导读:本文包含了萤光素酶报告载体论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:细胞色素P450,7A1(CYP7A1),报告基因法,载体构建
萤光素酶报告载体论文文献综述
张照研,王宇光,高月[1]（2018）在《CYP7A1基因启动子克隆及萤光素酶报告基因载体构建》一文中研究指出目的:克隆细胞色素P450 7A1(CYP7A1)基因启动子,构建以CYP7A1基因启动子为启动序列的双萤光素酶报告基因系统并分析其活性,为研究CYP7A1基因转录调控提供有效筛选工具。方法:采用PCR方法克隆CYP7A1基因启动子序列,连接到pUC57载体中,双酶切后连接至萤光素酶报告质粒pGL3-Basic上,构建重组萤光素酶报告质粒pGL3-CYP7A1-promoter-luc。结果:重组质粒经双酶切和测序,证实构建正确;pGL3-CYP7A1-promoter-luc质粒2、3转染HepG2细胞均具有显着性启动子活性,pGL3-CYP7A1-promoter-luc2转染24和48 h后经检测分别为对照组(pGL3-basic空载体)的13.1±2.8倍(P<0.001)和23.3±2.9倍(P<0.001);pGL3-CYP7A1-promoter-luc3转染24、48 h后,荧光响应值分别是对照组的8.4±1.6倍(P<0.001)和22.1±1.9倍(P<0.01),呈现强启动子活性。结论:构建了CYP7A1基因启动子萤光素酶报告基因重组质粒pGL3-CYP7A1-promoter-luc,为后续深入研究药物对其调控作用机制奠定了基础。(本文来源于《生物技术通讯》期刊2018年05期）
胡志嵩,刘欣禹,杜晓,欧阳清,李昂[2]（2017）在《用于筛选shRNA的新型双萤光素酶报告基因载体的构建及应用》一文中研究指出目的:构建一个新型双萤光素酶报告基因载体用于准确高效地筛选有效抑制靶基因表达的shRNA。方法:采用PCR、定向克隆、基因重组等分子生物学方法,将双萤光素酶报告基因系统中需要的报告基因载体、shRNA真核表达载体和内参载体叁个功能,整合于一个新型的双萤光素酶报告基因载体pFLuc-C-TK-RLuc-shRNA之中。应用该载体对靶向人PD1基因以及Furin基因的shRNA进行干涉效果比较。结果:应用p FLuc-C-TK-RLuc-shRNA载体进行单质粒转染方法与传统的叁质粒转染方法均提示shRNA#1对靶基因PD1的抑制效果最优;但是使用新型双萤光素酶报告基因载体检测结果的标准差数值显着低于传统方法。以pFLuc-C-TK-RLuc-shRNA单质粒转染方法得到的各组样品结果的均一性显着提高,能够准确地反映出shRNA#3较shRNA#2具有更强的Furin基因抑制作用;而传统方法未能有效判断二者的差异。结论:新型双萤光素酶报告基因载体简化了操作步骤,降低了传统叁质粒共转染方法所引起的检测结果大幅波动,进一步增强了双萤光素酶报告基因系统的信噪比,提高了筛选抑制靶基因表达shRNA的准确性。(本文来源于《现代生物医学进展》期刊2017年21期）
刘丹,武烨,刘鑫,刘慧荣[3]（2015）在《小鼠Omi/HtrA2基因启动子萤光素酶报告载体的构建及转录活性分析》一文中研究指出目的:通过构建小鼠Omi/HtrA 2基因启动子萤光素酶报告载体并进行转录活性分析,深入研究小鼠Omi/HtrA 2转录调控发生的机制。方法:本实验构建覆盖小鼠Omi/HtrA 2基因5’侧翼区(-1 205 bp~+93 bp)区域的一系列启动子萤光素酶报告基因载体,将其转染至小鼠成纤维细胞NIH3T3、大鼠心肌细胞H9c2和人胚肾细胞HEK293,并进行萤光素酶活性检测。结(本文来源于《中国病理生理杂志》期刊2015年10期）
马晓芸,于金梅,卓仁恭,张康,郑建全[4]（2014）在《cAMP反应元件萤光素酶报告基因载体的构建》一文中研究指出目的:构建含有cAMP反应元件(CRE)的萤光素酶报告基因载体。方法:以含有gal4位点的萤光素酶报告基因质粒为模板,利用PCR方法,在去除gal4位点的同时,连入4个CRE元件得到pCRE-luc;将该载体与G蛋白偶联受体(GPCR)共转染人胚肾细胞HEK293,测定萤光素酶活性;应用蛋白激酶A(PKA)抑制剂确认CRE的活性是否与Gs通路相关。结果:pCRE-luc的活性直接相关于GPCR的激活程度,并依赖Gs信号通路。结论:CRE萤光素酶报告基因载体构建成功,可用于检测Gs偶联GPCR的活性,为基于GPCR的高通量药物筛选奠定了基础。(本文来源于《生物技术通讯》期刊2014年01期）
余卓,孙学华,李曼,朱晓骏,周振华[5]（2013）在《HBV启动子克隆及萤光素酶报告基因载体的构建》一文中研究指出目的对HBV启动子基因序列进行分析,克隆并构建S1、S2、ENⅠ/X及ENⅡ/C 4个启动子的萤光素酶报告基因载体。方法用pHBV 1.3作为模板进行PCR扩增目的片段,将获得片段与pGL3-Enhancer荧光素酶报告载体重组构建,分别转染Huh7细胞后,检测萤光素酶活性。结果成功获得121 bp、368 bp、437 bp、237 bp 4个目的扩增片段,并成功构建了S1、S2、ENⅠ/X及ENⅡ/C启动子报告基因载体。结论上述载体的成功构建及初步分析为进一步研究HBV启动子活性及新的抗HBV药物奠定了基础。(本文来源于《胃肠病学和肝病学杂志》期刊2013年05期）
张述,刘婕,刘世翠,林娅红,张亚楠[6]（2013）在《血管内皮细胞生长因子启动子突变体萤光素酶报告基因载体的构建》一文中研究指出目的:构建含有不同片段血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因的启动子的萤光素酶报告基因载体,并定位缺氧诱导因子1α(HIF-1α)结合VEGF启动子的区域。方法:以VEGF全长启动子为模板,PCR扩增VEGF启动子的不同片段,插入萤光素酶报告基因载体pGL4-basic,确定所扩增的DNA序列后,将其与HIF-1α表达载体共转染293T细胞,定位HIF-1α结合VEGF启动子的区域。结果:测序结果表明扩增的不同片段的VEGF启动子序列正确;萤光素酶活性实验表明,-1128~-728 bp片段是HIF-1α与VEGF相互作用激活VEGF启动子转录活性的区域。结论:克隆了VEGF启动子5'端缺失突变体报告基因表达载体,为调控VEGF表达的转录因子的筛选及功能研究打下了良好基础。(本文来源于《生物技术通讯》期刊2013年01期）
卢俊宇,金鹏,高巍,陆晓娟,王亚婷[7]（2012）在《错配修复基因hMLH1启动子萤光素酶报告基因载体的构建与鉴定》一文中研究指出目的构建含hMLH1启动子片段的萤光素酶报告基因载体,并检测其在雌激素诱导下的转录活性。方法以正常人基因组DNA为模板,PCR扩增hMLH1启动子片段(-1 953/+53),插入萤光素酶报告基因载体pGL3-Basic,将重组质粒转入HEK293细胞,检测在有和无雌激素诱导下萤光素酶的活性变化。结果酶切和测序结果证实重组萤光素酶报告基因载体pGL3-Promoter1-luc构建成功。转染pGL3-Promoter1-luc后,雌激素诱导的萤光素酶活性为7.45±0.81,显着高于无水乙醇组的3.28±0.19(n=3,P<0.001)。结论 hMLH1启动子片段存在与雌激素相关的调控序列。(本文来源于《基础医学与临床》期刊2012年04期）
管洁,王秀平,邓瑶,周为民,吴小兵[8]（2011）在《含分泌型萤光素酶和绿色荧光蛋白双报告基因的慢病毒载体的制备与表达分析》一文中研究指出目的:制备含分泌型萤光素酶和绿色荧光蛋白双报告基因的慢病毒载体,为慢病毒载体的进一步广泛应用奠定基础。方法:克隆构建含分泌型萤光素酶和绿色荧光蛋白双报告基因的转基因载体pCS-gluc-2A-eGFP,酶切与序列分析鉴定其正确后,与包装质粒pCMVHR'Δ8.2、包膜质粒pVSV-G共转染293FT细胞,获得含分泌型萤光素酶和绿色荧光蛋白双报告基因的重组慢病毒载体;重组慢病毒载体感染A549、Huh7细胞后,用荧光显微镜直接观察报告基因GFP的表达,或取细胞上清实时检测分泌型萤光素酶的表达。结果:制备了含双报告基因的重组慢病毒载体,感染细胞后可以活体观察绿色荧光蛋白的表达,也可以快速灵敏地检测到分泌型萤光素酶的表达。结论:所获含分泌型萤光素酶和绿色荧光蛋白双报告基因的重组慢病毒载体感染效率高,表达易于活体实时检测,灵敏度高。本研究为慢病毒载体的广泛应用奠定了基础。(本文来源于《生物技术通讯》期刊2011年02期）
王荡,方六荣,罗锐,谢立兰,江云波[9]（2010）在《猪IFN-β启动子及其NF-κB结合位点萤光素酶报告载体的构建与活性检测》一文中研究指出通过PCR的方法从猪基因组DNA中克隆IFN-β基因启动子片段,分别构建了含有猪β干扰素基因启动子萤光素酶报告质粒及其4个重复的NF-κB结合位点序列的萤光素酶报告质粒。脂质体基因转染法将萤光素酶报告质粒转染PK-15细胞,在poly(I∶C)或poly(dAT∶dAT)的刺激下,萤光素酶表达显着增加。本试验为进一步探讨猪β干扰素信号转导通路的研究奠定了基础。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2010年01期）
卫艳萍,马云云,何婷玉,冯龙,郭文涛[10]（2009）在《人CXCR4基因启动子萤光素酶报告载体的构建及鉴定》一文中研究指出目的构建并鉴定人CXCR4基因启动子萤光素酶报告载体,为AIDS的靶向基因治疗奠定基础。方法利用PCR技术扩增人CXCR4基因启动子的核心片段,克隆至含新霉素抗性的萤光素酶表达载体pGL3-neo,构建含CXCR4启动子的萤光素酶表达载体pGL3-neo-CXCR4,重组子经双酶切、PCR及测序鉴定。再将构建的载体用脂质体转染体外培养的Jurkat细胞株,检测萤光素酶的表达活性。结果扩增得到CXCR4基因启动子序列,克隆入pGL3-neo-CXCR4的CXCR4基因启动子序列与GenBank报道的一致,实验组(pGL3-neo-CXCR4组)萤光素酶的表达活性为869 159.0±62 618.8,与空白组(未转染组)的464.2±44.0和对照组(pGL3-neo组)的39 088.4±3867.9相比,差异有统计学意义(F=1415.124,P均<0.05)。结论成功构建了含人CXCR4基因启动子的萤光素酶报告基因表达载体pGL3-neo-CXCR4。(本文来源于《山东医药》期刊2009年43期）
萤光素酶报告载体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:构建一个新型双萤光素酶报告基因载体用于准确高效地筛选有效抑制靶基因表达的shRNA。方法:采用PCR、定向克隆、基因重组等分子生物学方法,将双萤光素酶报告基因系统中需要的报告基因载体、shRNA真核表达载体和内参载体叁个功能,整合于一个新型的双萤光素酶报告基因载体pFLuc-C-TK-RLuc-shRNA之中。应用该载体对靶向人PD1基因以及Furin基因的shRNA进行干涉效果比较。结果:应用p FLuc-C-TK-RLuc-shRNA载体进行单质粒转染方法与传统的叁质粒转染方法均提示shRNA#1对靶基因PD1的抑制效果最优;但是使用新型双萤光素酶报告基因载体检测结果的标准差数值显着低于传统方法。以pFLuc-C-TK-RLuc-shRNA单质粒转染方法得到的各组样品结果的均一性显着提高,能够准确地反映出shRNA#3较shRNA#2具有更强的Furin基因抑制作用;而传统方法未能有效判断二者的差异。结论:新型双萤光素酶报告基因载体简化了操作步骤,降低了传统叁质粒共转染方法所引起的检测结果大幅波动,进一步增强了双萤光素酶报告基因系统的信噪比,提高了筛选抑制靶基因表达shRNA的准确性。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
萤光素酶报告载体论文参考文献
[1].张照研,王宇光,高月.CYP7A1基因启动子克隆及萤光素酶报告基因载体构建[J].生物技术通讯.2018
[2].胡志嵩,刘欣禹,杜晓,欧阳清,李昂.用于筛选shRNA的新型双萤光素酶报告基因载体的构建及应用[J].现代生物医学进展.2017
[3].刘丹,武烨,刘鑫,刘慧荣.小鼠Omi/HtrA2基因启动子萤光素酶报告载体的构建及转录活性分析[J].中国病理生理杂志.2015
[4].马晓芸,于金梅,卓仁恭,张康,郑建全.cAMP反应元件萤光素酶报告基因载体的构建[J].生物技术通讯.2014
[5].余卓,孙学华,李曼,朱晓骏,周振华.HBV启动子克隆及萤光素酶报告基因载体的构建[J].胃肠病学和肝病学杂志.2013
[6].张述,刘婕,刘世翠,林娅红,张亚楠.血管内皮细胞生长因子启动子突变体萤光素酶报告基因载体的构建[J].生物技术通讯.2013
[7].卢俊宇,金鹏,高巍,陆晓娟,王亚婷.错配修复基因hMLH1启动子萤光素酶报告基因载体的构建与鉴定[J].基础医学与临床.2012
[8].管洁,王秀平,邓瑶,周为民,吴小兵.含分泌型萤光素酶和绿色荧光蛋白双报告基因的慢病毒载体的制备与表达分析[J].生物技术通讯.2011
[9].王荡,方六荣,罗锐,谢立兰,江云波.猪IFN-β启动子及其NF-κB结合位点萤光素酶报告载体的构建与活性检测[J].中国兽医学报.2010
[10].卫艳萍,马云云,何婷玉,冯龙,郭文涛.人CXCR4基因启动子萤光素酶报告载体的构建及鉴定[J].山东医药.2009
标签：细胞色素P450; 7A1(CYP7A1); 报告基因法; 载体构建;