导读:本文包含了可溶表达论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:交联酶聚集体,PLD,可溶表达,大肠杆菌
可溶表达论文文献综述
吴蓉,曹君,杨猛,苏二正[1]（2019）在《磷脂酶D在大肠杆菌中的高水平可溶表达及其磁性纳米交联酶聚集体的制备》一文中研究指出磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine, PS)具有提高认知力、抗抑郁、缓解紧张压抑、辅助激活酶和改善老年痴呆症等功能,在食品、化妆品和制药行业的应用受到广泛的关注。虽然PS在自然界中来源广泛,但是由于在植物中含量较低和动物脑细胞来源的不安全性,限制了PS的工业化应用。因此,利用磷脂酶D(本文来源于《第十二届中国酶工程学术研讨会论文摘要集》期刊2019-08-08）
鞠文君[2]（2019）在《转氨酶yhxA的可溶表达及其催化性能的改造》一文中研究指出手性胺是指小分子化合物手性中心的取代基含有氨基的一类化合物,是多数医药、农药的重要中间体。例如,治疗糖尿病的药物西他列汀、抗生素青霉素及广谱触杀型除草剂草铵膦等都是手性胺化合物。转氨酶制备手性胺的方法有两种,分别为动力学拆分外消旋的胺及从前手性酮不对称合成手性胺。其中不对称合成制备手性胺的理论产率能够达到100%,使转氨酶在生产工业领域具有强大的应用前景。手性内酰胺是抗生素中十分重要且具有广泛生物活性的中间体。转氨酶可催化醛酯或酮酯进行生物转化,不对称合成相应的手性胺,随后通过自发的分子内环化反应获得具有光学活性的手性内酰胺中间体。由于目前催化这一反应的转氨酶种类较少,本论文对催化手性内酰胺不对称合成进行了转氨酶的基因挖掘,最终从数据库中筛选到与模板酶相似度为29.4%来源枯草杆菌的假定转氨酶yhxA(NCBI:CAB12754.2),氨基酸序列全长450 aa,与模板转氨酶同属乙酰鸟氨酸转氨酶家族,随后对yhxA进行了可溶表达。为了实现yhxA的可溶表达,选择了利于蛋白NI-NTA亲和层析纯化的pET表达系统。但在pET-21a,pET-28a和pET-28b上未能获得yhxA的可溶蛋白。针对这一问题,参考本实验室对多聚氨基酸修饰促进蛋白可溶表达的研究,选择不同长度的组氨酸、赖氨酸和精氨酸对yhxA的N-端和C-端进行修饰,最终实现了yhxA的可溶表达。其中可溶蛋白表达量最高的是His6-yhxA;可溶蛋白表达量较高且占总蛋白的比例最高的是His6-yhxA-Lys15。对以上可溶表达的yhxA进行初步活力测定,发现His6-yhxA-Lys10的活力最高为4.31 U/mg,并发现可溶表达量较高的yhxA之间活力相差不多。随后使用可溶表达的yhxA催化手性内酰胺不对称合成,反应效果并不理想。针对yhxA催化活性不高的问题,通过酶的理性设计对yhxA的催化性能进行改造。利用同源模建和分子对接的手段对yhxA的催化活性空腔进行分析,推测底物结合口袋的大(Large)口袋中62位的色氨酸(Trp62)体积较大造成了空间位阻,因此对这一氨基酸位点进行了饱和突变。首先在yhxA可溶表达的基础上对His6-yhxA-Lys15(Trp62)进行饱和突变,获得的突变体His6-yhxA-Lys15_(W62T)和His6-yhxA-Lys15_(W62V)催化α-苯乙胺和丙酮酸的转氨反应,将产物苯乙酮产率分别提高至27.9%和24.1%。实验中还发现Trp62可能影响yhxA的可溶表达,因此对表达全部为包涵体的yhxA(Trp62)进行了饱和突变,获得2个可溶表达的突变体yhxA_(W62F)和yhxA_(W62Y),其中yhxA_(W62F)将苯乙酮产率提高至38.9%,是未突变His6-yhxA-Lys15的1.95倍。随后,对突变体yhxA_(W62F)和yhxA_(W62Y),以可溶蛋白表达量最高且能够纯化的His6-yhxA作为参照,进行了酶学性质的研究。结果表明叁者最适温度均为40℃,在10℃下稳定性最好;最适pH均为pH 7.0,且在pH 7.0的缓冲液中稳定性更好。从金属离子稳定性的测定结果分析,实验中用到的金属离子均会使叁者的活力降低。最后对yhxA进行了底物适用范围的筛选,通过外消旋-α-苯乙胺和(R)-α-苯乙胺作为胺供体的反应鉴定出yhxA是选择S-构型的ω-转氨酶;催化苯乙酮为氨基受体,异丙胺或1,5-二氨基戊烷为氨基供体的反应,未能检测到苯乙酮的减少,yhxA对这两种氨基供体没有催化活性。通过转氨酶yhxA催化的反应,目前yhxA能够识别的底物包括丙酮酸和α-苯乙胺。(本文来源于《吉林大学》期刊2019-05-01）
万爱妮,徐栋生,蔡燕飞,陈蕴,金坚[3]（2019）在《硫氧还蛋白促进人胰岛素样生长因子-1在大肠杆菌中高效可溶表达》一文中研究指出为实现人胰岛素样生长因子-1(Insulin-like growth factor-1,IGF-1)在大肠杆菌中的高效可溶表达,获得大量具生物活性的IGF-1。应用融合PCR技术构建trx-igf1融合基因,克隆至p ET30a载体。重组载体pET30a-Trx-IGF-1转化大肠杆菌C43(DE3),并进行条件优化大量表达可溶性蛋白Trx-IGF-1。利用His标签纯化表达产物,对纯化蛋白进行Western blot与生物活性分析。构建的pET30a-Trx-IGF-1重组载体转化大肠杆菌C43(DE3)后,在30℃培养条件下1 mmol/L IPTG诱导表达5 h,获得大量以可溶形式表达的融合蛋白Trx-IGF-1;采用Ni离子亲和层析,获得纯度达90%以上的融合蛋白,经Western blot检测具有IGF-1抗原活性。生物学活性检测显示,融合蛋白Trx-IGF-1能明显促进NIH3T3细胞增殖及细胞周期进展。本研究应用的载体蛋白Trx,能实现在大肠杆菌中高效可溶表达具生物活性的IGF-1,为包涵体蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达提供借鉴。(本文来源于《食品与生物技术学报》期刊2019年04期）
涂兵,叶吉星,甘翼搏,张立泰,欧阳斌[4]（2018）在《碱性成纤维细胞生长因子和骨形态发生蛋白在Origami2体系中的可溶表达及二者促成骨的协同效应》一文中研究指出目的建立优化高效的碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)、骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein,BMP-2)蛋白重组方法,阐明二者在促成骨中的协同效应。方法优化bFGF和BMP-2成熟肽的基因序列密码子,获得适用于大肠杆菌Origami2体系表达的bFGF及BMP-2成熟肽cDNA片段;利用PCR法将bFGF成熟肽cDNA片段插入原核表达质粒pColdⅡ中,构建重组原核表达质粒pColdⅡ-bFGF;利用PCR法将BMP-2成熟肽cDNA片段插入原核表达质粒pET-30a(+)中,构建重组原核表达质粒pET-30a(+)-BMP-2,转入大肠杆菌Origami2中表达纯化;运用双酶切、质粒测序及Western blot技术证明Origami2表达体系的构建效果;进行细胞增殖实验、碱性磷酸酶(alkaline phosphates,ALP)染色观察和体内成骨效率检测等,探索bFGF、BMP-2在促成骨中的协同效应。结果双酶切和质粒测序鉴定证明成功构建重组大肠杆菌pColdⅡ-bFGF/Origami2和pET30a(+)-BMP-2/Origami2表达体系,Western blot检测发现蛋白正确表达。经过Ni-NTA亲和层析纯化后bFGF及BMP-2纯度高达90%。通过对二者比例的优化筛选,发现40 ng/mL bFGF+40 ng/mL rh BMP-2时,大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖效率、ALP活性及体内成骨效率最高,是二者促成骨的最优效组合。结论成功构建高效表达的pColdⅡ-bFGF/Origami2和pET30a(+)-BMP-2/Origami2表达体系,实现了bFGF及BMP-2的高效表达。bFGF和BMP-2的优化联合应用具有促成骨协同效应。(本文来源于《第叁军医大学学报》期刊2018年10期）
李冠英,李海红,徐士勋,潘晓雨[5]（2018）在《重组人白细胞介素-2的原核可溶表达》一文中研究指出为探索白细胞介素-2在大肠杆菌中的可溶表达及其生物学活性,利用载体p MAL-c5x将rh IL-2与MBP融合,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导MBP-rh IL2的表达。接着用Amylose树脂将MBP-rh IL2纯化,最后利用Factor Xa蛋白酶将rh IL-2从融合蛋白中释放。结果显示:MBP-rh IL2以可溶形式表达;Factor Xa成功将rh IL-2从融合蛋白中释放出来;经生物学活性测定,其比活性为4.4×106IU/mg。(本文来源于《生物学杂志》期刊2018年01期）
房婷,陶正红,刘艳红,于长明,职睿智[6]（2018）在《白喉毒素突变体CRM197在大肠杆菌中的高效可溶表达、纯化及免疫原性分析》一文中研究指出CRM197(Cross-reacting material 197)是白喉毒素的无毒突变体,在生物制药领域具有非常广泛的应用前景。为了实现CRM197在大肠杆菌中的无标签、可溶表达,以替代现有昂贵、复杂的白喉杆菌分泌发酵工艺,文中对目的蛋白的序列进行优化,转化大肠杆菌经IPTG诱导,目的蛋白获得了可溶性高表达,目的蛋白约占碎菌上清总蛋白的40%。超声破菌后、经阴离子交换、肝素亲和以及脱盐叁步柱上层析获得纯度高于95%的CRM197样品。细胞毒性实验证明,CRM197的IC_(50)值是白喉毒素IC_(50)值的2.1×10~7倍,是白喉类毒素IC_(50)值的9.6倍,表明文中表达的CRM197是安全无毒的。随后,比较了高、低剂量的CRM197在小鼠体内的免疫原性,发现2μg组叁免后的抗体滴度与20μg组的相当,可达1︰409 600。文中建立了CRM197的无标签、高效、可溶表达的大肠杆菌表达系和快速纯化体系,获得了具有较好免疫原性和安全性的重组蛋白,为该蛋白的进一步应用奠定了基础。(本文来源于《生物工程学报》期刊2018年04期）
潘剑茹,陈莉娟,何火聪,苏颖,王香玲[7]（2017）在《全长SOD2重组蛋白的可溶表达、纯化、稳定性与跨膜效应》一文中研究指出超氧化物歧化酶(SOD)家族是保护细胞免受正常代谢过程中产生的活性氧(ROS)毒性所必需的,含Mn2+离子的超氧化物歧化酶(Mn-SOD,SOD2)是其中最重要的一种。本研究合成了人源SOD2全基因序列,并将其插入带有GST的原核表达载体p GEX-4T-1中,成功构建了GST-SOD2融合蛋白表达质粒。然后,将重组质粒p GEX-4T-1-SOD2转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG在25℃下诱导表达融合蛋白,得到可溶性GST-SOD2融合蛋白,经GST亲和树脂纯化得到比活为1 788 U/mg的纯蛋白,分子量约为46 k Da。利用凝血酶切去GST标签后经肝素亲和柱纯化得到了电泳纯的SOD2重组蛋白,该蛋白分子量约为25 k Da,与SOD2全长序列的理论分子量相符,比活为2 000 U/mg。两种重组SOD2蛋白在生理条件下都具有良好的SOD活性,且都具有显着的跨膜能力(P<0.05)。这些工作为深入研究两种全长重组SOD2蛋白的结构与生物效应建立了基础。(本文来源于《生物工程学报》期刊2017年07期）
白羊,章永垒,邹有土,黄奋飞,陈胜亮[8]（2016）在《重组人βNGF在大肠杆菌中的可溶表达、纯化及活性鉴定》一文中研究指出旨在大肠杆菌中可溶表达重组人神经生长因子(Recombinant humanβnerve growth factor,rhβNGF),并对表达产物进行分离纯化和生物学活性鉴定。成功扩增h NGFβ亚基基因,将其克隆入pMAL-c2X表达载体,构建了hβNGF-MBP的大肠杆菌表达体系并进行诱导表达,表达产物经纯化后以Factor Xa酶切去除麦牙糖结合蛋白(MBP),Western blot鉴定后以TF-1细胞法检测生物学活性。结果显示,pMAL-c2X-hβNGF经酶切和测序证实构建正确,25℃、180 r/min、0.5 mmol/L IPTG诱导下可溶表达hβNGF-MBP融合蛋白。hβNGF-MBP经Factor Xa酶切后可去除MBP标签,SDS-PAGE分析纯化的hβNGF位于13 k D左右,纯度可达95%。Western blot鉴定为hβNGF,结果表明,比活约为1×10~6 U/mg。在大肠杆菌中成功可溶表达hβNGF,并具有较高的生物学活性。(本文来源于《生物技术通报》期刊2016年11期）
石梦杨[9]（2016）在《USP25催化结构域可溶表达探索》一文中研究指出USP25在免疫和其他领域有着关键性的调节作用,但目前还没有USP25的结构被报道。为了解析USP25的结构,首先需要得到质量好的可溶蛋白,本篇文章尝试了叁种表达体系,分别是大肠杆菌表达体系、昆虫细胞表达体系、昆虫细胞融合MBP标签表达体系,最终在昆虫细胞融合MBP标签表达体系中获得了USP25最关键结构域-催化机构域的可溶蛋白,为结构解析打下了基础。(本文来源于《生物技术世界》期刊2016年05期）
谭才邓,朱美娟,廖延智,邓毛程[10]（2015）在《神秘果素Miraculin基因的克隆及原核可溶表达研究》一文中研究指出以神秘果果实为实验材料,以改良CTAB法提取并获得高质量的总果实RNA,经过RTPCR获得Miraculin基因,构建原核表达载体pQE30-MIR并进行原核表达。经过大量的实验,表明Miraculin蛋白可溶表达的最佳条件为:28℃,120 r/min,IPTG使用浓度为1.5 mmol/L,诱导表达5 h。(本文来源于《食品科技》期刊2015年07期）
可溶表达论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
手性胺是指小分子化合物手性中心的取代基含有氨基的一类化合物,是多数医药、农药的重要中间体。例如,治疗糖尿病的药物西他列汀、抗生素青霉素及广谱触杀型除草剂草铵膦等都是手性胺化合物。转氨酶制备手性胺的方法有两种,分别为动力学拆分外消旋的胺及从前手性酮不对称合成手性胺。其中不对称合成制备手性胺的理论产率能够达到100%,使转氨酶在生产工业领域具有强大的应用前景。手性内酰胺是抗生素中十分重要且具有广泛生物活性的中间体。转氨酶可催化醛酯或酮酯进行生物转化,不对称合成相应的手性胺,随后通过自发的分子内环化反应获得具有光学活性的手性内酰胺中间体。由于目前催化这一反应的转氨酶种类较少,本论文对催化手性内酰胺不对称合成进行了转氨酶的基因挖掘,最终从数据库中筛选到与模板酶相似度为29.4%来源枯草杆菌的假定转氨酶yhxA(NCBI:CAB12754.2),氨基酸序列全长450 aa,与模板转氨酶同属乙酰鸟氨酸转氨酶家族,随后对yhxA进行了可溶表达。为了实现yhxA的可溶表达,选择了利于蛋白NI-NTA亲和层析纯化的pET表达系统。但在pET-21a,pET-28a和pET-28b上未能获得yhxA的可溶蛋白。针对这一问题,参考本实验室对多聚氨基酸修饰促进蛋白可溶表达的研究,选择不同长度的组氨酸、赖氨酸和精氨酸对yhxA的N-端和C-端进行修饰,最终实现了yhxA的可溶表达。其中可溶蛋白表达量最高的是His6-yhxA;可溶蛋白表达量较高且占总蛋白的比例最高的是His6-yhxA-Lys15。对以上可溶表达的yhxA进行初步活力测定,发现His6-yhxA-Lys10的活力最高为4.31 U/mg,并发现可溶表达量较高的yhxA之间活力相差不多。随后使用可溶表达的yhxA催化手性内酰胺不对称合成,反应效果并不理想。针对yhxA催化活性不高的问题,通过酶的理性设计对yhxA的催化性能进行改造。利用同源模建和分子对接的手段对yhxA的催化活性空腔进行分析,推测底物结合口袋的大(Large)口袋中62位的色氨酸(Trp62)体积较大造成了空间位阻,因此对这一氨基酸位点进行了饱和突变。首先在yhxA可溶表达的基础上对His6-yhxA-Lys15(Trp62)进行饱和突变,获得的突变体His6-yhxA-Lys15_(W62T)和His6-yhxA-Lys15_(W62V)催化α-苯乙胺和丙酮酸的转氨反应,将产物苯乙酮产率分别提高至27.9%和24.1%。实验中还发现Trp62可能影响yhxA的可溶表达,因此对表达全部为包涵体的yhxA(Trp62)进行了饱和突变,获得2个可溶表达的突变体yhxA_(W62F)和yhxA_(W62Y),其中yhxA_(W62F)将苯乙酮产率提高至38.9%,是未突变His6-yhxA-Lys15的1.95倍。随后,对突变体yhxA_(W62F)和yhxA_(W62Y),以可溶蛋白表达量最高且能够纯化的His6-yhxA作为参照,进行了酶学性质的研究。结果表明叁者最适温度均为40℃,在10℃下稳定性最好;最适pH均为pH 7.0,且在pH 7.0的缓冲液中稳定性更好。从金属离子稳定性的测定结果分析,实验中用到的金属离子均会使叁者的活力降低。最后对yhxA进行了底物适用范围的筛选,通过外消旋-α-苯乙胺和(R)-α-苯乙胺作为胺供体的反应鉴定出yhxA是选择S-构型的ω-转氨酶;催化苯乙酮为氨基受体,异丙胺或1,5-二氨基戊烷为氨基供体的反应,未能检测到苯乙酮的减少,yhxA对这两种氨基供体没有催化活性。通过转氨酶yhxA催化的反应,目前yhxA能够识别的底物包括丙酮酸和α-苯乙胺。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
可溶表达论文参考文献
[1].吴蓉,曹君,杨猛,苏二正.磷脂酶D在大肠杆菌中的高水平可溶表达及其磁性纳米交联酶聚集体的制备[C].第十二届中国酶工程学术研讨会论文摘要集.2019
[2].鞠文君.转氨酶yhxA的可溶表达及其催化性能的改造[D].吉林大学.2019
[3].万爱妮,徐栋生,蔡燕飞,陈蕴,金坚.硫氧还蛋白促进人胰岛素样生长因子-1在大肠杆菌中高效可溶表达[J].食品与生物技术学报.2019
[4].涂兵,叶吉星,甘翼搏,张立泰,欧阳斌.碱性成纤维细胞生长因子和骨形态发生蛋白在Origami2体系中的可溶表达及二者促成骨的协同效应[J].第叁军医大学学报.2018
[5].李冠英,李海红,徐士勋,潘晓雨.重组人白细胞介素-2的原核可溶表达[J].生物学杂志.2018
[6].房婷,陶正红,刘艳红,于长明,职睿智.白喉毒素突变体CRM197在大肠杆菌中的高效可溶表达、纯化及免疫原性分析[J].生物工程学报.2018
[7].潘剑茹,陈莉娟,何火聪,苏颖,王香玲.全长SOD2重组蛋白的可溶表达、纯化、稳定性与跨膜效应[J].生物工程学报.2017
[8].白羊,章永垒,邹有土,黄奋飞,陈胜亮.重组人βNGF在大肠杆菌中的可溶表达、纯化及活性鉴定[J].生物技术通报.2016
[9].石梦杨.USP25催化结构域可溶表达探索[J].生物技术世界.2016
[10].谭才邓,朱美娟,廖延智,邓毛程.神秘果素Miraculin基因的克隆及原核可溶表达研究[J].食品科技.2015