本文主要研究内容
作者程悍（2019）在《Wnt/β-catenin信号通路在大气PM2.5引起p16基因甲基化及细胞生物行为学改变中作用的研究》一文中研究指出：目的大气PM2.5作为空气污染物之一,与肺癌的发生发展有着明显的关联,本研究探讨Wnt/β-catenin信号通路在大气PM2.5引起人支气管上皮细胞（Beas-2B）、非小细胞肺癌细胞（A549）p16抑癌基因启动子甲基化改变中的关键作用;探讨Wnt/β-catenin信号通路在大气PM2.5引起上述两种细胞生物行为改变中的作用。分别用正常支气管上皮细胞、肺癌细胞建模进行体外实验,从致癌、促癌两个角度研究大气PM2.5对肺癌的相关分子机制。方法根据课题组前期大气PM2.5采集方法,采集大气PM2.5,干燥、称重后溶解于DMSO,将其浓度定为100 mg/mL备用。不同浓度大气PM2.5染毒Beas-2B、A549细胞24小时后,MTT、细胞划痕及Transwell实验确定细胞染毒浓度;同样以MTT实验确定DKK-1抑制剂最佳浓度;Western blot法检测经不同浓度PM2.5处理及加入抑制剂DKK-1与PM2.5共孵育后细胞中Wnt/β-catenin通路各蛋白、DNA甲基化转移酶1（DNMT1）以及EMT相关蛋白表达水平;RT-qPCR法检测细胞中Wnt/β-catenin通路各因子mRNA及DNA甲基化转移酶（DNMTs）mRNA表达水平;甲基化特异性PCR（MSP）法检测细胞中p16抑癌基因甲基化水平;细胞划痕实验检测抑制剂DKK-1与PM2.5共孵育后A549细胞迁移力水平改变;Transwell实验检测加入抑制剂DKK-1与PM2.5共孵育后A549细胞侵袭力水平改变。结果Wnt/β-catenin通路在大气PM2.5引起A549细胞p16甲基化及细胞生物行为学改变中的作用1.MTT实验确定染毒及DKK-1剂量。染毒处理24 h后,当剂量为100μg/mL时细胞存活率接近81%,且与对照组相比有统计学意义（P<0.01）。故本研究选择染毒剂量包括0、25、50、100μg/mL,且染毒时间定在24 h。随着DKK-1浓度增高,细胞存活率呈下降趋势,当DKK-1剂量为50 ng/mL,细胞存活率为94%,与对照组相比无统计学差异。2.PM2.5引起细胞甲基化水平上升。与对照组相比,随着染毒剂量升高,DNMT1蛋白表达水平及p16基因甲基化水平上升,且染毒浓度为100μg/mL时,效应最强（P<0.01）。3.PM2.5引起细胞生物行为学改变。与对照组相比,当染毒浓度为25、50μg/mL时,细胞迁移力相比明显增加（P<0.01）,当染毒浓度继续上升至100μg/mL时,细胞迁移力无明显改变。相比于对照组,25μg/mL的染毒组,细胞侵袭力增强,但随着PM2.5浓度继续升高至50、100μg/mL时,侵袭力明显下降（P<0.01）。故将细胞分为0、6.25、12.5、25μg/mL四组,检测细胞EMT蛋白水平,与对照组相比,随着染毒剂量的提高,Vimentin蛋白表达水平上调而E-cadherin蛋白表达水平下降（P<0.01）。4.PM2.5激活Wnt/β-catenin信号通路。随着染毒剂量提升,p-GSK-3β/GSK-3β比值及β-catenin、p-GSK-3β蛋白表达水平上调而APC蛋白表达水平下降。5.DKK-1抑制PM2.5激活的Wnt/β-catenin信号通路。与单独染毒组相比,PM2.5与DKK-1共孵育组p-GSK-3β/GSK-3β比值及β-catenin、p-GSK-3β蛋白表达水平下降而APC蛋白表达水平上调,并皆具有统计学意义（P<0.01）。6.DKK-1抑制PM2.5激活的Wnt/β-catenin信号通路后p16甲基化及细胞生物行为学改变。与单独染毒组相比,PM2.5与DKK-1共孵育组DNMT1蛋白表达水平及p16甲基化水平下降,且细胞迁移力及侵袭力下降,EMT蛋白Vimentin表达水平下降而E-cadherin蛋白表达上调（P<0.01）。Wnt/β-catenin通路在大气PM2.5引起Beas-2B细胞p16甲基化及EMT蛋白表达水平改变中的作用1.MTT实验确定染毒及DKK-1剂量。染毒处理24 h后,当剂量为100μg/mL时细胞存活率接近75%,且与对照组相比有统计学意义（P<0.01）。故本研究选择染毒剂量包括0、25、50、100μg/mL,且染毒时间定在24 h。随着DKK-1浓度增高,细胞存活率呈下降趋势,当DKK-1剂量为50 ng/mL,细胞存活率为93%,与对照组相比无统计学差异。2.PM2.5引起细胞甲基化水平上升。与对照组相比,随着染毒剂量升高,DNMT1蛋白、DNMT3b mRNA表达水平及p16基因甲基化水平上升,且染毒浓度为100μg/mL时,效应最强（P<0.01）。3.PM2.5引起细胞EMT蛋白水平改变。与单独TGF-β1处理组相比,随着染毒剂量升高,Vimentin蛋白表达水平上调而E-cadherin蛋白表达水平下降（P<0.01）。4.PM2.5激活Wnt/β-catenin信号通路。随着染毒剂量提升,p-GSK-3β/GSK-3β比值及β-catenin、p-GSK-3β蛋白表达水平上调而APC蛋白、APC mRNA及DKK-1mRNA表达水平下降（P<0.01）。5.DKK-1抑制PM2.5激活的Wnt/β-catenin信号通路。与单独染毒组相比,PM2.5与DKK-1共孵育组p-GSK-3β/GSK-3β比值及β-catenin、p-GSK-3β蛋白表达水平下降而APC蛋白及mRNA表达水平上调,并皆具有统计学意义（P<0.01）。6.DKK-1抑制PM2.5激活Wnt/β-catenin信号通路后p16甲基化及细胞EMT蛋白水平改变。与单独染毒组相比,PM2.5与DKK-1共孵育组DNMT1蛋白、DNMT3b mRNA表达水平及p16甲基化水平下降,且EMT蛋白Vimentin表达水平下降而E-cadherin蛋白表达上调（P<0.01）。结论从促癌的角度阐释了大气PM2.5染毒A549细胞24 h后,A549细胞抑癌基因p16甲基化水平上升,细胞EMT蛋白表达水平上升,细胞侵袭力、迁移力增强,并且Wnt/β-catenin通路参与到PM2.5诱导的p16基因甲基化水平上升及细胞生物行为学改变的过程中;此外从诱癌的角度阐释了染毒正常Beas-2B细胞后,p16基因甲基化水平上升,细胞EMT蛋白表达水平上升,且Wnt/β-catenin通路同样参与到此过程中。从诱癌、促癌两个角度研究大气PM2.5对肺癌的相关分子机制,进一步为细颗粒物暴露导致肺癌的防治提供新思路和新靶点。
Abstract
mu de da qi PM2.5zuo wei kong qi wu ran wu zhi yi ,yu fei ai de fa sheng fa zhan you zhao ming xian de guan lian ,ben yan jiu tan tao Wnt/β-cateninxin hao tong lu zai da qi PM2.5yin qi ren zhi qi guan shang pi xi bao （Beas-2B）、fei xiao xi bao fei ai xi bao （A549）p16yi ai ji yin qi dong zi jia ji hua gai bian zhong de guan jian zuo yong ;tan tao Wnt/β-cateninxin hao tong lu zai da qi PM2.5yin qi shang shu liang chong xi bao sheng wu hang wei gai bian zhong de zuo yong 。fen bie yong zheng chang zhi qi guan shang pi xi bao 、fei ai xi bao jian mo jin hang ti wai shi yan ,cong zhi ai 、cu ai liang ge jiao du yan jiu da qi PM2.5dui fei ai de xiang guan fen zi ji zhi 。fang fa gen ju ke ti zu qian ji da qi PM2.5cai ji fang fa ,cai ji da qi PM2.5,gan zao 、chen chong hou rong jie yu DMSO,jiang ji nong du ding wei 100 mg/mLbei yong 。bu tong nong du da qi PM2.5ran du Beas-2B、A549xi bao 24xiao shi hou ,MTT、xi bao hua hen ji Transwellshi yan que ding xi bao ran du nong du ;tong yang yi MTTshi yan que ding DKK-1yi zhi ji zui jia nong du ;Western blotfa jian ce jing bu tong nong du PM2.5chu li ji jia ru yi zhi ji DKK-1yu PM2.5gong fu yo hou xi bao zhong Wnt/β-catenintong lu ge dan bai 、DNAjia ji hua zhuai yi mei 1（DNMT1）yi ji EMTxiang guan dan bai biao da shui ping ;RT-qPCRfa jian ce xi bao zhong Wnt/β-catenintong lu ge yin zi mRNAji DNAjia ji hua zhuai yi mei （DNMTs）mRNAbiao da shui ping ;jia ji hua te yi xing PCR（MSP）fa jian ce xi bao zhong p16yi ai ji yin jia ji hua shui ping ;xi bao hua hen shi yan jian ce yi zhi ji DKK-1yu PM2.5gong fu yo hou A549xi bao qian yi li shui ping gai bian ;Transwellshi yan jian ce jia ru yi zhi ji DKK-1yu PM2.5gong fu yo hou A549xi bao qin xi li shui ping gai bian 。jie guo Wnt/β-catenintong lu zai da qi PM2.5yin qi A549xi bao p16jia ji hua ji xi bao sheng wu hang wei xue gai bian zhong de zuo yong 1.MTTshi yan que ding ran du ji DKK-1ji liang 。ran du chu li 24 hhou ,dang ji liang wei 100μg/mLshi xi bao cun huo lv jie jin 81%,ju yu dui zhao zu xiang bi you tong ji xue yi yi （P<0.01）。gu ben yan jiu shua ze ran du ji liang bao gua 0、25、50、100μg/mL,ju ran du shi jian ding zai 24 h。sui zhao DKK-1nong du zeng gao ,xi bao cun huo lv cheng xia jiang qu shi ,dang DKK-1ji liang wei 50 ng/mL,xi bao cun huo lv wei 94%,yu dui zhao zu xiang bi mo tong ji xue cha yi 。2.PM2.5yin qi xi bao jia ji hua shui ping shang sheng 。yu dui zhao zu xiang bi ,sui zhao ran du ji liang sheng gao ,DNMT1dan bai biao da shui ping ji p16ji yin jia ji hua shui ping shang sheng ,ju ran du nong du wei 100μg/mLshi ,xiao ying zui jiang （P<0.01）。3.PM2.5yin qi xi bao sheng wu hang wei xue gai bian 。yu dui zhao zu xiang bi ,dang ran du nong du wei 25、50μg/mLshi ,xi bao qian yi li xiang bi ming xian zeng jia （P<0.01）,dang ran du nong du ji xu shang sheng zhi 100μg/mLshi ,xi bao qian yi li mo ming xian gai bian 。xiang bi yu dui zhao zu ,25μg/mLde ran du zu ,xi bao qin xi li zeng jiang ,dan sui zhao PM2.5nong du ji xu sheng gao zhi 50、100μg/mLshi ,qin xi li ming xian xia jiang （P<0.01）。gu jiang xi bao fen wei 0、6.25、12.5、25μg/mLsi zu ,jian ce xi bao EMTdan bai shui ping ,yu dui zhao zu xiang bi ,sui zhao ran du ji liang de di gao ,Vimentindan bai biao da shui ping shang diao er E-cadherindan bai biao da shui ping xia jiang （P<0.01）。4.PM2.5ji huo Wnt/β-cateninxin hao tong lu 。sui zhao ran du ji liang di sheng ,p-GSK-3β/GSK-3βbi zhi ji β-catenin、p-GSK-3βdan bai biao da shui ping shang diao er APCdan bai biao da shui ping xia jiang 。5.DKK-1yi zhi PM2.5ji huo de Wnt/β-cateninxin hao tong lu 。yu chan du ran du zu xiang bi ,PM2.5yu DKK-1gong fu yo zu p-GSK-3β/GSK-3βbi zhi ji β-catenin、p-GSK-3βdan bai biao da shui ping xia jiang er APCdan bai biao da shui ping shang diao ,bing jie ju you tong ji xue yi yi （P<0.01）。6.DKK-1yi zhi PM2.5ji huo de Wnt/β-cateninxin hao tong lu hou p16jia ji hua ji xi bao sheng wu hang wei xue gai bian 。yu chan du ran du zu xiang bi ,PM2.5yu DKK-1gong fu yo zu DNMT1dan bai biao da shui ping ji p16jia ji hua shui ping xia jiang ,ju xi bao qian yi li ji qin xi li xia jiang ,EMTdan bai Vimentinbiao da shui ping xia jiang er E-cadherindan bai biao da shang diao （P<0.01）。Wnt/β-catenintong lu zai da qi PM2.5yin qi Beas-2Bxi bao p16jia ji hua ji EMTdan bai biao da shui ping gai bian zhong de zuo yong 1.MTTshi yan que ding ran du ji DKK-1ji liang 。ran du chu li 24 hhou ,dang ji liang wei 100μg/mLshi xi bao cun huo lv jie jin 75%,ju yu dui zhao zu xiang bi you tong ji xue yi yi （P<0.01）。gu ben yan jiu shua ze ran du ji liang bao gua 0、25、50、100μg/mL,ju ran du shi jian ding zai 24 h。sui zhao DKK-1nong du zeng gao ,xi bao cun huo lv cheng xia jiang qu shi ,dang DKK-1ji liang wei 50 ng/mL,xi bao cun huo lv wei 93%,yu dui zhao zu xiang bi mo tong ji xue cha yi 。2.PM2.5yin qi xi bao jia ji hua shui ping shang sheng 。yu dui zhao zu xiang bi ,sui zhao ran du ji liang sheng gao ,DNMT1dan bai 、DNMT3b mRNAbiao da shui ping ji p16ji yin jia ji hua shui ping shang sheng ,ju ran du nong du wei 100μg/mLshi ,xiao ying zui jiang （P<0.01）。3.PM2.5yin qi xi bao EMTdan bai shui ping gai bian 。yu chan du TGF-β1chu li zu xiang bi ,sui zhao ran du ji liang sheng gao ,Vimentindan bai biao da shui ping shang diao er E-cadherindan bai biao da shui ping xia jiang （P<0.01）。4.PM2.5ji huo Wnt/β-cateninxin hao tong lu 。sui zhao ran du ji liang di sheng ,p-GSK-3β/GSK-3βbi zhi ji β-catenin、p-GSK-3βdan bai biao da shui ping shang diao er APCdan bai 、APC mRNAji DKK-1mRNAbiao da shui ping xia jiang （P<0.01）。5.DKK-1yi zhi PM2.5ji huo de Wnt/β-cateninxin hao tong lu 。yu chan du ran du zu xiang bi ,PM2.5yu DKK-1gong fu yo zu p-GSK-3β/GSK-3βbi zhi ji β-catenin、p-GSK-3βdan bai biao da shui ping xia jiang er APCdan bai ji mRNAbiao da shui ping shang diao ,bing jie ju you tong ji xue yi yi （P<0.01）。6.DKK-1yi zhi PM2.5ji huo Wnt/β-cateninxin hao tong lu hou p16jia ji hua ji xi bao EMTdan bai shui ping gai bian 。yu chan du ran du zu xiang bi ,PM2.5yu DKK-1gong fu yo zu DNMT1dan bai 、DNMT3b mRNAbiao da shui ping ji p16jia ji hua shui ping xia jiang ,ju EMTdan bai Vimentinbiao da shui ping xia jiang er E-cadherindan bai biao da shang diao （P<0.01）。jie lun cong cu ai de jiao du chan shi le da qi PM2.5ran du A549xi bao 24 hhou ,A549xi bao yi ai ji yin p16jia ji hua shui ping shang sheng ,xi bao EMTdan bai biao da shui ping shang sheng ,xi bao qin xi li 、qian yi li zeng jiang ,bing ju Wnt/β-catenintong lu can yu dao PM2.5you dao de p16ji yin jia ji hua shui ping shang sheng ji xi bao sheng wu hang wei xue gai bian de guo cheng zhong ;ci wai cong you ai de jiao du chan shi le ran du zheng chang Beas-2Bxi bao hou ,p16ji yin jia ji hua shui ping shang sheng ,xi bao EMTdan bai biao da shui ping shang sheng ,ju Wnt/β-catenintong lu tong yang can yu dao ci guo cheng zhong 。cong you ai 、cu ai liang ge jiao du yan jiu da qi PM2.5dui fei ai de xiang guan fen zi ji zhi ,jin yi bu wei xi ke li wu bao lou dao zhi fei ai de fang zhi di gong xin sai lu he xin ba dian 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自安徽医科大学的程悍，发表于刊物安徽医科大学2019-09-02论文，是一篇关于大气论文,信号通路论文,甲基化论文,安徽医科大学2019-09-02论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自安徽医科大学2019-09-02论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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