导读:本文包含了外结构论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:淀粉样前体蛋白,胞外结构域,突变体,信号肽
外结构论文文献综述
张鹏,崔冬冰,舒莉萍,范安然[1]（2019）在《叁种淀粉样前体蛋白胞外结构域突变体的建立及功能验证》一文中研究指出目的:构建3种淀粉样前体蛋白(APP)胞外结构域突变体细胞株并进行功能的初步验证。方法:通过Touch down PCR的方法扩增E1结构域缺失的APP695片段以及E1和信号肽双缺失的片段,采用融合PCR的方法扩增E2结构域缺失的APP695片段,并将获得的片段连接于pCMV-APP695载体中得到APP胞外结构域突变体质粒;质粒转染CHO细胞后,添加G418筛选表达APP胞外结构域突变体的单克隆细胞系;通过Western blot方法检测APP胞外结构域突变体的表达及胞外分泌水平,分析信号肽对该突变体分泌的影响。结果:成功获得了APP的E1结构域突变体、E1/信号肽双缺失突变体以及E2结构域突变体细胞株,且APP突变体可以正常表达和分泌,但是信号肽缺失后APP突变体可以表达、而不能分泌。结论:APP的E1和E2结构域对APP蛋白的胞外分泌无影响。(本文来源于《贵州医科大学学报》期刊2019年06期）
章乔艳,邵冯金,俞向前,谭勋[2]（2018）在《禽CD133胞外结构域原核表达及多克隆抗体的制备》一文中研究指出为构建禽CD133胞外区原核表达载体,制备抗CD133多克隆抗体,在生物信息学分析的基础上,选取禽CD133蛋白N端胞外区一段由89个氨基酸残基构成的肽段作为候选抗原,通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)扩增其编码基因,亚克隆至pET-28a(+)表达载体,转化大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞,用异丙基β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside, IPTG)诱导表达;目的蛋白经镍柱纯化后免疫BALB/c小鼠,制备抗血清。结果表明,构建的原核表达载体可高效表达CD133重组蛋白。蛋白质印迹法(Westernblotting)证实鼠抗禽CD133血清可特异性识别CD133重组蛋白。免疫组化染色结果显示,该抗血清可用于检测组织中的CD133阳性细胞。上述结果表明,利用禽CD133蛋白N端胞外结构域重组蛋白为抗原成功制备出了抗禽CD133多克隆抗体。(本文来源于《浙江大学学报(农业与生命科学版)》期刊2018年06期）
郭鑫鑫[3]（2017）在《细胞毒性T细胞抗原4胞外结构域的高效表达与纯化》一文中研究指出背景针对自身免疫性疾病以及恶性肿瘤的治疗尚无疗效较好且副作用较少的方法或药物,近年来的研究表明,在上述疾病的发生、发展过程中,抗原特异性T细胞起一定作用。CTLA4作为一种主要的共刺激信号负调节分子,具有阻断T细胞活化的作用;作为CTLA4的单克隆抗体则具有激活T细胞的作用,二者通过对T细胞的调控作用,干预机体免疫微环境,开辟了对上述疾病的新的治疗途径。目的本研究目的在于获得高纯度的细胞毒性T淋巴细胞相关分子4胞外结构域(extracellular domain of cytotoxic T-lymphocyte-associated protein 4,ex CTLA4)。通过构建ex CTLA4重组表达质粒,并在大肠杆菌Transetta(DE3)中进行重组蛋白的表达。以期获得高纯度的ex CTLA4重组蛋白,为研究其生物学功能或制备人源化的CTLA4单克隆抗体提供基础。方法1.构建原核表达质粒p ET-28a-ex CTLA4。根据人源CTLA4基因序列由公司合成胞外域序列,以此序列为模板,扩增后并构建到p ET-28a载体的相应酶切位点。2.诱导表达ex CTLA4重组蛋白。将测序正确的表达质粒转化至大肠杆菌Transetta(DE3)中,在诱导物IPTG浓度为0.5m M、诱导温度为37°C时,诱导菌体表达蛋白,培养4h后收集菌体,SDS-PAGE检测菌体中的重组蛋白有无表达。3.优化ex CTLA4重组蛋白表达条件。从诱导物浓度IPTG,诱导温度,诱导时间叁方面诱导条件进行优化。并在此基础上,设计叁水平叁因素正交试验,选择最优表达条件。4.纯化ex CTLA4重组蛋白。选择最优条件诱导目的蛋白表达,收集菌体后,超声破碎菌体并收集包涵体,先用低浓度尿素(2M)洗去大部分背景蛋白后,再用高浓度尿素(8M)溶解包涵体,进一步用镍离子亲和层析方法得到高纯度ex CTLA4。5.梯度稀释法复性ex CTLA4重组蛋白。用复性缓冲液梯度稀释样品,并经过透析可将变性的重组蛋白复性。6.检测重组蛋白ex CTLA4的生物学活性。利用CTLA4的配体B7-1以及外周血单核细胞(PBMC),通过相应ELISA试剂盒检测ex CTLA4的生物学活性。结果1.成功构建表达质粒p ET-28a-ex CTLA4,测序后序列与已知序列经BLAST比对完全一致。2.成功诱导重组蛋白的表达,获得了ex CTLA4在Transetta(DE3)中的最佳诱导条件,即在0.75m M IPTG、25°C下,诱导6h能得到最佳表达,但重组蛋白以包涵体形式存在。3.通过镍离子亲和层析纯化及复性获得高纯度重组蛋白,经Western blot鉴定为CTLA4。4.经过ELISA检测鉴定,纯化的ex CTLA4具有生物学活性。结论本研究构建了ex CTLA4重组表达质粒,获得了ex CTLA4重组蛋白在大肠杆菌中的最佳表达条件以及最佳优化结果,得到了具有生物学活性的重组蛋白,为该蛋白的应用以及后期的抗体筛选奠定了基础。(本文来源于《新乡医学院》期刊2017-03-01）
郑蓉,翟林[4]（2016）在《产前超声诊断双胎之一永存动脉干合并心外结构畸形1例》一文中研究指出孕妇,35岁,孕1产2,临床孕周:22W2D,超声检查提示:宫腔内可见两胎儿,两胎儿间可见羊膜分隔,左侧胎儿胎位:臀位,双顶径:5.3cm头围:16.4cm股骨长:3.6cm腹围:16.3cm颅内结构未见明显异常;膀胱可显示;脐动脉:2根;胃泡未显示;胎盘位于子宫后壁,回声均匀。胎心胎动可见;胎儿叁血管切面无法正常显示,室间隔回声中断,约3.1mm,可见一大血管由左右心室发出。心率:150bpm S/D:4.1羊水深度:(本文来源于《中国超声医学工程学会第六届全国妇产超声医学学术大会论文汇编》期刊2016-12-02）
栾明春[5]（2016）在《CD82胞外结构域模拟肽段对肿瘤细胞转移的影响及作用机制研究》一文中研究指出CD82是抑癌基因KAI1编码的细胞膜糖蛋白,属于四跨膜蛋白超家族(transmembrane 4 superfamily or tetraspan superfamily,TM4SF)成员之一,其主要生物学功能是参与细胞的聚集、粘附、迁移等。CD82在正常机体组织广泛表达,在肿瘤组织表达下降。大量研究结果表明,CD82可抑制多种组织来源的肿瘤细胞在体内的转移,是广谱的肿瘤转移抑制因子。CD82抑制肿瘤转移机制的研究日益受到重视,但其详细分子机理仍不完全清楚。CD82由胞外区、跨膜区和胞内区叁部分组成,跨膜区为四个疏水的肽段,胞外区形成一个小环(small extracellular loop,SEL)和一个大环(large extracellular loop,LEL),胞内区包括N-端、C-端和一个细胞内环。分子结构是蛋白发挥功能的基础,胞外区结构域是CD82直接与细胞外基质分子及其它细胞相互识别、结合及相互作用的部位,是CD82发挥生理功能的重要结构基础。对CD82蛋白胞外区结构域功能进行研究,可阐明其抑制肿瘤转移的分子机理。目前,对CD82的胞外区功能研究较少,尤其是胞外区SEL功能尚不明确。为研究CD82胞外结构域在CD82抑制肿瘤转移中的作用,本论文采用基因重组技术和化学合成方法得到了CD82-LEL序列模拟肽和CD82-SEL序列模拟寡肽,进行了以下几个内容的研究。一、CD82胞外区序列模拟肽段对肿瘤细胞迁移的影响。CD82抑制肿瘤细胞转移的主要机理是抑制细胞的运动和迁移能力。采用划痕法、Boyden小室培养法对CD82-LEL和CD82-SEL序列模拟肽段体外抑制肿瘤细胞迁移作用进行了观察。结果:采用基因重组技术和化学合成方法获得了CD82-LEL序列模拟肽和CD82-SEL序列模拟寡肽。CD82-LEL序列模拟肽对SW620肿瘤细胞的体外迁移和侵袭无明显抑制作用,而CD82-SEL序列模拟寡肽对SW620肿瘤细胞的体外迁移和侵袭有抑制作用,处理浓度越大抑制作用越强。结论:cd82-lel序列模拟肽在体外不能抑制细胞的运动和迁移,而cd82-sel序列模拟寡肽抑制体外培养的细胞的运动和迁移,随处理浓度增大抑制作用增强。说明,cd82-sel可能是cd82抑制肿瘤转移的重要功能结构域。二、cd82胞外区序列模拟肽段对肿瘤细胞与不同细胞外基质分子识别、粘附的影响。cd82胞外结构域直接参与细胞与细胞外基质间的识别、结合,因此,是cd82参与细胞迁移、运动的重要结构,也是其肿瘤转移抑制作用的重要功能部位。在这部分,我们观察了cd82-lel序列模拟肽和cd82-sel序列模拟寡肽对sw620肿瘤细胞与层粘连蛋白(laminin,ln)、纤粘连蛋白(fibronectin,fn)、基质胶(matrigel)粘附的影响。结果:cd82-lel序列模拟肽对sw620肿瘤细胞与ln、fn、matrigel的粘附无明显抑制作用,而cd82-sel序列模拟寡肽对sw620肿瘤细胞与ln、fn、matrigel的粘附有明显抑制作用,且其抑制能力与处理浓度呈正相关。结论:cd82-lel序列模拟肽不能独自参与肿瘤细胞与细胞外基质的识别、粘附,或由失去糖链结构而致;cd82-sel序列模拟寡肽具有抑制肿瘤细胞与细胞外基质的识别、粘附作用,这可能与cd82-sel序列模拟寡肽抑制肿瘤细胞的迁移运动有关。叁、cd82-sel序列模拟寡肽影响整合素与细胞外基质分子之间的相互作用。分布于细胞表面的粘附分子中,只有整合素的配体是细胞外基质分子,包括fn、ln、玻璃粘连蛋白(vitronecin,vn)和胶原蛋白(collagen,ca)等。所以只有整合素才是介导细胞与细胞外基质接触结合的粘附分子。有文献报道,cd82可抑制整合素与ln的结合,并发现cd82在细胞表面常与整合素、生长因子受体及其他四跨膜家族蛋白结合成复合体而发挥作用。为探讨cd82-sel序列模拟寡肽抑制细胞的运动和迁移以及抑制细胞与细胞外基质粘附的分子机制,我们对整合素在cd82-sel序列模拟寡肽抑制肿瘤细胞与细胞外基质的识别、粘附过程中的作用进行了初步研究。结果:(1)采用westernblot技术检测了不同类型整合素亚基在sw620肿瘤细胞的表达图谱。结果显示,sw620细胞可表达α3、α4、α5、α6、β1、β3亚基。(2)细胞外基质分子ln刺激sw620细胞整合素α3、α6、β1亚基的表达,FN刺激SW620细胞整合素α4、α5、β1亚基的表达,Matrigel刺激SW620细胞整合素α3、β1亚基的表达。(3)CD82-SEL序列模拟寡肽可分别抑制LN、FN和Matrigel刺激的SW620细胞整合素α3、α4、α5、α6、β1亚基的表达。其抑制作用随处理浓度增加而增强。(4)整合素α3、α6、β1亚基可与LN结合,α4、α5、β1亚基可与FN结合,α3、β1亚基可与Matrigel结合。(5)CD82-SEL序列模拟寡肽抑制整合素亚基与细胞外基质分子LN、FN、Matrigel识别、结合。结论:CD82-SEL序列模拟寡肽既可抑制细胞外基质分子刺激SW620细胞整合素亚基的表达,又可抑制整合素与细胞外基质分子LN、FN、Matrigel直接结合。从而抑制细胞对细胞外基质分子的识别粘附。四、CD82-SEL序列模拟寡肽对SW620细胞粘着斑激酶酪氨酸残基磷酸化的影响。粘着斑激酶(FAK)是整合素所介导的细胞信号转导通路中的关键蛋白激酶。整合素与其配体结合以及粘着斑的形成使FAK磷酸化活化,调节细胞的生长、增殖、分裂及迁移运动。为探讨CD82-SEL序列模拟寡肽对SW620细胞运动、迁移的抑制机理,我们进一步观察了CD82-SEL序列模拟寡肽对SW620细胞FAK酪氨酸残基磷酸化的影响。结果:(1)采用Western Blot技术检测了SW620肿瘤细胞FAK各位点酪氨酸残基磷酸化情况。结果显示,SW620细胞FAK的397、407、576、577、861、925位酪氨酸残基均发生磷酸化。(2)细胞外基质分子LN、FN、Matrigel可刺激SW620细胞FAK的397、407和861位酪氨酸残基磷酸化,不影响FAK的925位酪氨酸残基磷酸化。(3)CD82-SEL序列模拟寡肽抑制细胞外基质分子LN、FN、Matrigel对SW620细胞FAK的397、407和861位酪氨酸残基磷酸化的刺激作用。结论:CD82-SEL序列模拟寡肽通过抑制SW620肿瘤细胞整合素与其细胞外配体结合,从而抑制FAK的磷酸化活化。可能是其抑制肿瘤细胞迁移运动的重要机制之一。(本文来源于《大连医科大学》期刊2016-04-01）
王超男,孙乐桥,沈雪莲,李少华,李洁[6]（2016）在《人vasorin蛋白胞外结构域单克隆抗体的纯化及应用》一文中研究指出目的:纯化人vasorin(VASN)蛋白胞外结构域的单克隆抗体并鉴定。方法:用表达人VASN蛋白胞外结构域单克隆抗体的杂交瘤细胞免疫小鼠,收集腹水,纯化抗体;ELISA检测单抗的特异性和亲和力,Western印迹、免疫共沉淀、细胞免疫荧光等实验检测单抗的特异性与可能的用途。结果:纯化获得2株抗VASN胞外结构域单抗V20和V21,ELISA结果显示二者均特异性强、亲和力高;Western印迹显示2株单抗均可结合Hep G2细胞中的VASN蛋白,以V20为佳;免疫共沉淀实验结果显示V21能够钓取Hep G2细胞中的VASN蛋白及细胞培养上清中的分泌型VASN;免疫荧光实验结果显示V21能与Hep G2细胞的VASN蛋白结合。结论:纯化获得2株抗人VASN胞外结构域单抗,为进一步研究VASN蛋白的生物学功能提供了实验工具。(本文来源于《生物技术通讯》期刊2016年02期）
牛纯青,高香,罗金华,李伟,刘秋萍[7]（2016）在《重组人死亡受体6胞外结构域的制备及与淀粉样前体蛋白N端片段相互作用鉴定》一文中研究指出人淀粉样前体蛋白氨基端切割片段(a cleaved amino-terminal fragment of amyloid precursor protein,N-APP)结合死亡受体6(Death receptor-6,DR6),会触发神经元和轴突依赖天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶的自我毁灭过程,从而导致阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)的发生。为了在分子水平上研究N-APP-DR6诱导神经元退化途径,制备大量纯化的重组DR6胞外结构域以及鉴定NAPP和DR6胞外结构域的结合位点是关键。从甲醇毕赤酵母中成功表达并纯化了重组DR6胞外域(aa42-349),得率高达90 mg/L。为了验证DR6和NAPP的相互作用关系,构建谷胱甘肽转移酶-死亡受体6(GST-DR6)(aa42-349)融合蛋白原核表达质粒,转化大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)BL21,表达融合蛋白GST-DR6(aa42-349),同时纯化得到DR6的配体NAPP,GST pull-down结果显示DR6与NAPP能够在细胞外发生相互作用。(本文来源于《中国生物工程杂志》期刊2016年02期）
罗银珠,贺现辉,周素明,冯赛祥,姚文凤[8]（2015）在《HPS OmpP2膜外结构环诱导PAMs IL-8 mRNA转录的研究》一文中研究指出OmpP2是副猪嗜血杆菌的致病因子,也是其重要的免疫原性蛋白。为探明OmpP2蛋白8个膜外结构环(Loop)在HPS感染过程中的促炎作用,本试验以猪肺泡巨噬细胞(Porcine Alveolar Macrophages,PAMs)为细胞模型,以HPS血清5型标准菌株OmpP2蛋白、HPS血清5型标准菌株全菌体及牛血清白蛋白(BSA)作为参照,通过Real-Time PCR的方法研究OmpP2 8个膜外结构环诱导PAMs产生炎性应答的作用。结果显示,与空白对照组相比,HPS血清5型标准菌株OmpP2蛋白膜外结构环均能诱导PAMs细胞使其促炎细胞因子IL-8的转录水平出现不同程度的上调,表明它们在HPS感染过程中参与了宿主肺泡巨噬细胞的促炎性免疫应答;在8个膜外结构环中,Loop7(2~(-△△Ct)≈8,P<0.05)表现出非常显着的刺激活性,远远高于其他膜外结构环组,并与HPS血清5型标准菌株OmpP2蛋白组的诱导上调幅度(2~(-△△Ct)≈12(P<0.05))最接近,表明Loop7在OmpP2蛋白诱导PAMsIL-8促炎性免疫应答过程中扮演着重要角色,结果暗示Loop7很可能是OmpP2致宿主肺巨噬细胞促炎性功能活跃区。本试验为进一步了解OmpP2蛋白功能及了解HPS诱导宿主细胞炎症反应分子机制提供实验基础。(本文来源于《中国兽医杂志》期刊2015年10期）
高捷[9]（2015）在《大岗山拱坝右岸边坡中倾坡外结构面工程地质特征研究》一文中研究指出本文根据大岗山水电站开挖以后右岸边坡发生的变形开裂现象,结合勘探试验,从地质结构面的角度对边坡失稳的原因和机理进行了分析,确定了边坡失稳破坏的主要控制因素为断层和卸荷裂隙密集带,并对两个控制因素的空间分布、规模和物理力学性质进行了详细研究和阐述,最后对失稳机理和加固措施提出了建议。(本文来源于《水电站设计》期刊2015年02期）
赵小琪[10]（2015）在《中国现代诗学的内结构与外结构关系论》一文中研究指出中国现代诗学本质观,是由众说纷纭、莫衷一是的诗学观念构成的既对立又统一的理论集合体。因而,想要真正有效地揭示中国现代诗学本质观复杂的内涵与形式,就必须考察它的复合关系结构。所谓复合关系结构,是指我们所讲的中国现代诗学是一个具有多重结构关系层次的立体网络体系。这意味着,我们既要重视长期被人所忽视的注重对文学的外部结构关系进行研究的马克思主义诗学与保守主义诗学的对立统一关系,也要仔细探寻注重对文学的内部结构关系进行研究的自律论和注重对文学的外部结构关系进行研究的他律论的相互渗透、相互转化的关系。(本文来源于《上海师范大学学报(哲学社会科学版)》期刊2015年03期）
外结构论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为构建禽CD133胞外区原核表达载体,制备抗CD133多克隆抗体,在生物信息学分析的基础上,选取禽CD133蛋白N端胞外区一段由89个氨基酸残基构成的肽段作为候选抗原,通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)扩增其编码基因,亚克隆至pET-28a(+)表达载体,转化大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞,用异丙基β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside, IPTG)诱导表达;目的蛋白经镍柱纯化后免疫BALB/c小鼠,制备抗血清。结果表明,构建的原核表达载体可高效表达CD133重组蛋白。蛋白质印迹法(Westernblotting)证实鼠抗禽CD133血清可特异性识别CD133重组蛋白。免疫组化染色结果显示,该抗血清可用于检测组织中的CD133阳性细胞。上述结果表明,利用禽CD133蛋白N端胞外结构域重组蛋白为抗原成功制备出了抗禽CD133多克隆抗体。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
外结构论文参考文献
[1].张鹏,崔冬冰,舒莉萍,范安然.叁种淀粉样前体蛋白胞外结构域突变体的建立及功能验证[J].贵州医科大学学报.2019
[2].章乔艳,邵冯金,俞向前,谭勋.禽CD133胞外结构域原核表达及多克隆抗体的制备[J].浙江大学学报(农业与生命科学版).2018
[3].郭鑫鑫.细胞毒性T细胞抗原4胞外结构域的高效表达与纯化[D].新乡医学院.2017
[4].郑蓉,翟林.产前超声诊断双胎之一永存动脉干合并心外结构畸形1例[C].中国超声医学工程学会第六届全国妇产超声医学学术大会论文汇编.2016
[5].栾明春.CD82胞外结构域模拟肽段对肿瘤细胞转移的影响及作用机制研究[D].大连医科大学.2016
[6].王超男,孙乐桥,沈雪莲,李少华,李洁.人vasorin蛋白胞外结构域单克隆抗体的纯化及应用[J].生物技术通讯.2016
[7].牛纯青,高香,罗金华,李伟,刘秋萍.重组人死亡受体6胞外结构域的制备及与淀粉样前体蛋白N端片段相互作用鉴定[J].中国生物工程杂志.2016
[8].罗银珠,贺现辉,周素明,冯赛祥,姚文凤.HPSOmpP2膜外结构环诱导PAMsIL-8mRNA转录的研究[J].中国兽医杂志.2015
[9].高捷.大岗山拱坝右岸边坡中倾坡外结构面工程地质特征研究[J].水电站设计.2015
[10].赵小琪.中国现代诗学的内结构与外结构关系论[J].上海师范大学学报(哲学社会科学版).2015