陈蒙：山葡萄苯丙烷代谢相关基因的克隆表达与功能验证论文

本文主要研究内容

作者陈蒙（2019）在《山葡萄苯丙烷代谢相关基因的克隆表达与功能验证》一文中研究指出：山葡萄果皮中富含多种花色苷,该物质既能使植物呈现出诱人的色泽,又在各个领域中具有开发应用的潜能,对山葡萄花色苷的生物合成进行研究具有重要意义。本试验以不同发育期的山葡萄果皮为供试材料,针对控制花色苷生物合成的苯丙烷代谢途径,对参与该分支前三个催化反应步骤的PAL、C4H、4CL基因进行研究,应用RACE法获得了PAL、C4H、4CL基因的全长cDNA序列,并进行生物信息学分析;应用实时荧光定量PCR技术,对不同发育期的果皮中三个基因表达量进行分析;将目的基因在大肠杆菌中进行表达,并优化诱导表达过程;以拟南芥为受体材料,将C4H基因转化到拟南芥中。主要研究结果如下:从山葡萄果皮中克隆得到PAL、C4H、基因全长cDNA序列。分析结果显示:PAL基因VaPAL的全长eDNA为2 130 bp,开放阅读框(ORF)为1 926 bp,共编码641个氨基酸,分子量为61.06 KDa。C4H基因VaC4H的全长cDNA为1735 bp,开放阅读框(ORF)为1 518 bp,共编码505个氨基酸,分子量为57.70 KDa。4CL基因Va4WCL 的 cDNA 全长为 1 772 bp,放阅读框(ORF)为 1 635 bp,共编码544个氨基酸,分子量为61.07 KDa。研究山葡萄果皮不同发育阶段中PAL、C4H、4CL基因的表达规律,结果表明:VaPAL基因从转色前到完熟期表达量逐次递减,转色50%和转色 100%儿乎不表达。VaC4H在果皮各个转色时期表达丰度较高,该基因表达量在整个生长过程中表达量呈逐渐上升的趋势。在山葡萄果皮颜色转色100%时,Va4CL的表达丰度最高,在此阶段前该基因表达量呈逐渐上升的趋势,完熟时期表达有所下降,相对表达量在这三个基因中最低。将重组质粒pET28a-VaPAL、pET28a-VaC4H、pET28a-Va4CL转化感受态细胞BL21后,加入1PTG诱导菌体表达。本研究中,在28℃培养条件下筛选IPTG的浓度,PAL、C4H、4CL蛋白的IPTG最佳诱导浓度分别为1.0 mmol L-1、1.0 mmo丨L-1、1.2mmol-L,分子量分别约为 61 kDa、57kDa、61 kDa。转VaC4H基因的拟南芥(Arabidopsis thaliana)植株较野生型生长迅速,表现为叶片数目多于对照,中部叶片、叶柄均长于对照,茎和叶均有明显颜色变化,茎和叶颜色较深,呈现紫红色。

Abstract

shan pu tao guo pi zhong fu han duo chong hua se gan ,gai wu zhi ji neng shi zhi wu cheng xian chu you ren de se ze ,you zai ge ge ling yu zhong ju you kai fa ying yong de qian neng ,dui shan pu tao hua se gan de sheng wu ge cheng jin hang yan jiu ju you chong yao yi yi 。ben shi yan yi bu tong fa yo ji de shan pu tao guo pi wei gong shi cai liao ,zhen dui kong zhi hua se gan sheng wu ge cheng de ben bing wan dai xie tu jing ,dui can yu gai fen zhi qian san ge cui hua fan ying bu zhou de PAL、C4H、4CLji yin jin hang yan jiu ,ying yong RACEfa huo de le PAL、C4H、4CLji yin de quan chang cDNAxu lie ,bing jin hang sheng wu xin xi xue fen xi ;ying yong shi shi ying guang ding liang PCRji shu ,dui bu tong fa yo ji de guo pi zhong san ge ji yin biao da liang jin hang fen xi ;jiang mu de ji yin zai da chang gan jun zhong jin hang biao da ,bing you hua you dao biao da guo cheng ;yi ni na gai wei shou ti cai liao ,jiang C4Hji yin zhuai hua dao ni na gai zhong 。zhu yao yan jiu jie guo ru xia :cong shan pu tao guo pi zhong ke long de dao PAL、C4H、ji yin quan chang cDNAxu lie 。fen xi jie guo xian shi :PALji yin VaPALde quan chang eDNAwei 2 130 bp,kai fang yue dou kuang (ORF)wei 1 926 bp,gong bian ma 641ge an ji suan ,fen zi liang wei 61.06 KDa。C4Hji yin VaC4Hde quan chang cDNAwei 1735 bp,kai fang yue dou kuang (ORF)wei 1 518 bp,gong bian ma 505ge an ji suan ,fen zi liang wei 57.70 KDa。4CLji yin Va4WCL de cDNA quan chang wei 1 772 bp,fang yue dou kuang (ORF)wei 1 635 bp,gong bian ma 544ge an ji suan ,fen zi liang wei 61.07 KDa。yan jiu shan pu tao guo pi bu tong fa yo jie duan zhong PAL、C4H、4CLji yin de biao da gui lv ,jie guo biao ming :VaPALji yin cong zhuai se qian dao wan shou ji biao da liang zhu ci di jian ,zhuai se 50%he zhuai se 100%er hu bu biao da 。VaC4Hzai guo pi ge ge zhuai se shi ji biao da feng du jiao gao ,gai ji yin biao da liang zai zheng ge sheng chang guo cheng zhong biao da liang cheng zhu jian shang sheng de qu shi 。zai shan pu tao guo pi yan se zhuai se 100%shi ,Va4CLde biao da feng du zui gao ,zai ci jie duan qian gai ji yin biao da liang cheng zhu jian shang sheng de qu shi ,wan shou shi ji biao da you suo xia jiang ,xiang dui biao da liang zai zhe san ge ji yin zhong zui di 。jiang chong zu zhi li pET28a-VaPAL、pET28a-VaC4H、pET28a-Va4CLzhuai hua gan shou tai xi bao BL21hou ,jia ru 1PTGyou dao jun ti biao da 。ben yan jiu zhong ,zai 28℃pei yang tiao jian xia shai shua IPTGde nong du ,PAL、C4H、4CLdan bai de IPTGzui jia you dao nong du fen bie wei 1.0 mmol L-1、1.0 mmoshu L-1、1.2mmol-L,fen zi liang fen bie yao wei 61 kDa、57kDa、61 kDa。zhuai VaC4Hji yin de ni na gai (Arabidopsis thaliana)zhi zhu jiao ye sheng xing sheng chang xun su ,biao xian wei xie pian shu mu duo yu dui zhao ,zhong bu xie pian 、xie bing jun chang yu dui zhao ,jing he xie jun you ming xian yan se bian hua ,jing he xie yan se jiao shen ,cheng xian zi gong se 。

论文参考文献

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论文详细介绍

论文作者分别是来自延边大学的陈蒙，发表于刊物延边大学2019-07-16论文，是一篇关于由葡萄论文,苯丙烷代谢论文,基因克隆论文,原核表达论文,遗传转化论文,延边大学2019-07-16论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自延边大学2019-07-16论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。

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