导读:本文包含了免疫胶体金诊断试纸条论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:鸽Ⅰ型副粘病毒,胶体金,诊断试纸条
免疫胶体金诊断试纸条论文文献综述
马志宏,杨明,郭慧琳,陈伯祥,张登基[1]（2019）在《鸽Ⅰ型副黏病毒免疫胶体金诊断试纸条的制备》一文中研究指出采用柠檬酸钠还原法制备胶体颗粒,胶体金用抗鸽Ⅰ型副黏病毒(PPMV-1)F蛋白单克隆抗体标记并纯化,包被于玻璃纤维膜。再将纯化的抗PPMV-1 F蛋白单克隆抗体和羊抗鼠的二抗包被在NC膜作为检测线和质控线,组装成PPMV-1快速检测试纸条,建立一种快速、简便的检测PPMV-1的胶体金免疫层析方法。结果表明,所研制PPMV-1胶体金免疫层析快速检测试纸条,准确性高,且不与鸡传染性支气管炎病毒、鸡减蛋综合征病毒、鸡马立克病毒等发生交叉反应;批间和批内的重复性较好;灵敏度高,试纸条可以检测血凝效价≥23的病毒液;试纸条置4℃避光密封干燥保存1年,37℃放置10 d,对其性能没有任何影响。试纸条与HA、HI试验检测方法相比,检测棉拭子的符合率为97.5%,检测病料的符合率为100%。所研制的PPMV-1试纸条在鸽Ⅰ型副黏病毒检测诊断方面具有快速、灵敏、特异、简便等特点,具有良好的开发应用前景。(本文来源于《中兽医医药杂志》期刊2019年05期）
穆昱[2]（2016）在《鹿黏膜病免疫胶体金诊断试纸条的研制及应用》一文中研究指出鹿黏膜病(Deer mucosal disease,DMD)是由牛病毒性腹泻/黏膜病病毒(Bovine virus diarrhea/mucosal disease virus,BVD/MDV)引起的一种以怀孕母鹿流产、产死胎或畸形胎、仔鹿严重腹泻为主要特征的多临床症状传染病。目前,该疾病在国内广泛流行,严重影响养鹿业的健康发展。现阶段,对于鹿黏膜病的诊断方法主要包括:病原的分离鉴定、琼脂扩散试验、中和试验、酶联免疫吸附试验、聚合酶链式反应等。以上这些检测方法均存在检出时间长、检测需要专业的实验室条件及相关实验人员和检测仪器设备等条件,不利于基层临床样品的快速检测。因此,急需建立一种简便、快捷、特异、现场应用的鹿黏膜病诊断方法。本实验首先通过Bac-to-Bac表达系统,表达出鹿源BVD/MDV的保护性抗原E2蛋白,经Western Blot分析、直接免疫荧光检测表明该蛋白具有良好的抗原性。将纯化的E2蛋白免疫Balb/c小鼠,经细胞融合,阳性杂交瘤细胞筛选、亚克隆,成功筛选出2株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1F11和1B11,收集腹水并纯化获得2株单抗1F11和1B11,经Western Blot和间接免疫荧光检测表明所制备的2株单抗均能够与E2蛋白和鹿源BVD/MDV发生特异性的反应。采用柠檬酸钠还原法制备20nm胶体金溶液,通过优化胶体金试纸条的各项参数,最终确定胶体金颗粒与1F11单抗结合的最佳p H为7,最佳的单抗结合浓度为14.4μg/m L,并将1F11单抗标记在20nm胶体金分子上作为金标抗体,1B11单抗作为检测线抗体(浓度1.5mg/m L),羊抗鼠Ig G作为质控线抗体(浓度1mg/m L)。选用聚酯纤维素膜(RB65)和玻璃纤维塑膜(DL68)组合,最终制备了鹿黏膜病免疫胶体金诊断试纸条。实验表明,该试纸条具有良好的特异性,对于BVD/MDV病原的检测灵敏度可达103TCID50/m L。应用免疫胶体金试纸条和传统的RT-PCR法共同检测50份采集于吉林某鹿场仔鹿腹泻的粪便样品,均检测出阳性样品10份,且两种方法检测结果一致。研究结果表明,本实验制备的免疫胶体金诊断试纸条可作为一种快速、灵敏、特异的诊断方法应用于鹿黏膜病的临床现场病原检测,该方法的研制丰富了国内外鹿黏膜病的现场诊断手段,对于该传染病的快速诊断、流行病学调查和种鹿群的净化具有重要的临床应用价值。(本文来源于《吉林大学》期刊2016-06-01）
王华俊,陈汉忠,谢彩华[3]（2015）在《大片形吸虫病免疫胶体金诊断试纸条的研制》一文中研究指出大片形吸虫(Fasciola gigantica)病是由大片形吸虫感染引起的寄生虫病,呈全球性分布。动物感染大片形吸虫后引起急性、慢性疾病,或呈隐性经过,给全球经济动物的生产造成巨大经济损失;同时,大片形吸虫病也是一种食源性人畜共患寄生虫病,严重威胁人类健康,人大片形吸虫病将作为公共卫生问题重新引起人们的重视。该病的防治、净化依赖有效、快捷、易于判定的检测方法,为此本研究将采用免疫学技术和胶体金层析技术建立一种新的大片形吸虫病诊断和检测方法。利用本实验室保存的杂交瘤细胞株7D1和7D4分别制备和纯化得到抗大片形吸虫分泌排泄抗原单克隆抗体,同时制备和纯化大片形吸虫分泌抗原;利用柠檬酸叁钠还原法制备胶体金,再用胶体金标记纯化的抗大片形吸虫ES抗原单克隆抗体7D1,在硝酸纤维素膜的质控带(C线)和检测带(T线)处分别包被羊抗鼠Ig G二抗和抗大片形吸虫ES抗原单克隆抗体7D4,经反应条件优化,组装成了大片形吸虫免疫诊断试纸条。经测试该诊断试纸条对ES抗原的检测下限为0.94μg/m L,与胰扩盘吸虫、前后盘吸虫、支原体、弓形虫、伊氏锥虫VSG抗原均无交叉反应,特异性较好。分别用诊断试纸条和双抗体夹心ELISA方法检测19份阳性粪样上清和35份阴性粪样上清,试纸条的总符合率为87.04%,ELISA为94.44%.利用研制的试纸条,对采集于广西地区水牛的334份新鲜样本进行了调查检测,阳性率为38.62%。结果证明该试纸条方法操作简单、快速、易于判定,特异性好,敏感性高,适合基层大面积普查和现场检测诊断大片形吸虫病,本检测方法的建立为大片形吸虫病的诊断和流行病学调查提供了新的方法。(本文来源于《第十届全国免疫学学术大会汇编》期刊2015-11-14）
张雅岭[4]（2014）在《弓形虫病免疫胶体金诊断试纸条的研制》一文中研究指出弓形虫(T.gondii)病是一种呈世界性分布的人畜共患病,人群感染普遍,对孕妇和免疫力低下者,危害很大;200多种动物都能感染该病,多数呈隐性感染,但猪暴发感染弓形虫后,可引起大批死亡。弓形虫病严重威胁着人类的健康,同时也给畜牧业造成了很大的损失。目前,临床上诊断弓形虫病,依赖于血清学诊断,主要包括间接血凝试验、间接荧光抗体试验、染色试验和酶联免疫吸附试验,但这些免疫检测技术费时、费力,还需要特殊仪器设备辅助,不适合大面积推广应用。胶体金技术是一种新型快速诊断技术,已经在弓形虫病的诊断上得到使用,临床检测时操作简便、快速,无需相关专业的技术人员和贵重的仪器设备,适合于基层大面积检测、普查等,从而得到了快速发展。临床上诊断弓形虫病时经常检测血清中的抗体,但是抗体可以在体内长期存在,不能区分现症感染或既往感染,而弓形虫循环抗原存在于急性感染弓形虫病的血清中,适合急性病的诊断。本研究利用胶体金标记技术,运用免疫学方法,根据层析原理,结合单克隆抗体制备和选用新材料等多种方法,建立了一种新的检测弓形虫循环抗原的试纸条诊断方法。利用本实验室制备和保存的D5和B6两株杂交瘤细胞株,分别制备、纯化抗弓形虫P30蛋白和速殖子的单克隆抗体,同时制备弓形虫可溶性速殖子抗原。制备胶体金并标记单抗D5,在NC膜的检测线(T线)和质控线(C线)上分别包被B6单抗和羊抗鼠IgG二抗,经过一系列条件的优化,研制出了弓形虫病免疫胶体金诊断试纸条。经试纸条敏感性检测,可检出1:1000倍稀释的弓形虫阳性血清。与伊氏锥虫VSG抗原、大片吸虫ES抗原、横川后殖吸虫分泌抗原、异尖线虫分泌抗原均无交叉反应。建立弓形虫感染小鼠的动物模型,分别用试纸条和已建立的双抗体夹心ELISA方法检测64份小鼠血清中循环抗原,符合率为93.8%;用这两种方法对在广西采集的80份猪血清分别检测,符合率为98.8%,两者比较一致,结果证明建立的试纸条诊断方法灵敏、特异,另外该方法具有简便、快速、适合现场检测、结果易于判定和基层普通人员即可使用等优点。这种新方法的建立为弓形虫病现症、现场的诊断提供了新的方法,对临床上更有效的防治弓形虫病具有重要的意义。(本文来源于《广西大学》期刊2014-06-01）
王华俊[5]（2013）在《大片形吸虫病免疫胶体金诊断试纸条的研制》一文中研究指出大片形吸虫(Fasciolagigantica)病是由大片形吸虫感染引起的寄生虫病,呈全球性分布。动物感染大片形吸虫后引起急性、慢性疾病,或呈隐性经过;同时,大片形吸虫病也是一种食源性人畜共患寄生虫病,严重威胁人类健康,给全球造成巨大的经济损失。该病的防治依赖有效、快捷的诊断检测方法。本研究采用免疫学技术和胶体金层析技术建立了一种新的大片形吸虫病诊断和检测方法。利用实验室保存的杂交瘤细胞株7D1和7D4分别制备和纯化得到抗大片形吸虫分泌排泄抗原单克隆抗体,同时制备和纯化大片形吸虫分泌抗原;利用柠檬酸叁钠还原法制备胶体金,再用胶体金标记纯化的抗大片形吸虫ES抗原单克隆抗体7D1,在硝酸纤维素膜的质控带(C线)和检测带(T线)处分别包被羊抗鼠IgG二抗和抗大片形吸虫ES抗原单克隆抗体7D4,经反应条件优化,组装成了大片形吸虫免疫诊断试纸条。经测试该诊断试纸条对ES抗原的检测下限为0.94μg/mL,与胰扩盘吸虫、前后盘吸虫、支原体、弓形虫、伊氏锥虫VSG抗原均无交叉反应,特异性较好。分别用试纸条和ELISA方法检测19份阳性粪样上清和35份阴性粪样上清,试纸条的总符合率为 87.04%,ELISA 为 94.44%.利用研制的试纸条,对采集于广西地区水牛的334份新鲜样本进行了调查检测,阳性率为38.62%。结果证明该试纸条方法操作简单、快速、易于判定,特异性好,敏感性高,适合基层大面积普查和现场检测诊断大片形吸虫病,本方法的建立为大片形吸虫病的诊断和流行病学调查提供了新的方法。(本文来源于《广西大学》期刊2013-06-01）
刘慧[6]（2013）在《PRRS液相阻断ELISA试剂盒及免疫胶体金诊断试纸条的研制及应用》一文中研究指出猪繁殖与呼吸综合征（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome，PRRS），是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine Reproductive and RespiratorySyndrome Virus，PRRSV）引起的以母猪繁殖障碍及仔猪呼吸道疾病为特征的高度接触性传染病。本病自1987年首次报道以来，给养猪产业造成巨大经济损失，我国也于1995年暴发PRRS。自2001年以来，我国许多地区爆发流行了一种原因不明的猪“高热病”，之后一系列的研究证明，引起“高热病”的主要病原为变异的高致病性的PRRSV，故将此病命名为高致病性猪繁殖与呼吸综合征（Highly pathogenic Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome，HP-PRRS）。与PRRSV相比，HP-PRRSV在Nsp2基因编码区的第1447~1449位和1597~1698位发生突变，即在Nsp2蛋白序列中第483位和535-563位有30个氨基酸的缺失，这一点成为鉴别二者的重要指标，通过检测非结构蛋白抗体可区分由PRRSV与HP-PRRSV引起的感染，为临床诊断提供辅助依据。实验室的检测PRRS感染的方法主要包括病毒分离、回归本动物、过氧化物酶单层试验(IPMA)、血清中和实验(SN)、免疫荧光实验、酶联免疫吸附试验(ELlSA)、RT-PCR等，这些仍然是监测PRRS并辅助检测的重要方法，但现有的诊断方法费时费力，不适用于快速临床检测或大量检测，而且能快速区分PRRS和HP-PRRS的诊断方法尚少，因此研制出简便、特异并快速的诊断方法十分必要。我国目前应用的PRRS疫苗主要是灭活疫苗和弱毒疫苗，但在种猪场中只能利用灭活疫苗，以避免毒力返强、传毒、散毒以及垂直感染。因此，建立一种可区分野毒感染和疫苗免疫抗体性质的快速现场应用的诊断方法势在必行，为临床综合防控HP-PRRS、种猪净化以及分子流行病学调查提供技术方法。本实验通过合成HP-PRRSV在Nsp2蛋白中缺失的30个氨基酸的多肽，并应用该多肽制备相应的单克隆抗体（简称为缺失段Nsp2单抗）1E9，并应用1E9单克隆抗体研制了可用于快速、特异区分PRRSV感染和HP-PRRSV感染的液相阻断ELISA试剂盒及免疫胶体金诊断试纸条。本实验中的液相阻断ELISA方法在检测过程中对HP-PRRSV、CSFV、PPV、PRV、SI抗血清均无交叉反应，该方法可检测的阳性血清最高稀释度为1:20。应用液相阻断ELISA试剂盒对220份本地血清样品及对应病料进行检测，结果显示阻断ELISA试剂盒检测阳性率为53.2%，商品化ELISA试剂盒检测阳性率为69.5%；而由商品化ELISA试剂盒检测为阴性的样品，液相阻断ELISA试剂盒检测结果亦为阴性；两试剂盒的差异样品数共36份，经RT-PCR鉴定其中的11份样品为HP-PRRSV感染猪血清，而其余25份样品为经过PRRSV灭活疫苗免疫猪血清。本实验中的胶体金诊断试纸条在检测过程中对HP-PRRSV、CSFV、PPV、PRV、SI抗血清均无交叉反应，该方法可检测的阳性血清最高稀释度为1:10。应用胶体金诊断试纸条对100份血清样品及对应病料进行检测，结果显示胶体金诊断试纸条与商品化ELISA试剂盒共同阳性样品数为59，共同阴性样品数为35，免疫胶体金诊断试纸条检测为阴性而试剂盒检测为阳性的样品数为6。本课题所研制的液相阻断ELISA方法对该100份样品的检测结果与该试纸条的检测结果相符。通过临床对本地血清样品的检测，结果显示两种检测方法的检测结果基本可信，可推广应用于种猪场定期的血清学监测、及时排除阳性（即PRRSV感染或注射活毒疫苗）种猪，剔除带毒猪，防止疫源地扩大，并及时采用有效防治措施。(本文来源于《吉林大学》期刊2013-06-01）
吕字华[7]（2012）在《诊断鹅副黏病毒病免疫胶体金试纸条的制备及初步应用》一文中研究指出鹅副黏病毒病，是鹅源副黏病毒引起的一种在鹅群中具有高发病率、死亡率和传染性的病毒性传染病。经鉴定鹅源副黏病毒为血清I型禽副黏病毒，因此鹅副黏病毒病又称为鹅的新城疫。该病自1997年在江苏省爆发以来，几年内迅速在全国多个地区出现并流行，造成了很大的经济损失，严重威胁着我国养鹅业的健康发展。鹅副黏病毒病的及时诊断，对防止其感染范围扩大造成更大的经济损失具有重要意义。目前用于鹅副黏病毒病的诊断方法主要有：病毒的分离鉴定、HA-HI试验、琼脂扩散试验、ELISA、免疫荧光技术、RT-PCR、实时定量PCR等，但这些方法都不适用于现场的快速诊断。胶体金免疫层析试纸条以硝酸纤维素膜为反应载体，胶体金为反应示踪剂，免疫吸附为原理，具有简便易行，检测结果肉眼可见等优点，适用于疾病的临场快速诊断。本研究将鹅源副黏病毒NA-1株进行鸡胚增殖后蔗糖密度梯度离心纯化。将纯化的病毒按照常规程序免疫6-8周龄BALB/c小鼠，根据间接ELISA结果，选择血清效价达到1：128000的小鼠免疫脾细胞与处于对数生长期的SP2/0骨髓瘤细胞融合。利用所建立的间接ELISA方法对融合细胞进行阳性筛选后，有限稀释法克隆3次以上，得到上清效价为1：6400、1：3200、1:3200的叁株杂交瘤细胞株，分别命名为3E9、2B8、1D8。对3E9、2B8、1D8杂交瘤细胞株进行染色体分析，其染色体平均数目分别为98、91、87条，符合杂交瘤细胞染色体数。间接ELISA法鉴定单克隆抗体特异性结果表明，3株单抗都显示鹅源副黏病毒NA-1株、F48E9鸡新城疫国家标准强毒株、鸡新城疫La Sota株阳性，与AIV、IBV、IBDV、MDV无交叉反应。经单抗亚类试剂盒鉴定，3E9、2B8、1D8抗体亚类分别为IgG1、IgM、IgM。取3E9杂交瘤细胞株制备腹水，测定其ELISA效价为1∶160000。将腹水单抗对鹅源副黏病毒NA-1株、F48E9鸡新城疫国家标准强毒株、鸡新城疫La Sota株、AIV、IBV、IBDV、MDV进行HA-HI试验，结果表明其对鹅源副黏病毒NA-1株、F48E9鸡新城疫国家标准强毒株、鸡新城疫La Sota株的血凝抑制效价分别为2~(14)、2~(12)、2~(11)，对其他4种病毒株无血凝抑制现象。间接免疫荧光试验结果显示，3E9腹水单抗能够特异性识别鹅源副黏病毒NA-1株、F48E9鸡新城疫国家标准强毒株、鸡源La Sota株。将腹水进行纯化后测定其浓度为2.13mg/mL，效价为1∶128000。以鹅源副黏病毒NA-1株制备兔抗NA-1多抗并纯化后，测定其浓度为4.26mg/mL，效价为1∶640000。利用所制备的3E9单抗标记胶体金颗粒，以兔抗NA-1多抗为检测线，羊抗鼠二抗为质控线，制备诊断鹅副黏病毒病的免疫胶体金试纸条，其对鹅源副黏病毒NA-1株的敏感性是HA-HI试验的8倍，对F48E9鸡新城疫国家标准强毒株、鸡新城疫La Sota株的敏感性是HA-HI试验的2倍。在对鹅咽拭子及肛拭子的诊断中，本试纸条检测结果与鹅抗NA-1阳性血清HA-HI试验结果符合率分别为88%和98%。综上所述，本研究中所制备的诊断鹅副黏病毒病的免疫胶体金试纸条为鹅副黏病毒病的快速诊断提供了一种操作简单，便于临场应用的方法。(本文来源于《吉林大学》期刊2012-06-01）
许欣[8]（2010）在《湖羊早期妊娠诊断免疫胶体金层析试纸条的初步研制》一文中研究指出在妊娠早期,母畜外周血浆中的孕酮含量远远高于发情期,所以可以通过测定血液中的孕酮含量来进行早期妊娠诊断。传统的测定方法主要有放射免疫测定法(RIA),酶免疫测定法(EIA)和乳胶凝集测定试验(LAIT),但是由于操作比较复杂,所以并未得到广泛的应用。胶体金免疫层析技术是20世纪90年代在免疫渗滤技术基础上建立的一种简易快速的免疫检测技术,其检测结果通过肉眼即可判断。这种技术具有操作简便,操作时间短等优点,已经广泛地应用于食品安全和激素的检测。本试验采用胶体金免疫层析技术,根据试验确立的湖羊妊娠孕酮临界值,应用竞争法研制出一种胶体金免疫层析试纸条；通过对配种后21d左右湖羊血液中的孕酮进行半定量测定,进行早期妊娠诊断,具有很好的应用价值。试验的主要内容包括以下3个部分：1.对85头配种后21 d左右未出现返情的湖羊采用放射免疫测定法(RIA)测定其外周血中的孕酮含量。研究结果表明,妊娠羊的孕酮含量为2.33±0.70ng/mL,未妊娠羊的孕酮含量为1.24±0.33ng/mL,怀孕羊的孕酮水平高于未怀孕羊,且差异显着(P<0.05)。设定孕酮含量大于1.7ng/mL为妊娠,低于1.5ng/mL为未妊娠,介于两者之间为疑似怀孕。根据上述标准,妊娠确诊率为100%,未妊娠确诊率为82.61%,疑似妊娠确诊率为64%。2.为了获得高质量的金标孕酮单抗,通过采用柠檬酸叁钠还原法制备出符合要求的30 nm的胶体金溶液,在此基础上摸索胶体金标记孕酮单克隆抗体的最佳条件,并对其进行质量鉴定。用柠檬酸叁钠还原法制备的30 nm胶体金溶液呈深红色,透射电镜观察,胶体金颗粒大小基本一致；胶体金标记孕酮单克隆抗体的最低稳定浓度为16μg/mL,最适稳定浓度为19.2μg/mL,最适标记pH为8.5。经电镜观察,制备的金标抗体复合物周围有一层明显的低电子密度晕圈,且其在520 nm处的OD值在0.2～0.4范围内。3.利用胶体金免疫层析技术竞争法原理,根据试验所得的湖羊早孕诊断血液孕酮临界值,用金标孕酮单抗复合物为探针制成金标垫,同时用11α-羟孕酮琥珀酸酯与BSA的偶联物和羊抗小鼠IgG二抗包被硝酸纤维素膜分别作为检测线和质控线,制备了半定量检测孕酮的胶体金免疫层析试纸条。结果采用国产SB-08玻璃纤维膜作为样品垫材料,进口Ahlstrom8964玻璃纤维膜作为金标垫,Millipore135硝酸纤维素(NC)膜作为层析材料制成试纸条。检测线和质控线上的包被浓度分别为1.6mg/mL和1.2mg/mL,金标孕酮单抗按1:2稀释后浸金法制作金标垫。NC膜划线后用3%BSA的封闭液进行封闭。试纸条的特异性、稳定性及重复性良好。临床检测27头湖羊,结果显示,与RIA法的符合率为77.8%,与生产记录进行对比后发现,用试纸条进行诊断的妊娠准确率为83.3%,未妊娠准确率为66.7%。(本文来源于《南京农业大学》期刊2010-04-01）
胡仁建,蔡家利,徐佳缘,张贵,梁晓媛[9]（2010）在《HPV16型免疫胶体金诊断试纸条的制备》一文中研究指出建立一种快速、准确、简便检测高危型人乳头瘤病毒16型的胶体金诊断试纸条,以用于宫颈癌的早期筛查。用柠檬酸叁钠还原法制备了酒红色的30 nm胶体金颗粒,胶体金颗粒标记的单抗的实际标记量为6μg/mL。选用了2种稳定剂BSA和PEG20000获得了稳定的金标抗体溶液。实验结果表明:第7种样品垫处理液和第7种结合垫处理液处理样品垫和结合垫组装的试纸条效果最好;试纸条检测HPV16E6蛋白为阳性,检测HPV16L1蛋白为阴性。(本文来源于《重庆理工大学学报(自然科学版)》期刊2010年02期）
胡仁建[10]（2009）在《高危型人乳头瘤病毒16型免疫胶体金诊断试纸条的研制》一文中研究指出目的:研制高危型人乳头瘤病毒16型免疫胶体金诊断试纸条,以用于宫颈癌的早期筛查。方法:利用基因克隆技术构建和表达HPV16E6基因,用镍柱亲和层析纯化HPV16E6蛋白;用HPV16E6蛋白免疫家兔,制备抗HPV16E6蛋白多克隆抗体;用HPV16E6蛋白免疫雌性Balb/C小鼠,用杂交瘤技术建立抗HPV16E6蛋白的单抗杂交瘤细胞株,用体外诱生法制备大量的单抗腹水;用鼠源单克隆抗体作为抗原免疫家兔制备高效价的兔抗鼠IgG即二抗;用获得的单克隆抗体、多克隆抗体和二抗建立了高危型人乳头瘤病毒HPV16型的胶体金免疫层析快速诊断方法。结果:利用基因克隆技术成功构建含HPV16E6基因原核表达质粒的工程菌pET-28a(+)-HPV16E6-BL21 Star- DE3 PlysS,DNA测序正确,Western Blotting鉴定诱导表达出的蛋白为HPV16E6蛋白;兔抗HPV16E6蛋白多抗的效价高达1:256000;细胞融合率达93.2%,筛选出阳性克隆11孔,两次有限稀释法克隆化培养,筛选出了6株能稳定分泌特异性抗HPV16E6蛋白单克抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1F9、2F10、3C5、3C6、4D4、5B10。免疫细胞化学检测时这些单抗仅与CaSki细胞(含HPV16型)发生特异性反应,而不与其Hela细胞(含HPV18型)发生反应,免疫组织化学检测时这些单抗只与宫颈癌鳞癌组织(含HPV16型)发生反应,而不与宫颈癌腺癌(含HPV18型)发生反应;间接ELISA方法检测兔抗鼠单抗IgG的多克隆抗体血清的效价高达1:256000;制备了30nm的胶体金颗粒,单克隆抗体(4D4株)的实际标记量为6ug/ml。将金标抗体固定于结合垫(玻璃纤维膜)上作为显色源,将兔抗HPV16E6蛋白多抗和兔抗鼠IgG的抗抗体喷画在硝酸纤维素膜上分别作为捕获线和质检线,通过正交试验确定叁种抗体的最佳喷涂量后制成了HPV16型免疫胶体金诊断试纸条。结论:本研究成功地构建了含HPV16E6基因的原核表达质粒工程菌pET-28a(+)-HPV16E6-BL21 Star- DE3 PlysS,Western Blotting鉴定诱导表达的蛋白为HPV16E6蛋白,用镍柱亲和层析纯化了HPV16E6蛋白;制备了高效价的抗HPV16E6蛋白的多克隆抗体;获得6株能稳定分泌抗HPV16E6蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株;制备了高效价的兔抗鼠IgG抗抗体。将这叁种抗体应用在HPV16的诊断上,研制完成高危型人乳头瘤病毒16型的免疫胶体金诊断试纸条。(本文来源于《重庆理工大学》期刊2009-09-10）
免疫胶体金诊断试纸条论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
鹿黏膜病(Deer mucosal disease,DMD)是由牛病毒性腹泻/黏膜病病毒(Bovine virus diarrhea/mucosal disease virus,BVD/MDV)引起的一种以怀孕母鹿流产、产死胎或畸形胎、仔鹿严重腹泻为主要特征的多临床症状传染病。目前,该疾病在国内广泛流行,严重影响养鹿业的健康发展。现阶段,对于鹿黏膜病的诊断方法主要包括:病原的分离鉴定、琼脂扩散试验、中和试验、酶联免疫吸附试验、聚合酶链式反应等。以上这些检测方法均存在检出时间长、检测需要专业的实验室条件及相关实验人员和检测仪器设备等条件,不利于基层临床样品的快速检测。因此,急需建立一种简便、快捷、特异、现场应用的鹿黏膜病诊断方法。本实验首先通过Bac-to-Bac表达系统,表达出鹿源BVD/MDV的保护性抗原E2蛋白,经Western Blot分析、直接免疫荧光检测表明该蛋白具有良好的抗原性。将纯化的E2蛋白免疫Balb/c小鼠,经细胞融合,阳性杂交瘤细胞筛选、亚克隆,成功筛选出2株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1F11和1B11,收集腹水并纯化获得2株单抗1F11和1B11,经Western Blot和间接免疫荧光检测表明所制备的2株单抗均能够与E2蛋白和鹿源BVD/MDV发生特异性的反应。采用柠檬酸钠还原法制备20nm胶体金溶液,通过优化胶体金试纸条的各项参数,最终确定胶体金颗粒与1F11单抗结合的最佳p H为7,最佳的单抗结合浓度为14.4μg/m L,并将1F11单抗标记在20nm胶体金分子上作为金标抗体,1B11单抗作为检测线抗体(浓度1.5mg/m L),羊抗鼠Ig G作为质控线抗体(浓度1mg/m L)。选用聚酯纤维素膜(RB65)和玻璃纤维塑膜(DL68)组合,最终制备了鹿黏膜病免疫胶体金诊断试纸条。实验表明,该试纸条具有良好的特异性,对于BVD/MDV病原的检测灵敏度可达103TCID50/m L。应用免疫胶体金试纸条和传统的RT-PCR法共同检测50份采集于吉林某鹿场仔鹿腹泻的粪便样品,均检测出阳性样品10份,且两种方法检测结果一致。研究结果表明,本实验制备的免疫胶体金诊断试纸条可作为一种快速、灵敏、特异的诊断方法应用于鹿黏膜病的临床现场病原检测,该方法的研制丰富了国内外鹿黏膜病的现场诊断手段,对于该传染病的快速诊断、流行病学调查和种鹿群的净化具有重要的临床应用价值。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
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