本文主要研究内容
作者刘倍伶（2019）在《土壤放线菌11-9-3的鉴定及其代谢产物杀虫活性成分研究》一文中研究指出：微生物的次生代谢产物是重要的天然产物资源,通过对微生物次生代谢产物进行结构修饰或衍生而开发新型药物,是现今新农药研发与天然产物研究的主要方向之一,其中放线菌是重要的生物活性物质产生菌,目前从微生物次生代谢产物发现的具有生物活性的30000多种天然产物中约有70%源自于放线菌,放线菌因其种类繁多、分布广泛,所产生的次生代谢产物结构新颖多样,因此从放线菌的代谢产物中发现新的活性物质为新农药的开发以及新先导化合物的研发提供基础。本研究对几株分离自气候条件多变土壤状况复杂的青藏高原和内蒙古地区、具有一定农用活性的土壤放线菌发酵液进行杀虫活性筛选,筛选出一株具有显著杀虫活性的土壤放线菌11-9-3,为了进一步明确菌株11-9-3的杀虫活性成分,本研究对该菌株进行了较为系统的研究,对该菌株的代谢产物进行了活性成分的分离、鉴定以及活性评价,同时对该菌株进行了分类鉴定。主要结果如下:（1）采用玻片浸渍法与浸虫浸叶法,以小菜蛾（Plutella xylostella）、朱砂叶螨（Tetranychina harti）、粘虫（Mythimna separata）、苹果黄蚜（Aphis citricola Van der Goot）为试虫,分别对实验室保藏的7株土壤放线菌发酵液进行了杀虫活性筛选,结果表明:11-9-3、11-9-49、12-9-10、11-12-1、11-12-2对朱砂叶螨具有明显的毒杀活性,24h校正死亡率均高于60%,而11-9-3、12-9-10对红蜘蛛的毒杀活性最好,24h校正死亡率高达80%;11-9-3、11-9-49、12-9-10对于苹果黄蚜的毒杀活性较好,24h校正死亡率高于50%,而11-9-3对苹果黄蚜的毒杀活性最好,24h校正死亡率达到了70%;7株放线菌发酵液对粘虫的毒杀活性较低,无明显的毒杀活性,72h死亡率均低于20%;7株放线菌发酵液对小菜蛾的毒杀活性差异显著,其中12-9-26、12-9-27的72h校正死亡率低于20%,11-9-49、12-9-10的72h校正死亡率高于50%,而11-9-3对小菜蛾的毒杀活性最为显著,72h校正死亡率达到了90%。11-9-3的发酵液表现出了显著的杀虫活性,进一步定量测定了该菌株4个极性段粗提物杀虫活性,结果显示乙酸乙酯粗提物与氯仿粗提物（20mg/ml）对小菜蛾的毒杀活性最好,72h校正死亡率高于90%,因此可确定活性物质集中在氯仿段与乙酸乙酯段内。（2）采用多相分类学方法,通过对11-9-3菌株进行形态学特征观察及生理生化特征分析,结合菌株的16S rDNA序列与特征菌株的比对分析和系统发育树的构建,可基本确定菌株11-9-3属于链霉菌属（Streptomyces）。通过序列比对,放线菌11-9-3菌株与吸水链霉菌（Streptomyces hygroscopicus）在同一系统进化分支上,相似度达到了98%,其形态特征、培养特征也与吸水链霉菌（Streptomyces hygroscopicus）相似,但是其生理生化特征却与典型的吸水链霉菌存在较大差异,因此11-9-3可能为吸水链霉菌的新亚种,其分类地位的确定还需进行DNA-DNA杂交以及细胞壁化学成分比较。（3）对菌株11-9-3进行大量发酵,收集上清液经萃取浓缩后得到氯仿段粗提物与乙酸乙酯段粗提物,采用活性追踪法结合硅胶柱层析、凝胶柱层析、薄层层析、HPLC等多种分离手段分别对11-9-3菌株的氯仿活性段以及乙酸乙酯活性段粗提物进行进一步分离提取,最终得到了8个化合物,利用核磁氢碳谱等波谱分析方法结合文献分析比对,鉴定出了6个化合物,分别为:4-Hydroxybenzoic acid（A）、环（L-脯氨酸-L-亮氨酸）二肽（B）、1-acetyl-4,5-dihydroxyanthracene-9,10-dione（C）、1,8-dihydroxy-6-methylanthracene-9,10-dione（E）、Convolvulol（I）、环（L-苯丙氨酸-L-脯氨酸）二肽（D）,C、E均为蒽醌类化合物,B、D均为环二肽类化合物,I为苯并呋喃类化合物。（4）对分离得到6个化合物进行了初步的杀虫活性研究,分别测定了化合物对苹果黄蚜、朱砂叶螨、小菜蛾、粘虫的毒杀活性、对粘虫的拒食活性、对小菜蛾的生长抑制作用,结果显示:筛选出了两个对朱砂叶螨具有较好毒杀活性的化合物C(致死中浓度LC50为756.46μg/ml)和化合物E(LC50为389.79μg/ml),以及对粘虫有一定拒食活性的化合物I,拒食率为44%。
Abstract
wei sheng wu de ci sheng dai xie chan wu shi chong yao de tian ran chan wu zi yuan ,tong guo dui wei sheng wu ci sheng dai xie chan wu jin hang jie gou xiu shi huo yan sheng er kai fa xin xing yao wu ,shi xian jin xin nong yao yan fa yu tian ran chan wu yan jiu de zhu yao fang xiang zhi yi ,ji zhong fang xian jun shi chong yao de sheng wu huo xing wu zhi chan sheng jun ,mu qian cong wei sheng wu ci sheng dai xie chan wu fa xian de ju you sheng wu huo xing de 30000duo chong tian ran chan wu zhong yao you 70%yuan zi yu fang xian jun ,fang xian jun yin ji chong lei fan duo 、fen bu an fan ,suo chan sheng de ci sheng dai xie chan wu jie gou xin ying duo yang ,yin ci cong fang xian jun de dai xie chan wu zhong fa xian xin de huo xing wu zhi wei xin nong yao de kai fa yi ji xin xian dao hua ge wu de yan fa di gong ji chu 。ben yan jiu dui ji zhu fen li zi qi hou tiao jian duo bian tu rang zhuang kuang fu za de qing cang gao yuan he nei meng gu de ou 、ju you yi ding nong yong huo xing de tu rang fang xian jun fa jiao ye jin hang sha chong huo xing shai shua ,shai shua chu yi zhu ju you xian zhe sha chong huo xing de tu rang fang xian jun 11-9-3,wei le jin yi bu ming que jun zhu 11-9-3de sha chong huo xing cheng fen ,ben yan jiu dui gai jun zhu jin hang le jiao wei ji tong de yan jiu ,dui gai jun zhu de dai xie chan wu jin hang le huo xing cheng fen de fen li 、jian ding yi ji huo xing ping jia ,tong shi dui gai jun zhu jin hang le fen lei jian ding 。zhu yao jie guo ru xia :（1）cai yong bo pian jin zi fa yu jin chong jin xie fa ,yi xiao cai e （Plutella xylostella）、zhu sha xie man （Tetranychina harti）、nian chong （Mythimna separata）、ping guo huang ya （Aphis citricola Van der Goot）wei shi chong ,fen bie dui shi yan shi bao cang de 7zhu tu rang fang xian jun fa jiao ye jin hang le sha chong huo xing shai shua ,jie guo biao ming :11-9-3、11-9-49、12-9-10、11-12-1、11-12-2dui zhu sha xie man ju you ming xian de du sha huo xing ,24hjiao zheng si wang lv jun gao yu 60%,er 11-9-3、12-9-10dui gong zhi zhu de du sha huo xing zui hao ,24hjiao zheng si wang lv gao da 80%;11-9-3、11-9-49、12-9-10dui yu ping guo huang ya de du sha huo xing jiao hao ,24hjiao zheng si wang lv gao yu 50%,er 11-9-3dui ping guo huang ya de du sha huo xing zui hao ,24hjiao zheng si wang lv da dao le 70%;7zhu fang xian jun fa jiao ye dui nian chong de du sha huo xing jiao di ,mo ming xian de du sha huo xing ,72hsi wang lv jun di yu 20%;7zhu fang xian jun fa jiao ye dui xiao cai e de du sha huo xing cha yi xian zhe ,ji zhong 12-9-26、12-9-27de 72hjiao zheng si wang lv di yu 20%,11-9-49、12-9-10de 72hjiao zheng si wang lv gao yu 50%,er 11-9-3dui xiao cai e de du sha huo xing zui wei xian zhe ,72hjiao zheng si wang lv da dao le 90%。11-9-3de fa jiao ye biao xian chu le xian zhe de sha chong huo xing ,jin yi bu ding liang ce ding le gai jun zhu 4ge ji xing duan cu di wu sha chong huo xing ,jie guo xian shi yi suan yi zhi cu di wu yu lv fang cu di wu （20mg/ml）dui xiao cai e de du sha huo xing zui hao ,72hjiao zheng si wang lv gao yu 90%,yin ci ke que ding huo xing wu zhi ji zhong zai lv fang duan yu yi suan yi zhi duan nei 。（2）cai yong duo xiang fen lei xue fang fa ,tong guo dui 11-9-3jun zhu jin hang xing tai xue te zheng guan cha ji sheng li sheng hua te zheng fen xi ,jie ge jun zhu de 16S rDNAxu lie yu te zheng jun zhu de bi dui fen xi he ji tong fa yo shu de gou jian ,ke ji ben que ding jun zhu 11-9-3shu yu lian mei jun shu （Streptomyces）。tong guo xu lie bi dui ,fang xian jun 11-9-3jun zhu yu xi shui lian mei jun （Streptomyces hygroscopicus）zai tong yi ji tong jin hua fen zhi shang ,xiang shi du da dao le 98%,ji xing tai te zheng 、pei yang te zheng ye yu xi shui lian mei jun （Streptomyces hygroscopicus）xiang shi ,dan shi ji sheng li sheng hua te zheng que yu dian xing de xi shui lian mei jun cun zai jiao da cha yi ,yin ci 11-9-3ke neng wei xi shui lian mei jun de xin ya chong ,ji fen lei de wei de que ding hai xu jin hang DNA-DNAza jiao yi ji xi bao bi hua xue cheng fen bi jiao 。（3）dui jun zhu 11-9-3jin hang da liang fa jiao ,shou ji shang qing ye jing cui qu nong su hou de dao lv fang duan cu di wu yu yi suan yi zhi duan cu di wu ,cai yong huo xing zhui zong fa jie ge gui jiao zhu ceng xi 、ning jiao zhu ceng xi 、bao ceng ceng xi 、HPLCdeng duo chong fen li shou duan fen bie dui 11-9-3jun zhu de lv fang huo xing duan yi ji yi suan yi zhi huo xing duan cu di wu jin hang jin yi bu fen li di qu ,zui zhong de dao le 8ge hua ge wu ,li yong he ci qing tan pu deng bo pu fen xi fang fa jie ge wen suo fen xi bi dui ,jian ding chu le 6ge hua ge wu ,fen bie wei :4-Hydroxybenzoic acid（A）、huan （L-fu an suan -L-liang an suan ）er tai （B）、1-acetyl-4,5-dihydroxyanthracene-9,10-dione（C）、1,8-dihydroxy-6-methylanthracene-9,10-dione（E）、Convolvulol（I）、huan （L-ben bing an suan -L-fu an suan ）er tai （D）,C、Ejun wei en kun lei hua ge wu ,B、Djun wei huan er tai lei hua ge wu ,Iwei ben bing fu nan lei hua ge wu 。（4）dui fen li de dao 6ge hua ge wu jin hang le chu bu de sha chong huo xing yan jiu ,fen bie ce ding le hua ge wu dui ping guo huang ya 、zhu sha xie man 、xiao cai e 、nian chong de du sha huo xing 、dui nian chong de ju shi huo xing 、dui xiao cai e de sheng chang yi zhi zuo yong ,jie guo xian shi :shai shua chu le liang ge dui zhu sha xie man ju you jiao hao du sha huo xing de hua ge wu C(zhi si zhong nong du LC50wei 756.46μg/ml)he hua ge wu E(LC50wei 389.79μg/ml),yi ji dui nian chong you yi ding ju shi huo xing de hua ge wu I,ju shi lv wei 44%。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自西北农林科技大学的刘倍伶，发表于刊物西北农林科技大学2019-07-11论文，是一篇关于土壤放线菌论文,杀虫活性论文,分类鉴定论文,次生代谢产物论文,结构鉴定论文,西北农林科技大学2019-07-11论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自西北农林科技大学2019-07-11论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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