导读:本文包含了多聚左旋精氨酸论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:多聚左旋精氨酸,JNK信号通路,凋亡,气道上皮细胞
多聚左旋精氨酸论文文献综述
吴莎莎[1]（2018）在《JNK信号通路在多聚左旋精氨酸诱导NCI-H292细胞凋亡中的作用及其机制研究》一文中研究指出目的:探讨c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)通路在多聚左旋精氨(Poly-L-arginine,PLA)诱导NCI-H292细胞凋亡中的作用及其分子机制。方法:1、细胞培养:NCI-H292细胞生长于10%胎牛血清+100 mg/L青霉素+100 mg/L链霉素+12mmol/L L-谷氨酰胺的RPMI1640培养液中,于37℃、5%CO_2培养箱内培养,每2天换液1次。2、Western Blot法检测JNK信号通路蛋白的表达选择PLA为凋亡诱导物,诱导气道上皮细胞NCI-H292的凋亡。分别以0 mg/L、10 mg/L、20 mg/L、40 mg/L、60 mg/L浓度的PLA刺激NCI-H292细胞24小时后提取各组细胞总蛋白,采用Western Blot法检测各组细胞内P-JNK/JNK表达有无差异。3、Annexin V-FITC/PI双染法检测NCI-H292细胞凋亡情况将NCI-H292细胞设为空白对照组、PLA组、SP600125组、PLA+SP600125组,按照分组要求提前1h用特异性JNK通路抑制剂SP600125预处理NCI-H292细胞,然后加入PLA,处理细胞24小时后收集各组细胞,采用Annexin V和PI双染的方法,染色凋亡的NCI-H292细胞,并于4小时内进行流式细胞的检测分析,观察JNK通路抑制剂SP600125(10μM)作用前后细胞的凋亡情况。4、Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Casepase-3的表达采用Western Blot方法分别检测空白对照组、PLA组、SP600125组、PLA+SP600125组中NCI-H292细胞内Bax、Bcl-2、Casepase-3的表达和信号通路蛋白JNK、P-JNK的表达。5、统计学处理采用SPSS17.0统计软件进行分析,结果以均数±标准差表示,多组数据间比较采用单因素方差分析(One-Way ANOVA);两两间比较当方差齐时采用LSD-t检验,方差不齐时采用Dunnett′s T3检验,P<0.05表示差异有统计学意义。结果:1、PLA浓度10 mg/L组作用NCI-H292细胞后JNK磷酸化水平与0mg/L组比较无统计学差异(P=0.179),PLA作用浓度为20 mg/L组、40 mg/L组、60 mg/L组的JNK磷酸化水平与0mg/L组比较均增加,且呈现剂量依赖性,差异有统计学意义(F=4.239,P均<0.05)。2、空白对照组、PLA组、SP600125组、PLA+SP600125组NCI-H292细胞凋亡率分别为(5.13±1.12)%、(22.62±1.66)%、(5.69±0.18)%、(8.99±1.74)%,各组间差异有统计学意义(F=113.961,P<0.001);PLA组NCI-H292细胞凋亡率与空白对照组相比明显增高(P<0.001);PLA+SP600125组与PLA组比较细胞凋亡率明显降低(P<0.001)。3、PLA(40 mg/L)作用于NCI-H292细胞后,P-JNK/JNK比值与空白对照组相比明显升高(F=31.778,P<0.001);凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax比值降低(F=21.077,P<0.01);Caspase-3表达明显升高(F=31.768,P<0.001)。4、特异性JNK通路抑制剂SP600125干预后,PLA+SP600125组相比PLA组NCI-H292细胞内P-JNK/JNK比值显着降低(P<0.001);Bcl-2/Bax比值显着升高(P<0.001);Caspase-3表达显着下降(P<0.001)。结论:1、气道上皮NCI-H292细胞内JNK信号转导信号通路能够被PLA激活;2、PLA可以诱导NCI-H292细胞内促凋亡蛋白Bax、Caspase-3的表达增加,抑凋亡蛋白Bcl-2表达降低;3、JNK信号通路能通过促进Bax、Caspase-3表达,抑制Bcl-2表达介导PLA诱导的NCI-H292细胞凋亡。(本文来源于《安徽医科大学》期刊2018-03-02）
张玲玲[2]（2017）在《多聚左旋精氨酸通过ERK1/2信号通路诱导NCI-H292细胞凋亡的机制研究》一文中研究指出目的:研究多聚左旋精氨酸(Poly-L-arginine,PLA)诱导气道上皮细胞NCI-H292细胞凋亡的通路机制以及对细胞内Bcl-2/Bax、Caspase-3表达的影响,从而揭示PLA参与哮喘气道上皮损伤的部分机制。方法:1、细胞培养常规培养基(RPMI1640+10%胎牛血清)培养NCI-H292细胞,于37℃、5%二氧化碳环境的培养箱内孵育。每2~3天换液一次,细胞分裂铺展至培养瓶70%~80%时用0.25%胰酶消化传代,用于后续实验。2、透射电镜制片观察NCI-H292细胞凋亡NCI-H292细胞分为对照组、PLA(60 mg/L)组两组,PLA作用24 h后,收集细胞,固定后脱水,包埋干燥,切片浸染后用透射电镜摄片观察两组细胞的超微结构。3、Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡率按加入PLA浓度不同将细胞分为空白对照组、10 mg/L PLA组、20 mg/L组PLA、40 mg/L PLA组、60 mg/L PLA组,按是否加入ERK1/2信号通路抑制剂PD98059分为空白对照组、PD组、PLA组、PLA+PD组。收集各组细胞后,运用流式细胞仪检测凋亡率,flowjo软件分析凋亡结果。4、Western Blot法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Casepase-3及信号通路ERK1/2的表达采用Western Blot法分析在不同浓度PLA(0、10、20、40、60 mg/L)刺激下Bax、Bcl-2、Casepase-3和ERK1/2的蛋白含量,并比较ERK信号通路抑制剂PD98059(20μmol/L)作用前后对Bcl-2/Bax、Casepase-3和ERK1/2磷酸化的影响。5、统计学处理采用统计学软件SPSS16.0进行处理分析,数据以(?)x±s表示,数据均进行正态性检验,多组间比较采用单因素方差分析(One-Way ANOVA);两两间比较采用LSD-t检验。所有实验均重复不少于3次。P<0.05为差异有统计学意义。结果:1、电镜下可见PLA刺激后的NCI-H292细胞核膜皱缩外突,染色质在核膜下浓聚;线粒体肿胀变圆、呈空泡状,线粒体嵴排列杂乱多不规则,数量明显减少,甚至部分消失,呈明显凋亡改变。2、Annexin V-FITC/PI双染法凋亡检测显示,对照组、10 mg/L PLA组、20 mg/L PLA组、40 mg/L PLA组、60 mg/L PLA组NCI-H292细胞凋亡率分别为(4.97±0.17)%,(7.82±0.21)%,(11.99±0.21)%,(29.52±0.55)%,(55.23±0.67)%,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.001),并呈浓度依赖性。3、Western Blot检测10 mg/L PLA组、20 mg/L PLA组、40 mg/L PLA组、60 mg/L PLA组的Bcl-2/Bax比值相对于空白对照组皆显示降低趋势,差异都有统计学意义(P均<0.01);在活性Caspase-3蛋白表达水平的检测中,10 mg/L PLA组、20 mg/L PLA组、40 mg/L PLA组、60 mg/L PLA组的活性Caspase-3蛋白表达量比之于对照组都有所增加,有统计学差异(P均<0.001)。4、与空白对照组相比较,10 mg/L PLA组、20 mg/L PLA组、40 mg/L PLA组、60mg/L PLA组ERK磷酸化水平均增加(P均<0.01),且在PLA终浓度为20mg/L时,P-ERK/ERK的表达量达到高峰(P<0.01)。5、空白对照组、PD组、PLA组、PLA+PD组NCI-H292细胞凋亡率分别为(5.04±0.26)%、(4.99±0.19)%(P=0.801)、(20.72±1.37)%(P<0.001)、(8.67±0.18)%(P<0.001),且PLA+PD组凋亡率明显低于PLA组,其差异统计学意义(P<0.001)。6、PLA+PD组相比PLA组Bcl-2/Bax明显升高,活性Caspase-3明显降低,差异均有统计学意义(P<0.001)。与空白对照组相较,PLA组活性P-ERK/ERK表达水平明显升高(P<0.001);PLA+PD组相比PLA组P-ERK/ERK明显降低(P<0.001)。结论:1、PLA可诱导气道上皮细胞凋亡;2、PLA可能通过激活Bax、Bcl-2、Caspase-3等凋亡相关蛋白诱导气道上皮细胞凋亡;3、PLA可能通过调控ERK信号通路激活Bax、Bcl-2、Caspase-3等凋亡相关蛋白的表达诱导气道上皮细胞凋亡。(本文来源于《安徽医科大学》期刊2017-03-01）
陈冰[3]（2016）在《脂多糖协同多聚左旋精氨酸诱导NCI-H292细胞分泌IL-6、IL-8的JNK信号通路研究》一文中研究指出目的:研究脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)协同多聚左旋精氨酸(Poly-L-arginine,PLA)诱导NCI-H292细胞分泌白介素-6(interleukin-6,IL-6)和IL-8的信号通路机制。方法:1.细胞培养用常规培养基(10%胎牛血清+90%RPMI1640培养液)体外培养NCI-H292细胞,置于37℃、5%CO2环境的培养箱内孵育,根据细胞生长状态,一般每3-4天传代1次。取最佳生长状态的细胞,以约3×105/500μl的密度接种于24孔细胞培养板中。2.Western Blot检测JNK磷酸化水平按照实验设计,将NCI-H292细胞分为PLA(5μg/ml)组、LPS(5μg/ml)组、PLA(5μg/ml)+LPS(5μg/ml)组,每组刺激时间分别为0、15min、30min、45min、60min、90min、120min,采用Western Blot检测各组细胞在不同时间点的JNK、p-JNK蛋白含量,以β-actin作内参,并分析比较不同时间点的p-JNK/JNK比值;将NCI-H292细胞分为空白对照组、PLA(5μg/ml)组、LPS(5μg/ml)组、PLA(5μg/ml)+LPS(5μg/ml)组,采用Western Blot检测比较各组细胞内的JNK、p-JNK蛋白含量,并比较JNK信号通路特异性抑制剂SP600125(30μM)作用前后对JNK磷酸化的影响。3.ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)检测细胞因子IL-6、IL-8按照实验设计,将NCI-H292细胞分为空白对照组、PLA(5μg/ml)组、LPS(5μg/ml)组、PLA(5μg/ml)+LPS(5μg/ml)组、PLA(5μg/ml)+SP600125(30μM)组、LPS(5μg/ml)+SP600125(30μM)组、PLA(5μg/ml)+LPS(5μg/ml)+SP600125(30μM)组和SP600125(30μM)组,根据实验分组要求先加入JNK信号通路特异性抑制剂SP600125,在37℃、5%CO2的培养箱内孵育,预先刺激2h后,再加入PLA或/和LPS。共同培养24h后收集细胞上清液,按照ELISA试剂盒检测各组的IL-6和IL-8表达情况,比较各组间存在的差异。4.统计学处理所有实验均重复3次。采用SPSS17.0统计软件处理、分析实验数据,数据用?x±s表示,单因素方差分析(One-Way ANOVA)用于多组间的比较;LSD(least significant difference)检验用于两两间比较方差齐时,方差不齐时采用Dunnett,s T3检验。P<0.05为差异有统计学意义。结果:1.PLA作用NCI-H292细胞一定时间(15min、30min、45min、60min、90min、120min)后JNK磷酸化水平均增加,与空白对照组比较具有统计学差异(P均<0.01),且JNK磷酸化随时间延长而增加,45min达到高峰(P<0.001)后下降。2.LPS作用时间为15min、30min、45min、60min、90min、120min时,JNK磷酸化水平较空白对照组均增加,差异有统计学意义(P均<0.05),与PLA类似的是45min之前呈上升趋势,45min为JNK磷酸化高峰(P<0.01),45min后为下降趋势。3.PLA+LPS作用NCI-H292细胞15min、30min、45min、60min、90min、120min,JNK磷酸化水平较空白对照组显着增加,并具有统计学意义(P均<0.001),PLA+LPS的作用高峰提前至30min(P<0.01),45min时较前下降(P<0.001),在60min时再次增加后减少(P<0.001),30min的JNK磷酸化水平高于60min,差异有统计学意义(P<0.01)。4.PLA+LPS组的JNK磷酸化水平显着高于PLA组或LPS组,PLA+LPS组与PLA组、LPS组之间的差异具有统计学意义(P均<0.001)。5.SP600125能明显减少PLA或/和LPS刺激NCI-H292细胞的JNK磷酸化水平增加(P均<0.001)。6.与空白对照组比较,PLA组、LPS组和PLA+LPS组的NCI-H292细胞内IL-6和IL-8的表达明显增加(P均<0.01),并且PLA+LPS组明显高于PLA组或LPS组(P均<0.001);SP600125能明显抑制PLA组、LPS组和PLA+LPS组的NCI-H292细胞表达IL-6、IL-8(P均<0.01)。结论:1.PLA、LPS能激活NCI-H292细胞内的JNK信号通路,并且两者具有协同效应。2.LPS能协同PLA促进NCI-H292细胞分泌IL-6和IL-8。3.JNK信号通路参与LPS协同PLA诱导NCI-H292细胞分泌IL-6、IL-8的过程。(本文来源于《安徽医科大学》期刊2016-03-01）
陆兆双[4]（2015）在《多聚左旋精氨酸促进LPS诱导的NCI-H292细胞释放炎症因子IL-6、IL-8的信号通路研究》一文中研究指出目的：研究多聚左旋精氨酸(Poly-L-arginine, PLA)促进脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的NCI-H292细胞释放白介素-6(interleukin-6, IL-6、IL-8的表达及其发挥作用的信号通路机制。方法：1、细胞培养使用含有10%胎牛血清的RPMI1640常规培养液培养NCI-H292细胞,根据细胞生长状况,每3-4天传代1次；以约3×105/500μl密度,选取生长状态优良的细胞接种于24孔培养板中。2、细胞因子IL-6、IL-8 mRNA和蛋白表达水平的测定按照实验设计内容分为空白组(培养液)、LPS组(5μg/ml)、PLA组(5μg/ml)、 LPS+PLA组、LPS+PLA+PD98059组、LPS+PLA+SB203580组、PD98059组、SB203580组、PLA+PD98059组、PLA+SB203580组、PD98059+SB203580组,并根据实验分组要求,先加入ERKl/2抑制剂PD98059和p38 MAPK抑制剂SB203580,置于37℃ 5% C02培养箱孵育1h后,再加入PLA、LPS。按实验要求,共同培养2小时后,采用RNAiso Plus提取细胞总RNA,按照荧光定量PCR方法分析各组IL-6、IL-8 mRNA表达情况,并比较各组间的差异；共同培养24小时后,收集细胞上清液,按照ELISA试剂盒说明检测各组IL-6、IL-8的表达水平,并比较各组间的差异。3、ERK1/2、p-ERK1/2、p38 MAPK和p-p38 MAPK水平检测按照实验设计先加入ERK1/2的抑制剂PD98059和p38 MAPK的抑制剂SB203580,置于37℃ 5% CO2培养箱孵育1h后,再加入PLA、LPS,共同培养1h后,按实验要求提取细胞蛋白,采用Western Blot检测ERK1/2、p-ERK1/2、p38 MAPK和p-p38 MAPK水平,以P-actin作为内参。4、统计学处理实验数据采用SPSS17.0统计分析软件进行处理,数据以x±s表示。多组间数据比较使用单因素方差分析(one-way ANO VA)；两组之间进行比较,若方差齐采用LSD方法检验,当方差不齐时,使用Dunnett's T3方法检验。当P<0.05时,表示差异有统计学意义。结果：1.在PLA和LPS共同作用下,NCI-H292细胞的IL-6、IL-8 mRNA的表达水平明显增高,与单独LPS组、PLA组以及对照组比较,IL-6、IL-8 mRNA的水平差异具有显着统计学意义(P<0.05)。2.在PLA和LPS共同作用下,NCI-H292细胞的IL-6、IL-8的蛋白表达水平明显增高,与单独LPS组、PLA组以及对照组比较,IL-6、IL-8的蛋白水平差异具有显着统计学意义(P<0.05)。3.当LPS+PLA组加入ERK1/2的抑制剂PD98059后,NCI-H292细胞的IL-6、IL-8的mRNA和蛋白表达水平明显低于LPS+PLA组(P<0.05)。4.当LPS+PLA组加入p38 MAPK的抑制剂SB203580后,NCI-H292细胞的IL-6、IL-8的mRNA和蛋白表达水平也明显低于LPS+PLA组(P<0.05)。5.当LPS和/或PLA刺激NCI-H292细胞时,ERK1/2和p38 MAPK磷酸化水平增高,且LPS+PLA组表达水平最高；当加入ERK1/2的抑制剂PD98059或p38 MAPK的抑制剂SB203580后,ERK1/2和p3 MAPK的磷酸化水平被明显抑制。结论：1.PLA促进LPS诱导的NCI-H292细胞表达炎症介质IL-6、IL-8。2.PLA可能通过ERK1/2和p38 MAPK信号通路促进LPS诱导的NCI-H292细胞IL-6、IL-8的表达。(本文来源于《安徽医科大学》期刊2015-03-01）
陆兆双,范晓云,陈冰,张玲玲[5]（2014）在《多聚左旋精氨酸通过 p38/MAPK 信号通路诱导NCI-H292 细胞分泌 IL-6、IL-8的研究》一文中研究指出目的研究多聚左旋精氨酸(PLA)诱导气道上皮细胞NCI-H292分泌炎症因子白介素-6(IL-6)和白介素-8(IL-8)的机制。方法将NCI-H292细胞按PLA浓度分组(0、2.5、5、10、20 mg/L),采用荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测细胞中IL-6和IL-8 mRNA表达水平;按PLA加药时间分组(0、15、30、45、60 min),Western blot法检测p38/MAPK磷酸化水平;按对照组、PLA组、PLA+SB203580组和SB203580组分组,采用qRT-PCR法和ELISA法检测IL-6和IL-8的mRNA和蛋白表达量。结果 PLA能诱导NCI-H292细胞IL-6、IL-8 mRNA表达上调(P<0.01),PLA也能增加NCI-H292细胞p38/MAPK磷酸化水平(P<0.01),p38/MAPK阻断剂SB203580可抑制PLA诱导的NCI-H292细胞IL-6、IL-8 mRNA表达上调(P<0.01)及p38/MAPK磷酸化水平的增加(P<0.01)。结论 p38/MAPK信号通路参与PLA诱导NCI-H292细胞炎症因子IL-6和IL-8 mRNA转录过程。(本文来源于《安徽医科大学学报》期刊2014年12期）
唐伟,范晓云,陆兆双,霍龙[6]（2014）在《多聚左旋精氨酸对NCI-H292细胞炎症介质的调节》一文中研究指出目的研究多聚左旋精氨酸(PLA)对NCI-H292细胞分泌白细胞介素(IL)-6、IL-8、IL-13、嗜酸性粒细胞趋化因子(Eotaxin)的影响。方法将NCI-H292细胞分为对照组(培养液)、脂多糖(LPS)组(5μg/ml)、PLA组(Max=40μg/ml)、LPS+PLA组、LPS+PLA+肝素组。采用ELISA法检测各组IL-6、IL-8、IL-13、Eotaxin的水平,并比较各组间的差异。结果 LPS+PLA组IL-6、IL-8、Eotaxin的水平明显高于对照组、LPS组、PLA组(P<0.05),而LPS组、PLA组与对照组比较,IL-6、IL-8、Eotaxin的水平差异无统计学意义(P>0.05);各组IL-13的水平差异无统计学意义(P>0.05);而肝素能够降低LPS+PLA组IL-6、IL-8、Eotaxin的水平(P<0.05)。结论 PLA促进LPS诱导NCI-H292细胞IL-6、IL-8、Eotaxin的表达,但肝素可抑制其表达;而PLA对IL-13的表达没有影响。(本文来源于《安徽医科大学学报》期刊2014年04期）
唐伟[7]（2014）在《多聚左旋精氨酸对NCI-H292细胞炎症介质调节作用的研究》一文中研究指出目的:研究NCI-H292细胞在多聚左旋精氨酸（Poly-L-arginine）联合脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）作用于下白介素-6（interleukin-6,IL-6）、IL-8、IL-13、嗜酸性粒细胞趋化因子（Eotaxin）的表达水平，以及肝素和L-单甲基-精氨酸（L-NG-monomethyl-arginine,L-NMMA）对其细胞因子表达的影响。方法:1.细胞培养及哮喘微环境模型的建立将NCI-H292细胞培养在含10%胎牛血清的常规培养基中，每周传代两次；选择生长状态良好的细胞以3×105/500μl密度接种于24孔培养板中，用LPS预先将气道上皮细胞激活，模拟哮喘气道上皮细胞模型。2.细胞因子水平的测定按照实验设计分为空白对照组(培养液)、LPS组(5μg/ml)、多聚左旋精氨酸组(Max=40μg/ml)、LPS+poly-L-arginine组、LPS+poly-L-arginine+肝素(100u/L)组、LPS+poly-L-arginine+L-NMMA(Max=0.8mM)组，并依照分组要求加入不同浓度的多聚左旋精氨酸、LPS、肝素、L-NMMA；共培养20小时，收集细胞上清液。按照试剂盒说明采用ELISA法检测各组IL-6、IL-8、IL-13、Eotaxin的表达水平，并比较各组间的差异。3.统计学处理实验数据采用SPSS16.0统计分析软件分析，数据以x±s表示。多组间比较采用单因素方差分析（one-wayANOVA）；两两比较时方差齐时采用LSD检验，方差不齐时采用Dunnett’s T3检验。P<0.05为差异有统计学意义。结果:1.在多聚左旋精氨酸作用下，IL-6、IL-8、Eotaxin的表达水平明显增高，且在多聚左旋精氨酸为5μg/ml时，IL-6、IL8的表达水平最高；在多聚左旋精氨酸为20μg/ml时，Eotaxin的表达水平最高；但各浓度之间的差异无统计学意义；而单独LPS组、多聚左旋精氨酸组与对照组比较，IL-6、IL-8、Eotaxin的水平差异无统计学意义(P>0.05)。2.在多聚左旋精氨酸作用下，IL-13的表达未见明显改变；各组IL-13的水平差异无统计学意义(P>0.05)。3.将多聚左旋精氨酸、LPS及肝素共同作用NCI-H292细胞时，IL-6、IL-8、Eotaxin的表达水平明显低于LPS+poly-L-arginine组(P<0.05)。4.将多聚左旋精氨酸、LPS及L-NMMA共同作用NCI-H292细胞时，L-NMMA对各组IL-6、IL-8的表达无影响(P>0.05)。结论:1.多聚左旋精氨酸能够促进LPS诱导的NCI-H292细胞IL-6、IL-8、Eotaxin的表达水平，但对IL-13的表达水平没有影响。2.肝素能够抑制多聚左旋精氨酸联合LPS诱导的NCI-H292细胞IL-6、IL-8的表达水平，而L-NMMA对IL-6、IL-8的表达水平没有影响。(本文来源于《安徽医科大学》期刊2014-03-01）
唐伟,陆兆双,霍龙,范晓云[8]（2013）在《多聚左旋精氨酸对NCI-H292细胞炎症介质的调节作用》一文中研究指出目的研究多聚左旋精氨酸(PLA)对NCI-H292细胞分泌细胞因子IL-6、IL-8、IL-13、Eotaxin的影响。方法将培养的NCI-H292细胞分为对照组(培养液)、LPS组(LPS=5μg/ml)、PLA组(Max=40μg/ml)、LPS+PLA组,采用ELISA方法检测各组不同浓度下IL-6、IL-8、IL-13、Eotaxin的水平并比较各组间的差异。结果与对照组比较,LPS组、PLA组细胞上清中IL-6、IL-8、Eotaxin的水平无统计学差异(P>0.05);而LPS+PLA组IL-6、IL-8、Eotaxin的水平明显高于对照组、LPS组、PLA组(P<0.05),但PLA对NCI-H292细胞IL-13的分泌(本文来源于《中华医学会呼吸病学年会——2013第十四次全国呼吸病学学术会议论文汇编》期刊2013-09-18）
多聚左旋精氨酸论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:研究多聚左旋精氨酸(Poly-L-arginine,PLA)诱导气道上皮细胞NCI-H292细胞凋亡的通路机制以及对细胞内Bcl-2/Bax、Caspase-3表达的影响,从而揭示PLA参与哮喘气道上皮损伤的部分机制。方法:1、细胞培养常规培养基(RPMI1640+10%胎牛血清)培养NCI-H292细胞,于37℃、5%二氧化碳环境的培养箱内孵育。每2~3天换液一次,细胞分裂铺展至培养瓶70%~80%时用0.25%胰酶消化传代,用于后续实验。2、透射电镜制片观察NCI-H292细胞凋亡NCI-H292细胞分为对照组、PLA(60 mg/L)组两组,PLA作用24 h后,收集细胞,固定后脱水,包埋干燥,切片浸染后用透射电镜摄片观察两组细胞的超微结构。3、Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡率按加入PLA浓度不同将细胞分为空白对照组、10 mg/L PLA组、20 mg/L组PLA、40 mg/L PLA组、60 mg/L PLA组,按是否加入ERK1/2信号通路抑制剂PD98059分为空白对照组、PD组、PLA组、PLA+PD组。收集各组细胞后,运用流式细胞仪检测凋亡率,flowjo软件分析凋亡结果。4、Western Blot法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Casepase-3及信号通路ERK1/2的表达采用Western Blot法分析在不同浓度PLA(0、10、20、40、60 mg/L)刺激下Bax、Bcl-2、Casepase-3和ERK1/2的蛋白含量,并比较ERK信号通路抑制剂PD98059(20μmol/L)作用前后对Bcl-2/Bax、Casepase-3和ERK1/2磷酸化的影响。5、统计学处理采用统计学软件SPSS16.0进行处理分析,数据以(?)x±s表示,数据均进行正态性检验,多组间比较采用单因素方差分析(One-Way ANOVA);两两间比较采用LSD-t检验。所有实验均重复不少于3次。P<0.05为差异有统计学意义。结果:1、电镜下可见PLA刺激后的NCI-H292细胞核膜皱缩外突,染色质在核膜下浓聚;线粒体肿胀变圆、呈空泡状,线粒体嵴排列杂乱多不规则,数量明显减少,甚至部分消失,呈明显凋亡改变。2、Annexin V-FITC/PI双染法凋亡检测显示,对照组、10 mg/L PLA组、20 mg/L PLA组、40 mg/L PLA组、60 mg/L PLA组NCI-H292细胞凋亡率分别为(4.97±0.17)%,(7.82±0.21)%,(11.99±0.21)%,(29.52±0.55)%,(55.23±0.67)%,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.001),并呈浓度依赖性。3、Western Blot检测10 mg/L PLA组、20 mg/L PLA组、40 mg/L PLA组、60 mg/L PLA组的Bcl-2/Bax比值相对于空白对照组皆显示降低趋势,差异都有统计学意义(P均<0.01);在活性Caspase-3蛋白表达水平的检测中,10 mg/L PLA组、20 mg/L PLA组、40 mg/L PLA组、60 mg/L PLA组的活性Caspase-3蛋白表达量比之于对照组都有所增加,有统计学差异(P均<0.001)。4、与空白对照组相比较,10 mg/L PLA组、20 mg/L PLA组、40 mg/L PLA组、60mg/L PLA组ERK磷酸化水平均增加(P均<0.01),且在PLA终浓度为20mg/L时,P-ERK/ERK的表达量达到高峰(P<0.01)。5、空白对照组、PD组、PLA组、PLA+PD组NCI-H292细胞凋亡率分别为(5.04±0.26)%、(4.99±0.19)%(P=0.801)、(20.72±1.37)%(P<0.001)、(8.67±0.18)%(P<0.001),且PLA+PD组凋亡率明显低于PLA组,其差异统计学意义(P<0.001)。6、PLA+PD组相比PLA组Bcl-2/Bax明显升高,活性Caspase-3明显降低,差异均有统计学意义(P<0.001)。与空白对照组相较,PLA组活性P-ERK/ERK表达水平明显升高(P<0.001);PLA+PD组相比PLA组P-ERK/ERK明显降低(P<0.001)。结论:1、PLA可诱导气道上皮细胞凋亡;2、PLA可能通过激活Bax、Bcl-2、Caspase-3等凋亡相关蛋白诱导气道上皮细胞凋亡;3、PLA可能通过调控ERK信号通路激活Bax、Bcl-2、Caspase-3等凋亡相关蛋白的表达诱导气道上皮细胞凋亡。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
多聚左旋精氨酸论文参考文献
[1].吴莎莎.JNK信号通路在多聚左旋精氨酸诱导NCI-H292细胞凋亡中的作用及其机制研究[D].安徽医科大学.2018
[2].张玲玲.多聚左旋精氨酸通过ERK1/2信号通路诱导NCI-H292细胞凋亡的机制研究[D].安徽医科大学.2017
[3].陈冰.脂多糖协同多聚左旋精氨酸诱导NCI-H292细胞分泌IL-6、IL-8的JNK信号通路研究[D].安徽医科大学.2016
[4].陆兆双.多聚左旋精氨酸促进LPS诱导的NCI-H292细胞释放炎症因子IL-6、IL-8的信号通路研究[D].安徽医科大学.2015
[5].陆兆双,范晓云,陈冰,张玲玲.多聚左旋精氨酸通过p38/MAPK信号通路诱导NCI-H292细胞分泌IL-6、IL-8的研究[J].安徽医科大学学报.2014
[6].唐伟,范晓云,陆兆双,霍龙.多聚左旋精氨酸对NCI-H292细胞炎症介质的调节[J].安徽医科大学学报.2014
[7].唐伟.多聚左旋精氨酸对NCI-H292细胞炎症介质调节作用的研究[D].安徽医科大学.2014
[8].唐伟,陆兆双,霍龙,范晓云.多聚左旋精氨酸对NCI-H292细胞炎症介质的调节作用[C].中华医学会呼吸病学年会——2013第十四次全国呼吸病学学术会议论文汇编.2013