导读:本文包含了抗原纯化论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:α1-抗胰蛋白酶,基因克隆,基因表达,抗原性鉴定
抗原纯化论文文献综述
宋帅[1]（2019）在《α1-抗胰蛋白酶的克隆、表达、纯化及其抗原性鉴定》一文中研究指出α1-抗胰蛋白酶(α1-antitrypsin,α1-AT)是人体内重要的蛋白酶抑制剂,主要是由肝细胞合成的一种糖蛋白,也能在肠上皮细胞肾实质等肝外组织和某些肿瘤细胞中产生,它能抑制多种蛋白酶与丝氨酸内切肽酶。在电泳中,其迁移位点位于α1蛋白带,因而又被称为α1蛋白酶抑制剂。在多种肺部炎性疾病中,胰蛋白酶-抗胰蛋白酶系统起到关键作用。某些有关α1-抗胰蛋白酶疾病的诊治,尤其α1-抗胰蛋白酶与肝脏疾病,有待进一步研究。在胃癌患者胃液中存在大量的α1-抗胰蛋白酶,其具体原因尚不明确,有待进一步研究。目的:克隆人α1-抗胰蛋白酶基因使其在细胞中表达,进行其抗原性鉴定。方法:(1)表达质粒的构建:以人胚肾细胞系293T的mRNA为模板,采用RT-PCR方法得到人α1-AT cDNA序列(1200bp),克隆至载体后酶切鉴定,进行序列分析。(2)融合蛋白的表达与纯化:提取序列正确的重组质粒转入大肠杆菌M_(15)中表达,GST亲和纯化方法纯化上清(过柱法),还原型谷氨酸溶液洗杂蛋白,用PBS(pH7.4)缓冲液洗目的蛋白,分别取10μl过柱前上清、过柱后上清和所得目的蛋白进行SDS-PAGE分析。(3)重组蛋白的抗原性鉴定:免疫印迹(Western blot)法验证目的蛋白是否符合α1-AT的抗原性。结果:基因克隆方法得到人α1-AT基因cDNA,获得的人α1-AT序列与Gene bank文献报道的核苷酸序列一致,Western blot法验证目的蛋白符合α1-AT的免疫学特性。结论:(1)以人胚肾细胞系293T细胞的总RNA为模板,采用RT-PCR法获得α1-AT基因cDNA,构建人α1-AT的表达载体PQE_(30)-α1-AT,可在大肠杆菌M_(15)中获得高效表达的α1-AT蛋白。(2)采用基因工程技术获得并纯化的人α1-AT蛋白具有同天然α1-AT相同抗原性。(本文来源于《吉林大学》期刊2019-06-01）
张攀,石宇,徐颖[2]（2019）在《儿童免疫性血小板减少症血清中抗核仁抗体纯化以及靶抗原的筛选》一文中研究指出免疫性血小板减少症为儿童常见获得性免疫性疾病,本研究前期发现有较高比例的抗核仁抗体阳性的儿童为免疫性血小板减少症患者。为筛选鉴定抗核仁抗体阳性免疫性血小板减少症患儿血清中抗核仁抗体识别的靶抗原,本研究利用HEP-2细胞系建立了细胞固定-抗体结合-抗体洗脱-抗体中和体系,成功纯化免疫性血小板减少症患儿血清中抗核仁抗体。利用蛋白免疫共沉淀和质谱分析法筛选出Ncl、Krt1、Krt2、Krt10等蛋白可能为免疫性血小板减少症患儿血清中抗核仁抗体结合的靶抗原。这些结果为免疫性血小板减少症患儿血清中抗核仁抗体靶抗原的鉴定提供有效方法,可进一步深化我们对免疫性血小板减少症发病机制的认识。(本文来源于《基因组学与应用生物学》期刊2019年05期）
胡涛,金郁,汪学龙,李群[3]（2019）在《水疱性口炎病毒纯化抗原制备多克隆抗体的检测结果分析》一文中研究指出目的水疱性口炎病毒纯化抗原制备兔抗VSV多克隆抗体,免疫学方法检测其结果分析比较。方法纯化的抗原制备兔抗VSV多克隆抗体,采用双向琼脂扩散试验,间接ELISA方法和中和试验测定效价。结果兔抗VSV多克隆抗体最高效价双向琼脂扩散试验为1∶32,间接ELISA法为1∶640,中和试验为1∶256。结论试验结果分析比较表明,建立纯化抗原制备的兔抗VS多克隆抗体,中和试验特异性好、敏感性高,可做为VSV的血清学检测和流行抗学调查抗供技术保障。(本文来源于《热带病与寄生虫学》期刊2019年01期）
胡涛,李群,刘伯玉[4]（2019）在《教学用纯化水疱性口炎病毒抗原制备兔多克隆抗体结果分析》一文中研究指出目的用纯化水疱性口炎病毒抗原制备兔抗VSV多克隆抗体,经免疫学方法检测并分析其结果。方法纯化VSV抗原免疫家兔后收集免疫血清,采用双向琼脂扩散试验、酶联免疫吸附试验(ELISA)和中和试验测定效价。结果兔抗VSV多克隆抗体双向琼脂扩散试验最高效价为1∶32,ELISA法最高效价为1∶320,中和试验最高效价为1∶256。结论纯化VSV抗原制备的兔抗VSV多克隆抗体特异性好、敏感性高,可为课堂教学、VSV科研及流行病学调查提供可靠依据和技术保障。(本文来源于《卫生职业教育》期刊2019年06期）
霍苏馨,郑朝朝,赵玉龙,韩润林,鲍恩东[5]（2019）在《抗原纯化对猪支原体肺炎灭活疫苗免疫效果的影响》一文中研究指出为了评价优化猪支原体肺炎灭活疫苗的免疫效果,本试验通过对比所选疫苗优化前后疫苗抗原浓度及总蛋白浓度,以及检测异种受试动物的存活率、增重情况、血常规及血生化指标等,对疫苗的纯度、安全性进行了评估。结果显示,相对于未纯化疫苗,使用25佐剂的优化疫苗(C5)的抗原纯度及抗原浓度均有显着的升高,其安全性得到了显着的改善。优化疫苗(C5)的抗原纯度、抗原浓度及安全性都与进口疫苗(J1)相当,优于进口疫苗(J2)。该产品的优化为未来单针疫苗及联苗的研发打下了基础。(本文来源于《畜牧与兽医》期刊2019年03期）
陈静梅,李瑾,孙慧,肖婷,魏庆宽[6]（2019）在《猪囊尾蚴排泄分泌抗原Ts8B2基因的原核表达、纯化以及免疫反应性分析》一文中研究指出目的原核表达猪囊尾蚴排泄分泌抗原Ts8B2基因,分析重组蛋白的免疫反应性。方法参照GenBank中Ts8B2基因序列设计引物,以合成基因为模板获得预期DNA片段,双酶切后连接至原核表达载体pGEX-4T-1。将重组质粒转化入大肠埃希菌DH5α(E.coli DH5α),PCR、双酶切筛选阳性质粒,测序确认后转化至E.coli Rosstea,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测表达产物。尿素法提取重组蛋白,然后以脑囊虫病患者血清为一抗,Western blot分析其免疫反应性。结果 Ts8B2基因PCR扩增产物为258 bp,与理论值一致。双酶切和测序鉴定重组表达质粒构建成功,SDS-PAGE分析重组质粒转化菌表达相对分子质量为3.5×10~3,以包涵体形式存在目的蛋白,Western blot分析尿素法提取的重组蛋白能被脑囊虫患者血清识别。结论成功构建Ts8B2基因重组表达质粒表达的重组蛋白具有免疫反应性,为进一步研究该蛋白在抗体检测中的应用奠定了基础。(本文来源于《中国病原生物学杂志》期刊2019年02期）
严石,潘春刚,张健,许磊,宋芳[7]（2019）在《兽用疫苗抗原分离纯化技术》一文中研究指出近年来,随着生物技术的快速发展,运用一系列的技术手段,已设计、制造出多种生物制品。其研发、生产过程大致包括上、下游两个阶段,上游是运用生物技术手段研制目标产物,下游是指对目标产物的料液进行前处理、浓缩纯化等一系列过程。目前,生物制品上游技术发展较快,而下游分离纯化技术发展相对滞后。许多生物制品在实验室已研制成功,却无法向工业化规模生产的方向迈进。(本文来源于《中国兽医杂志》期刊2019年01期）
李正军[8]（2018）在《基于乙肝核心抗原病毒样颗粒及其衍生物颗粒性质的纯化和应用过程设计》一文中研究指出病毒样颗粒(Virus like particles,VLP)是多个蛋白质亚基组装而成的纳米颗粒,有望发展成为各种疫苗抗原、佐剂或药物载体,是近年来生物制药工程领域的热点之一。本文以乙肝核心抗原病毒样颗粒(Hepatitis B core antigen virus-like particles,HBc-VLP)为研究对象,在已有的蛋白质研究方法之上,对其进行颗粒学研究,建立了适合其批量制备的纯化工艺,探索了其作为疫苗抗原和药物载体的应用。主要研究结果如下:(1)分析了 HBc-VLP颗粒表面结构性质,利用其表面强疏水性的特点,建立了基于疏水层析的批量制备HBc-VLP的技术。以疏水层析纯化为核心,以60℃加热30min预处理为前级分离,以凝胶过滤层析为后级精制,从发酵培养后破菌上清液中分离纯化HBc-VLP,总收率41.92%,纯度大于99%,是迄今为止文献上报道的全套HBc-VLP分离纯化工艺。先后进行6批次发酵液的层析纯化,产品收率和纯度重现性良好。(2)根据结构同源性模拟计算了 HBc-VLP与叁种衍生物颗粒表面疏水值的差异,优化了疏水层析条件,采用(1)中建立的HBc-VLP纯化工艺,成功地从发酵后细胞破碎上清液中纯化出高纯度的M2e-HBc、NP-HBc和OVA-HBc。其中,叁种衍生物M2e-HBc、NP-HBc和OVA-HBc均以HBc-VLP为骨架,分别通过基因融合的方式插入了流感病毒基质蛋白M2e、流感病毒核蛋白NP和模型抗原卵清蛋白OVA叁种抗原表位。(3)从颗粒变化的角度对纯化工艺中的前处理步骤进行了考察,发现当加热处理菌体破碎液沉淀宿主蛋白时,HBc-VLP在高于70℃处理后颗粒尺寸和分子量都有增加,而低于70℃处理就没有这种现象发生。仔细分析发现,HBc-VLP具有热敏可逆膨胀性,温度升高,亚基与亚基间孔道扩张,颗粒尺寸增大;但温度恢复常温后,尺寸也能复原。但是当温度大于70℃后,孔道扩张足够大,使得细胞破碎上清液中大量杂质蛋白能够通过孔道,而VLP是中空的颗粒,进入颗粒内部的杂质蛋白在颗粒内部积累,并在热处理后仍然驻留在颗粒内部,导致VLP尺寸增加和分子量增大。(4)建立了两步加热预处理的策略。第一步在60℃加热30min以沉淀去除菌体破碎上中大部分杂质蛋白,第二步升高到70℃加热30 min进一步沉淀残留的杂蛋白。两步加热的策略有效避免了一次升高到70℃出现的大量杂质进入颗粒的问题,HBc-VLP收率达到85.8%,纯度74.7%。耦合一步疏水层析精制使纯度达到99.0%,整个工艺收率77.7%。新工艺用于HBc-VLP的衍生物的纯化亦获得成功,M2e-HBc、NP-HBc和OVA-HBc的纯度都达到97%以上,收率均在50%以上。(5)根据上面HBc-VLP在高温下颗粒尺寸膨胀、亚基之间孔道加大的发现,设计了高温装载抗原的应用过程。将纯化后的M2e-HBc(表面融合流感基质蛋白M2e)作为流感疫苗的候选,通过加热法使流感病毒核蛋白抗原表位多肽(NP)进入到M2e-HBc颗粒中,构建了一种表面、内部都具有抗原的流感疫苗。免疫小鼠后,ELISA法检测针对M2e/NP的抗体,抗体水平较对照组有明显提升;A/FM/1/47(H1N1)流感病毒进行攻毒实验,内外双抗原流感疫苗保护率能够达到100%。(6)将加热装载法拓展到装载抗癌药物的应用上,以纯化的HBc-VLP为抗癌药物阿霉素(DOX)的载体,通过70℃加热90 min实现每个HBc-VLP分子装载4248个DOX,优于传统方法的装载效率。利用HBc-VLP多对二硫键对谷胱甘肽敏感的特性,实现阿霉素在肿瘤细胞内的控释。HBc-VLP表面化学修饰RGD靶向肽,达到特异性靶向的目的,取得了比传统给药更好的抑瘤效果。(本文来源于《中国科学院大学(中国科学院过程工程研究所)》期刊2018-12-01）
郭万美,陈玉娟,周宇杭,陈泉,李飞[9]（2018）在《抗癌胚抗原纳米抗体与人Fc融合蛋白在毕赤酵母和HEK293细胞中的表达、纯化和性质比较》一文中研究指出通过对不同系统表达的肿瘤标记物癌胚抗原(CEA)纳米抗体与人Fc融合蛋白(11C12-Fc)的表达、纯化及抗体性质等的比较分析,比较不同表达系统的特点及其对融合抗体性质的影响;从而为CEA融合纳米抗体在体内检测方面的应用提供理论依据。构建两种11C12-Fc表达系统(Pichia pastoris和HEK293)相应的表达载体和菌株,分别进行诱导表达、分离纯化;并对其纯化产物的生物学活性等进行初步研究。成功构建了毕赤酵母、HEK293细胞两种CEA纳米抗体融合蛋白(11C12-Fc)表达系统并实现11C12-Fc的胞外分泌表达;通过protein A柱及阴离子交换层析纯化,获得了较高纯度和浓度的11C12-Fc样品;通过突变糖基化位点的方式有效去除了毕赤酵母表达11C12的过度糖基化作用;并且其抗体亲和力较突变前未发生明显改变,与HEK293细胞表达的11C12-Fc都表现出较高的亲和力。毕赤酵母和HEK293系统均能够表达具有较高生物活性的11C12-Fc,后续的科研或生产可根据实际需要和条件来合理选择表达系统。为后续的纳米抗体融合蛋白规模化生产、体内诊断与靶向治疗的应用提供了理论和技术参考。(本文来源于《科学技术与工程》期刊2018年21期）
刘国英,郝鹏,陈光达,李志鹏[10]（2018）在《伪狂犬抗原纯化浓缩工艺研究》一文中研究指出伪狂犬病毒(Pesudorabies virus,PRV)属于疱疹Ⅰ型病毒,PRV病毒粒子的核衣壳成正二十面体,带囊膜的成熟病毒粒子直径约120～300nm。自2011年以来,我国多地猪场暴发伪狂犬病,给我国养猪业带来了较大影响。目前,急需生产出高质量伪狂犬疫苗来应对疫情的威胁。传统的伪狂犬疫苗单位体积内抗原含量不高,免疫效果不佳;杂蛋白含量较多,免疫副反应较严重。本实(本文来源于《兽医导刊》期刊2018年11期）
抗原纯化论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
免疫性血小板减少症为儿童常见获得性免疫性疾病,本研究前期发现有较高比例的抗核仁抗体阳性的儿童为免疫性血小板减少症患者。为筛选鉴定抗核仁抗体阳性免疫性血小板减少症患儿血清中抗核仁抗体识别的靶抗原,本研究利用HEP-2细胞系建立了细胞固定-抗体结合-抗体洗脱-抗体中和体系,成功纯化免疫性血小板减少症患儿血清中抗核仁抗体。利用蛋白免疫共沉淀和质谱分析法筛选出Ncl、Krt1、Krt2、Krt10等蛋白可能为免疫性血小板减少症患儿血清中抗核仁抗体结合的靶抗原。这些结果为免疫性血小板减少症患儿血清中抗核仁抗体靶抗原的鉴定提供有效方法,可进一步深化我们对免疫性血小板减少症发病机制的认识。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
抗原纯化论文参考文献
[1].宋帅.α1-抗胰蛋白酶的克隆、表达、纯化及其抗原性鉴定[D].吉林大学.2019
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