导读:本文包含了少突胶质细胞祖细胞论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:诱导性少突胶质细胞祖细胞,少突胶质细胞,转录因子,miRNA
少突胶质细胞祖细胞论文文献综述
令文慧,王明玉,熊春霞,谢登峰,陈麒宇[1]（2019）在《介导诱导性少突胶质细胞祖细胞生成的重编程因子的研究进展》一文中研究指出少突胶质细胞(oligodendrocytes, OLs)是中枢神经系统(central nervous system, CNS)中主要的成髓鞘细胞,其功能障碍会引发一系列的神经性疾病,例如:多发性硬化症(multiple sclerosis,MS)和脑白质营养不良。少突胶质细胞祖细胞(oligodendrocyte precursor cells, OPCs)的移植是治疗髓鞘相关疾病的一种潜在方法。在脑损伤后, OPCs可向OLs方向分化并对损伤部位的轴突进行髓鞘化,但是, OPCs在大脑中仅占5%～8%,这种髓鞘修复作用十分有限。通过体外重编程技术生成诱导性少突胶质细胞祖细胞(induced oligodendrocyte precursor cells, iOPCs)的策略可为髓鞘损伤疾病的治疗提供大量的细胞资源。但是该方法仍存在一系列亟待解决的问题,包括i OPCs生成效率较低、体外培养周期较长等。因此,该文从限定性转录因子、miRNA以及小分子物质等方面阐述了iOPCs的生成方法,并分析了iOPCs的现存问题和应用前景,旨在为其在疾病模型构建、药物开发和再生医学等方面的应用提供理论和技术参考。(本文来源于《中国细胞生物学学报》期刊2019年08期）
乐一帆,马腾,徐扬,田衍平,李红丽[2]（2019）在《伴侣分子Annexin A6调控神经祖细胞定向少突胶质细胞分化的实验研究》一文中研究指出目的:自然分化条件下神经祖细胞(NPCs)极少会分化为少突胶质细胞(OLs)。然而,孕晚期的脑白质又极易受到如缺氧,高糖等因素的影响,造成OLs分化受阻及不可逆的神经损伤。因此,调控NPCs向OLs的定向分化具有重要的意义。近期研究发现Annexin(Anx)家族成员AnxA6,通过在细胞内与Ca～(2+)结合,而发挥伴侣分子的作用,并可通过与Fyn、(本文来源于《中国解剖学会2019年年会论文文摘汇编》期刊2019-08-18）
令文慧[3]（2019）在《应用“间接谱系转化”技术重编程小鼠胚胎成纤维细胞成为诱导性少突胶质细胞祖细胞的研究》一文中研究指出“间接谱系转化”技术借助基因载体,通过表达转录因子,将已分化的体细胞重编程成为特定谱系的祖细胞,为再生医学提供了安全、高效的新途径。神经细胞轴突外的髓鞘对于神经系统的信号传导和脑内稳态的维持至关重要,髓鞘的缺失或功能障碍会导致众多疾病,例如多发性硬化症(Multiple sclerosis,MS)和脑白质营养不良。少突胶质细胞祖细胞(Oligodendrocyte precursor cells,OPCs)的移植是治疗髓鞘相关疾病的一种潜在方法。然而,体内OPCs在大脑中仅占约5-8%,且在成人脑中维持缓慢增殖或静止的状态。因此,在脑损伤后,通过OPCs分化成为少突胶质细胞(Oligodendrocytes,OLs)进而修复损伤髓鞘的能力十分有限。鉴于此,本研究通过过表达叁种神经转录因子(Olig 2、Nkx 6.2和Sox 10),将小鼠胚胎成纤维细胞(Mouse embryonic fibroblast,MEFs)——NIH/3T3细胞重编程成为诱导性少突胶质细胞祖细胞(Induced oligodendrocyte precursor cells,iOPCs),其形态学和基因表达与原代OPCs相似,并具有体外分化的能力,为脱髓鞘疾病的细胞代替治疗、疾病模型构建和药物开发等奠定了基础。试验一:昆明小鼠原代OPCs的体外分离、培养和诱导分化小鼠OPCs是一种在体外极易受到损伤、不易存活的细胞。为了优化小鼠OPCs的体外分离培养体系,高效获得OPCs,并将其作为评估iOPCs质量的对照组,本研究通过探讨不同胎龄和消化方法对OPCs生长状况、细胞总数以及存活率的影响,筛选适宜条件,进一步优化OPCs的分离、纯化方案。结果表明:(1)采用0.125%胰蛋白酶结合0.25%鸡血清消化胎龄为18.5天小鼠胎儿脑皮质,所得的OPCs数量最多,与其余处理组之间均存在显着性差异(P<0.05),且极显着性高于对照组(P<0.01);(2)与1日龄新生小鼠相比,采用胎龄为18.5天的小鼠胎儿更容易分离得到OPCs,仅培养7-9天,细胞之间出现明显分层,且增殖速度较快,极大缩短了细胞培养时间;(3)无论是胎龄为18.5天的胎鼠还是1日龄新生小鼠,采用改良后的间隔震荡纯化方法纯化OPCs的存活率极显着性高于传统纯化方法(P<0.01),且其纯度较高(>97%);(4)分离所得OPCs能够在含有40 ng/mL叁碘甲状腺氨酸(Triiodothyronine,T3)的无血清诱导培养液中分化成为OLs,在含10%胎牛血清的培养液中分化成为Ⅱ型星形胶质细胞,且体外分化所得细胞的纯度可达95%以上。因此,采用胎龄为18.5天的小鼠胎儿进行脑皮质的采集,经0.125%胰蛋白酶结合0.25%鸡血清消化15 min的方法可以获得具有典型形态、生长良好且具有体外定向诱导分化能力的OPCs。试验二:不同载体介导神经转录因子Olig 2质粒DNA转染NIH/3T3细胞的条件优化为了提高神经转录因子Olig 2质粒DNA转染NIH/3T3细胞的效率,为iOPCs的制备奠定基础,本研究分别采用不同浓度(2.5μg/mL、5μg/mL和7.5μg/mL)的非病毒转染载体(Lipofectamine 2000和Lipofectamine LTX)结合不同浓度(1μg/mL、2μg/mL、3μg/mL、4μg/mL和5μg/mL)的质粒DNA,且采用磁纳米颗粒载体与质粒DNA 1:1结合后转染NIH/3T3细胞,以绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)基因作为报告基因,通过比较不同处理组的转染效率和细胞毒性,筛选出转染效率高、细胞毒性小的转染条件。结果表明:叁种试剂的最高转染效率处理组(7.5μg/mL Lipofectamine 2000结合3μg/mL质粒DNA处理组、7.5μg/mL Lipofectamine LTX结合2μg/mL质粒DNA处理组、2μg/mL Poly-MAG结合2μg/mL质粒DNA处理组)之间无显着性差异(P>0.05)。但是,当叁种试剂的转染效率达到最高时,Poly-MAG转染试剂对NIH/3T3细胞的毒性极显着性低于Lipofectamine 2000与Lipofectamine LTX转染试剂的细胞毒性(P<0.01)。此外,由于磁性纳米颗粒载体Poly-MAG具有顺磁性,在外源性磁场的作用下,它能够快速地吸引至到细胞表面,有助于Olig 2质粒DNA的稳定表达。因此,宜采用2μg/mL Poly-MAG介导2μg/mL Olig 2质粒DNA转染NIH/3T3细胞。试验叁:应用“间接谱系转化”技术重编程NIH/3T3细胞成为iOPCs的可行性研究为了建立NIH/3T3细胞向iOPCs的“间接谱系转化”体系,本试验采用磁性纳米颗粒载体Poly-MAG介导Olig 2、Nkx 6.2和Sox 10转录因子在NIH/3T3细胞中过表达,并对重编程所得细胞进行形态学观察、免疫细胞化学染色、荧光定量PCR(Real-time PCR,RT-PCR)以及Western Blot检测,旨在获得iOPCs,为髓鞘再生机制研究、药物筛选和细胞移植治疗等奠定基础。结果表明:重编程所得细胞具有以下特征:(1)具有OPCs的典型形态学特征,细胞呈圆形或椭圆形生长,折光性强,多数有两个突起,少数有叁个突起,与小鼠原代OPCs十分类似;(2)表达OPCs特异性抗原——A2B5,A2B5~+细胞的数量占68.37±2.05%;(3)与对照组相比,重编程所得细胞的PDGFRα、S100β、NG2和Olig 2基因的表达量呈现出极显着性的上调(P<0.01);(4)能够体外诱导分化成为MBP~+的OLs和GFAP~+的Ⅱ型星形胶质细胞,其阳性率分别为72.67?2.52%和75.36?1.98%;(5)与小鼠原代OPCs相比,iOPCs的A2B5蛋白水平差异不显着(P>0.05),这说明过表达叁个神经转录因子所得到的细胞与小鼠原代OPCs相似,有OPCs特异性蛋白A2B5的表达。因此,采用Poly-MAG介导Olig 2、Nkx 6.2和Sox 10的过表达能够将已分化的NIH/3T3细胞重编程成为iOPCs。结论:宜采用0.125%胰蛋白酶结合0.25%鸡血清消化18.5天胎龄昆明小鼠胚胎的脑皮质,混合培养7-9天后细胞出现明显分层,通过间隔震荡纯化方法,可以高效获得形态正常、增殖较快且具有分化能力的OPCs;在外源性磁场的作用下,采用2μg/mL Poly-MAG结合2μg/mL Olig 2质粒DNA能够更为高效地转染NIH/3T3细胞,且细胞毒性较低;利用该磁性纳米颗粒转染体系介导叁个神经转录因子Olig 2、Nkx 6.2和Sox 10的过表达能够将NIH/3T3细胞重编程成为iOPCs,为脱髓鞘机制的研究和相关疾病的治疗等提供了丰富的细胞资源。(本文来源于《西南大学》期刊2019-04-08）
戚佳俊[4]（2019）在《EGF促进胶质祖细胞向少突胶质细胞发育分化的研究》一文中研究指出许多实验结果证明,表皮生长因子(EGF)信号通路在髓鞘发育以及髓鞘损伤后的修复中扮演着重要的角色,但是对其在少突胶质细胞(OLs)的早期生成和分化中的生物学作用还不明确。在这项研究中,我们通过EGF对分离得到的限制性胶质前体细胞(GRP)细胞的作用,来研究EGF对OLs早期发育的影响。结果发现EGF可以与血小板衍生生长因子-AA(PDGFaa)共同促进GRP细胞的存活和自我更新,但是从培养体系中去除血小板衍生生长因子-AA(PDGFaa)的情况下,GRP细胞则倾向于分化为O4阴性的早期少突胶质细胞前体细胞(OPCs)。而在OPCs阶段,EGF与PDGFaa共同存在时可以维持细胞的O4阴性抗原表型。当去除PDGFaa以后,EGF通过减少细胞的凋亡和扩增成熟OLs的数量来达到促进OPCs终末分化的作用。综上所述,EGF对少突胶质细胞的发育起着重要的作用。(本文来源于《杭州师范大学》期刊2019-03-01）
苏敏,宋银红,何志旭,胡蓉,Debra,Rood[5]（2015）在《胚胎干细胞来源的胸腺上皮祖细胞表达髓鞘少突胶质细胞糖蛋白诱导抗原特异性耐受,改善实验性自身免疫性脑脊髓炎》一文中研究指出目的:研究小鼠胚胎干细胞(mESCs)来源的胸腺上皮祖细胞(TEPs)表达髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)胸腺内移植诱导耐受,预防实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的作用,并初步探讨相关耐受诱导机制。方法:利用基因克隆和转染技术,构建重组质粒pEF1α-MOG-IRES-AcGFP,转染TC-1 mESCs,筛选获得稳定表达MOG的细胞株MOG/mESCs,利用细胞因子EGF、KGF、FGF10和BMP4体外培养诱导MOG/mESCs分化为胸(本文来源于《中国解剖学会2015年年会论文文摘汇编》期刊2015-08-08）
苏敏[6]（2015）在《胚胎干细胞源性胸腺上皮祖细胞表达少突胶质细胞糖蛋白对实验性多发硬化症的防治作用》一文中研究指出多发性硬化症(MS)是由自身反应性T细胞介导的,对髓鞘抗原免疫耐受破坏所致的自身免疫病。自身靶抗原通过与抗原提呈细胞结合触发自身致病性CD4+Th1/Th17细胞产生,同时伴有调节性T细胞(Tregs)的免疫功能抑制,可能与MS发病有关。T细胞在胸腺内的发育经阴性选择,自身反应性T细胞发生清除或抑制,可诱导抗原特异性耐受,阻止MS的发生和发展。胸腺功能减退和其内自身抗原的不稳定表达则影响了阴性选择发生而限制了治疗效果。因此,对MS的防治而言,耐受诱导不仅依赖于自身抗原在胸腺持续表达,而且还与胸腺功能是否正常有关。但随年龄增长,胸腺上皮细胞(TECs)凋亡,导致胸腺微环境的改变,胸腺功能逐渐退化,可引起T细胞正常发育受阻。大量研究表明,髓质(m)TECs可表达自身组织特异性抗原(TSAs),传递给胸腺内树突状细胞或直接提呈给发育中的T细胞,诱导阴性选择,可引起抗原特异性T细胞清除,刺激抗原特异性Tregs增加,起到阻止自身免疫性疾病发生的作用,但TECs有限的数量来源极大限制了其临床应用。已有研究证实,小鼠胚胎干细胞(m ESCs)来源的胸腺上皮祖细胞(TEPs)移植到体内,可分化为TECs,重建胸腺结构,促进T细胞发育,这为TECs的临床应用提供了充足的种子细胞来源。因此,将自身致病性抗原过表达在m ESCs内,并诱导分化为TEPs进行胸腺内移植的方法,可能诱导自身耐受,为MS的防治提供了新的途径,也为其它已知自身致病性抗原的自身免疫病的预防和治疗提供科学依据。目的:本课题通过建立小鼠MS动物模型实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE),将引起MS的关键致病性抗原髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)过表达在m ESCs来源的TEPs(m ESC-TEPs)内,胸腺内移植,研究其是否能分化为TECs,改善胸腺微环境,促进T细胞发育,同时MOG在胸腺内持续表达,诱导针对MOG抗原的特异性耐受,达到防治MS的目的;并探讨防治作用的相关机制,是否与中枢耐受(自身抗原特异性T细胞删除或抑制)或/和外周耐受(抗原特异性Tregs增加)机制有关。方法:1.利用基因克隆和转染技术,构建带有绿色荧光蛋白GFP的重组质粒MOG-p EF1a-IRES-Ac GFP,转染TC-1 m ESCs,筛选获得MOG稳定表达的细胞株MOG/m ESCs。利用细胞因子表皮生长因子(EGF)、成纤维细胞生长因子7/角质细胞生长因子(FGF7/KGF)、FGF10和骨形成蛋白4(BMP4)联合体外培养,诱导MOG/m ESCs分化为胸腺上皮祖细胞(MOG/TEPs)。取4-6周129S6Sv Ev Tac小鼠12只,分4组,每组3只进行胸腺内注射:实验组为注射MOG/TEPs基因转染细胞组、对照组分别为注射p EF1a/TEPs空载体转染细胞组、MOG/聚乙烯亚胺(PEI)质粒组和p EF1a/PEI空载体组。分别于注射后第2天、第30天和第90天取胸腺组织,Western blot、和流式细胞术(FACS)分析比较各组胸腺移植后,m ESC-TEPs数量、分布以及绿色荧光蛋白(GFP)和MOG蛋白持续表达情况。2.建立小鼠MS实验动物模型——实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE),研究MOG/TEPs细胞胸腺内移植对MS的预防作用。取4-6周TC-1 m ESCs同基因系129S6Sv Ev Tac小鼠35只,利用anti-Ep CAM抗体,运用免疫磁珠分选方法对培养的m ESC-TEPs细胞进行分选,获得MOG/TEPs(Ep CAM+)和MOG/Ep CAM-细胞,分5组作小鼠胸腺内注射:实验组为注射MOG/TEPs(Ep CAM+)细胞组、对照组分别为注射MOG/Ep CAM-细胞组、p EF1a/TEPs空载体转染细胞组、MOG/PEI质粒组和PBS组;作为平行实验,非同基因系的C57BL/6小鼠35只,致死量照射后,T细胞清除的骨髓(TCD-BM)移植,同时按上述5组分组进行胸腺内注射。8周后,MOG35-55小鼠背部皮下四点注射诱导EAE,逐日观察模型建立和发病进展情况,临床评分,42天后处死小鼠。① 取脊髓组织石蜡包埋切片,苏木精-伊红(HE)染色、卢卡斯快蓝(LFB)染色和Bielschowski镀银(BSI)染色,观察各组小鼠组织病理学改变并对组织切片进行半定量评分。② 取胸腺组织,分离胸腺细胞和TECs,FACS检测各组总胸腺细胞数、CD4-CD8-、CD4+CD8+、CD4+或CD8+细胞数量变化;分析各组总TECs(CD45-Ep CAM1+)、c TECs(CD45-Ep CAM1+Ly51+)和m TECs(CD45-Ep CAM1+Ly51-)细胞数量变化。③ 取脾脏组织,分离脾细胞,不同剂量MOG35-55以及anti-CD3和anti-CD28抗体刺激培养,Brd U掺入检测脾细胞增殖情况。④ 收集各组MOG35-55刺激培养脾细胞上清,CBA试剂盒标记,FACS检测Th1/Th2/Th17细胞因子产物分泌情况。⑤ 收集各组小鼠血清,间接酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测各组小鼠血清中抗MOG抗体产生情况。3.建立小鼠EAE模型,研究MOG/TEPs细胞胸腺内移植对MS的治疗作用。4-6周C57BL/6小鼠15只,MOG35-55注射诱导EAE,逐日观察发病及疾病进展情况;临床评分达1-2分后,小鼠致死量照射并TCD-BM移植,同时分叁组进行胸腺内注射:实验组为注射MOG/TEPs细胞组、对照组为注射MOG/Ep CAM-细胞组和PBS组;注射后观察至第44天,MOG35-55再次免疫诱导EAE,继续进行临床评分,观察至第75天,处死小鼠,取脊髓观察各组小鼠脊髓组织病理学改变并对组织切片进行半定量评分。结果:1.成功克隆获得了重组质粒MOG-p EF1a-IRES-Ac GFP;建立了MOG/m ESCs细胞模型,该细胞可稳定表达MOG蛋白,AP染色呈阳性,可检测到OCT4和SSEA1干细胞相关基因表达,NOD-SCID小鼠皮下注射后,可形成畸胎瘤;体外可成功诱导分化MOG/m ESCs为MOG/TEPs,该细胞阳性表达Ep CAM1、K5和K8分子,Pax1、Pax9、Plet1、Fox N1和Hox A3基因m RNA表达量明显增加;MOG/TEPs胸腺内移植后,体内可分化为TECs细胞,胸腺内不同发育阶段T细胞数量较对照组增加,同时移植后90天仍可在胸腺内检测到MOG和GFP蛋白表达。2.MOG/TEPs移植对MS/EAE的动物疾病模型具有预防发病的作用:MOG/TEPs移植后129S6Sv Ev小鼠和C57BL/6小鼠发病率、平均临床分数和积累评分较各对照组低,组织切片观察,病理受损情况减轻。3.MOG/TEPs胸腺内注射对MS/EAE模型具有治疗作用:MOG/TEPs处理联合骨髓移植后,MOG35-55再次免疫,小鼠EAE临床评分降低,组织病理改变减轻。4.MOG35-55刺激培养后,MOG/TEPs处理组脾细胞增殖指数降低,IL-17、TNF和IFN-γ分泌减少,而抗CD3/CD28抗体刺激培养后增殖指数无明显变化。另外,MOG/TEPs处理后,小鼠胸腺和脾脏内CD4+CD25+Fox P3+细胞数量增加,血清MOG抗体浓度检测无明显变化。结论:本研究成功地将过表达MOG的m ESCs诱导分化为TEPs,并将该细胞移植到MS/EAE模型小鼠胸腺内,实现了有效预防MS/EAE模型小鼠疾病发生的目的,同时MOG/TEPs胸腺内注射联合骨髓造血干细胞移植对已建立的MS/EAE模型可达到长期缓解的治疗作用;该防治作用的发挥可能是通过中枢耐受(抗原特异性T细胞删除)和外周耐受(Tregs增加)机制的参与而实现的。(本文来源于《贵阳医学院》期刊2015-05-21）
巩晓明[7]（2009）在《少突胶质细胞祖细胞分化对Olig1的下调作用(英文)》一文中研究指出Olig1 is a transcription factor that is essential for oligodendrogenesis. It is important to understand the upstream regulation of Olig1 expression because of its critical role in remyelination repair. A mouse oligodendrocyte progenitor cell (OPC) differentiation model was(本文来源于《第二届国际神经修复学会年会论文汇编》期刊2009-04-01）
陈焕然,黄其林,杨辉,马玉新,张伟[8]（2008）在《Sema3A-Fc真核表达载体构建及诱导少突胶质细胞祖细胞迁移作用观察》一文中研究指出目的构建真核表达载体pIGSema3A-Fc,并观察Sema3A-Fc融合蛋白对少突胶质细胞祖细胞(OPCs)迁移的作用。方法运用DNA重组技术自原核表达载体上将鸡来源的Sema3A基因克隆到真核表达载体pIGIgG1Fc上,并用双酶切、测序法进行鉴定。采用脂质体法转染非洲绿猴肾细胞株(COS-7)细胞进行融合蛋白表达,培养3天后提取上清液,经蛋白A亲和纯化,Western blotting进行鉴定。利用插入式细胞迁移小室(millicell-PCF)细胞迁移仓观察其对OPCs细胞迁移的诱导作用。结果重组质粒双酶切产生了2.24kb目的片段及5.7kb载体片段。测序证实构建的Sema3A膜外区与Sema3A-Fc cDNA阅读框完整,连接部位序列正确;Western blotting证实有Sema3A-Fc融合蛋白表达。迁移试验证明其对少突胶质细胞祖细胞迁移具有推斥作用。结论成功构建了Sema3A-Fc真核表达载体,并使有生物学活性的Sema3A-Fc融合蛋白在COS-7细胞上获得了稳定表达,为进一步研究OPCs细胞定向迁移奠定了基础。(本文来源于《创伤外科杂志》期刊2008年03期）
陈焕然[9]（2008）在《Sema3A诱导少突胶质细胞祖细胞迁移及其信号转导机制的初步研究》一文中研究指出中枢神经系统(central nervous system, CNS)髓鞘的形成是由少突胶质细胞(oligodendrocytes, OLs)完成的,是维持正常神经冲动传导的重要物质基础。但是,由于少突胶质细胞对损伤因子很敏感,当CNS损伤时,少突胶质细胞很容易受到损害而死亡或凋亡,导致脱髓鞘或再生的轴突不能髓鞘化。伴随CNS创伤出现的一种特征性病理变化就是轴突脱髓鞘,且多不能自发再髓鞘修复,其中一个重要原因,可能就是与OLs减少和不能及时得到补充有关。室管膜下区的少突胶质细胞祖细胞(oligodendrocyte progenitor cells, OPCs)定向迁移可能对OLs的补充具有重要意义。虽然目前对与少突胶质细胞系的发育有关的细胞因子(如GGF、PDGF、bFGF等)有了较深入了解,但是却对如何诱导OPCs迁移及其迁移机制知之甚少。由于神经元和少突胶质细胞之间存在密切的相互作用关系,因此,调控神经元轴突塌陷和定向的分子也可能对OPCs迁移产生影响。近年来发现的诱导分子Semaphorin3A(Sema3A)及其受体就是对轴突生长和神经元定向迁移发挥着重要作用。那么Sema3A是否对OPCs细胞迁移过程产生调控作用呢?在此过程中其信号传导机制如何呢?目前还不清楚。本文通过对传统的培养、纯化方法进行改良,从新生大鼠室管膜下区分离出高纯度的OPCs,转染增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因,使其携带绿色荧光;并利用DNA重组技术制备表达Sema3A-Fc融合蛋白的COS-7细胞,用millicell-PCF细胞迁移小室(孔径8um)进行细胞迁移试验,观察Sema3A-Fc对OPCs迁移的影响及并探讨可能的信号传导机制。研究目的:1、观察Sema3A-Fc对少突胶质细胞祖细胞迁移的影响;2、探讨cAMP-PKA、cGMP-PKG和RhoA-ROCK信号通路在Sema3A-Fc诱导少突胶质细胞祖细胞迁移中的作用;3、试图阐明Sema3A诱导少突胶质细胞祖细胞迁移中可能的信号机制。实验方法1、少突胶质细胞祖细胞的分离培养与鉴定在解剖显微镜下切取新生SD大鼠室管膜下区脑组织进行细胞培养,培养基为含10%小牛血清和10%胎牛血清的DMEM。细胞分层时由于OPCs生长在星形胶质细胞层上面,根据贴壁能力差异,采用差速振荡法分离上层的OPCs。OPCs采用DMEM/F12培养基(含2%B27,20ng/L bFGF和20ng/L PDGF-AA)进行扩增培养。分别用无血清培养基和血清培养基对OPCs进行促分化培养。分别选取少突胶质细胞系不同发育期标志性抗原(A2B5、GFAP和CNPase),采用间接免疫荧光染色技术对所培养的细胞进行类型鉴定。EGFP质粒转染体外培养的少突胶质细胞祖细胞,挑选成功转染GFP的少突胶质细胞祖细胞扩增培养备用。2、表达Sema3A-Fc的COS-7细胞的制备利用基因重组技术,构建Sema3A-Fc重组质粒,利用双酶切、基因测序进行重组质粒鉴定;脂质体法转染COS-7细胞,G418筛选抗性克隆,扩增培养,免疫组化和免疫印迹法鉴定重组蛋白表达情况,获得稳定表达Sema3A的COS-7细胞。用含有sema3A-Fc培养上清加入体外培养的OPCs培养瓶中,通过对比观察构建表达的sema3A-Fc是否具有生物学活性。并对细胞膜上NP-1受体进行了检测。3、Sema3A-Fc诱导少突胶质细胞祖细胞迁移信号机制的实验研究1)用millicell-PCF细胞迁移小室(孔径8um)进行细胞迁移试验。将稳定表达Sema3A-Fc的COS-7细胞培养在迁移仓下层,待细胞融合达70%以上后,将纯化培养的少突胶质细胞祖细胞按2×104/孔接种在迁移仓的上层,共培养12h后,固定细胞,甲苯胺蓝染色,计数迁移细胞数。设对照组:单纯培养基对照和转染pIG的COS-7对照组。2)PKA和PKG的激活实验:分别加入cAMP类似物8-溴-cAMP(浓度50μM),cGMP类似物8-溴-cGMP(浓度500μM)于分层迁移实验舱下层中,观察少突胶质细胞祖细胞的迁移情况,计数并比较迁移结果。3)PKA和PKG抑制实验:分别加入PKA的特异性抑制物KT5720(浓度10μM)和PKG的特异性抑制物KT5823(浓度1μM)于分层迁移实验舱下层中,观察少突胶质细胞祖细胞的迁移情况,计数并比较迁移结果。4)抑制Rock激酶试验:分别在上述实验组中加入有Rho活性的ROCK激酶抑制物Y27632(浓度10μM),分别观察少突胶质细胞祖细胞的迁移情况,计数并比较迁移结果。5)免疫荧光法检测PKA催化亚基和PKG1含量:分别用小鼠抗PKA催化亚基抗体和兔抗PKG1抗体做为一抗,PBS替代一抗作阴性对照,在相同条件下进行免疫荧光染色和照相。用Image-Pro Plus 5.1图像分析软件,对图像进行分析处理。6)观察PKG,PKA和ROCK活性对OPCs细胞迁移的直接作用。在没有sema3A-Fc存在的情况下,用8-Br-cAMP, 8-Br-cGMP, KT5720、KT5823和Y 27632直接作用于OPCs细胞(浓度同前),观察PKG,PKA和ROCK活性改变是否对体外培养的OPCs细胞迁移的产生直接影响。4、统计定量数据以均数±标准差( x±s)表示,用SPSS10.0统计软件对数据进行分析,使用独立样本t检验分析两个组间的差异,使用单因素方差分析比较多个组间统计学差异。以P < 0.05为有统计学差异,以P < 0.01为有显着差异。主要结果1、体外成功分离培养出少突胶质细胞祖细胞,A2B5标记阳性,纯度达到95%以上。并能进一步分化为CNPase标记阳性的少突胶质细胞和GFAP标记阳性Ⅱ型星形胶质细胞。2、成功构建了pIGsema3A-Fc重组质粒,经双酶切(HindⅢ和BamHⅠ)和基因测序鉴定正确,转染COS-7细胞后,经免疫组化和Western-blot检测到重组蛋白的表达。表达Sema3A-Fc的COS-7细胞的培养上清能够促使体外培养的OPCs细胞突起回缩,胞体变圆。用抗Fc抗体和抗NP-1抗体免疫荧光染色均呈膜性染色。3、sema3A-Fc诱导细胞迁移实验结果:Sema3A-Fc实验组OPCs迁移数为(24.3±6.7),单纯培养基对照组为(38.4±7.9),转染pIG的COS-7对照组为(37.7±8.3),实验组与两个对照组均存在明显差异(n=15, P <0.01)。4、OPCs细胞内PKG、PKA免疫组化检测:通过针对催化亚基的抗体用免疫荧光法对细胞内PKA和PKG进行检测,发现OPCs细胞内的PKA和PKG均有基础量的表达,主要分布在胞浆和突起内。当加入含sema3A-Fc的培养上清时,细胞内PKA催化亚基染色强度没有明显变化,而PKG1的染色强度则较对照组明显增高(P <0.01),表明PKG含量增加,活性增强。表明含sema3A-Fc激活了cGMP-PKG信号通路。5、PKA和PKG激活/抑制实验:OPCs迁移数分别为:8-溴-cAMP组OPCs迁移数为(32.6±7.3)较对照组(24.3±6.7)明显增加(P <0.01),8-溴-cGMP组为(19.3±5.5)较对照组(24.3±6.7)有减少明显(P <0.05)。PKA和PKG抑制实验:OPCs迁移数分别为:KT5720组(17.5±5.3)较对照组(24.3±6.7)明显减少(P <0.01)。KT5823组(29.9±6.2)较对照组(24.3±6.7)有明显增加(P <0.05)。表明PKG通路对sema3A信号具有正向调节作用,而PKA通路则具有负向调节作用。6、抑制ROCK激酶试验:Y27632干预前后的成对数据的统计结果为,对照组(37.7±8.3)对(38.4±8.2),sema3A-Fc组(24.3±6.7)对(35.3±8.7),8-溴-cAMP组(32.6±7.3)对(32.4±7.6) , 8-溴-cGMP组(19.3±5.5)对(29.9±6.2) , KT5720组(17.5±5.3)对(26.5±5.7),KT5823组(29.9±6.2)对(36.9±7.7)。单因素方差分析示组间有明显差异(P =0.012)。表明ROCK激酶抑制剂Y27632能明显抑制sema3A-Fc对OPCs细胞迁移的作用,间接证明Sema3A激活了OPCs细胞内的Rho-ROCK信号通路。7、在去除Sema3A-Fc情况,单独应用8-Br-cGMP、8-Br-cAMP、KT5720、KT5823和Y27632并不能改变OPCs原有的迁移能力。结果为:8-溴-cAMP组(36.8±7.1),8-溴-cGMP组(35.1±7.4),KT5720组(37.5±8.1),KT5823组(34.9±7.6),均与对照组(37.7±8.3)无明显差异(n=15, P>0.05)。但与sema3A-Fc存在时的数据进行配对比较则有明显差异(P<0.05)。全文结论1、通过二次接种和差速振荡法,成功分离出高纯度少突胶质细胞祖细胞,传代及分化培养,通过免疫组化法鉴定了细胞类型。脂质体法成功导入EGFP基因,成为可示踪的少突胶质细胞祖细胞。2、成功构建了pIGsema3A-Fc真核表达载体,通过脂质体法成功转染COS-7细胞,表达出具有生物活性的sema3A融合蛋白。3、Sema3A-Fc对体外培养的OPCs细胞迁移具有排斥作用;Sema3A-Fc对OPCs的排斥作用可能是通过激活cGMP-PKG和Rho-ROCK信号通路介导的,而cAMP-PKA信号通路没有直接参于该效应,但对该效应具有明显的负向调节作用。4、Sema3A-Fc诱导OPCs细胞迁移的信号转导机制是非常复杂的,cGMP-PKG和Rho-ROCK信号通路只是其中的一小部分,可能还存在其它的作用机制,尚需要更深入的研究。(本文来源于《第叁军医大学》期刊2008-05-01）
陈焕然,黄其林,杨辉,马玉新,阴金波[10]（2008）在《少突胶质细胞祖细胞高效分离培养及EGFP基因转染》一文中研究指出目的:建立高效分离少突胶质细胞祖细胞(oligodendrocyte precursor cells,OPCs)的方法,并转染增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因。方法:采用2次接种培养和差速振荡分离,结合使用神经营养因子(bFGF、PDGF-AA),体外分离纯化和扩增培养OPCs,用抗A2B5、GFAP、CNPase免疫荧光抗体鉴定细胞类型。采用脂质体介导EGFP基因转染OPCs,筛选获得稳定表达EGFP的OPCs细胞。结果:分离培养的OPCs细胞呈A2B5阳性,纯度达到99%,具有增殖和双向分化的潜能(GFAP阳性的2型星形胶质细胞和CNPase阳性的少突胶质细胞),传代培养1个月仍具有增殖能力。EGFP基因转染后OPCs细胞能发出绿色荧光,并继续保持增殖分化特性。结论:二次接种培养和差速振荡分离法可获得高纯度OPCs细胞;EGFP基因转染可作为示踪OPCs迁移的有效方法。(本文来源于《西南国防医药》期刊2008年01期）
少突胶质细胞祖细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:自然分化条件下神经祖细胞(NPCs)极少会分化为少突胶质细胞(OLs)。然而,孕晚期的脑白质又极易受到如缺氧,高糖等因素的影响,造成OLs分化受阻及不可逆的神经损伤。因此,调控NPCs向OLs的定向分化具有重要的意义。近期研究发现Annexin(Anx)家族成员AnxA6,通过在细胞内与Ca～(2+)结合,而发挥伴侣分子的作用,并可通过与Fyn、
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
少突胶质细胞祖细胞论文参考文献
[1].令文慧,王明玉,熊春霞,谢登峰,陈麒宇.介导诱导性少突胶质细胞祖细胞生成的重编程因子的研究进展[J].中国细胞生物学学报.2019
[2].乐一帆,马腾,徐扬,田衍平,李红丽.伴侣分子AnnexinA6调控神经祖细胞定向少突胶质细胞分化的实验研究[C].中国解剖学会2019年年会论文文摘汇编.2019
[3].令文慧.应用“间接谱系转化”技术重编程小鼠胚胎成纤维细胞成为诱导性少突胶质细胞祖细胞的研究[D].西南大学.2019
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[5].苏敏,宋银红,何志旭,胡蓉,Debra,Rood.胚胎干细胞来源的胸腺上皮祖细胞表达髓鞘少突胶质细胞糖蛋白诱导抗原特异性耐受,改善实验性自身免疫性脑脊髓炎[C].中国解剖学会2015年年会论文文摘汇编.2015
[6].苏敏.胚胎干细胞源性胸腺上皮祖细胞表达少突胶质细胞糖蛋白对实验性多发硬化症的防治作用[D].贵阳医学院.2015
[7].巩晓明.少突胶质细胞祖细胞分化对Olig1的下调作用(英文)[C].第二届国际神经修复学会年会论文汇编.2009
[8].陈焕然,黄其林,杨辉,马玉新,张伟.Sema3A-Fc真核表达载体构建及诱导少突胶质细胞祖细胞迁移作用观察[J].创伤外科杂志.2008
[9].陈焕然.Sema3A诱导少突胶质细胞祖细胞迁移及其信号转导机制的初步研究[D].第叁军医大学.2008
[10].陈焕然,黄其林,杨辉,马玉新,阴金波.少突胶质细胞祖细胞高效分离培养及EGFP基因转染[J].西南国防医药.2008
标签：诱导性少突胶质细胞祖细胞; 少突胶质细胞; 转录因子; miRNA;