分生组织发育论文-李娜

分生组织发育论文-李娜

导读:本文包含了分生组织发育论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献,主要关键词:TRANSPORTIN,1,顶端分生组织,生长素,细胞分裂素

分生组织发育论文文献综述

李娜[1](2019)在《拟南芥TRANSPORTIN 1在顶端分生组织发育及激素响应中的功能研究》一文中研究指出拟南芥TRANSPORTIN 1(TRN1)属于Importinβ家族,该家族成员的主要功能是作为受体介导相关蛋白的核质转运。若核质转运无法顺利进行,则导致目标蛋白不能正常发挥作用,从而影响细胞乃至整个植物体正常的生命活动。本研究基于本实验室前期的研究结果,主要对纯合突变体trn1与野生型(Col)植物在顶端分生组织相关Marker基因表达、植物激素响应方面的比较分析,以及对与TRN1存在相互作用的基因的定量分析,对TRN1在植物生长发育进程中的功能进行了探究。trn1纯合突变体茎端分生组织发育缓慢且形状不规则,且根尖分生组织发育有缺陷。为了探究其分子机制,我们分别通过杂交向trn1突变体中导入了茎尖分生组织维持有关的WUS或CLV3基因启动子驱动的GUS基因(pWUS:GUS和pCLV3:GUS)、QC特异性标记基因启动子驱动的GUS基因(QC46:GUS和QC184:GUS)、能够形象地反映出根尖生长素的分布情况的DR5:GUS、细胞周期的标记基因pCYCB:GUS、在根尖分生组织干细胞调控中起作用的PLT1、PLT2、以及SHR等基因的启动子驱动的pPLT1:CFP和pPLT2:CFP以及pPLT1:PLT1:YFP、pPLT2:PLT2:YFP和pSHR:SHR:eGFP等融合基因。通过检测这些基因的表达,发现在trn1纯合突变体中所有这些基因,无论是表达部位还是表达量,都受到了一定程度的影响。另外我还探究了trn1纯合突变体与WT对细胞分裂素和生长素的响应情况并分别分析了其信号通路上相关基因的表达水平,结果表明:trn1纯合突变体对细胞分裂素敏感性增加,但是对生长素敏感性下降,并且发现激素响应信号通路相关基因的表达量都发生变化;最后我对前期酵母杂交获得的结果做了定量分析,发现相关基因在trn1纯合突变体中表达量都发生了变化,以此为基础,我们进一步分析了互作基因的功能。通过本论文的研究我们发现:TRN1在植物生长发育过程中,通过影响WUS、CLV3、PLT1、PLT2以及SHR、CYCB等基因的表达,进而影响了植物顶端分生组织的发育;TRN1通过调控细胞分裂素信号通路中ARRs响应因子的表达,影响植物对细胞分裂素的响应;TRN1通过调控生长素运输相关基因的表达,影响植物对生长素的响应;此外,TRN1还可以与多种蛋白相互作用,最终影响了多种生物学过程。因此,我们认为TRN1在拟南芥中作为核质转运蛋白,通过影响一系列底物蛋白的转运,参与多个生物学过程,同时为我们接下来寻找TRN1的底物创造了条件。(本文来源于《兰州大学》期刊2019-04-01)

张科,郭鑫鑫,刘西岗,郭琳[2](2018)在《植物花分生组织终止发育机制的研究进展》一文中研究指出植物花的发育依赖于花分生组织(floral meristem,FM)活性的维持与分化。当FM完成各轮花器官原基的起始后,其活性会程序性地终止(termination),这个过程就是FM的终止发育过程(FM determinacy)。FM的终止发育是一个复杂精细且多步骤的调控过程。WUSCHEL(WUS)是一个具有同源异型结构域(homeodomain)的转录因子,其对FM的活性维持及终止发育发挥着重要作用。越来越多的研究表明许多转录因子以及环境信号、激素信号和表观遗传相关因子通过对WUS及其调节基因的调控来影响FM终止发育过程。本研究组首次在组织水平阐明了生长素和细胞分裂素调控FM活性的分子机制:AUXIN RESPONSE FACTOR3(ARF3)能够整合AG、APETALA2(AP2)和生长素(auxin)的信号通过抑制细胞分裂素(cytokinin)信号系统调控FM终止发育;还首次证实光信号对FM活性调控的分子机制:FAR-RED ELONGATED HYPOCOTYL3(FHY3)通过PHYTOCHROME A(PHY A)信号途径介导光信号对WUS表达的调控;在基因水平上首次揭示了染色质构象变化对FM终止发育的调控作用:AGAMOUS(AG)可以直接结合到WUS的调控区并招募Pc G蛋白对WUS5′-TSS和WUS3′-CRE的结合,以介导WUS染色质环状结构(chromatin loop)的形成,进而抑制WUS的转录,而DNA TOPOISOMERASE 1 TOP1α(TOP1α)对染色质的高级结构的重塑作用也是该染色质环形成的基础。随着3D基因组(three dimensional genomics)时代的到来为我们进一步理解FM终止发育机制提供了新的窗口,而FM终止发育机制在农业生产上的运用也体现了其巨大的应用价值。本文首先简述了拟南芥(Arabidopsis thaliana)花发育研究的发展史,介绍了花发育相关领域所关心的3个科学问题,并着重阐述了FM终止发育调控的研究进展与前景。(本文来源于《中国生态农业学报》期刊2018年10期)

王珊珊[3](2018)在《拟南芥TIR3基因调控茎端分生组织和胚胎发育的机理研究》一文中研究指出植物和动物的干细胞都有自我更新及分裂产生子细胞并形成新的组织和器官细胞的能力。在高等植物中,干细胞主要位于茎端分生组织和根端分生组织中。分生组织干细胞的细胞分裂导致植物生长过程中可以源源不断的产生新的组织和器官。茎端分生组织是由胚胎发生阶段起始,进而发育形成植物地上部分的组织和器官,因此研究植物茎端分生组织的发育过程至关重要。前期在筛选茎端分生组织发育异常的突变体时,我们鉴定到一个茎端分生组织相比野生型明显变大的T-DNA插入突变体,命名为big shoot meristem(bom1)。进而鉴定导致bom1突变体表型的功能缺失基因,并解析其介导茎端分生组织发育的分子机理。主要结果如下:(1)观察bom1突变体幼苗的表型,发现突变体的子叶及莲座叶的叶柄相比野生型明显变短,莲座叶变紧凑。而突变体的茎端分生组织和花序分生组织相比野生型明显变大,茎端产生了更多的莲座叶和花。通过T-DNA插入位点的鉴定,发现单一的T-DNA序列插入到了TRANSPORT INHIBlTOR RESPONSE 3(TIR3)基因(AT3G02260)中,导致该基因功能缺失,造成茎端分生组织变大。(2)为了研究TIR3基因调控茎端分生组织发育的机制,我们对bom1/tir3突变体和野生型中茎端分生组织特征基因的表达模式进行了分析。结果发现,TIR3基因功能缺失导致CLV3、WUS和STM表达信号的强度和表达范围在bom1/tir3突变体中都增大,从而引起突变体茎端分生组织变大的表型。(3)通过遗传学关系分析,发现TIR3通过抑制WUS及STM的表达来起作用。(4)在wus和stm突变体中,TIR3基因的表达量都是明显升高的;而在WUS和STM过量表达植株中,TIR3基因的表达量明显受到抑制。因此,WUS和STM也能抑制TIR3的表达。进而通过染色质免疫共沉淀实验分析发现,STM直接结合到TIR3基因的启动子上抑制TIR3的转录。TIR3与WUS和STM之间存在反馈调节,共同调控茎端分生组织的发育。(5)通过研究bom1/tir3突变体的胚胎发生过程发现,茎端分生组织的起始与野生型相比没有明显差别。因此,TIR3基因主要调控胚后茎端分生组织的维持。观察发现,突变体的胚相比野生型明显变小。统计胚胎细胞的大小和数目发现,突变体的胚变小是由于细胞分裂受到抑制导致的。而且,bom1/tir3突变体中细胞周期相关基因的表达也受到了抑制。由于胚胎发育受到抑制,因此突变体的成熟种子相比野生型也明显变小。(6)为分析TIR3基因调控胚胎发生的机理,利用转录组测序技术对受精后3天的bom1/tir3突变体和野生型的胚珠中的基因转录表达谱进行了比较分析。结果显示,突变体的胚珠中细胞分裂素合成基因IPT5的转录水平明显下降。而在突变体中过量表达IPT5基因,能够恢复突变体的胚和种子变小的表型,说明TIR3基因通过影响细胞分裂素的合成来调控胚胎发生和种子的发育。(本文来源于《山东农业大学》期刊2018-05-10)

郑庆伟[4](2018)在《中科院遗传发育所在植物激素调控花分生组织维持及分化的分子机制研究中获进展》一文中研究指出高等植物中,植物体所有胚后发育的组织和器官都来源于各级分生组织。花分生组织产生及维持是花器官生成及发育的前提,而FM活性的程序性终止导致的细胞分化是后续的生殖生长及世代交替的保证,在实际应用中能够保证农作物的产量。分生组织的维持及分化由特定的蛋白组分如转录因子,多肽信号和受体及植物激素如生长素和细胞分裂素共同调控,但植物激素间以及激素与蛋白间互作调控FM维持及分化的机制未有系统研究。中国科学院遗传与发育生物学研究所农业资源研究中心刘西岗研究组(本文来源于《农药市场信息》期刊2018年05期)

吴彦庆,葛金涛,陶俊[5](2015)在《芍药花分生组织决定基因(AP1)克隆、序列分析及其在不同发育时期花瓣中的表达变化规律》一文中研究指出为进一步了解芍药(Paeonia lactiflora Pall.)花分生组织决定基因(APETALA1,AP1)的生物学功能,本研究根据高等植物AP1基因的保守区域设计引物,采用RACE(rapid-amplification of c DNA ends)技术从芍药中克隆了AP1基因(Gen Bank登录号:KC354376),利用生物信息学对其蛋白结构及功能进行分析和预测,并对其在芍药不同花发育时期内外花瓣中差异表达进行系统分析。测序结果表明,获得芍药AP1基因c DNA全长为1 236 bp,其ORF全长为726 bp,编码242个氨基酸。生物信息学分析表明,芍药AP1蛋白为脂溶亲水性的不稳定蛋白,无跨膜结构和信号肽,表明为非分泌蛋白;其二级结构以α螺旋和无规则卷曲为主;AP1蛋白存在1个N-糖基化位点(89号氨基酸)和1个O-糖基化位点(206号氨基酸),还存在13个潜在的磷酸化位点,其中包括有蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)、表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、酪蛋白激酶Ⅱ(casein kinaseⅡ,CKⅡ)、依赖DNA的蛋白激酶(DNA-Protein kinase,DNAPK)、蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)、蛋白激酶G(protein kinase G,PKG)、毛细血管扩张共济失调突变蛋白(Ataxia-telangiectasia mutated protein,ATM)和p38分裂原激活的蛋白激酶(p38-mitogen activated protein kinases,p38MAPK)等8种保守的特异性蛋白质激酶的结合位点;芍药AP1蛋白包含MADS(2~74位氨基酸)和K-box(89~173位氨基酸)2个超级家族保守结构域。芍药AP1基因表达谱检测发现,AP1基因在芍药花色嵌合体品种金辉4个发育阶段(花蕾期,初开期,盛开期和衰败期)的内外花瓣中的表达水平均存在差异表达,在衰败期内外花瓣中表达水平差异极显着(P<0.01),进一步表明,AP1基因表达水平可能与芍药花器官发育有关。本研究成功获得了芍药AP1基因全长c DNA序列,进一步揭示了芍药AP1蛋白的理化性质、结构以及AP1的潜在功能,为今后系统开展芍药AP1基因的功能研究提供基础资料。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2015年12期)

范爱霞[6](2015)在《类受体激酶MDKs调控拟南芥分生组织的发育》一文中研究指出植物类受体激酶是一类与动物细胞蛋白激酶同源的蛋白,定位在细胞膜上,可感知外界环境的刺激,在细胞信号转导和植物生长发育过程中起着重要的作用。拟南芥中有600多个类受体蛋白激酶,其中最大的一个家族是富亮氨酸重复序列的类受体激酶(LRR-RLKs),可根据胞内激酶结构域的同源关系分为13个亚家族。研究这些蛋白激酶时发现有一个LRR-RLK亚家族的成员调控拟南芥分生组织的发育,我们将其命名为Meristem Development Receptor-Like Kinases (MDKs)。拟南芥分生组织中央区包含一个干细胞群体,这些细胞代谢旺盛,可自我更新,分化程度低,植物体各部分由这些干细胞增生和分化而成。植物从营养生长过渡至生殖生长阶段,茎端分生组织随之转换成花序分生组织,与此同时叶腋处也可形成腋生分生组织。本文通过构建多重缺失突变体,并利用扫描电镜观察、基因表达模式分析和分子生物学等手段,分析了MDKs对拟南芥分生组织发育的调控。缺失突变体mdk2 mdk3 mdk4+/-分生组织发育出现问题,导致植株矮化、发育滞后,进入生殖生长阶段后莲座叶腋生分枝增多,植株顶端优势可能受到影响、主茎不明显,果荚变短,花数目减少。表达模式分析显示MDK1、MDK2、 MDK3、MDK4均在分生组织中有表达,互补实验证明突变体表型确因MDKs缺失导致,可能与细胞分裂素、生长素以及一些转录因子有关。MDKs具体通过哪些途径调控拟南芥分生组织的发育还不清楚,有待进一步研究。(本文来源于《兰州大学》期刊2015-06-01)

谷慧英,江为,李敬,王志敏,汤青林[7](2014)在《非细胞自主性转录因子对植物分生组织发育的调控》一文中研究指出为了应对多变复杂的生长环境,植物进化出了独特的信号机制,几乎每一个器官和组织都能形成高效的信号转导系统。胞间转运是器官、组织或相邻细胞中形态建成的特定发生机制,参与这一运输方式的有转录因子、多肽、小RNA和植物激素。这四类移动分子介导不同的信号转导途径,但是这些移动分子能够产生互作并构成了完整的胞间信号网络。作为一类特殊的蛋白质,转录因子尤其是非细胞自主性转录因子在植物器官形成和发育过程中发挥重要作用。主要概述了植物中的非细胞自主性转录因子以及非细胞自主性转录因子与其他移动分子共同调控植物分生组织发育的机制。(本文来源于《生物技术通报》期刊2014年10期)

江为,谷慧英,王志敏,宋明,汤青林[8](2014)在《拟南芥花分生组织决定基因AGL24对花发育的影响》一文中研究指出AGAMOUS-LIKE 24(AGL24)基因编码MADS蛋白,在植物花发育的不同时期发挥着重要的作用。综述了AGL24如何通过和其他花分生组织决定基因的相互作用来影响拟南芥花的发育,调节开花时间,这将有助于人们对开花基因调控网络有更进一步的认识,能够在生产上有效的调控开花时间,从而为植物育种提供借鉴。(本文来源于《生物技术通报》期刊2014年04期)

成凯莉[9](2014)在《类受体激酶H13与同源基因调控拟南芥分生组织和器官发育》一文中研究指出类受体激酶参与调控植物生长发育的很多方面,例如CLV1影响分生组织形态和功能,BRI1和BAK1形成复合体感知BR信号等。拟南芥中有600多个类受体激酶,但目前还不清楚大多数类受体激酶的生物学功能。本研究利用反向遗传学手段,在探究部分类受体激酶功能的过程中,获得了四个同源类受体激酶H6、H10、H12、H13的所有单基因和多基因T-DNA插入缺失突变体。其中单基因缺失突变体没有明显的表型,而四重突变体h6/10/12/13呈现类似clvl的表型,植株叶片数目增多,花序分生组织的面积和体积增大,花期较长,心皮数目在5个以上,果荚棒状,茎和雄蕊的发育也存在缺陷。RT-PCR结果表明突变体花序中CLV3表达量较野生型明显上调,WUS的表达量微弱下调;酵母双杂交实验结果显示H13/10与CLV1有相互作用。推测H13及其同源蛋白可能与CLV1相互作用形成复合体,共同感知CLV3信号,通过CLV3-WUS负反馈信号途径控制分生组织和雌雄蕊的正常发育和功能。(本文来源于《兰州大学》期刊2014-06-01)

滕飞[10](2013)在《拟南芥AP2/ERF基因ERF055调控茎端分生组织发育的功能研究》一文中研究指出AP2(APETALA2)和EREBP(脱水响应元件结合蛋白)是拟南芥转录因子家族成员。AP2/ERF超基因家族以AP2/ERF结构域为特征的,这个结构域通常由60-70个氨基酸组成,并与DNA结合有关。其中AP2/ERF类基因构成一个庞大的多基因家族,这个家族包括ERF家族,AP2家族和RAV家族。有研究证明AP2/ERF家族编码的蛋白不仅在一系列的植物的生物过程如生长和发育的转录调控有重要功能,而且与环境应急的响应有关。AP2家族的基因被证明参与植物发育过程的调控,如花序分生组织的确定,叶表皮细胞的确定以及花发育,胚胎发生。ERF家族的许多蛋白被鉴定并且被预测与各种植物的细胞过程的功能有关,如生物与环境压力的响应过程调控。ERF055属于AP2/ERF超基因家族,ERF家族,DREB亚家族成员。高等植物胚胎发育后期器官的形成依赖于茎端分生组织和根端分生组织干细胞的的活动。人们寻找影响茎端分生组织的突变体并分离到半显性突变体l28。研究发现这个突变体的茎端分生组织和干细胞的分化过早终止。等位基因竞争实验提示l28是AP2家族基因的负显性位点。而之前报道过AP2与花形成和种子的发育有关。基因分析l28突变体早期的茎端分生组织的终止提示AP2通过修饰WUS-CLV3反馈调节环参与茎端分生组织的维持。目前对于ERF055这个基因功能的研究尚未见报道。有研究显示,随着种子的发育,ERF055的表达水平逐渐升高,在成熟的种子中表达水平最高。提示该基因可能与种子的发育以及成熟过程中的主动脱水有关。那么它是否参与胚胎发育过程的调控,影响茎端分生组织发育的分子机理是什么。所以,我们通过利用遗传学,分子生物学,解剖学的手段进行研究,来研究ERF055基因在胚胎发育过程的作用和调控茎端分生组织发育的功能,同时也将为阐明AP2/ERF超基因家族成员调控植物发育的分子机理提供新的资料。AP2/ERF基因家族的功能广泛,涉及营养和生殖的生长发育调控,该论文通过筛选42个AP2家族基因的69个突变体,其中3个有胚胎发生方面的表型,然后选取erf055突变体进行深入的功能鉴定,erf055突变体观察到了合子胚发育滞后的现象。比较了野生型和过表达转基因拟南芥的合子胚的发育过程。对ERF055基因表达的组织特异性和合子胚发育进程中的表达模式进行了分析。(1)进化树分析,ERF055基因有很多同源性高的基因,它们可能存在功能冗余。(2)在胚胎发育阶段, ERF055-OX的发育进程在心形期、鱼雷期发育进程比野生型快,在接近成熟期胚时,发育进程趋向一致;在胚后发育阶段,过表达的ERF055的SAM比野生型小,且真叶形成较为迟缓。ERF055-RNAi的真叶比野生型真叶大。(3)ERF055基因在拟南芥的根、茎、叶、花、角果中都有表达,其中在角果中的表达量最高,暗示该基因可能与种子的成熟有关。(4)拟南芥中ERF055基因参与胚胎发育过程和胚后发育的调控,并参与茎端分生组织发育的调控。原位杂交和GUS染色分析的结果显示ERF055在胚胎发育的各个时期都有明显的表达,在胚后发育时期,在幼苗中的SAM,叶原基,幼叶中都有明显的表达,萌发2天和3天的幼苗中,在整个胚,子叶,下胚轴,胚根中都有表达,在成熟区表达信号最强,萌发5天的幼苗,主要在根冠区表达。萌发7天的幼苗,在侧根原基起始时,主要集中在侧根原基表达。(5)烟草的瞬时表达证明ERF055基因编码一个转录因子,在植物的生长发育中起调控作用。(本文来源于《山东农业大学》期刊2013-05-10)

分生组织发育论文开题报告

(1)论文研究背景及目的

此处内容要求:

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例:

植物花的发育依赖于花分生组织(floral meristem,FM)活性的维持与分化。当FM完成各轮花器官原基的起始后,其活性会程序性地终止(termination),这个过程就是FM的终止发育过程(FM determinacy)。FM的终止发育是一个复杂精细且多步骤的调控过程。WUSCHEL(WUS)是一个具有同源异型结构域(homeodomain)的转录因子,其对FM的活性维持及终止发育发挥着重要作用。越来越多的研究表明许多转录因子以及环境信号、激素信号和表观遗传相关因子通过对WUS及其调节基因的调控来影响FM终止发育过程。本研究组首次在组织水平阐明了生长素和细胞分裂素调控FM活性的分子机制:AUXIN RESPONSE FACTOR3(ARF3)能够整合AG、APETALA2(AP2)和生长素(auxin)的信号通过抑制细胞分裂素(cytokinin)信号系统调控FM终止发育;还首次证实光信号对FM活性调控的分子机制:FAR-RED ELONGATED HYPOCOTYL3(FHY3)通过PHYTOCHROME A(PHY A)信号途径介导光信号对WUS表达的调控;在基因水平上首次揭示了染色质构象变化对FM终止发育的调控作用:AGAMOUS(AG)可以直接结合到WUS的调控区并招募Pc G蛋白对WUS5′-TSS和WUS3′-CRE的结合,以介导WUS染色质环状结构(chromatin loop)的形成,进而抑制WUS的转录,而DNA TOPOISOMERASE 1 TOP1α(TOP1α)对染色质的高级结构的重塑作用也是该染色质环形成的基础。随着3D基因组(three dimensional genomics)时代的到来为我们进一步理解FM终止发育机制提供了新的窗口,而FM终止发育机制在农业生产上的运用也体现了其巨大的应用价值。本文首先简述了拟南芥(Arabidopsis thaliana)花发育研究的发展史,介绍了花发育相关领域所关心的3个科学问题,并着重阐述了FM终止发育调控的研究进展与前景。

(2)本文研究方法

调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

分生组织发育论文参考文献

[1].李娜.拟南芥TRANSPORTIN1在顶端分生组织发育及激素响应中的功能研究[D].兰州大学.2019

[2].张科,郭鑫鑫,刘西岗,郭琳.植物花分生组织终止发育机制的研究进展[J].中国生态农业学报.2018

[3].王珊珊.拟南芥TIR3基因调控茎端分生组织和胚胎发育的机理研究[D].山东农业大学.2018

[4].郑庆伟.中科院遗传发育所在植物激素调控花分生组织维持及分化的分子机制研究中获进展[J].农药市场信息.2018

[5].吴彦庆,葛金涛,陶俊.芍药花分生组织决定基因(AP1)克隆、序列分析及其在不同发育时期花瓣中的表达变化规律[J].农业生物技术学报.2015

[6].范爱霞.类受体激酶MDKs调控拟南芥分生组织的发育[D].兰州大学.2015

[7].谷慧英,江为,李敬,王志敏,汤青林.非细胞自主性转录因子对植物分生组织发育的调控[J].生物技术通报.2014

[8].江为,谷慧英,王志敏,宋明,汤青林.拟南芥花分生组织决定基因AGL24对花发育的影响[J].生物技术通报.2014

[9].成凯莉.类受体激酶H13与同源基因调控拟南芥分生组织和器官发育[D].兰州大学.2014

[10].滕飞.拟南芥AP2/ERF基因ERF055调控茎端分生组织发育的功能研究[D].山东农业大学.2013

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分生组织发育论文-李娜
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