导读:本文包含了猪水肿毒素论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:猪水肿毒素,单克隆抗体,单抗竞争ELISA,抗体检测
猪水肿毒素论文文献综述
张建民,吴斌,赵战勤,卢顺,何华[1]（2009）在《猪水肿毒素单抗竞争ELISA试剂盒的研制及应用》一文中研究指出本研究旨在建立猪水肿毒素抗体的快速检测方法。以纯化的猪水肿毒素A亚基基因片段的原核表达产物作为抗原免疫BALB/c小鼠制备单抗,并利用表达蛋白和猪水肿毒素A亚基单抗酶结合物建立了竞争ELISA方法检测猪水肿毒素抗体。经过研究确定抗原包被浓度为0.32μg.mL-1,待检血清最佳稀释度为1∶2,酶标单抗工作浓度为1∶3200,血清抑制率大于40%为阳性。应用单抗竞争ELISA和细胞毒性中和试验同时对60份血清进行猪水肿毒素抗体检测,竞争ELISA的检出率为33.8%,细胞毒性中和试验检出率为30.9%,两者符合率达88.2%。试验结果表明,该ELISA方法特异性强,敏感性高,稳定性和重复性好,操作简便。本方法的建立在实验室诊断的标准化、猪水肿病疫苗免疫效果的评价及流行病学调查方面具有较高的应用价值。(本文来源于《畜牧兽医学报》期刊2009年07期）
张建民[2]（2008）在《猪水肿毒素A亚基单抗的制备及竞争ELISA检测方法的建立》一文中研究指出猪水肿病(Porcine Edema disease,ED)是常见的一种仔猪急性、致死性传染病,是由某些特定血清型的大肠杆菌引起的肠毒血症。该病的直接致病因子是产志贺样毒素大肠杆菌(Shiga-like toxigenic E.coli,SLTEC)产生的一种志贺样毒素Ⅱ型变异体(Shiga-like toxinⅡe,SLT-Ⅱe),又称猪水肿毒素。SLT-Ⅱe的分子结构由一个A亚单位和5个B亚单位组成。SLT-Ⅱe通过其B亚单位与猪肠上皮细胞的特异性受体发生结合,介导A亚单位进入细胞核糖体,其A1亚基与核糖体大亚基28SrRNA发生接触反应阻止氨酰tRNA与核糖体RNA结合,从而阻断细胞内蛋白质的合成,导致细胞死亡。因此,SLT-Ⅱe是该菌致病性的重要物质基础,是制备毒素的特异性抗体理想的靶抗原。鉴于猪水肿病是一种造成断奶仔猪死亡并在世界范围内广泛存在的重要疾病。对猪群的血清学检测以及疫苗免疫是预防和控制该病的关键,然而目前为止,市面上还没有商品化的疫苗及血清学检测方法。本实验室研究生已经分别克隆表达了猪水肿毒素A亚基和B亚基,利用纯化的蛋白建立了间接ELISA方法,但是该方法采用大肠杆菌的融合表达蛋白含有大肠杆菌蛋白,在临床应用上常会产生假阳性的结果,因此需要进行改进。本研究就是利用猪水肿病大肠杆菌SLT-ⅡeA表达蛋白制备其单克隆抗体,旨在建立检测猪水肿毒素抗体的单抗竞争ELISA方法,具体研究情况如下:1.猪水肿毒素A亚基单克隆抗体的制备及鉴定以纯化的猪水肿毒素A亚基基因片段的原核表达蛋白为免疫原,免疫Balb/c小鼠,取免疫鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,用间接ELISA方法筛选,采用有限稀释法对其进行克隆,最终获得10株能稳定分泌抗猪水肿毒素A亚基蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为3E12、2G11、5812、2E3、4F4、4G2、1A10、4A7、4812、3H7。细胞培养上清ELISA效价为2~2×100～2~5×100,腹水ELISA效价可达2~8×100～2~(14)×100。与蛋白亲和力试验表明,这10株单抗具有较高的亲和力。Western-blot结果表明,10株单抗都可以与表达蛋白反应,其中有8株单抗可以与天然水肿毒素反应。Vero细胞中和试验表明,只有3H7和4G2具有一定的中和活性。2.竞争ELISA方法的建立和初步应用本研究以辛酸—硫酸铵法纯化3H7单抗腹水,以改良过碘酸钠法标记纯化的3H7单抗,制备酶标单克隆抗体。以原核表达蛋白SLT-ⅡeA为抗原,以酶标单抗为检测抗体,建立检测猪水肿毒素抗体的单抗竞争ELISA方法。用方阵滴定确定蛋白包被浓度为0.32μg/mL,酶标单抗的工作浓度为1:3200,血清稀释度为1:2,通过检测30份阴性血清,120份阳性血清,确定血清抑制率大于40%判定为阳性。特异性、重复性及临床试验结果表明,该方法特异性强、重复性好、稳定性高。本实验通过单克隆抗体制备的常规技术,获得针对猪水肿毒素A亚基的抗体,用纯化的单抗和HRP进行标记,获得可以与阳性血清竞争的酶标抗体。同时,对影响ELISA试验的主要因素进行了摸索,对研制的诊断试剂盒的特异性、敏感性、重复性等进行研究和探索,为下一步试剂盒的应用打下了基础。(本文来源于《华中农业大学》期刊2008-06-01）
赵战勤,卢顺,吴斌,刘国平,张建民[3]（2007）在《猪水肿毒素A亚基基因表达产物的生物学特性及抗体检测ELISA方法的建立》一文中研究指出根据TMpred生物学软件对SLT-ⅡeA亚基的蛋白质结构分析结果,表达了猪水肿毒素(SLT-Ⅱe)A亚基。SDS-PAGE和Western blot分析表明,表达产物以可溶形式存在,易于纯化且具有良好免疫学活性。生物学毒性试验表明,表达产物不能致死小白鼠,也不具有Vero细胞毒性。体外细胞毒性中和试验表明,表达产物的兔抗血清能中和天然SLT-Ⅱe(中和度90.4℅)。在小鼠免疫保护力试验中,表达产物作为免疫原不能提供任何保护力。以表达产物为抗原建立检测SLT-Ⅱe抗体的间接ELISA方法,结果该方法对猪萎缩性鼻炎等9种常见细菌性疾病阳性血清的检测均为阴性,能特异性检测到人工感染猪水肿毒素8d仔猪的血清抗体IgG,对临床送检的1083份猪血清的检测阳性率为20.9℅。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2007年03期）
赵战勤,吴斌,刘国平,林艺远,周锐[4]（2005）在《猪水肿毒素A1亚基的可溶性表达及其表达产物的生物学特性研究》一文中研究指出以本地分离的猪水肿病大肠杆菌鄂E株为模板,用PCR分别扩增大肠杆菌猪水肿病毒素(SLT-IIe)A亚基960bp的全基因和A1亚基666bp的基因片段,分别将其克隆到pMD18-T载体。对A亚基960bp的基因片段进行核苷酸和氨基酸序列分析,同时将A1亚基666bp的DNA片段后插入pGEX-KG构建原核表达载体pGEX-KG/SLT-IIeA1并转化BL21进行诱导表达。获得的融合表达蛋白为53kDa的可溶性蛋白质且具有免疫学活性。将蛋白纯化后免疫新西兰大白兔,获得的抗血清能中和鄂E株产生的SLT-IIe从而阻断其对VeroE6细胞的生物学毒性作用。以表达的蛋白为抗原建立SLT-IIeA1亚基的间接ELISA检测方法,经初步研究与应用表明,该方法可用于猪血清中SLT-IIe抗体的检测。(本文来源于《中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届全国会员代表大会暨第11次学术研讨会论文集》期刊2005-09-24）
倪振亚,焦新安,高崧,彭大新,张如宽[5]（2000）在《大肠杆菌猪水肿毒素B亚单位基因的克隆与鉴定》一文中研究指出根据已知大肠杆菌志贺氏菌样毒素Ⅱ型变异体Ｂ亚单位（ＳＬＴ－ⅡｖＢ）基因序列，设计并合成 ３条２对引物，以大肠杆菌 Ｏ_１３８基因组为模板，通过聚合酶链式反应（ＰＣＲ）分别扩增出 ２０４ ｂｐ的基因序列及包含一段信号肽的 ２６１ ｂｐ基因序列。将这两段 ＤＮＡ分别克隆进表达性载体质粒ＰＹＡ３３３４的ＥｃｏＲⅠ和ＢａｍＨⅠ位点之间，经地高辛标记探针进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交和酶切分析鉴定，并对两条扩增片段进行序列测定。结果表明，扩增产物的大小与设计相符，扩增与克隆的片段为ＳＬＴ－ⅡｖＢ基因的特异性片段。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2000年01期）
杜华茂,何洪章,徐刚,黄伟[6]（1997）在《猪水肿毒素琼脂扩散沉淀反应方法的建立》一文中研究指出采用滤膜除菌、生物大分子浓缩胶浓缩、戊二醛灭活的方法制备的EHEc水肿毒素抗原,可与其兔高免血清和鸡高免血清发生沉淀反应。对5株EHEc进行了分析,并与小白鼠毒性试验结果进行了比较,证明该沉淀反应具有高度的特异性。(本文来源于《四川畜牧兽医学院学报》期刊1997年01期）
猪水肿毒素论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
猪水肿病(Porcine Edema disease,ED)是常见的一种仔猪急性、致死性传染病,是由某些特定血清型的大肠杆菌引起的肠毒血症。该病的直接致病因子是产志贺样毒素大肠杆菌(Shiga-like toxigenic E.coli,SLTEC)产生的一种志贺样毒素Ⅱ型变异体(Shiga-like toxinⅡe,SLT-Ⅱe),又称猪水肿毒素。SLT-Ⅱe的分子结构由一个A亚单位和5个B亚单位组成。SLT-Ⅱe通过其B亚单位与猪肠上皮细胞的特异性受体发生结合,介导A亚单位进入细胞核糖体,其A1亚基与核糖体大亚基28SrRNA发生接触反应阻止氨酰tRNA与核糖体RNA结合,从而阻断细胞内蛋白质的合成,导致细胞死亡。因此,SLT-Ⅱe是该菌致病性的重要物质基础,是制备毒素的特异性抗体理想的靶抗原。鉴于猪水肿病是一种造成断奶仔猪死亡并在世界范围内广泛存在的重要疾病。对猪群的血清学检测以及疫苗免疫是预防和控制该病的关键,然而目前为止,市面上还没有商品化的疫苗及血清学检测方法。本实验室研究生已经分别克隆表达了猪水肿毒素A亚基和B亚基,利用纯化的蛋白建立了间接ELISA方法,但是该方法采用大肠杆菌的融合表达蛋白含有大肠杆菌蛋白,在临床应用上常会产生假阳性的结果,因此需要进行改进。本研究就是利用猪水肿病大肠杆菌SLT-ⅡeA表达蛋白制备其单克隆抗体,旨在建立检测猪水肿毒素抗体的单抗竞争ELISA方法,具体研究情况如下:1.猪水肿毒素A亚基单克隆抗体的制备及鉴定以纯化的猪水肿毒素A亚基基因片段的原核表达蛋白为免疫原,免疫Balb/c小鼠,取免疫鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,用间接ELISA方法筛选,采用有限稀释法对其进行克隆,最终获得10株能稳定分泌抗猪水肿毒素A亚基蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为3E12、2G11、5812、2E3、4F4、4G2、1A10、4A7、4812、3H7。细胞培养上清ELISA效价为2~2×100～2~5×100,腹水ELISA效价可达2~8×100～2~(14)×100。与蛋白亲和力试验表明,这10株单抗具有较高的亲和力。Western-blot结果表明,10株单抗都可以与表达蛋白反应,其中有8株单抗可以与天然水肿毒素反应。Vero细胞中和试验表明,只有3H7和4G2具有一定的中和活性。2.竞争ELISA方法的建立和初步应用本研究以辛酸—硫酸铵法纯化3H7单抗腹水,以改良过碘酸钠法标记纯化的3H7单抗,制备酶标单克隆抗体。以原核表达蛋白SLT-ⅡeA为抗原,以酶标单抗为检测抗体,建立检测猪水肿毒素抗体的单抗竞争ELISA方法。用方阵滴定确定蛋白包被浓度为0.32μg/mL,酶标单抗的工作浓度为1:3200,血清稀释度为1:2,通过检测30份阴性血清,120份阳性血清,确定血清抑制率大于40%判定为阳性。特异性、重复性及临床试验结果表明,该方法特异性强、重复性好、稳定性高。本实验通过单克隆抗体制备的常规技术,获得针对猪水肿毒素A亚基的抗体,用纯化的单抗和HRP进行标记,获得可以与阳性血清竞争的酶标抗体。同时,对影响ELISA试验的主要因素进行了摸索,对研制的诊断试剂盒的特异性、敏感性、重复性等进行研究和探索,为下一步试剂盒的应用打下了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
猪水肿毒素论文参考文献
[1].张建民,吴斌,赵战勤,卢顺,何华.猪水肿毒素单抗竞争ELISA试剂盒的研制及应用[J].畜牧兽医学报.2009
[2].张建民.猪水肿毒素A亚基单抗的制备及竞争ELISA检测方法的建立[D].华中农业大学.2008
[3].赵战勤,卢顺,吴斌,刘国平,张建民.猪水肿毒素A亚基基因表达产物的生物学特性及抗体检测ELISA方法的建立[J].农业生物技术学报.2007
[4].赵战勤,吴斌,刘国平,林艺远,周锐.猪水肿毒素A1亚基的可溶性表达及其表达产物的生物学特性研究[C].中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届全国会员代表大会暨第11次学术研讨会论文集.2005
[5].倪振亚,焦新安,高崧,彭大新,张如宽.大肠杆菌猪水肿毒素B亚单位基因的克隆与鉴定[J].农业生物技术学报.2000
[6].杜华茂,何洪章,徐刚,黄伟.猪水肿毒素琼脂扩散沉淀反应方法的建立[J].四川畜牧兽医学院学报.1997