阿不都西克日?阿不都力米提1，2张全梅2刘丽1滕亮2(通讯作者)
(1.新疆医科大学药学院新疆乌鲁木齐830011)
(2.新疆医科大学第一附属医院药学部新疆乌鲁木齐830011)
【摘要】目的建立用于测定痤疮酊中水杨酸和氯霉素含量的紫外分光光度法。方法通过方法学考察，确定了可用于测定痤疮酊中水杨酸和氯霉素含量的双波长紫外分光光度法。结果氯霉素在10~25μg?mL-1、水杨酸在5~20μg?mL-1范围内浓度与ΔA线性关系良好。氯霉素的平均回收率为101.04%，RSD（%）=1.59。水杨酸的平均回收率为100.65%，RSD（%）=1.16。样品中氯霉素的平均含量为10±0.39μg?mL-1，水杨酸的平均含量为20±0.12μg?mL-1。结论本方法操作简便、快速、结果准确，可用于痤疮酊的质量控制。
【关键词】紫外分光光度法痤疮酊氯霉素水杨酸
【中图分类号】R927.2【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2014）24-0074-02
ContentDeterminationofSalicylicAcidandChloramphenicolinAcneTincturebyDualWavelengthSpectrophotometry
Abuduxikeri?Abudulimiti1，2,ZhangQuanmei2,LiuLi1,TengLiang(Correspondingauthor)2
(1.CollegeofPharmacy，XinjiangMedicalUniversity，Urumqi830011;2.PharmacyDepartment，theFirstAffiliatedhospitalofXinjiangMedicalUniversity，Urumqi830011)
【Abstract】ObjectiveToDeterminethecontentofsalicylicacidandchloramphenicolinacnetincturebyUV.MethodsThecontentsofchloramphenicolandsalicylicacidweredeterminedbydualwavelengthspectrophotometry,whichwasverifiedbymethodologicalevaluation.ResultsTherewasagoodlinearrelationshipbetweentheconcentrationofchloramphenicolandΔAwithintherangeof10~25μg?mL-1.TherewasagoodlinearrelationshipbetweentheconcentrationofsalicylicacidandΔAwithintherangeof5~20μg?mL-1.Theaveragerecoveryofchloramphenicolwas101.04%(RSD=1.59%),andtheaveragerecoveryofsalicylicacidwas100.65%(RSD=1.16%).Theaveragecontentofchloramphenicolwas10±0.39μg?mL-1,andtheaveragecontentofsalicylicacidwas20±0.12μg?mL-1insamples.ConclusionThemethodissimple,rapidandaccurate,whichcanbeusedtocontrolthequalityofacnetincture.
【Keywords】UVSpectrophotometry,Acnetincture,Chloramphenicol,Salicylicacid
新疆医科大学第一附属医院自制制剂“痤疮酊”主要由氯霉素、水杨酸组成，具有消炎杀菌、溶解角栓的作用，主要用于毛囊炎、头皮湿疹、脂溢性皮炎、酒糟鼻等的治疗，效果良好，在临床使用多年，未见严重不良反应，是一种疗效较好、价格低廉、使用方便、患者易于接受的外用制剂。
目前“痤疮酊”的质量控制方法包括是鉴别、检查、总酸量的测定，但没有主要成分氯霉素与水杨酸的含量测定。随着医药科技的发展与临床用药安全性需求的增加，目前的质量控制体系已无法满足要求。因此，本课题主要探讨采用双波长等吸收法测定“痤疮酊”中氯霉素与水杨酸的含量，为完善该制剂的质量标准提供试验基础。
1仪器与材料
1.1仪器UV-120-01紫外分光光度计（日本岛津），BP211D分析天平（德国）。
1.2试药氯霉素标准品(130555-201203，中国药品生物制品检定所)、水杨酸标准品(100106-201104，中国药品生物制品检定所)、75％乙醇、痤疮酊均由新疆医科大学第一附属医院药学部药检室提供。
2方法与结果
2.1测定波长的的选择[1-4]
精取水杨酸0.005克，氯霉素0.0025克各放入100ml的量瓶中。加50％的乙醇溶液至刻度。又从各溶液中精密取1ml加入10ml的量瓶中，加50％的乙醇溶液至刻度，得50μg/ml的水杨酸A和25μg/ml的氯霉素B溶液。两溶液均在220到320nm范围内测定吸收度，并绘制吸收光谱，结果见图1。
图1水杨酸A和氯霉素B的吸收光谱
2.2波长组合的选择
按作图法在图上初测定水杨酸的组合波长为λs1＝231，λr1＝254氯霉素的组合波长为位λs2＝278，λr2＝246.然后按照精密选定法六中不同浓度的氯霉素水杨酸溶液，先在组分的测定波长λs处测定吸光度，再在组分的参比λr上下每隔0.2nm波长测定吸光度，并分别计算△A值，经试验选择确定水杨酸的最佳组合波长为λs1＝231，λr1＝254。氯霉素的最佳组合波长为位λs2＝278，λr2＝246。
2.3线性关系实验
2.3.1绘制水杨酸的标准曲线[5-7]
精取水杨酸0.005克，氯霉素0.0025克各放入100ml的量瓶中。加50％的乙醇溶液至刻度。又从各溶液中精密取1ml加入10ml的量瓶中，加50％的乙醇溶液至刻度，得50μg/ml的水杨酸和25μg/ml的氯霉素溶液。精密称取水杨酸标准溶液1、1.5、2、2.5、3、4ml，氯霉素标准溶液1、1.5、2、2.5、3、4ml，分别置10ml的量瓶中加50%的乙醇溶液至刻度，水杨酸浓度分别为5、7.5、10、12.5、15、20μg/ml，氯霉素的浓度2.5、3.75、5、6.25、7.5、10μg/ml，用50％的乙醇溶液做空白，分别在231nm、254nm和278nm、246nm处测定吸光度，计算△A水杨酸=A254-A231，结果见表1。以△A水杨酸与水杨酸进行线性回归，得回归方程y=0.0446x+0.02，r＝0.9998（P＜0.05）。
表1水杨酸标准曲线结果（n＝6）
浓度57.51012.51520
△A0.240.360.460.580.690.91
结果表明水杨酸在5~20μg/ml范围内浓度与△A线性关系良好。
2.3.2绘制氯霉素的标准曲线
精取水杨酸0.005克，氯霉素0.005克各放入100ml的量瓶中。加50％的乙醇溶液至刻度。又从各溶液中精密取1ml加入10ml的量瓶中，加50％的乙醇溶液至刻度得50μg/ml的水杨酸和50μg/ml的氯霉素溶液。精密称取水杨酸标准溶液1、1.5、2、2.5、3、4ml，氯霉素标准溶液2、2.5、3、3.5、4、4.5ml，分别置10ml的量瓶中加50％的乙醇溶液至刻度。这是水杨酸的浓度分别为5,7.5，10，12.5，15，20。氯霉素的浓度分别为10，12.5，15，17.5，20，22.5μg/ml，加50％的乙醇溶液做空白分别在231nm254nm和278nm246nm处测定吸光度，结果见表1。以△A氯霉素与氯霉素进行线性回归，得回归方程Y=0.016x+0.05，r＝1（P＜0.05）。
表2氯霉素标准曲线结果（n＝6）
浓度1012.51517.52022.5
△A0.210.250.290.330.370.41
结果表明氯霉素在10~25μg/ml范围内浓度与△A线性关系良好。
2.4空白回收率的测定
精取水杨酸0.005克，氯霉素0.0025克各放入100ml的量瓶中。加50％的乙醇溶液至刻度。配置水杨酸12.5μg/ml氯霉素17.5μg/ml的6分溶液测定水杨酸的吸收度。求△A水杨酸分别代入回归方程计算水杨酸的含量。计算回收率，水杨酸的平均回收率为100.65%，RSD（%）=1.16。配置水杨酸15μg/ml氯霉素20μg/ml的6分溶液测定氯霉素的吸收度。求△A氯霉素分别代入回归方程计算氯霉素的含量。计算回收率，氯霉素的平均回收率为101.04%，RSD（%）=1.59。
表3水杨酸空白回收率试验结果（n＝6）
2.5重复性和稳定性试验取标准曲线制备项下的氯霉素对照品溶液、水杨酸溶液测定△A，连续测6次，吸收度基本无变化。于室温下不同时间点测定氯霉素对照品溶液、水杨酸溶液测定△A，吸收度基本无变化，提示样品溶液在12h内稳定。
表5重复性实验结果(n=6)
次数（n)123456
水杨酸0.410.420.420.420.410.41
氯霉素0.290.3000.300.290.290.30
表6稳定性试验结果(n=6)
时间（h)1246812
水杨酸0.410.410.420.410.410.42
氯霉素0.300.300.290.290.300.29
2.6样品测定精密吸取1ml痤疮酊至1000ml量瓶中，50％乙醇稀释至刻度，精密吸取1ml至100ml的量瓶中，50％乙醇稀释至刻度，在231nm、254nm和278、246波长测定吸收度A，求得△A水杨酸和△A氯霉素，分别代入回归方程，计算水杨酸和氯霉素的含量。结果氯霉素的平均含量为10±0.39μg/ml，水杨酸的平均含量为20±0.12μg/ml。
表7各批次痤疮酊中氯霉素的含量（n=5）
△A0.20.210.210.210.210.22
浓度（μg/ml）9.3810.0010.0010.0010.0010.63
表8各批次痤疮酊中水杨酸的含量（n=5）
△A0.920.910.910.910.920.92
浓度（μg/ml）20.1819.9619.9619.9619.9620.18
3讨论
3.1应用双波长分光光度法可以对两个吸收峰极相近或相互重迭的组分进行测定，可以在背景很深或混浊溶液中测定痕量组分，具有准确度和精密度好、灵敏度高、多组分同时测定、能进行高浓度溶液和浑浊液样品的分析等优点，具有实际应用价值，尤其适合基层医疗单位用于院内制剂的质量控制研究。
3.2原标准采用滴定法测定总酸量，并未考虑氯霉素的含量测定方法。滴定法操作复杂，滴定需要很长时间，而且中间经过过滤等环节，会对实验结果造成影响。本文采用紫外分光光度法同时测定样品中水杨酸与氯霉素的含量，操作方便，对水杨酸的测定较准确。由于本法操作简单，节省试剂，测定速度快，非常适合对痤疮酊半成品进行预检，也可用于成品中氯霉素与水杨酸的含量测定。
参考文献
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