本文主要研究内容
作者尹丹（2019）在《鸭坦布苏病毒流行株prM蛋白单克隆抗体的制备及其抗体依赖性感染增强作用的初步验证》一文中研究指出：鸭坦布苏病毒病是由坦布苏病毒(Tembusu Virus,TMUV)引起的一种新发传染性疾病。该病自2010年起持续危害我国水禽养殖业,造成了严重经济损失。2017年11月,山东临沂地区一前期接种过鸭坦布苏病毒弱毒疫苗的种鸭群发生以产蛋下降为主要特征的疾病。通过采集脑、肝脏等组织制备组织悬液,无菌处理后在10日龄鸭胚上盲传四代,经鉴定,本试验获得了一株鸭坦布苏病毒,随后进行了动物回归试验。所收获毒液对易感雏鸭进行了致病性试验。结果显示,该分离株可致胚体出血、侏儒化,攻毒死亡雏鸭剖检可见肺脏、脑膜出血水肿,腺胃出血,脾脏肿大、表面有出血点等病变,与临床病例表现一致。对该毒株NS1基因和prM基因进行遗传进化分析,结果表明该分离株位于中国基因II型分支上,且与该分支上的其他参考株同源性较高,氨基酸同源性最高可达99.4%,核苷酸的同源性最高达99.8%。综上所述,本研究成功从免疫鸭群中分离到一株有致病性的鸭坦布苏病毒病野毒株。从分离到的鸭坦布苏病毒中扩增出prM基因,成功构建了pET-32a-prM原核表达载体,将其转入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,并对表达出的鸭坦布苏病毒prM蛋白进行纯化。利用纯化的prM蛋白作为抗原免疫3月龄新西兰白兔,获取相应的多克隆抗体。通过间接ELISA试验检测抗体效价为1:51200,Western-blot结果显示,该多克隆抗体能与pET-32a-prM重组蛋白发生特异性结合,证明其具有良好的反应性,间接免疫荧光试验结果表明制备的prM蛋白多克隆抗体可以特异性的识别TMUV感染细胞中的相应蛋白。将纯化的prM重组蛋白作为抗原免疫6~8周龄BALB/c小鼠,经过细胞融合和间接ELISA筛选,最终得到3株能稳定分泌prM蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并通过抗体亚类试剂盒测定所获得的单抗均为IgG1亚型。利用间接ELISA方法进行效价测定,三株单抗的细胞上清效价均在1:2~6以上,诱导产生腹水的效价均大于1:25600。Western-blot和间接免疫荧光试验结果表明,三株单抗均可与prM蛋白发生特异性反应。该鸭坦布苏病毒prM蛋白单克隆抗体的制备为后续研究其ADE作用机制提供了必要基础。黄病毒属病毒被认为普遍存在抗体依赖性感染增强作用(Antibody-dependent enhancement,ADE),TMUV作为黄病毒属成员之一,其ADE的作用机制一直未能明确,而prM蛋白诱导产生的抗体被认为与黄病毒的ADE作用密切相关。本试验利用不同稀释度的抗体与鸭坦布苏病毒结合形成抗体病毒混合物后感染HEK-293细胞,通过荧光定量PCR检测鸭坦布苏病毒在细胞内的增殖情况。结果显示稀释度为1:800的抗体与鸭坦布苏病毒结合共同感染的HEK-293细胞病毒载量最高,感染效果显著增强,表明抗体依赖性感染增强作用的强度与抗体的浓度有一定关系。本研究利用制备的prM蛋白单克隆抗体通过体外试验初步探索了鸭坦布苏病毒的抗体依赖性感染增强作用,为后续研究ADE的作用机制、研发减弱特异性prM抗体的新型TMUV疫苗打下了一定基础。
Abstract
ya tan bu su bing du bing shi you tan bu su bing du (Tembusu Virus,TMUV)yin qi de yi chong xin fa chuan ran xing ji bing 。gai bing zi 2010nian qi chi xu wei hai wo guo shui qin yang shi ye ,zao cheng le yan chong jing ji sun shi 。2017nian 11yue ,shan dong lin yi de ou yi qian ji jie chong guo ya tan bu su bing du ruo du yi miao de chong ya qun fa sheng yi chan dan xia jiang wei zhu yao te zheng de ji bing 。tong guo cai ji nao 、gan zang deng zu zhi zhi bei zu zhi xuan ye ,mo jun chu li hou zai 10ri ling ya pei shang mang chuan si dai ,jing jian ding ,ben shi yan huo de le yi zhu ya tan bu su bing du ,sui hou jin hang le dong wu hui gui shi yan 。suo shou huo du ye dui yi gan chu ya jin hang le zhi bing xing shi yan 。jie guo xian shi ,gai fen li zhu ke zhi pei ti chu xie 、zhu ru hua ,gong du si wang chu ya pou jian ke jian fei zang 、nao mo chu xie shui zhong ,xian wei chu xie ,pi zang zhong da 、biao mian you chu xie dian deng bing bian ,yu lin chuang bing li biao xian yi zhi 。dui gai du zhu NS1ji yin he prMji yin jin hang wei chuan jin hua fen xi ,jie guo biao ming gai fen li zhu wei yu zhong guo ji yin IIxing fen zhi shang ,ju yu gai fen zhi shang de ji ta can kao zhu tong yuan xing jiao gao ,an ji suan tong yuan xing zui gao ke da 99.4%,he gan suan de tong yuan xing zui gao da 99.8%。zeng shang suo shu ,ben yan jiu cheng gong cong mian yi ya qun zhong fen li dao yi zhu you zhi bing xing de ya tan bu su bing du bing ye du zhu 。cong fen li dao de ya tan bu su bing du zhong kuo zeng chu prMji yin ,cheng gong gou jian le pET-32a-prMyuan he biao da zai ti ,jiang ji zhuai ru da chang gan jun BL21(DE3)gan shou tai xi bao ,bing dui biao da chu de ya tan bu su bing du prMdan bai jin hang chun hua 。li yong chun hua de prMdan bai zuo wei kang yuan mian yi 3yue ling xin xi lan bai tu ,huo qu xiang ying de duo ke long kang ti 。tong guo jian jie ELISAshi yan jian ce kang ti xiao jia wei 1:51200,Western-blotjie guo xian shi ,gai duo ke long kang ti neng yu pET-32a-prMchong zu dan bai fa sheng te yi xing jie ge ,zheng ming ji ju you liang hao de fan ying xing ,jian jie mian yi ying guang shi yan jie guo biao ming zhi bei de prMdan bai duo ke long kang ti ke yi te yi xing de shi bie TMUVgan ran xi bao zhong de xiang ying dan bai 。jiang chun hua de prMchong zu dan bai zuo wei kang yuan mian yi 6~8zhou ling BALB/cxiao shu ,jing guo xi bao rong ge he jian jie ELISAshai shua ,zui zhong de dao 3zhu neng wen ding fen bi prMdan bai chan ke long kang ti de za jiao liu xi bao zhu ,bing tong guo kang ti ya lei shi ji he ce ding suo huo de de chan kang jun wei IgG1ya xing 。li yong jian jie ELISAfang fa jin hang xiao jia ce ding ,san zhu chan kang de xi bao shang qing xiao jia jun zai 1:2~6yi shang ,you dao chan sheng fu shui de xiao jia jun da yu 1:25600。Western-blothe jian jie mian yi ying guang shi yan jie guo biao ming ,san zhu chan kang jun ke yu prMdan bai fa sheng te yi xing fan ying 。gai ya tan bu su bing du prMdan bai chan ke long kang ti de zhi bei wei hou xu yan jiu ji ADEzuo yong ji zhi di gong le bi yao ji chu 。huang bing du shu bing du bei ren wei pu bian cun zai kang ti yi lai xing gan ran zeng jiang zuo yong (Antibody-dependent enhancement,ADE),TMUVzuo wei huang bing du shu cheng yuan zhi yi ,ji ADEde zuo yong ji zhi yi zhi wei neng ming que ,er prMdan bai you dao chan sheng de kang ti bei ren wei yu huang bing du de ADEzuo yong mi qie xiang guan 。ben shi yan li yong bu tong xi shi du de kang ti yu ya tan bu su bing du jie ge xing cheng kang ti bing du hun ge wu hou gan ran HEK-293xi bao ,tong guo ying guang ding liang PCRjian ce ya tan bu su bing du zai xi bao nei de zeng shi qing kuang 。jie guo xian shi xi shi du wei 1:800de kang ti yu ya tan bu su bing du jie ge gong tong gan ran de HEK-293xi bao bing du zai liang zui gao ,gan ran xiao guo xian zhe zeng jiang ,biao ming kang ti yi lai xing gan ran zeng jiang zuo yong de jiang du yu kang ti de nong du you yi ding guan ji 。ben yan jiu li yong zhi bei de prMdan bai chan ke long kang ti tong guo ti wai shi yan chu bu tan suo le ya tan bu su bing du de kang ti yi lai xing gan ran zeng jiang zuo yong ,wei hou xu yan jiu ADEde zuo yong ji zhi 、yan fa jian ruo te yi xing prMkang ti de xin xing TMUVyi miao da xia le yi ding ji chu 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自山东农业大学的尹丹，发表于刊物山东农业大学2019-07-08论文，是一篇关于鸭坦布苏病毒论文,蛋白论文,单克隆抗体论文,抗体依赖性感染增强论文,山东农业大学2019-07-08论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自山东农业大学2019-07-08论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
标签：鸭坦布苏病毒论文; 蛋白论文; 单克隆抗体论文; 抗体依赖性感染增强论文; 山东农业大学2019-07-08论文;