张战波李娜范利彬李杏丽（武警河北总队医院河北石家庄050081）
【摘要】目的观察丁苯酞对急性脑梗塞大鼠海马中信号转导与转录活化因子５（Stat-5）表达的影响。方法将60健康雄性SD大鼠急性脑梗死患者随机分为治疗组（n=30）和对照组（n=30）。治疗组及对照组根据干预时间不同又随机分为2h组、12h组、24h组，用TTC染色和免疫组化染色观察大鼠脑梗死体积及海马区ＳＴＡＴ－５蛋白的表达水平。结果治疗组的２h组及12h组的梗死体积明显小于模型对照组各对应时间点(P<0.05)，而24h组与模型对照组比较，梗死体积虽有所缩小但尚不具有明显差异；治疗组Stat-5的表达水平均较对照组明显降低。结论急性脑梗塞应用丁苯酞治疗可以减小脑梗死体积，降低海马区Stat-5阳性细胞数，疗效确切。
【关键词】左旋丁苯酞脑梗塞Stat-5梗死体积
【中图分类号】R965【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）40-0030-02
【Abstract】Objective：ToobservetheeffectsofButylphthalideontheexpressionofStat-5inthehippocampusofratswithacutecerebralinfarction.Methods60healthymaleSDratswithacutecerebralinfarctionwererandomlypidedintotreatmentgroup(N=30)andcontrolgroup(N=30).Eachgroupwaspidedintothreegroupsaccordingtotheinterventiontime;2h,12h,24hgroup.TTCdyingandimmunohistochemistrydyingwereperformedtoassessinfarctvolumeandtheexpressionsofStat-5inhippocampus.Resultscomparedwithmodelcontrolgroup，theinfarctvolumein2hinterventiongroupand12hinterventiongroupobviouslydecreased(P<0.05)。theinfarctvolumein24hinterventiongroupslightlyreduced.butnosignificanceyet；TheexpressionsStat-5ateachtimepointinmodelinterventiongroupweredistinctlylessthanthatinmodelcontrolgroup.ConclusionsButylphthalideinjectioncanreducetheexpressionofStat-5inratsofacutecerebralinfarction，diminishinfarctvolume.andthetherapeuticeffectiseffective.
【Keywords】3-n-ButylphthalideacutecerebralinfarctionStat-5infarctvolume
左旋丁苯酞(1-NBP)可以改善脑代谢、缩小大鼠局灶性脑缺血脑梗塞体积、改善局部因缺血引起的脑水肿、改善脑血供和微循环，对损伤神经具有多种保护作用[1]。信号传导和转录活化因子5(signaltransductionandactivatoroftranscription5,Stat-5）可能是参与了促红细胞生成素（erythropoietin，EPO）抗神经元凋亡的Jak-2/Stat-5通路。EPO是近年来发现的具有多种神经功能的一种递质[2]。本研究探讨丁苯酞对大鼠神经组织中Stat-5表达水平的影响及其可能机制，为丁苯酞治疗脑梗塞的临床应用提供理论依据。
1材料与方法
1.1动物分组
纳入试验的雄性SD大鼠70只，体重300-350g，月龄2-3个月经过医院伦理委员会批准，并随机分为实验组和对照组。实验组及对照组根据干预时间不同又随机分为2h组、12h组、24h组，每组各10只。各实验组分别于分组对应的时间点给予丁苯酞注射液（5mg/kg）腹腔注射，各对照组给予等量生理盐水腹腔注射。
1.2模型的建立
采用改良结扎法制备大鼠大脑中动脉闭塞局灶性脑缺血模型(MCAO)[3-4]，实验组及对照组均建成MCAO模型，假手术组仅钝性分离左侧CCA、ICA、ECA、PPA后即缝合皮肤。完成模型制备后各实验组分别于分组对应时间点给予丁苯酞（5mg/kg）腹腔注射，对照组均于相应时间点给予等量生理盐水腹腔注射。
1.3梗死体积计算
给药后5h将大鼠麻醉迅速灌注、取脑，冲洗后，-20℃速冻5min，然后将脑从额极向后连续冠状位切片；放入1%2，3，5-－三苯基-2H-四唑盐酸盐中，37℃摇晃恒温孵育30min，0.1MPBS溶液冲洗2-3次；然后用4%多聚甲醛溶液固定24h；拍照后扫描，用图像处理软件计算相应的体积。
1.4免疫组化染色
将所取之脑块自前向后行冠状位切片，片厚约6?m，每张切片包含海马的冠状位切面，脱蜡，染色、脱水，光镜下观察HE染色大鼠海马CA3区神经元形态结构以及免疫组化染色阳性细胞数，以细胞内出现鲜艳的棕黄色颗粒为阳性细胞。用图像信号采集分析系统测量计数每个视野下阳性细胞数，每个部位随机测5个视野，取其平均值。
1.5统计学处理
采用SPSS13.0统计软件，所有数据以均值±标准差（x-±S）表示。
2结果
2.1测量脑梗死体积
用TTC染色测量脑梗死体积，结果见表1。
表1不同组间脑梗死体积（单位mm3）
3讨论
Stat-5能够影响细胞的增殖、分化、存活与凋亡,不但在乳腺发育、免疫应答、干细胞自我更新调控、造血作用以及肿瘤的发生发展等中具有重要作用，而且可能是参与了EPO抗神经元凋亡的Jak-2/Stat-5通路。EPO是一种具有多种功能的神经递质，它可以通过与相应受体结合引起一系列的信号转导，参与缺血后的脑保护。但其具体抗神经元凋亡的信号转导机制尚不完全清楚，有研究显示EPO可能主要是通过与（EPO-R）结合，形成二聚体，并磷酸化激活Janus激酶2，使之发生自体磷酸化，继而引发下游信号转导，调节细胞凋亡[5]。
本研究结果表明,EPO和Stat-5在缺血性脑损伤中可能作为保护性的因子起到抗神经细胞凋亡的作用，进而推测EPOR-Jak-2-Stat-5途径可能也存在神经细胞中，且丁苯酞有可能是通过EPOR-Jak-2-Stat-5信号转导通路途径发挥脑缺血后抗神经元凋亡的保护性作用。
参考文献
[1]彭英，徐少锋，王玲，等．手性丁基苯酞对暂时性局部脑缺血大鼠脑梗死体积的影响．中国新药杂志，2005,14(4):420-423.２
[2]DawsonTM.Preconditioning-mediatedneuroProtectionthrougherythropoietin.TheLancet，2002,359(9301):96-97.
[3]罗超，赵万红，王珺．左旋丁苯酞对脑低灌注大鼠学习记忆及脑β淀粉样肽含量的影响．中国药师，2011.14（10）：1417-1420.
[4]ZeaLE,WeinsteinPR,C'arlsonS.etal.Reversiblemiddlecerebralarteryocclusionwithoutcraniectomyinrats.Stroke.1989，20(11):84-91.
[5]ChezziP,BrinesM.Erythropoietinasanantiapoptotic.tissueprotectivecytokine.CellDeathandDiffentiation.2004.11:S37-44.