导读:本文包含了溶剂耐受性论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献,主要关键词:正丁醇耐受性,sRNA,大肠杆菌,恶臭假单胞菌
溶剂耐受性论文文献综述
肖琳[1](2019)在《细菌耐丁醇元件的挖掘及大肠杆菌的溶剂耐受性研究》一文中研究指出微生物对有机溶剂的耐受能力在许多生物燃料有效生产中是至关重要的,并且在非水相催化工业生物技术中也占据关键地位,因此,获得一株溶剂耐受能力较好的宿主菌具有很大的研究价值和工业应用潜力。恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)是常被用于环境生物修复、生物活性物质合成等领域的重要工业微生物。大肠杆菌(Escherichia coli)是一类遗传背景清晰的平台微生物,其较差的有机溶剂耐受性成为工业化应用的瓶颈。本文基于sRNA调节基因及其分子伴侣工程、ARTP随机诱变技术两个研究方向来获得高正丁醇耐受性的大肠杆菌。一方面,通过在E.coli JM109中过表达sRNA调节基因(hfq,fur,sgrs和rpoS)或RNA伴侣基因(hfq,fur,rpoH,stpA,nusB,cspC,cspD,proQ和ffh)来改善对正丁醇的耐受性。在添加8 g·L~(-1)正丁醇的条件下,JM109/pQE80L-rpoS过表达菌株的耐受性相比于对照菌株提高了41%。然后,将rpoS基因与两个分子伴侣基因(secB和groS)共表达。在9.6 g·L~(-1)正丁醇浓度下,菌株JM109/pQE80L-groS-secB-rpoS的正丁醇耐受性是对照菌株的近3倍,并且通过实验发现基因的表达顺序差异会影响菌株的正丁醇耐受性。此外,通过构建rpoS基因随机突变文库,筛选了10000个左右的突变体,最终获得正丁醇耐受性提高1.5倍的突变体C11和1.8倍的突变体D5。另一方面,基于ARTP随机诱变技术对P.putida 901进行诱变,再经过一系列正丁醇浓度下的传代驯化,获得在8 g·L~(-1)的正丁醇添加下耐受性提高了约2倍的突变体,并且其对正丁醇的最大耐受浓度进一步提高到12 g·L~(-1)。通过Illumina HiSeq平台对突变株与对照菌株进行全基因组重测序,结果显示共获得大约1900万对reads,平均读长为150nt,与参考基因组的片段配对率为92.03%,覆盖率为90.34%。共检测到40704个单核苷酸位点变异(Single Nucleotide Variation,SNV),其中纯合的为39319个,杂合的为1385个;存在2153个基因小片段插入/缺失序列(Insert&Deletions,InDels),其中纯合的突变位点数量为1871个,杂合的突变位点数量为282个。最后,将所有突变进行GO/KEGG数据库功能注释,发现突变数目最多的是涉及到代谢相关基因,其中以氨基酸代谢和糖代谢路径相关基因为主。综上,本研究基于sRNA调节基因及分子伴侣工程等基因工程策略,提高了大肠杆菌的正丁醇耐受性,并通过ARTP随机诱变技术与生物信息学分析为筛选大肠杆菌正丁醇耐受性的元件及大肠杆菌宿主菌的表型改造提供了理论依据。(本文来源于《江南大学》期刊2019-06-01)
王艳霞,刘祥胜,王敏,骆健美[2](2015)在《利用分子生物学技术提高微生物有机溶剂耐受性的研究进展》一文中研究指出耐有机溶剂微生物是一类能够在较高浓度有机溶剂中存活或者生长的微生物,其在非水相生物催化等领域表现出巨大的应用优势。与自然筛选、长期驯化和传统诱变等方法相比,利用分子生物学技术获得微生物有机溶剂耐受菌株是一种更为理性且高效的手段。主要综述了近年来利用分子生物学技术对耐性相关功能基因和转录因子进行改造,提高微生物有机溶剂耐受性的研究进展,并展望了有机溶剂耐受菌株的应用前景。(本文来源于《生物技术通报》期刊2015年10期)
张法,韩瑞枝,许国超,董晋军,倪晔[3](2016)在《arcA基因提高大肠杆菌对有机溶剂的耐受性》一文中研究指出【目的】将来源于恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida JUCT1)的基因arc A(编码精氨酸脱亚胺酶)整合到Escherichia coli JM109(DE3)基因组中,以提高该菌对有机溶剂的耐受性。【方法】以P.putida JUCT1的基因组为模板扩增基因arc A,并与p ET-20b(+)连接后导入E.coli JM109(DE3)中,验证该基因提高E.coli JM109(DE3)对有机溶剂的耐受性。利用Red同源重组的方法将arc A整合到E.coli JM109(DE3)基因组中。【结果】E.coli JM109(DE3)/p ET-20b(+)-arc A在添加了2.0%(体积比)环己烷、0.1%(体积比)甲苯、4.0%(体积比)萘烷和0.1%(体积比)丁醇的培养基中培养8 h后,其OD660由初始的0.2分别上升到0.8、0.9、1.8和1.3。将arc A成功整合到E.coli JM109(DE3)基因组中,获得了具有较好遗传稳定性的溶剂耐受E.coli JM109(DE3)宿主菌株。【结论】外源基因arc A能提高大肠杆菌菌株的有机溶剂耐受性,为工业化应用中耐溶剂微生物菌株的构建提供了实验依据和理论基础。(本文来源于《微生物学通报》期刊2016年01期)
胡宏飞[4](2015)在《有机溶剂耐受性酚酸脱羧酶及其在生产4-乙烯基酚类物质上的应用》一文中研究指出本文从地衣芽孢杆菌中克隆得到了一个新的酚酸脱羧酶基因(blpad),并在大肠杆菌中实现了超表达。该基因编码的蛋白(BLPAD)含有166个氨基酸,其理论分子量为19.521KDa,理论等电点为5.02。该重组酶最适温度为37℃,最适pH为6.0。该酶能以对香豆酸、阿魏酸、咖啡酸以及芥子酸为底物,且以它们为底物时的比酶活比例为100:74.59:34.41:0.29。动力学分析发现该酶对这四种底物的Km值分别为1.64,1.55,1.93以及2.45 mM,Vmax值分别为268.43,216.80,119.07以及0.78 IU/mg。与其它酚酸脱羧酶相比,该酶具有突出的有机溶剂耐受性及热稳定性。在两相体系中,在甲苯及环己烷存在条件下,该酶转化对香豆酸及阿魏酸生成4-乙烯基苯酚及4-乙烯基愈创木酚时表现出很高的催化能力。在对香豆酸及阿魏酸浓度达到500 mM时,该酶对它们的转化率分别达到了97.02%和75.02%,且体系中4-乙烯基苯酚及4-乙烯基愈创木酚的终浓度分别达到了58.28 g/L和56.33g/L。固定化酶Ni-NTA-BLPAD在底物浓度为50及100 mM时重复利用五次后,转化率仍能达到90%以上。两相体系的分子毒性研究发现,底物浓度、水相中残余有机溶剂及产物对BLPAD的活性均有一定的抑制作用。在实际应用中,低转化率及低产物浓度一直是利用酚酸脱羧酶生产4-乙烯基酚类物质的不足之处。本实验中的地衣芽孢杆菌酚酸脱羧酶BLPAD所具有的特殊性质使其在应用两相体系生产4-乙烯基酚类物质的工业化应用中有很大的潜力,另外根据对两相体系限制因素及固定化酶的研究结果,我们也可以对两相体系进行一些设计,降低其不良影响,使其更适合工业应用。(本文来源于《南京林业大学》期刊2015-06-01)
钱晓红[5](2014)在《全局转录机制工程提高大肠杆菌有机溶剂耐受性》一文中研究指出微生物细胞作为生物催化剂,有时需要应用于水/有机两相生物催化体系中以提高底物/产物的溶解性并降低其对细胞的抑制作用。然而,有机溶剂对绝大多数微生物细胞具有毒性。本研究以大肠杆菌为模型菌株,利用全局转录机制工程提高其对有机溶剂的耐受性。通过对全局转录因子σ70的编码基因rpoD进行随机突变构建突变文库,结合高通量筛选,最终获得两株σ70优良突变株C9和B1,分别能使大肠杆菌E. coli JM109耐受69%(v/v)环己烷和1.2%(v/v)丁醇。利用二维电泳,在不同有机溶剂条件下比较突变株C9总蛋白表达差异量性,发现有204个蛋白表达量差异在两倍以上,选取了其中43个高丰度蛋白进行MALDI-TOF/TOF分析,成功鉴定了22个蛋白。其中19个蛋白质的表达量上调,涉及核酸代谢、氨基酸代谢、糖代谢、能量代谢、转运蛋白以及外孔膜蛋白。3个蛋白质的表达量下调,分别为二肽结合蛋白、过氧化物酶以及外孔膜蛋白C。为验证这些蛋白对大肠杆菌有机溶剂耐受性的影响,选取了其中的6个蛋白(下调蛋白:二肽载体、过氧化物酶;上调蛋白:3-磷酸甘油醛脱氢酶、琥珀酸脱氢酶铁硫亚基、氨肽酶、假定蛋白YFGM)。在大肠杆菌中将以上6个蛋白的编码基因(dppA、bcp、gapA、sdhB、pepB、yfgM)进行敲除,并对上调基因(gapA、sdhB、pepB、yfgM)进行回补表达。溶剂耐受性试验表明,上调基因gapA、sdhB、pepB能够显着提高E. coli JM109对环己烷的耐受性。其中,3-磷酸甘油醛脱氢酶参与糖酵解过程,生成丙酮酸和ATP;琥珀酸脱氢酶铁硫亚基参与TCA循环,为琥珀酸脱氢酶提供辅酶,产生ATP;这两个蛋白表达量的上调可提高机体ATP能量水平,有利于微生物细胞克服有机溶剂的毒害作用。氨肽酶B蛋白对于提高有机溶剂耐受性的作用机制尚有待研究。经验证下调基因dppA的敲除明显提高了大肠杆菌对环己烷的耐受性,推测原因为该基因编码的蛋白与有机溶剂运输至胞内有关。此外,将本研究前期从Pseudomonas putida JUCT1鉴定获得的有机溶剂耐受性关键基因mmsB(编码3-羟基异丁酸脱氢酶),采用Red同源重组法整合到E. coli JM109的基因组。研究表明:携带了mmsB基因的E. coli JM109(DE3)(ΔendA::mmsB)对多种有机溶剂的耐受性均有显着提高,特别是毒性较高的乙酸丁酯和丁醇。将重组羰基还原酶表达质粒pET-kmCR转化宿主菌E. coli JM109(DE3)(ΔendA::mmsB),成功实现了该重组菌在水相/乙酸丁酯(1:1)两相体系中不对称还原合成(R)-2-羟基-4-苯基丁酸乙酯[(R)-HPBE],转化率较对照菌株E. coli JM109(DE3)/pET-kmCR提高近一倍。本研究为基因工程构建具有优良有机溶剂耐受性的微生物菌株提供了基础和实验依据,对于生物催化和生物能源等重要工业应用领域具有重要意义。(本文来源于《江南大学》期刊2014-06-01)
刘源涛,汪颖,郑昀昀,彭惠[6](2013)在《α-淀粉酶AmyP对有机溶剂和表面活性剂的耐受性》一文中研究指出AmyP是一个来自海洋宏基因组文库的α-淀粉酶。AmyP不仅对log P ow值从4.5到-0.24的各种有机溶剂均具有良好的耐受性,而且能被正辛醇、正辛烷和甲苯提高活性为139%、118%和119%。正辛醇影响AmyP的淀粉水解产物、葡萄糖的含量增加、麦芽叁糖的含量降低。非离子型的表面活性剂Tween-20、Tween-80和Triton X-100存在条件下,AmyP的活性反而有不同程度的提高。但是,AmyP对阴离子型的SDS和阳离子型CTAB的耐受性稍差。结果表明AmyP是一个同时具有有机溶剂和表面活性剂耐受性的新型α-淀粉酶。(本文来源于《微生物学杂志》期刊2013年05期)
王刚,吕熹,李俊,郭明珠,王波[7](2010)在《有机溶剂耐受性脂肪酶的研究进展》一文中研究指出耐有机溶剂脂肪酶在有机溶剂存在下仍保持高酶活,因此在应用中有着其他脂肪酶无法取代的优越性,而具有高活性耐有机溶剂脂肪酶因其具有理论和应用上的双重意义成为了近年来的研究热点。从描述耐有机溶剂脂肪酶生产菌的微生物特征入手,系统阐述了耐脂肪酶的来源、分类、酶学特性及最新进展,概述了耐有机溶剂脂肪酶在食品、洗涤、制药等工业上的应用。(本文来源于《安徽农业科学》期刊2010年02期)
别松涛,王珊,蒋彦洁,路福平,杜连详[8](2009)在《简单节杆菌AS1.94*细胞对有机溶剂的耐受性》一文中研究指出以糖代谢活力保留值R(%)为指标,研究简单节杆菌细胞在15种logPoct不同的有机溶剂中的耐受性。发现游离简单节杆菌细胞和固定化简单节杆菌细胞糖代谢活力保留值与溶剂logPoct值大致都呈"S"型曲线关系。考察了微生物的生长时期、摇床转速、摇床温度、水相介质等对游离简单节杆菌细胞有机溶剂耐受性的影响,结果发现,不同生长时期、摇床转速、摇床温度对简单节杆菌的有机溶剂耐受性有很大的影响,而采用不同的水相介质简单节杆菌的糖代谢活力保留值R(%)没有明显的差别。(本文来源于《中国酿造》期刊2009年07期)
舒正玉,林瑞凤,江欢,张岩峰,黄建忠[9](2009)在《从植物根际定向批量筛选广谱有机溶剂耐受性脂肪酶产生菌》一文中研究指出洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶是一类具有重要工业应用价值的优良脂肪酶之一。根据已公布的洋葱伯克霍尔德菌基因组信息,在传统的洋葱伯克霍尔德菌选择性培养基中添加适量的氨苄青霉素和卡那霉素,从植物根际的土壤中筛选洋葱伯克霍尔德菌。对获得的单菌落再用含罗丹明B指示剂的产脂肪酶定性检测平板检测,从4个根际土壤中筛选到35株产脂肪酶的洋葱伯克霍尔德菌,阳性率达到65%。其中15株对体积浓度为10%的苯、己烷和正庚烷同时具有耐受性。用recA基因分子鉴定上述15株菌种,全部属于洋葱伯克霍尔德菌菌群。(本文来源于《微生物学通报》期刊2009年06期)
侯雪丹,吴培,张毅,许喜林[10](2009)在《有机溶剂耐受性酵母细胞的脂肪酸组成分析》一文中研究指出本文以出发菌株酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、筛选所得乙醇耐受菌株Y-c-8和丙酮耐受菌株B-g-5为研究对象,分析测定了叁种不同菌株的脂肪酸组成,从而证实有机溶剂会引起酵母细胞脂肪酸成分发生改变,主要是合成更多长链不饱和脂肪酸以适应不良环境。本研究为有机溶剂对微生物细胞的毒性机制提供了理论支持,为有机介质中微生物全细胞催化的工业化应用提供了理论支持。(本文来源于《现代食品科技》期刊2009年05期)
溶剂耐受性论文开题报告
(1)论文研究背景及目的
此处内容要求:
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例:
耐有机溶剂微生物是一类能够在较高浓度有机溶剂中存活或者生长的微生物,其在非水相生物催化等领域表现出巨大的应用优势。与自然筛选、长期驯化和传统诱变等方法相比,利用分子生物学技术获得微生物有机溶剂耐受菌株是一种更为理性且高效的手段。主要综述了近年来利用分子生物学技术对耐性相关功能基因和转录因子进行改造,提高微生物有机溶剂耐受性的研究进展,并展望了有机溶剂耐受菌株的应用前景。
(2)本文研究方法
调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
溶剂耐受性论文参考文献
[1].肖琳.细菌耐丁醇元件的挖掘及大肠杆菌的溶剂耐受性研究[D].江南大学.2019
[2].王艳霞,刘祥胜,王敏,骆健美.利用分子生物学技术提高微生物有机溶剂耐受性的研究进展[J].生物技术通报.2015
[3].张法,韩瑞枝,许国超,董晋军,倪晔.arcA基因提高大肠杆菌对有机溶剂的耐受性[J].微生物学通报.2016
[4].胡宏飞.有机溶剂耐受性酚酸脱羧酶及其在生产4-乙烯基酚类物质上的应用[D].南京林业大学.2015
[5].钱晓红.全局转录机制工程提高大肠杆菌有机溶剂耐受性[D].江南大学.2014
[6].刘源涛,汪颖,郑昀昀,彭惠.α-淀粉酶AmyP对有机溶剂和表面活性剂的耐受性[J].微生物学杂志.2013
[7].王刚,吕熹,李俊,郭明珠,王波.有机溶剂耐受性脂肪酶的研究进展[J].安徽农业科学.2010
[8].别松涛,王珊,蒋彦洁,路福平,杜连详.简单节杆菌AS1.94*细胞对有机溶剂的耐受性[J].中国酿造.2009
[9].舒正玉,林瑞凤,江欢,张岩峰,黄建忠.从植物根际定向批量筛选广谱有机溶剂耐受性脂肪酶产生菌[J].微生物学通报.2009
[10].侯雪丹,吴培,张毅,许喜林.有机溶剂耐受性酵母细胞的脂肪酸组成分析[J].现代食品科技.2009