒载体构建小鼠趋化素基因缺陷性细胞系[J].中国组织工程研究.2018
[2].熊玮,董少红,张键,李江华,吴美善.慢病毒载体构建小鼠CMKLR1基因缺陷性血管平滑肌细胞系[J].中国组织工程研究.2015
[3].张香玲.新型的基于基因组复制缺陷性仙台病毒载体的免疫原性疫苗平台的评价[J].微生物学免疫学进展.2015
[4].徐春华,刘越,肖利民,邓圣泽,李东海.含HSV-TK基因及IL-18基因复制缺陷型腺病毒载体的构建和鉴定[J].中国医学创新.2014
[5].刘梦颖,韩舟,吴海银,陈晨,沈芯如.一种活性缺陷型小鼠端粒酶催化亚基过表达慢病毒载体的构建及功能初步测定[J].南京医科大学学报(自然科学版).2014
[6].林晓亮,姜云波,赵倩,殷小涛,田仁礼.携带p53AIP1基因的重组复制缺陷型腺病毒载体的构建、鉴定及其在人宫颈癌细胞系HeLa中的表达[J].细胞与分子免疫学杂志.2013
[7].卓萌,唐余燕,余永胜,周丽芹,潘庆春.抗TNFα单链抗体复制缺陷型腺病毒载体的构建及表达[J].世界华人消化杂志.2013
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[9].郝春秋,彭梅娟,谢玉梅,周云,魏欣.结缔组织生长因子基因RNA干扰复制缺陷型腺病毒载体的构建及鉴定[J].生物技术通讯.2013
[10].翟登月,魏宁,朱幼玲,吴波娜,姜永军.四环素调控复制缺陷性疱疹病毒载体介导LacZ基因在原代培养神经元中的表达[J].临床和实验医学杂志.2011