导读:本文包含了植物安全表达载体论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:抗病基因工程,复合侵染,病原物诱导启动子,双边界序列
植物安全表达载体论文文献综述
王丹丹,王荣,唐丽丽,刘爱新,孔维文[1]（2009）在《含双病原物诱导启动子植物安全表达载体的构建》一文中研究指出本研究用来自烟草的具有高度病原物特异性的两个诱导启动子EAS4和hsr203J,串联驱动GUS基因的表达,同时考虑到转基因植物的安全性,引入双边界序列,构建了含双病原物诱导启动子的植物安全表达载体。将表达载体转化烟草获得转基因植株。分析显示,在正常生长情况下转基因烟草检测不到GUS活性,或活性极低;而受疫霉激发子parasiticein、Phytophthora nicotianea[0]的孢子悬浮液和Ralstonia solanacarum的菌悬液诱导后,转基因烟草叶片中可检测到明显的GUS活性。结果表明,构建的植物表达载体所含双病原物诱导启动子均具有良好的诱导活性,可用于植物遗传转化。(本文来源于《植物病理学报》期刊2009年02期）
石君,黄丛林,吴忠义,张秀海,贾桂霞[2]（2008）在《逆境诱导型启动子RD29A与安全标记基因IPT植物表达载体的构建》一文中研究指出设计特异引物利用PCR的方法从拟南介(Arabidopsis tholiana)中克隆出逆境诱导型启动子RD29A基因上游823bp调控序列,序列分析表明,所克隆的序列与已报道的RD29A启动子有99%的同源性,并包括了ABA、DRE等逆境调控保守序列,可以在低温、干旱高盐环境下诱导基因的表达。IPT(isopentenyltrans- ferase)作为细胞分裂素合成途径的关键酶基因,目前已在植物基因工程中作为生物安全标记基因得到应用。本文通过构建逆境诱导型启动子RD29A启动IPT基因表达的双元载体,既可以利用IPT基因作为选择标记,又可以避免细胞分裂素过量表达带来的负面影响,在转基因植物安全标记中有着广泛的应用前景。(本文来源于《中国观赏园艺研究进展2008——中国园艺学会观赏园艺专业委员会2008年学术年会论文集》期刊2008-08-01）
王丹丹[3]（2008）在《含双病原物诱导启动子植物安全表达载体的遗传转化及表达活性分析》一文中研究指出植物抗病基因工程是植物抗病育种常用的工具之一,利用病原物诱导启动子驱动功能基因以提高植物的抗病性比组成型启动子有明显的优势。植物在环境中经常同时遭受不同病原物的为害,因而植物需要广谱的抗病性。由于单个启动子受诱导因子谱的限制,利用单一病原物诱导启动子驱动功能基因的表达,对入侵病原物的打击范围是有限的。本研究把两个具有高度病原物诱导特异性的启动子EAS4和hsr203J构建到同一个植物表达载体上,通过对烟草的遗传转化,分析转基因植株中启动子的诱导表达活性,说明串联两个启动子,可以增加诱导因子的范围,扩大转基因植物的抗病谱,这对于抵抗几种病原物的侵染尤其有重要意义。同时,出于对转基因安全性的考虑,利用两个T-DNA边界将目的基因与抗生素抗性基因分开,通过转基因植株的后代自交分离,获得了只含目标基因而不含抗生素标记的转基因植株。所得结果如下:1、构建了含双病原物诱导启动子的植物表达载体,并对烟草进行了遗传转化以pCAMBIA2301为基本构架,选用两个来自烟草的、具有高度病原物诱导特异性的启动子EAS4和hsr203J,替换驱动uidA(报告基因GUS)基因表达的CaMV 35S启动子。为了分析串联的两个启动子活性是否有位置效应,同时构建启动子串联次序不同的两种植物表达载体HP1+EP2(hsr203J+EAS4+uidA)和EP1+HP2(EAS4+hsr203J +uidA),并分别以单启动子hsr203J和EAS4驱动uidA为对照,构建了四个表达载体。通过农杆菌介导的叶盘转化法将表达载体转化烟草。对200株抗生素抗性植株进行PCR筛选,共获得152株PCR阳性植株。2、转基因植株中启动子表现明显的诱导表达活性,双启动子比单一启动子表现更强的诱导表达活性为检测转基因植株中启动子的诱导表达活性,从RNA水平、GUS的定性、定量检测等方面,对不同病原物诱导的启动子活性进行了研究。2.1随机选取30株PCR检测呈阳性的植株,用激发子parasiticein处理后提取诱导部位组织的总RNA,经RT-PCR检测,发现24株(80%)获得了与GUS基因预期大小一致的特异性片段,表明这些转基因烟草中GUS基因经诱导后可在转录水平上表达。2.2选取14株RT-PCR呈现阳性的植株,分别用烟草黑胫病菌( Phytophthora nicotianea [0] )、烟草青枯病菌( Ralstonia solanacearum)、灰霉病菌(Botrytis cinerea)和激发子parasiticein等诱导处理,经组织化学染色发现,在检测的植株中,除单一启动子ESA4不受灰霉菌诱导外,经其它病原物处理的植株都不同程度地被染成蓝色,而清水处理的叶片几乎没有颜色变化或仅有很轻微的背景色,表明,本研究所构建4个表达载体中,启动子都具有病原物诱导表达的活性,并且,双启动子较单启动子表现出更为广泛的诱导谱。2.3为明确单、双启动子是否存在诱导表达量的差异,用荧光法对GUS基因的诱导表达活性进行了定量检测。结果发现,转基因植株经P. nicotianea[0]、R. solanacearum和激发子parasiticein诱导后6h,双启动子HP1+EP2的诱导表达活性比单启动子hsr203J高5.9-8.0倍,比EAS4高6.7-7.9倍;双启动子EP1+HP2比单启动子hsr203J的诱导表达活性高5.0-5.7倍,比EAS4高4.7-6.5倍,双启动子与单启动子的活性差异均达极显着水平。双启动子HP1+EP2和EP1+HP2的诱导表达活性也存在极显着差异,而两个单启动子HP1和EP1之间没有明显差别。2.4同时,用荧光法对GUS的诱导表达活性进行了动态检测,发现双启动子HP1+EP2的诱导表达高峰一般出现在诱导后6-10h,而双启动子EP1+HP2的活性高峰一般在诱导后8-14h。在检测的时间范围内,双启动子的诱导活性始终高于单一启动子。这些结果说明,本研究所构建的4个载体中,启动子都具有病原物诱导表达活性,都可被多种病原物诱导表达。双启动子不仅有更广泛的诱导表达谱,而且诱导表达活性显着高于单启动子。3、转基因株系在T1代可以实现NPTII基因与功能基因uidA的自由分离,获得不含抗生素标记的、安全的转基因后代抗生素标记是转基因植物安全性所关注的重要内容之一,出于对转基因植物安全性的考虑,在载体设计时引入了双边界序列,把卡那霉素抗性基因NPTII表达盒和uidA基因表达盒分开在不同的T-DNA区,通过转基因植株后代的自交分离,筛选获得只含目的基因而不含NPTII的转基因植株。首先对14个转基因株系的T1代幼苗用含卡那霉素的平板进行了表型检测,结果发现,13个株系的NPTII基因的分离比平均为2.89:1,接近3:1,表明这13个株系中NPTII基因可能为单拷贝插入。为检测NPTII基因与uidA在T1代中是否发生自由分离,从13个NPTII单拷贝株系的T1代植株中随机选取130株,提取基因组DNA,PCR法对其NPTII基因和uidA基因同时进行扩增,结果是:只含uidA基因的植株占被扩增整体的20.77%,只含NPTII基因的占22.31%,同时含有NPTII基因和uidA基因的为53.85%,其分离比经X2检测符合两个相互独立的基因自由分离的比例9:3:3:1。说明转基因植株中NPTII基因与目标基因分别插入植物总DNA的不同部位,并在自交后代中发生自由分离。(本文来源于《山东农业大学》期刊2008-05-13）
张楠[4]（2007）在《转基因植物安全筛选标记基因的克隆和NAMP/Bt融合蛋白基因克隆及其原核与植物表达载体的构建》一文中研究指出为了加快作物遗传改良的进程,将外源目的基因导入植物体,并筛选出极少量的转化细胞,一套高效安全的选择方法极为重要。以往的筛选标记因为存在于转基因植物中时,其抗生素或除草剂抗性的标记基因是否会转移到微生物或杂草中,使病原菌或杂草获得抗性,对环境及人类健康有不良影响和损害。D-丝氨酸对植物有一定的毒性,它是由大肠肝菌体内的D-丝氨酸脱水酶(D-serine dehydratase,dsdA )基因编码的D-丝氨酸氨水裂解酶(D-serine ammonia lyase)可以解除D-丝氨酸对植物的毒性。对植物来说,很多组织缺乏正常的途径对D-氨基酸进行氧化脱氨基作用,由于这种消化系统的不同导致的结果是,有几种D-氨基酸本身对植物是有毒性的,即使在D-氨基酸相对浓度较低的情况下。因此,可以利用这种专一的对植物有毒性的D-氨基酸裂解酶作为一个安全的筛选标记。D-丝氨酸脱水酶对D-丝氨酸催化脱氨基作用,生成丙酮酸盐(或脂)、水、氨水,dsdA转基因的种子可以很明显的从野生型中筛选出来,而且氨基酸很容易被消化掉,并转变为水、氨水和丙酮酸盐(或脂)对环境没有污染,是一种很好的安全标记。本研究设计特异引物通过聚合酶链式反应从大肠肝菌菌体中克隆获得D-丝氨酸脱水酶基因(dsdA),并将其连接到T载体上进行测序同源性可达到99.93%,将测序过的dsdA基因连接于原核表达载体pET-28a上,通过IPTG诱导,聚丙烯酰胺电泳(SDS-PAGE)检测,dsdA在原核生物中得到了很好的表达,蛋白条带为48.0KDa。然后,把dsdA构建到含有kan的筛选标记的pBI-121的植物表达载体中,通过遗传转化到烟草植物中,分别用dsdA和kan来筛选转基因植物以检验dsdA的抗性效果。试验结果表明,以dsdA作为筛选标记就行筛选时,使用D-serine作为筛选剂进行筛选时用量较大且起效较慢,在前期筛选时没有卡那霉素敏感。(本文来源于《新疆农业大学》期刊2007-06-01）
植物安全表达载体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
设计特异引物利用PCR的方法从拟南介(Arabidopsis tholiana)中克隆出逆境诱导型启动子RD29A基因上游823bp调控序列,序列分析表明,所克隆的序列与已报道的RD29A启动子有99%的同源性,并包括了ABA、DRE等逆境调控保守序列,可以在低温、干旱高盐环境下诱导基因的表达。IPT(isopentenyltrans- ferase)作为细胞分裂素合成途径的关键酶基因,目前已在植物基因工程中作为生物安全标记基因得到应用。本文通过构建逆境诱导型启动子RD29A启动IPT基因表达的双元载体,既可以利用IPT基因作为选择标记,又可以避免细胞分裂素过量表达带来的负面影响,在转基因植物安全标记中有着广泛的应用前景。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
植物安全表达载体论文参考文献
[1].王丹丹,王荣,唐丽丽,刘爱新,孔维文.含双病原物诱导启动子植物安全表达载体的构建[J].植物病理学报.2009
[2].石君,黄丛林,吴忠义,张秀海,贾桂霞.逆境诱导型启动子RD29A与安全标记基因IPT植物表达载体的构建[C].中国观赏园艺研究进展2008——中国园艺学会观赏园艺专业委员会2008年学术年会论文集.2008
[3].王丹丹.含双病原物诱导启动子植物安全表达载体的遗传转化及表达活性分析[D].山东农业大学.2008
[4].张楠.转基因植物安全筛选标记基因的克隆和NAMP/Bt融合蛋白基因克隆及其原核与植物表达载体的构建[D].新疆农业大学.2007