导读:本文包含了新型转录本论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:卵巢衰老,白细胞介素6,托珠单抗,卵泡发育
新型转录本论文文献综述
程静[1]（2017）在《炎性因子Interleukin-6和新型转录本环状RNA在卵巢衰老中的作用初探》一文中研究指出目的:1、探讨IL-6在小鼠和人卵巢衰老过程中的表达变化,以及IL-6对小鼠卵泡发育成熟的影响,初步探究其分子机制。在此基础上,探索IL-6信号通路抑制剂托珠单抗能否提高年老小鼠卵巢对促性腺激素的反应性,改善老年小鼠的卵母细胞质量,从而为提高高龄妇女的生育结局提供新的策略和治疗方法。2、探索新型转录本环状RNA在女性颗粒细胞中的表达及其在衰老中变化,揭示与卵巢储备和卵母细胞质量下降有关的环状RNA。材料与方法:1、ELISA、免疫化学和蛋白免疫印记分析IL-6在不同年龄阶段小鼠和人卵巢组织中的表达变化;基于卵泡叁维培养体系,用不同浓度的IL-6处理小鼠窦前卵泡,观察IL-6对卵泡直径增长的影响,化学发光免疫技术检测雌孕激素生成,通过qRT-PCR、免疫荧光、体外成熟以及电镜评估其对卵母细胞发育成熟的作用,TUNE和蛋白免疫印记等检测凋亡、自噬相关蛋白和信号分子表达。利用卵巢间质细胞与卵泡共培养体系,将托珠单抗加入年老小鼠卵巢间质细胞培养基中,观察其对卵泡发育成熟的影响;用不同浓度的托珠单抗处理9月龄生殖衰老小鼠,1个月后检测小鼠卵巢对促性腺激素的反应性,免疫荧光观察卵母细胞减数分裂,MitoTracker检测卵母细胞线粒体分布,ELISA检测血清AMH、雌激素和孕酮的水平,蛋白免疫印记技术检测凋亡蛋白、自噬相关蛋白及JAK/STAT3的表达。2、收集2015年1月到2015年8月期间在同济医院生殖中心进行体外受精一胚胎移植患者的颗粒细胞,共126例。通过芯片检测人颗粒细胞中环状RNA表达模式随年龄的变化,qRT-PCR在20对样品中验证差异表达的环状RNA。RNaseR消化法和Sanger测序鉴定环状RNA的稳定性及成环位点。在另一独立队列80例样品中分析候选环状RNA与卵巢储备标记物和辅助生殖技术结局的相关性,并评估其预测价值;最后利用生物信息学方法预测这些候选环状RNA参与的生物学过程和信号通路。结果:1.IL-6在小鼠和人卵巢中的表达随着增龄而显着增加,与年龄呈显着的正相关关系。高浓度的IL-6显着抑制窦前卵泡的生长和雌孕激素的生成,并降低卵母细胞特异性基因的表达,阻碍卵母细胞减数分裂能力的恢复。高浓度IL-6处理的卵泡中卵母细胞超微结构严重受损,可见受损线粒体的聚集,伴随ROS生成增加。IL-6对卵泡的负向调控可能与它激活促凋亡蛋白、降低抗凋亡蛋白、抑制自噬活性有关。有趣的是,体内实验结果表明,与老年对照组小鼠相比,IL-6信号通路抑制剂托珠单抗能提高老年小鼠卵巢对促性腺激素的反应性增加获卵数,降低卵母细胞异常减数分裂的发生,改善卵母细胞内线粒体集聚,提高年老小鼠血清AMH和雌激素水平。托珠单抗对老年小鼠卵巢的保护作用可能与它抗凋亡和提高自噬活性有关。2.芯片结果显示人颗粒细胞环状RNA表达谱在女性衰老进程中发生显着改变,而且通过 qRT-PCR 确认了 circRNA_103829、circRNA_103827、circRNA_104816 和circRNA_101889的表达差异。在校正促排卵方案的影响后,circRNA_103827和circRNA_104816水平仍与女性年龄显着正相关。此外,颗粒细胞中这两个环状RNA的表达水平与血清AMH、AFC、获卵数和优质胚胎数呈显着负相关关系。ROC曲线分析表明circRNA_103827和circRNA_104816对临床妊娠结局具有一定的预测价值,其中circRNA_103827用于活产的预测性能为0.698[0.570-0.825],灵敏度为77.2%,特异性为60.9%(P=0.006),circRNA_104816的预测价值为0.645[0.507-0.783](P = 0.043)。生物信息学分析显示这两个环状RNA可能参与了能量代谢、细胞周期等生物学过程,以及类固醇激素生成、细胞粘附等信号通路。结论:1.IL-6在人和小鼠卵巢中的表达均呈增龄性的升高,升高的IL-6是窦前卵泡发育的负向调节因子,能引起卵泡发育成熟障碍和类固醇激素生成受损。它对卵泡发育成熟的调控作用可能与促凋亡、抑制自噬活性以及受损线粒体的集聚有关。此外,IL-6抑制剂托珠单抗注射能提高老年小鼠卵巢对促性腺激素的反应性,改善老年小鼠恶化的卵母细胞质量。因此,随年龄增长而升高的IL-6可能是导致女性内分泌功能异常、卵母细胞质量下降和卵巢低反应性的重要因素,阻断IL-6信号通路有望成为新的提高高龄妇女生育结局和延长卵巢寿命的方法。2.人颗粒细胞中环状RNA的表达受年龄的影响,随年龄增长而显着上调的circRNA_103827和circRNA_104816可能是卵泡微环境损伤的潜在指标,对体外受精的妊娠结局具有一定的预测价值。阐明这些环状RNA的生物学功能将有助于揭示卵母细胞质量下降的分子机制,改善个性化辅助生殖技术的治疗策略,提高高龄不孕女性的妊娠结局。(本文来源于《华中科技大学》期刊2017-05-01）
郭保平,牛亚茹,徐明龙,徐银学[2]（2015）在《AMHR2新型转录本AMHR2-SV1的鉴定及其在大鼠组织中的表达》一文中研究指出本研究旨在鉴定抗苗勒氏管激素受体2(AMHR2)一种新的转录本,确定其在大鼠组织中的表达情况。采用TRIzol法提取组织总RNA;运用RT-PCR和克隆测序技术分析AMHR2基因的可变剪接体及其在大鼠各组织器官中的表达差异,同时利用NCBI ORF Finder识别剪接体序列阅读框,运用Ex PASy-Prot Param和Conserved domains软件分别预测剪接体氨基酸构成及其性质和剪接体保守序列。AMHR2-SV1是AMHR2的一种新型转录本,命名为AMHR2-splice variant(AMHR2-SV1),与AMHR2参考序列比较,缺失第10外显子137 bp。利用NCBI ORF Finder和Ex PASy-Prot Param,预测AMHR2-SV1编码429个氨基酸残基,其编码的蛋白质分子量为45 990.7。Conserved domains在线软件分析表明:AMHR2-SV1蛋白序列比完整AMHR2蛋白序列缺少128个氨基酸,丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶结构域不完整。检测结果表明,大鼠组织中均存在AMHR2和AMHR2-SV1两个转录本。在肝、脾、肺、肾、肾上腺和子宫组织中AMHR2表达量均高于AMHR2-SV1,差异达到显着水平;两种转录本在不同组织中表达趋势相同,卵巢中表达量最高,心脏中次之,其他组织表达量均显着低于卵巢和心脏。(本文来源于《江苏农业学报》期刊2015年02期）
郭芬,林丕容,李月琴,苏宪礼,王丁丁[3]（2012）在《BRPF1及其新型转录本BRPF2与RHOX5蛋白间的相互作用》一文中研究指出RHOX5基因是最早发现的小鼠RHOX基因簇(reproductive homeobox on the X chromosome)成员,可特异性地在生殖系统中表达。RHOX5蛋白在胚胎发育、生殖组织的发育、精子的生成和成熟等多个环节发挥作用,但其功能的发挥途径尚不明确。在前期筛选与RHOX5蛋白相互作用的分子中初步获得一个BRPF1的新型转录本BRPF2。进一步构建pGBKT7-BRPF2质粒,酵母双杂交实验确定其与RHOX5蛋白的相互作用,GST-pull down实验确定其在体外的直接结合;PCR扩增BRPF1基因,构建pGBKT7-BRPF1和pGADT7-BRPF1质粒,酵母双杂交实验和GST-pulldown实验证明RHOX5蛋白亦可以直接结合BRPF1蛋白。BRPF1及其新型转录本BRPF2与RHOX5蛋白间的相互作用证实暗示了BRPF2极有可能与BRPF1竞争性结合RHOX5蛋白,为叁种蛋白功能的研究提供了新的思路。(本文来源于《中国生物工程杂志》期刊2012年09期）
郭芬,林丕容,李月琴,苏宪礼,王丁丁[4]（2013）在《BRPF1新型转录本BRPF2的鉴定及其在小鼠组织中的表达》一文中研究指出为鉴定BRPF1的一种新转录本,确定其在小鼠组织中的表达并对其蛋白功能进行初步研究,将获得的克隆进行序列测定。RT-PCR和Northern blotting实验检测BRPF1和BRPF2在小鼠各组织器官中的表达,生物信息学分析其保守结构域和蛋白功能,并使用TNT T7体外转录翻译系统获得BRPF1和BRPF2蛋白。结果表明BRPF2是BRPF1的一种新型转录本(GenBank登录号:DQ288860);在小鼠肝、胚胎、附睾、睾丸、卵巢和骨骼肌中均检测到BRPF1和BRPF2两个转录本,其中以BRPF1为主要的转录本;而在小鼠脾中,仅检测到BRPF2的转录本;BRPF1编码1246个氨基酸残基,其编码的蛋白质分子量为140 kDa;而BRPF2由于选择性剪接,导致翻译提前终止,仅编码442个氨基酸残基;CDD软件分析BRPF1和BRPF2结构域表明:与BRPF1相比,BRPF2蛋白缺失了Bromodomain结构域和PWWP结构域。鉴于Bromodomain结构域和PWWP结构域是BRPF1蛋白结合乙酰化或非乙酰化组蛋白,募集组蛋白乙酰转移酶Moz和参与染色质重构的关键,暗示BRPF2极有可能是做为BRPF1蛋白的负调控因子,共同参与染色质调控。(本文来源于《遗传》期刊2013年01期）
林丕容[5]（2010）在《Brpf1及其新型转录本Brpf2与Rhox5蛋白间的功能性相互作用研究》一文中研究指出Brpf1 (Bromodomain and PHD finger containing 1),也被称为Br140和Peregrin,是TrxG (Trithorax group)家族的新成员,是一个多结构域的蛋白。到目前为止,关于Brpf1的研究报导主要集中在染色质调控方面。研究表明BRPF1可以直接结合组蛋白,与活化的染色质相结合,募集组蛋白乙酰转移酶Moz乙酰化组蛋白,参与染色质重构。Rhox5是Rhox (reproductive homeobox genes on the X chromosome)同源异型框基因簇家族成员。Rhox5可特异性的在生殖系统中表达,例如在附睾、睾丸和卵巢中表达。研究表明Rhox5蛋白在胚胎发育、生殖组织的发育、精子的生成和成熟等多个环节发挥作用,但其功能的发挥极有可能是与其他蛋白相互作用组成调控复合物来完成。在前期的实验中,以Rhox5蛋白为诱饵蛋白,筛选小鼠7天胚胎cDNA文库,获得了一个新的克隆2-31。以此为前提,本论文开展了以下叁部分的工作：一、Brpf1及其新型转录本Brpf2的鉴定及表达谱分析从2-31克隆中抽提酵母质粒,转化大肠杆菌,最终经过序列测定后确定2-31克隆中所包含的基因序列为Brpf1基因的一种新的转录本,将其登陆GenBank,获得登录号DQ288860。使用RT-PCR和Northern blotting分析Brpf1和Brpf2的转录本在小鼠各组织中的表达情况,发现在大多数小鼠组织中(包括肝、胚胎、附睾、睾丸、卵巢、骨骼肌)中均检测到Brpf1和Brpf2两种转录本,而脾中仅检测到Brpf2转录本。表明Brpf1和Brpf2应该均具有生理学功能。在小鼠各组织中,Brpf1和Brpf2转录本在附睾、睾丸和卵巢中高表达,而在肝、胚胎、脾和骨骼肌中低表达,暗示Brpf1和Brpf2极有可能在生殖组织中发挥功能。生物信息学分析表明分析比对Brpf1和Brpf2的生物学特性,结果表明：Brpf1的mRNA全长4443bp,编码1246个氨基酸残基,其中包括2个PHD结构域、1个Bromodoamin结构域和1个PWWP结构域,预测分子量为140 kDa；而Brpf2的mRNA全长2747bp,但由于选择性剪接,导致终止密码子的提前出现,Brpf2蛋白仅编码442个氨基酸残基,丧失了参与染色质调控的功能性结构域Bromodoamin和PWWP结构域,仅保留了2个保守的PHD结构域,预测分子量为50 kDa。进一步扩增全长的Brpf1和Brpf2的mRNA序列,使用TNT体外转录翻译系统表达Brpf1和Brpf2的纯蛋白,其分子量为140 kDa和50kDa,与预测的分子量相符。二、Brpf1和Brpf2蛋白与Rhox5蛋白间的相互作用利用酵母双杂交实验确定单独的Brpf2并不能激活酵母双杂系统中的下游报告基因,交换载体,将Brpf2克隆至BD载体,而Rhox5克隆至AD载体,重复的双杂交实验亦证实Brpf2和Rhox5可以在酵母体内结合。将Rhox5蛋白与GST融合生成GST-Rhox5融合蛋白,融合蛋白在在终浓度为1 mmol/l的IPTG,37℃诱导培养6 h的条件下得到有效的表达,使用Glutathione-Sepharose 4B凝胶颗粒纯化后可以获得纯度较高的固着在Glutathione-Sepharose 4B凝胶颗粒上的GST蛋白和GST-Rhox5蛋白。体外的GST-pull down实验中,固着有GST-Rhox5蛋白的Glutathione-Sepharose 4B凝胶颗粒可以有效的pull down Brpf2蛋白,表明Brpf2可以在体外结合Rhox5蛋白。利用PCR方法扩增了Brpf1的CDS(coding sequence)序列,并分别将其克隆至BD载体和AD载体。酵母双杂交实验表明单独的Brpf1并不能激活酵母双杂系统中的下游报告基因,而Brpf1和Rhox5的共转化子则可以在SD/-Trp-Leu-His-Ade选择性培养基上生长,且表现β-半乳糖苷酶活性。这表明Brpf1和Rhox5可以在酵母体内结合。体外的GST-pull down实验中,固着有GST-Rhox5蛋白的Glutathione-Sepharose 4B凝胶颗粒可以有效的pull down Brpf1蛋白,表明Brpf1可以在体外结合Rhox5蛋白。叁、Brpf1及Brpf2与Rhox5蛋白结合的关键结构Brpf2转录本编码的蛋白与Brpf1蛋白相比,丧失了Bromodomain和PWWP结构域,保留了两个保守的PHD结构域。鉴于两种蛋白Brpf1和Brpf2均可以结合Rhox5蛋白,因此推测有可能是两个PHD结构域的其中一个介导了两者与Rhox5蛋白的结合。为了验证Brpf1和Brpf2的PHD结构域是否是其与Rhox5蛋白结合的关键,分别构建了Brpf2 A、Brpf2 B和Brpf2 C突变体,其中Brpf2 A含有两个PHD结构域；Brpf2 B含有第一个PHD结构域,而Brpf2 C含有第二个PHD结构域。酵母双杂交实验和GST-pull down实验结果均表明Brpf1和Brpf2共有的第二个PHD结构域是其与Rhox5蛋白结合的关键结构,而且Brpf1和Brpf2与Rhox5蛋白间的结合极有可能是竞争性结合。同时,利用Rhox5蛋白的两个截短型突变体：不含homeodomain的Rhox5N和含有homeodomain的Rhox5C进行酵母双杂交实验和GST-pull down,结果表明Rhox5的homeodomain直接介导了其与Brpf1和Brpf2蛋白的相互作用。基于这样的实验结果,对于Brpf1和Brpf2与Rhox5蛋白功能性相互作用模式,我们可以提出这样的假设：Brpf1和Brpf2的第二个PHD介导了其与Rhox5蛋白的结合；当Rhox5与Brpf1结合时,Brpf1的Bromodomain和PWWP结构域被掩盖,不能与核小体结合；而当Brpf2与Brpf1竞争性结合Rhox5蛋白时,Brpf1构象发生改变,Bromodomain和PWWP结构域暴露,与组蛋白结合,使核小体构象发生改变,募集转录相关蛋白,促进基因转录。(本文来源于《暨南大学》期刊2010-09-01）
新型转录本论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本研究旨在鉴定抗苗勒氏管激素受体2(AMHR2)一种新的转录本,确定其在大鼠组织中的表达情况。采用TRIzol法提取组织总RNA;运用RT-PCR和克隆测序技术分析AMHR2基因的可变剪接体及其在大鼠各组织器官中的表达差异,同时利用NCBI ORF Finder识别剪接体序列阅读框,运用Ex PASy-Prot Param和Conserved domains软件分别预测剪接体氨基酸构成及其性质和剪接体保守序列。AMHR2-SV1是AMHR2的一种新型转录本,命名为AMHR2-splice variant(AMHR2-SV1),与AMHR2参考序列比较,缺失第10外显子137 bp。利用NCBI ORF Finder和Ex PASy-Prot Param,预测AMHR2-SV1编码429个氨基酸残基,其编码的蛋白质分子量为45 990.7。Conserved domains在线软件分析表明:AMHR2-SV1蛋白序列比完整AMHR2蛋白序列缺少128个氨基酸,丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶结构域不完整。检测结果表明,大鼠组织中均存在AMHR2和AMHR2-SV1两个转录本。在肝、脾、肺、肾、肾上腺和子宫组织中AMHR2表达量均高于AMHR2-SV1,差异达到显着水平;两种转录本在不同组织中表达趋势相同,卵巢中表达量最高,心脏中次之,其他组织表达量均显着低于卵巢和心脏。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
新型转录本论文参考文献
[1].程静.炎性因子Interleukin-6和新型转录本环状RNA在卵巢衰老中的作用初探[D].华中科技大学.2017
[2].郭保平,牛亚茹,徐明龙,徐银学.AMHR2新型转录本AMHR2-SV1的鉴定及其在大鼠组织中的表达[J].江苏农业学报.2015
[3].郭芬,林丕容,李月琴,苏宪礼,王丁丁.BRPF1及其新型转录本BRPF2与RHOX5蛋白间的相互作用[J].中国生物工程杂志.2012
[4].郭芬,林丕容,李月琴,苏宪礼,王丁丁.BRPF1新型转录本BRPF2的鉴定及其在小鼠组织中的表达[J].遗传.2013
[5].林丕容.Brpf1及其新型转录本Brpf2与Rhox5蛋白间的功能性相互作用研究[D].暨南大学.2010