导读:本文包含了苏云金芽孢杆菌工程菌论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:黑色素,苏云金芽孢杆菌,紫外保护,活性检测
苏云金芽孢杆菌工程菌论文文献综述
胡海艳,黄雅莉,梁志洲,周世宁[1]（2011）在《工程菌所产黑色素对苏云金芽孢杆菌毒力的保护作用》一文中研究指出对基因工程菌Escherichia.coli fss6所产黑色素进行了紫外保护研究。结果表明:添加黑色素的苏云金芽孢杆菌(Bt)经紫外照射后菌体的存活率是不加黑色素菌体的8倍;黑色素能有效保护Bt的晶体毒素蛋白免受紫外照射的降解;随着被照射菌体中黑色素浓度的增加,其杀虫活性也相应提高。(本文来源于《农药学学报》期刊2011年02期）
王明跃,张小平[2]（2006）在《苏云金芽孢杆菌工程菌BM B_(20-4)的杀虫晶体蛋白检测及毒力测定》一文中研究指出苏云金芽孢杆菌的杀虫晶体蛋白由单基因编码,经过遗传操作,构建成BM B 20-4工程菌.本研究对工程菌BM B 20-4进行了杀虫晶体蛋白检测和发酵液毒力测定.结果表明:工程菌BM B 20-4杀虫晶体蛋白质含量比天然菌株提高44%,毒力效价显着提高,对小菜蛾提高了0.72倍,对棉铃虫提高了0.75倍.(本文来源于《阜阳师范学院学报(自然科学版)》期刊2006年04期）
毛文杰[3]（2006）在《苏云金芽孢杆菌杀虫基因的克隆和杀虫假单胞工程菌的构建》一文中研究指出由于苏云金杆菌在使用过程中存在的一些不足及害虫对其抗药性的产生,人们逐渐转向利用生物技术将Bt的杀虫基因转入其它更有优势的微生物中。本研究从本实验室分离的野生型苏云金芽孢杆菌中克隆有特异杀虫活性的vip3A基因和cry1Ba基因,并将其转入到植物根际有益微生物中,构建杀虫防病的工程菌。 利用PCR-RFLP方法对本实验室分离的苏云金芽孢杆菌WZ-7和sfw12菌株进行了基因型鉴定。鉴定结果表明,WZ-7中含有cry1Ab和vip3A,sfw12中含有cry1Ba基因。 根据vip3A和cry1Ba的基因序列分别设计引物,利用PCR方法从本实验室分离的苏云金芽孢杆菌WZ-7和sfw12菌株中扩增得到vip3A-WZ7全长序列及cry1Ba-sfw12片段。将PCR产物连入T-载体并测序,得到的vip3A-WZ7基因序列翻译为Vip3A-WBS蛋白一级序列,利用NCBI在线的Blast软件进行同源性分析。结果表明,该蛋白与已报道的10余个Vip3A蛋白同源性达99%以上,与其它蛋白无同源性。同样方法证实Cry1Ba-sfw12与Cry1Ba蛋白的同源性达99%。 将克隆的vip3A-WZ7基因插入携带Tn5转座子的pAG408自杀性质粒,并将其转化到大肠杆菌S17-1(λ_p),通过接合转移,将vip3A基因整合到假单胞菌染色体上,根据发光强度,并结合生物测定,挑选出杀虫活性高的Pshvip9接合子,PCR鉴定表明vip3A基因已经插入假单胞菌染色体。生物测定结果表明,工程菌Pshvip9对棉铃虫及甜菜夜蛾有较好的胃毒活性,LC_(50)分别为1.02x10~8 cells/mL和6.95x10~7 cells/mL。 室内平板抑菌实验表明,其对黄瓜枯萎病菌和小麦根腐病菌及大肠杆菌和Bt等有较强的抑菌作用,与出发菌株差别不大。对工程菌生长曲线的测定表明18h左右就可达到稳定期。对该工程菌同时在灭菌土和自然土中进行了小麦根部定殖试验,结果表明,在20天左右时能达到3～4x10~6CFU/g土壤。以上结果表明,将vip3A基因导入野生型假单胞菌PHB158中,并未使其抑菌、定殖等功能发生改变。将该工程菌不同培养基条件下培养,结果表明其在BPY培养基中生长最好。(本文来源于《河北农业大学》期刊2006-06-12）
王广君[4]（2005）在《高效广谱苏云金芽孢杆菌工程菌的构建及杀虫晶体蛋白的研究》一文中研究指出苏云金芽孢杆菌(Bt)是目前世界上应用范围最广的杀虫微生物,但是传统的Bt菌株存在杀虫谱窄、毒力低等缺点,因此必须通过生物技术手段构建高效广谱的Bt工程菌来满足生产的需要。苏云金芽孢杆菌的杀虫活性主要来源于其在芽孢形成过程中产生的杀虫晶体蛋白,杀虫晶体蛋白结构和作用机制是目前国内外研究的一个热点;在了解杀虫晶体蛋白结构与功能关系的基础上,可以通过分子设计来改变杀虫晶体蛋白的毒力和杀虫谱,为转基因植物或微生物提供新的基因来源。 本论文围绕苏云金芽孢杆菌工程菌的构建、杀虫晶体蛋白的分子设计、杀虫晶体蛋白的体外结晶等方面进行了一系列的研究,主要内容包括: 将对鞘翅目害虫高毒力的cry3Aα7基因分别通过电击转化到对鳞翅目害虫高毒力的野生菌株G03和UV17中,得到工程菌G033A和UV173A。室内生测结果表明两株工程菌对鞘翅目害虫和鳞翅目害虫都表现出很高的毒力,其中G033A对鞘翅目害虫榆蓝叶甲和马铃薯甲虫的LC_(50)分别为3.10 mg/ml、0.40 mg/ml,对鳞翅目害虫甜菜夜蛾和小菜蛾的LC_(50)分别为40.30 μg/ml、8.13μg/ml;UV173A对榆蓝叶甲和马铃薯甲虫的LC_(50)分别为1.47 mg/ml、0.31 mg/ml,对小菜蛾的LC_(50)为18.03 μg/ml。工程菌在田间对鞘翅目害虫和鳞翅目害虫也表现出了很好的防效。在用量为40 g/亩时,G033A对甜菜夜蛾的防效达67.9%;在使用浓度为1g/L时,G033A对马铃薯甲虫的防治效果为89.2%,UV173A为94.6%;接近化学农药的防治水平,具有良好的开发和应用前景。 通过监测工程菌在田间的残留、扩散以及对非靶标昆虫的影响,完成了工程菌中间试验和环境释放阶段的安全性评价。评价结果表明工程菌G033A和UV173A在田间存活时间较短,扩散范围较小,对草蛉、瓢虫等非靶标昆虫种群无不良影响。因此认为这两种工程菌使用安全,对于生态环境不会造成有害影响。 为了确定Cry1Ba3的最小活性区,通过PCR扩增获得9种不同长度的cry1Ba3基因片段,分别在大肠杆菌BL21中表达。采用浸叶法测定了相应蛋白片段对小菜蛾的杀虫活性,最终将Cry1Ba3蛋白对小菜蛾的最小活性区确定在第22-655位氨基酸之间。 通过重迭引物PCR得到由Cry1Ca蛋白Domain Ⅰ分别与Cry1Aa、Cry1Ab、Cry1Ac Domain Ⅲ组合的嵌合基因cry1C1C1Aa、cry1C1C1Ab、cry1C1C1Ac,在大肠杆菌BL21中进行表达;提取叁种蛋白,对棉铃虫和甜菜夜蛾进行了杀虫毒力测定。结果表明,与Cry1Ca蛋白相比,叁种嵌合蛋白对对棉铃虫的毒力力有不同程度的提高,但对甜菜夜蛾的毒力都有所降低。 通过高效液相色谱纯化了对小菜蛾高毒力的Cry1Ba3-3H蛋白以及对甜菜夜蛾高毒力的营养期杀虫蛋白Vip3A。采用气相扩散法,探索了两种蛋白体外结晶的条件,最终分别得到了方形的Cry1Ba3-3H蛋白晶体和正八面体形的Vip3A蛋白晶体。这些结果将为这两种蛋白的结构与功能解析奠定了基础。(本文来源于《中国农业科学院》期刊2005-06-01）
刘汉军[5]（2005）在《hwtx-Ⅰ基因四价体表达载体构建及苏云金芽孢杆菌工程菌株研究》一文中研究指出苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)编码杀虫晶体蛋白(Insecticidal Crystal Proteins,ICPs)的cry基因中cry1类基因的启动子是一类芽孢依赖型启动子,从芽孢形成T_2期开始被激活。虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅰ(Huwentoxin-Ⅰ,简称Hwtx-Ⅰ)是虎纹捕鸟蛛分泌产生的一类乙酰胆碱受体阻断剂,作用于神经肌肉的连接处,能阻断神经肌肉的信号传导,其溶液构象为叁对二硫键和叁股反平行β折叠的抑制剂胱氨酸结构模体。同时,其生物学活性表明也是一种N型Ca~(2+)离子通道的阻断剂。本研究根据已知的Hwtx-Ⅰ氨基酸序列,按照苏云金芽孢杆菌偏爱密码,将氨基酸序列转换成核苷酸序列,并将其基因单价体分片段化学合成。将合成片段磷酸化并退火连接。同时设计一段含有核酸内切酶Spe Ⅰ和Xba Ⅰ位点的衔接子linker,利用这两种内切酶酶切后的粘性末端互补这一特性,可将hwtx-Ⅰ基因头尾串联形成四价体。 带有Bt杀虫晶体蛋白基因cry1Ac的质粒pUA19经内切酶BsaBI和MunI酶切后,去掉了cry1Ac基因的ORF,只剩下cry1Ac基因的上游启动子序列和下游终止子序列。将设计的linker片段插入此位点,得到pUAK质粒,利用内切酶SpeⅠ和Xba Ⅰ双酶切后将已退火连接好的hwtx-Ⅰ基因插入其中,得到质粒pUKH1。将质粒pUKH1分别用SalⅠ/SpeⅠ 和Sal Ⅰ/Xba Ⅰ双酶切回收其中目的片段,连接后得到质粒pUKH2,将此质粒分别用SalⅠ/JpeⅠ和Sal Ⅰ/Xba Ⅰ双酶切回收其中目的片段,连接后得到质粒pUKH4。将pUKH4用Sal Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切回收1.1kb片段,与同样双酶切的大肠杆菌和苏云金芽孢杆菌的穿梭载体pHT304连接得到表达质粒pXH4。将pXH4分别电转入苏云金芽孢杆菌无晶体突变株XBU001和野生型菌株Bt4.0718中,Hwtx-Ⅰ四价体在苏云金芽孢杆菌转化子中得到表达,蛋白质定量分析显示目的蛋白摇瓶发酵表达量达到14.0mg/L。目的蛋白在XBU001的重组子UH04中占可溶性蛋白总量的11.48%,在Bt4.0718的重组子Bh4-4中占可溶性蛋白总量的4.51%。生测结果显(本文来源于《湖南师范大学》期刊2005-04-01）
高梅影,戴顺英,彭可凡[6]（2004）在《重组广谱苏云金芽孢杆菌工程菌生态安全性研究之一:工程菌的重组质粒向同生境中其它芽孢杆菌的转移》一文中研究指出本文采用特异性引物的PCR技术,研究了苏云金芽孢杆菌工程菌Lcj—12的重组质粒pHT304/lAc10在实验室和田间使用环境中向同生境其它芽孢杆菌转移的情况。结果表明,Lcj—12在实验室中与其它芽孢杆菌混合培养和Lcj—12的培养液与其它芽孢杆菌的培养液在土壤中混合时,Lcj—12中含crylAc杀虫基因及氨苄青霉素和红霉素抗性基因的重组质粒pHT304/lAc10可向同生境中的其它芽孢杆菌转移,其向枯草芽孢杆菌Bsu9501菌株转移的频率最高,分别达38.8%和20.6%;而在田间应用环境中未检测到Lcj—12的重组质粒向同生境中其它芽孢杆菌转移,同时工程菌Lcj—12在环境中的残留率较低。(本文来源于《武汉市首届学术年会论文集》期刊2004-10-01）
高梅影,戴顺英,彭可凡[7]（2004）在《苏云金芽孢杆菌工程菌的重组质粒向其他芽孢杆菌的转移》一文中研究指出采用特异性引物的PCR技术研究了苏云金芽孢杆菌工程菌LCj-12的重组质粒pHT304/1Ac10在实验室和田间使用环境中向同生境其他芽孢杆菌转移的情况。结果表明,LCj-12在实验室中与其他芽孢杆菌混合培养和LCj-12的培养液与其他芽孢杆菌的培养液在土壤中混合时,Lcj-12中含cry1Ac杀虫基因及氨苄青霉素和红霉素抗性基因的重组质粒pH/304/1Ac10可向同生境中的其他芽孢杆菌转移,其向枯草芽孢杆菌Bsu9501菌株转移的频率最高,分别达38.8%和20.6%;而在田间应用环境中未检测到LCj-12的重组质粒向同生境中其他芽孢杆菌转移,同时工程菌Lcj-12在环境中的残留率较低。(本文来源于《生命科学与微生物专辑》期刊2004-06-30）
吴燕榕[8]（2004）在《苏云金芽孢杆菌vip3A基因及杀虫防病工程菌研究》一文中研究指出营养期杀虫蛋白(vegetative insecticidal proteins，VIPs)是苏云金芽孢杆菌(Bacillus thruingiensis，Bt)在对数生长中期分泌的一类新型杀虫毒蛋白，它对鳞翅目昆虫具有较广谱的杀虫活性。Vip3A蛋白通过诱发细胞凋亡，最终导致昆虫死亡，这种作用机理与Bt杀虫晶体蛋白(insecticidal crystal proteins，ICPs)的作用机理完全不同。本文对实验室保存的菌株进行vip3A基因的检测，克隆了vip3A—WB5基因并在大肠杆菌中得到高效表达。应用生物信息学对vip3A—WB5基因的序列进行了分析。将vip3A—WB5基因导入具有防病、内生和促生功能的野生枯草芽孢杆菌中，构建了多功能工程菌。 用PCR方法对本室保存的菌株筛选获得30株含有vip3A基因。从中挑选对夜蛾科(Noctuidae)害虫具有较高毒力的WB5菌株，进行vip3A基因的克隆和测序。克隆得到的vip3A-WB5基因序列翻译为Vip3A-WB5蛋白一级序列，基因编码789个氨基酸残基。将Vip3A-WB5蛋白的氨基酸序列利用在线的Blast软件进行同源性分析。结果表明，该蛋白与已报道的8个Vip3A蛋白同源性达90％以上，与其它蛋白无同源性。应用NCBI的在线软件(NCBI Conserved Domain Search)分析表明，Vip3A-WB5蛋白具有CBM—4—9功能区，这是一个糖结合位点，这个结合位点与其作用机理密切相关。通过TMHMM2.0(http://genome.cbs.dtu.dk/services/TMHMM-2.0)分析表明，Vip3A-WB5蛋白具有信号肽，是一种跨膜蛋白。在线软件PredictProtein分析表明，Vip3A-WB5蛋白的二级结构中28.96％为螺旋结构，25.69％为折迭结构，45.35％为成环结构，经预测整个蛋白的叁维结构呈紧密的球状。 将克隆的vip3A—WB5基因插入表达载体pET29a(+)，构建重组表达质粒pETvip-WB5，将其转化到大肠杆菌BL21，经1mmol／L IPTG诱导表达89kDa大小的Vip3A蛋白。将Vip3A蛋白对斜纹夜蛾的2龄幼虫进行生物测定，结果表明具有较高的杀虫活性。蛋白可溶性试验表明，目的蛋白大部分可溶，透射电镜观察无包含体存在，其原因有待进一步研究。在自然条件下进行了目的蛋白的纯化，并将纯化的蛋白对家兔进行免疫而制备多克隆抗体。福建农林大学博士学位论文 将克隆的v加划一WBS基因插入枯草芽抱杆菌的分泌型表达载体pus186，构建重组分泌型表达质粒pUS186vip一wBS，将其转化到具防病、内生和促生的野生型枯草芽抱杆菌BSZ中。对工程菌、WBS和BsZ室内抑菌、内生和促生作用的实验表明:工程菌和BsZ抑菌活性相当，WBS无抑菌作用;工程菌和BSZ能在白菜体内内生定殖，WBS无内生作用;工程菌、WBS和BSZ菌液浸种白菜15d后鲜重分别增加155.89%、158.54%和145.27%，对白菜苗都具有促生作用，苏云金芽抱杆菌WBS对白菜苗具有促生作用这是一个新发现，有待进一步证实。以上结果表明，将重组分泌型表达质粒pUs 1 86vip一WBS导入野生型枯草芽抱杆菌BSZ中，并未使其抑菌、内生和促生功能发生改变。(本文来源于《福建农林大学》期刊2004-04-01）
沙莉[9]（2004）在《苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）几丁质酶基因的克隆、表达及其工程菌的构建》一文中研究指出从本室保存的Bacillus thuringiensis(Bt)菌株中，筛选出几丁质酶高产菌株WB-7。根据已经在GenBank上登录的Bt几丁质酶基因序列设计1对引物QCL1/QCL2，用PCR方法扩增出的几丁质酶全长基因，将PCR产物直接连接到pMD-18T克隆载体上转入E. coli DH5α中克隆得到2025bp包含氨基酸全序列的几丁质酶基因，并命名为Chi7，在GenBank上的登录注册号为AY074882。利用Blast软件进行该基因的同源性分析，结果表明：chi7基因与已知的Bt和Bc几丁质酶基因都有90％以上的同源性；而与其它细菌的几丁质酶基因同源性不高，如与Bacillus subtilis、Bacillus circulans的几丁质酶基因的同源性分别为50％、52％的。将chi7基因序列翻译为Chi7蛋白质氨基酸序列，该基因编码674个氨基酸残基。利用蛋白质分析软件对Chi7蛋白进行功能结构和空间结构分析，结果表明：经在线的Smart软件进行氨基酸的序列分析，推导出的Chi7蛋白质一级结构功能域包含有：7-26信号肽区、chiA几丁质酶催化区、485-557类纤连蛋白Ⅲ型区、579-672几丁质结合区4个结构功能域；经跨膜区分析在线软件TMHMM2.0分析，表明Chi7蛋白前端的信号肽是跨膜信号，同时SignalP分析也表明：Chi7蛋白的成熟加工剪切位点在第32-33的Ala-Asp间。用在线蛋白质分析软件ExPASy Proteomics tools进行chi7蛋白结构分析，结果表明：在氨基酸残基200-300间有可能存在coiled coil区域，整个蛋白质中没有亮氨酸拉链结构；在蛋白的二级结构中有19.56％的螺旋结构、25.78％的折迭结构、54.67％的成环结构；整个蛋白质的叁维结构呈紧密的球状。构建pBluescript SK原核表达载体在E.coli中检测到Bt几丁质酶活性，但是表达的Bt几丁质酶活性不高。 将Bt chi7基因连接到枯草芽孢杆菌(Bs)表达载体pUS186，电激转化到Bs菌株QB1098中筛选重组质粒pUS-chi7。将重组质粒pUS-chi7电激转化到Bs受体菌株BS-2中，用PCR检测重组质粒pUS-chi7是否导入，最后筛选得到5株含有Bt几丁质酶基因BS-2工程菌。(本文来源于《福建农林大学》期刊2004-04-01）
郭延奎,邵宗泽,喻子牛[10]（2003）在《苏云金芽孢杆菌工程菌芽孢形态发生的特征》一文中研究指出苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白的表达及晶体的形成与芽孢的发育有关。本文利用电子显微镜观察了苏云金芽孢杆菌工程菌不同发育时期芽孢的形态结构特点。结果表明 ,整个芽孢的发育过程依次经历了前芽孢、双层膜芽孢、初生芽孢壁形成、芽孢衣与孢外壁形成以及皮层形成等过程。这与一般芽孢的发育过程不同 ,即芽孢衣与孢外壁的形成时期早于皮层 ;另外发现孢外壁包被有膜结构 ,这表明杀虫晶体蛋白的超量表达可能会影响到芽孢的发育。(本文来源于《电子显微学报》期刊2003年04期）
苏云金芽孢杆菌工程菌论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
苏云金芽孢杆菌的杀虫晶体蛋白由单基因编码,经过遗传操作,构建成BM B 20-4工程菌.本研究对工程菌BM B 20-4进行了杀虫晶体蛋白检测和发酵液毒力测定.结果表明:工程菌BM B 20-4杀虫晶体蛋白质含量比天然菌株提高44%,毒力效价显着提高,对小菜蛾提高了0.72倍,对棉铃虫提高了0.75倍.
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
苏云金芽孢杆菌工程菌论文参考文献
[1].胡海艳,黄雅莉,梁志洲,周世宁.工程菌所产黑色素对苏云金芽孢杆菌毒力的保护作用[J].农药学学报.2011
[2].王明跃,张小平.苏云金芽孢杆菌工程菌BMB_(20-4)的杀虫晶体蛋白检测及毒力测定[J].阜阳师范学院学报(自然科学版).2006
[3].毛文杰.苏云金芽孢杆菌杀虫基因的克隆和杀虫假单胞工程菌的构建[D].河北农业大学.2006
[4].王广君.高效广谱苏云金芽孢杆菌工程菌的构建及杀虫晶体蛋白的研究[D].中国农业科学院.2005
[5].刘汉军.hwtx-Ⅰ基因四价体表达载体构建及苏云金芽孢杆菌工程菌株研究[D].湖南师范大学.2005
[6].高梅影,戴顺英,彭可凡.重组广谱苏云金芽孢杆菌工程菌生态安全性研究之一:工程菌的重组质粒向同生境中其它芽孢杆菌的转移[C].武汉市首届学术年会论文集.2004
[7].高梅影,戴顺英,彭可凡.苏云金芽孢杆菌工程菌的重组质粒向其他芽孢杆菌的转移[C].生命科学与微生物专辑.2004
[8].吴燕榕.苏云金芽孢杆菌vip3A基因及杀虫防病工程菌研究[D].福建农林大学.2004
[9].沙莉.苏云金芽孢杆菌（Bacillusthuringiensis）几丁质酶基因的克隆、表达及其工程菌的构建[D].福建农林大学.2004
[10].郭延奎,邵宗泽,喻子牛.苏云金芽孢杆菌工程菌芽孢形态发生的特征[J].电子显微学报.2003