导读:本文包含了桑粒肩天牛论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:桑粒肩天牛,筛选,纤维素,木质素
桑粒肩天牛论文文献综述
刘晨娟,蔡皓,李庆,喻子牛[1]（2010）在《桑粒肩天牛肠道木质纤维素分解细菌的分离和鉴定》一文中研究指出利用纤维素-刚果红选择培养基和苯胺蓝培养基从桑粒肩天牛肠道中筛选出一株同时具有纤维素酶活和木质素酶活的细菌。通过形态学观察和生理生化鉴定,确定为枯草芽孢杆菌。该菌在纤维素发酵培养基中,最高活力为0.51 IU.mL-1;在木质素发酵培养基中,锰过氧化物酶(Mnp)和漆酶(Lac)活力分别为0.1841 IU.mL-1(96 h)、0.0633 IU.mL-1(48 h),没有检测到过氧化物酶(Lip)活力。(本文来源于《化学与生物工程》期刊2010年07期）
陈金华,王中康,贺闽,殷幼平[2]（2008）在《DGGE和RFLP方法分析桑粒肩天牛幼虫肠道微生物多样性》一文中研究指出昆虫是一个复杂的微生态系统,这些微生物对宿主发育,营养物质的消化吸收和防御方面起着重要的作用。利用DGGE和RFLP指纹图谱的方法初步研究桑粒肩天牛幼虫肠道微生态系统。对肠道微生物16S rDNA V3区进行DGGE分离,得到24个不同位置的条带。DGGE图谱亦显示了肠道微生物的季节变化,夏季较冬季菌群丰富。各月DNA样品混合并扩增16S rDNA全长序列,构建16S rDNA克隆文库。用Msp I、Rsa I对文库中175个随机阳性克隆的质粒DNA进行限制性酶切。酶切图谱聚类分析结果显示175个克隆被归为60个不同的类群,这一结果显示桑粒肩天牛幼虫肠道微生物非常丰富。因此,这2种方法都能有效的反应肠道微生物多样性状况,且RFLP比DGGE具有更好的分辨率。结合使用这2种方法,初步反应了桑天牛肠道微生物多样性信息。(本文来源于《生物技术通报》期刊2008年06期）
何伟,王中康,陈金华,李强,曹月青[3]（2008）在《Bt杀虫基因在桑粒肩天牛幼虫肠道内生优势菌中的转化研究》一文中研究指出桑粒肩天牛(Apriona germariHope,Ag)幼虫是一种营钻蛀性生活的重要林业害虫,通过传统纯培养、生理生化鉴定和16SrDNA分子生物学分析等方法分离、鉴定出其肠道优势内生菌溶血葡萄球菌(Staphylococcus haem olyticus,S.haem olytic-us)Ag06菌株和人葡萄球菌(Staphylococcus hom is)Ag08菌株。从中筛选菌株S.haem olyticusAg06进行质粒消除后作为出发菌株,利用电转化技术将含有对鞘翅目昆虫具专一性毒力B t杀虫基因cry3A的Escherichia coli-Bacillus thuringiensis穿梭表达质粒pHT305 a和pHT7911分别转入其中。经质粒稳定性试验、转化子生长特性测试等分析,结果显示cry3A基因已经成功转入Ag幼虫的优势内生菌溶血葡萄球菌中。(本文来源于《氨基酸和生物资源》期刊2008年03期）
王中康,何伟,彭国雄,夏玉先,李强[4]（2008）在《特异性杀虫基因Bt cry3A在桑粒肩天牛幼虫两种肠道常驻内生菌中的转化和表达》一文中研究指出【目的】将特异性杀虫毒蛋白基因Btcry3A转入桑粒肩天牛(Apriona germari Hope,Ag)幼虫肠道常驻内生菌中,构建能在天牛幼虫肠道中定殖并表达特异性杀虫基因Bt cry3A的工程菌。【方法】以传统方法和16S rDNA分子生物学分析等方法分离、鉴定Ag幼虫肠道优势的常驻内生菌,从中筛选出适合转化的候选菌株。利用电转化技术将含有对鞘翅目昆虫具专一性毒力Bt cry3A基因的Escherichia coli-Bacillus thuringiensis穿梭表达质粒pHT305a和pHT7911分别转入Ag幼虫肠道常驻内生菌短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis Ag12,Ag12)和苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis Ag13,Ag13)中。【结果】从Ag幼虫肠道共分离获得18个不同种的可培养细菌菌株,并从中选取菌株Ag12和Ag13作为出发菌株转入Bt cry3A基因。经质粒稳定性试验、转化子生长特性测试、伴胞晶体电镜检测、毒蛋白SDS-PAGE分析、工程菌定殖性分析以及生物毒力测试,结果显示cry3A基因已经成功转入Ag幼虫的常驻内生菌短短芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌中,并且工程菌Ag12-305a、Ag13-305a、Ag12-7911和Ag13-7911都能在天牛幼虫肠道内稳定生长、繁殖并表达分子量约65kDa的伴孢晶体杀虫蛋白Cry3A。【结论】Bt cry3A基因已成功转入桑粒肩天牛幼虫肠道优势常驻内生菌中,获得了四株能在桑粒肩天牛幼虫肠道内定殖,并能表达目的杀虫基因Bt cry3A的转基因工程菌。(本文来源于《微生物学报》期刊2008年09期）
陈金华[5]（2008）在《桑粒肩天牛幼虫肠道微生物多样性的分子生物学方法研究》一文中研究指出桑粒肩天牛是是鞘翅目天牛科的一个很大的类群,一种重要的农业害虫,它们危害多种林木和木质产品。昆虫的肠道生活着大量的微生物,这些微生物和宿主相互作用,相互影响,对宿主的生长发育,营养代谢和疾病防御有着非常重要的作用。依靠纯培养技术为基础的传统的方法研究肠道微生物的多样性存在着很多的局限性,因为自然界超过99%的微生物,在现有的实验条件下都不能培养。而分子生物学的方法能够突破培养的瓶颈。本试验使用基于16S rDNA-PCR的变性梯度凝胶电泳(denaturing gradient gel electrophoresis, DGGE) ,限制性片段多态性分析(restriction fragment length polymorphism , RFLP)和均一化克隆文库技术研究桑粒肩天牛幼虫肠道微生物多样性。使用DGGE分析方法,从桑粒肩天牛肠道微生物的16S rDNA扩增片段切胶回收22个不同条带,经过分别测序,显示出它们属于15个属细菌。其中,一株不可培养的变形菌属菌株(Proteobacterium)和一株克雷伯氏菌属(Klebsiella)的细菌几乎都出现在检测的样品中。DGGE凝胶中最亮的两个条带分别被鉴定为芽孢杆菌属的菌株(Bacillus sp.)和克雷伯氏菌属菌株(Klebsiella sp.)。即通过DGGE图谱表现出来的优势菌为杆菌和克雷伯氏菌。DGGE图谱还反映了天牛肠道微生物的季节变化,夏季的肠道菌群较冬季更为丰富。同时,构建了一个传统的桑粒肩天牛幼虫肠道16S rDNA克隆文库和一个均一化16S rDNA克隆文库。用限制性酶切片段多态性(restriction fragment length polymorphism , RFLP)方法分析建立的传统克隆文库,根据不同的酶切指纹图谱将175个克隆子归为48个不同的分类操作单元(OTUs)。每个分类操作单元选择一个代表克隆子进行测序,通过比对,这48个OTUs分别属于22个不同的细菌属,其中的优势菌是来自克雷伯氏菌属(Klebsiella),乳球菌属(Lactococcus)和肠球菌属(Entorococcus)的细菌,它们分别占所检测克隆总数的24.6%, 19.4%和17.1%。此结果显示,RFLP分析方法比DGGE分析方法具有更高的分辨率。均一化技术被首次用于环境中微生物多样性的研究。在克隆的均一化文库中,随机测序的82个克隆包含了79种不同的细菌,它们分别属于32个属,17个科和7个门或者亚门。其中,来自醋酸杆菌属(Acetobacter),弓形杆菌属(Arcobacter),短波单胞菌属(Brevundimonas),氢噬胞菌属(Hydrogenophaga),克吕沃尔菌属(Kluyvera),泛菌属(Pantoea), Grimontella和涅斯捷连科氏菌属(Nesterenkonia)等8个属的细菌在传统以RFLP方法分析的传统文库中和以DGGE直接分析的方法中都没有检测到。此外,由于用于分析的序列接近16S rDNA的全长,两个文库也提供了比直接的16S rDNA PCR扩增片段的DGGE分析更为详尽的生物多样性信息。使用CLUSTAL W和PHYLIP (version 3.67)等软件对所得到的序列进行多样性分析,发现在本实验中得到的部分菌群与基因库中已知菌群的系统发育关系较远,较为独特。叁种分子生物学方法展示了桑粒肩天牛肠道中栖息着超过我们预料的丰富的微生物群体,总共有140多种,来自9个门,22个科和44个属。这个结果证明了直接提取DNA和扩增16S rDNA的分子生物学方法比传统的基于纯培养的方法能得到更多的微生物多样性信息。这叁种分子生物学的方法可以相互补充,全面综合的揭示和阐述天牛肠道微生物菌群的结构和变化。均一化技术也被证实是一种行之有效的肠道微生物多样性的研究方法。(本文来源于《重庆大学》期刊2008-04-01）
何伟[6]（2008）在《Bt杀虫基因Cry3A在桑粒肩天牛幼虫肠道优势菌和常驻菌中的转化和表达研究》一文中研究指出天牛是鞘翅目昆虫中较大的一个类群,在世界各地广有分布,其幼虫大多以木质纤维为食,林木、果树、桑、茶、棉、木建材料、家具等都可以受到天牛的危害,林木的天牛受害率达20-90%,每年造成的经济损失上亿元。由于天牛幼虫营钻蛀性生活,生活隐蔽,活动期长,所以防治工作难度很大。目前的主要防治方法仍是以传统的人工钩杀幼虫、砸卵、堵洞和化学药剂防治等方法为主。其中人工防治费时、费工、成本又高,不适用于规模化大农场生产;利用化学防治药剂防治由于药剂有效期短,不易达到虫体,而且容易导致害虫抗药性增强以及具有污染环境、杀伤天敌的弊端。因此,探索新的防治途径,开发新的防治技术,已成为生产上的迫切要求。新的害虫防治方法和理论完善与发展离不开昆虫生理生化的研究。近年来,研究昆虫肠道正常菌群和肠道微生态以探索新的害虫控制方法正在成为国内外研究的热点之一。本文用传统培养方法和现代分子生物学方法-16S rDNA分析法对桑粒肩天牛幼虫肠道微生物组成进行了研究,在此基础上,首次探索将杀虫基因转入天牛幼虫肠道常驻的和优势的正常菌群载体菌,以构建在昆虫肠道中高定植率、高生存力、高繁殖并能表达杀虫毒蛋白伴孢晶体的新型杀虫工程菌。研究将可能为害虫的生物防治开辟一条新的途径,为新型转基因生物农药的研发提供理论依据与技术支撑。主要研究结果如下:①用传统的培养方法从桑粒肩天牛幼虫肠道中共分离鉴定出18个种的细菌,它们分别是产酸克雷伯氏菌(Klebsilla Oxytoca)、成团杆菌(Enterobacter cloacae)、荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)、恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)、弗氏志贺氏菌(Shiqella flexneri)、溶血葡萄球菌(Staphylococcus haemolyticus)、鲍氏志贺氏菌(Shiqella boydii)、人葡萄球菌(Staphylococcus homis)、藤黄微球菌(Micrococcus luteus)、Breneria quercina、无花果沙雷氏菌(Serratia ficaria)、短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis)、苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)、大肠埃希氏菌(Escherichia coli)、Naxibacter haematophilus、产气长杆菌(Enterobacter aerogens)、克里斯汀微球菌( Micrococcus kristinae)、阿氏肠杆菌(Enterobacter absburiae)。其中溶血葡萄球菌(S. haemolyticus)、人葡萄球菌(S. homis)、短短芽孢杆菌(B. brevis)、苏云金芽孢杆菌(B. thuringiensis)等在幼虫肠道中全年均能分离到,成团杆菌(E. cloacae)、产气肠杆菌(E. aerogens)、阿氏肠杆菌(E. absburiae)可在1～2月份外的全年的大部分时间分离到,其它细菌种类则只能在4～11月份分离到,说明至少溶血葡萄球菌(S. haemolyticus)、人葡萄球菌(S. homis)、短短芽孢杆菌(B. brevis)、苏云金芽孢杆菌(B. thuringiensis)应为天牛肠道常驻菌群,而其余种类微生物则很可能是随进食或与环境接触而进入的过路菌群。根据分离率和肠道菌群培养的数量统计结果表明天牛肠道优势菌群是葡萄球菌属(Staphylococcus)细菌中的溶血葡萄球菌(S. haemolyticus)和人葡萄球菌(S. homis),其菌量分别为7.74±0.61和7.66±0.25,分离率分别为100%和98.09%。②将按传统方法从桑粒肩天牛幼虫肠道分离、鉴定的18个不同种的细菌作为PCR模板,进行16S rDNA序列的分析,经与数据库中登录序列比对,鉴定结果与分离培养方法所获得的结果一致。所测序列与Genbank中同种细菌的16S rDNA序列相似性分别为98.58%、99.18%、97.86%、99.89%、98.02%、99.19%、99.32%、98.46%、99.30%、98.05%、96.97%、98.33%、99.46%、99.60%、99.03%、99.45%、99.01%、99.52%,均高于98%,说明鉴定结果正确。所得菌株的16S rRNA都已在Genbank中登录注册,系统接受号为EU554427-EU554444。③将含有红霉素抗性基因和cry3A基因的Escherichia coli -Bacillus thuringiensis穿梭表达质粒pHT305a和pHT7911转入桑粒肩天牛幼虫肠道优势常驻菌溶血葡萄球菌(S. haemolyticus)、人葡萄球菌(S. homis)和常驻内生菌短短芽孢杆菌(B. brevis)、苏云金芽孢杆菌(B. thuringiensis)中,获得的转化子中外源基因能稳定自主复制,而且其中用红霉素抗性平板筛选出的常驻内生工程菌转化子在产伴孢晶体发酵培养基中培养至90%以上芽孢脱落晶体释放时的菌液可提取到经SDS-PAGE分析分子量为65KDa的伴孢晶体蛋白,说明已成功获得了四株转基因杀虫工程菌。对工程菌在天牛幼虫肠道内的定殖能力和生物毒力进一步测定的结果显示此四株工程菌既能在桑粒肩天牛幼虫肠道内定殖,又对天牛幼虫具有一定的杀虫活性。(本文来源于《重庆大学》期刊2008-04-01）
冯霞[7]（2005）在《桑粒肩天牛幼虫肠道优势菌群研究及Cry3A重组质粒载体构建》一文中研究指出天牛是鞘翅目昆虫中一个很大的类群,其幼虫大多以木质纤维为食。因为天牛危害,林木受害率达20-90%,每年经济损失上亿元。而传统的天牛防治方法费时、费工、成本又高,有的还对环境有严重污染。因此,探索新的防治途径,开发新的防治技术,已成为生产上的迫切要求。新的害虫防治方法和理论完善与发展离不开昆虫生理生化的研究。近年来,研究昆虫肠道正常菌群和肠道微生态以探索新的害虫控制方法正在成为国内外研究的热点之一。本文用传统培养方法和现代分子生物学方法-16S rRNA分析法对桑粒肩天牛幼虫肠道微生物组成进行了研究。同时本文还构建了含有GFP 标记基因的Cry3A基因重组质粒载体,并将此载体转入桑粒肩天牛幼虫肠道优势菌群,以期通过GFP标记基因表达绿色荧光蛋白而研究优势菌群在桑粒肩天牛幼虫肠道内的定植以及Cry3A 基因在桑粒肩天牛幼虫肠道内的表达。进而研究Cry3A 表达的毒蛋白对天牛生长发育的影响,为新型转基因生物农药的研发提供理论依据与技术支撑。主要研究结果如下:(1) 用传统的培养方法共分离出28 种细菌,经鉴定为9 个不同的属,由分离率和肠道菌群的数量统计可得天牛肠道优势菌群是葡萄球菌属(Staphylococcus),其菌量为7.84±0.61,分离率为100%;其次是肠杆菌属(Enterobacter),其菌量为7.42±0.23,分离率也为100%。其它细菌分离率较低,依次是克雷伯氏菌属(Klebsiella)、链球菌属(Streptococcus)、变形杆菌属(Proteus)、沙雷氏菌属(Serratia)、埃希氏菌属(Escherichia)、芽孢杆菌属(Bacillus)、微球菌属(Micrococcus)。(2) 将传统方法从桑粒肩天牛幼虫肠道分离、鉴定的9 个不同属的细菌作为PCR 模板,进行16S rRNA 序列分析。研究结果表明这9 个不同属的细菌分别是葡萄球菌属(Staphylococcus)、肠杆菌属(Enterobacter)、克雷伯氏菌属(Klebsiella)、链球菌属(Streptococcus)、变形杆菌属(Proteus)、沙雷氏菌属(Serratia)、埃希氏菌属(Escherichia)、芽孢杆菌属(Bacillus)和微球菌属(Micrococcus),与分离培养方法所获得的结果一致。所测序列与BLAST 中的16S rRNA 序列相似性分别为98.78%、99.02%、98.86%、97.89%、99.24%、98.99%、98.44%、86.67%、99.18%(第一对引物);99.23%、99.34%、99.64%、98.35%、99.87%、99.08%、99.16%、99.32%、99.29%(第二对引物)。(3) 用16S rRNA 序列分析法研究结果表明桑粒肩天牛幼虫肠道微生物优势菌群为葡萄球菌属(Staphylococcus),其次为肠杆菌属(Enterobacter)。它们的16S(本文来源于《重庆大学》期刊2005-05-10）
张伟,何正波,邓新平,殷幼平[8]（2004）在《桑粒肩天牛幼虫肠道菌群的种类及分布》一文中研究指出对47头野外采集的桑粒肩天牛幼虫肠道进行定性与定量检测,发现了13种菌群。其中葡萄球菌属在前中肠、中中肠、后中肠和后肠中的分离率为100%,是常住菌群。链球菌属、肠杆菌属、埃希氏菌属、志贺氏菌属和芽孢杆菌属在上述4个肠段都能分离到,但分离率较低。而其他菌群只能在某些肠道分离到,为过路菌群。各个肠段菌群菌量分布不同,即后中肠<中中肠<前中肠<后肠。葡萄球菌属菌量在各肠段分布同总的菌群菌量一致。可见葡萄球菌属在桑粒肩天牛生长发育过程中起了积极的作用。(本文来源于《西南农业大学学报(自然科学版)》期刊2004年02期）
殷幼平,王中康,曹月青,何正波[9]（2004）在《桑粒肩天牛幼虫内切-β-1,4-葡聚糖酶的纯化及性质》一文中研究指出经丙酮沉淀、UltrogelAcA5 4凝胶过滤、Q Sepharose离子交换柱层析和聚丙烯酰胺凝胶制备电泳 ,发现桑粒肩天牛幼虫肠液中具有所有水解纤维素成分的叁种消化酶 ,并且每种酶都有不同数目的同工酶。纯化出一种内切 - β- 1 ,4 -葡聚糖酶 (EG - 1 ) ,其分子量为 2 6ku ,等电点约为pI4 0。酶的最适反应温度为 4 5℃ ,最适反应pH为5 2 ;不耐热 ,5 0℃处理 30min ,酶活大大降低 ,70℃处理 2h ,几乎丧失全部活性 ,显示出该酶适合动物肠道反应环境 ,是内源性酶。(本文来源于《林业科学》期刊2004年02期）
何正波,殷幼平,曹月青,董亚敏,张伟[10]（2001）在《桑粒肩天牛幼虫肠道菌群的研究》一文中研究指出Intestinal flora of 47 Apriona germari(Hope) larvae,collected from fields,had been isolated and identified.The results showed that the predominant bacteria were Staphylococcus.Its viable count was 7.63±0.21,and the detection rate was 100%.Meanwhile,a strain of cellulose-utilizing bacterium was isolated from the fore-midgut fluid of A.germari larvae with the cellulose-congo red agar medium.The bacterium was tentatively identified as Cellulomonas.The detection rate of the cellulolytic bacterium was 23.40%,and the count was 3.84±0.54 approximately.Its contribution to the borer′s cellulose digestion needs further investigations.(本文来源于《微生物学报》期刊2001年06期）
桑粒肩天牛论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
昆虫是一个复杂的微生态系统,这些微生物对宿主发育,营养物质的消化吸收和防御方面起着重要的作用。利用DGGE和RFLP指纹图谱的方法初步研究桑粒肩天牛幼虫肠道微生态系统。对肠道微生物16S rDNA V3区进行DGGE分离,得到24个不同位置的条带。DGGE图谱亦显示了肠道微生物的季节变化,夏季较冬季菌群丰富。各月DNA样品混合并扩增16S rDNA全长序列,构建16S rDNA克隆文库。用Msp I、Rsa I对文库中175个随机阳性克隆的质粒DNA进行限制性酶切。酶切图谱聚类分析结果显示175个克隆被归为60个不同的类群,这一结果显示桑粒肩天牛幼虫肠道微生物非常丰富。因此,这2种方法都能有效的反应肠道微生物多样性状况,且RFLP比DGGE具有更好的分辨率。结合使用这2种方法,初步反应了桑天牛肠道微生物多样性信息。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
桑粒肩天牛论文参考文献
[1].刘晨娟,蔡皓,李庆,喻子牛.桑粒肩天牛肠道木质纤维素分解细菌的分离和鉴定[J].化学与生物工程.2010
[2].陈金华,王中康,贺闽,殷幼平.DGGE和RFLP方法分析桑粒肩天牛幼虫肠道微生物多样性[J].生物技术通报.2008
[3].何伟,王中康,陈金华,李强,曹月青.Bt杀虫基因在桑粒肩天牛幼虫肠道内生优势菌中的转化研究[J].氨基酸和生物资源.2008
[4].王中康,何伟,彭国雄,夏玉先,李强.特异性杀虫基因Btcry3A在桑粒肩天牛幼虫两种肠道常驻内生菌中的转化和表达[J].微生物学报.2008
[5].陈金华.桑粒肩天牛幼虫肠道微生物多样性的分子生物学方法研究[D].重庆大学.2008
[6].何伟.Bt杀虫基因Cry3A在桑粒肩天牛幼虫肠道优势菌和常驻菌中的转化和表达研究[D].重庆大学.2008
[7].冯霞.桑粒肩天牛幼虫肠道优势菌群研究及Cry3A重组质粒载体构建[D].重庆大学.2005
[8].张伟,何正波,邓新平,殷幼平.桑粒肩天牛幼虫肠道菌群的种类及分布[J].西南农业大学学报(自然科学版).2004
[9].殷幼平,王中康,曹月青,何正波.桑粒肩天牛幼虫内切-β-1,4-葡聚糖酶的纯化及性质[J].林业科学.2004
[10].何正波,殷幼平,曹月青,董亚敏,张伟.桑粒肩天牛幼虫肠道菌群的研究[J].微生物学报.2001