导读:本文包含了轻重链可变区基因论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:ER-α36,单克隆抗体,RT-聚合酶链反应,序列分析
轻重链可变区基因论文文献综述
郭银红[1]（2018）在《抗ER-α36单克隆抗体轻重链可变区基因的克隆和序列分析》一文中研究指出乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,近来年全世界乳腺癌发病率有逐年升高趋势,在欧美等发达国家,乳腺癌已成为女性的主要死因之一,在我国许多大、中城市,乳腺癌已位居女性恶性肿瘤发病率的首位,严重威胁着妇女的健康。目前乳腺癌的综合治疗包括外科手术切除、内科药物治疗及局部的放射治疗等手段。在内科治疗领域,乳腺癌又分为不同的亚型及相应的治疗。叁阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)是乳腺癌的一种特殊类型,是指 ER、PR、HER-2均为阴性的乳腺癌,临床上易复发、进展快、预后差,且因缺乏相应受体,常规的内分泌治疗和靶向Her-2治疗对其无效,治疗上十分棘手。通过临床标本的检测发现叁阴性乳腺癌绝大多数ER-α36的表达很高,下调叁阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231中ER-α36的表达后,细胞对化疗药物紫杉醇更加敏感,同时其迁移、侵袭能力明显下降,并且这些变化与雌激素是否存在无关,这些结果提示ER-α36极可能是治疗叁阴性乳腺癌的潜在靶点。由于ER-α36主要表达于细胞膜和细胞质,特异性单克隆抗体可能对其有封闭中和作用进而发挥其生物学功能。如能进一步改造ER-α36单克隆抗体,可提高其生物学效应及临床应用价值。本次试验利用已有的杂交瘤细胞,经RT-PCR技术,获得抗ER-α36单克隆抗体的轻重链可变区基因。具体为从具有分泌抗ER-α36单克隆抗体活性的杂交瘤细胞株中提取总RNA,经RT-PCR扩增并克隆该单抗的轻重链可变区基因并进行序列分析。结果显示抗体的重链可变区基因438bp,属于小鼠单克隆抗体IgM重链;抗体的轻链可变区基因416bp,属于免疫球蛋白轻链,且属于κ链的可变区基因。通过RT-PCR所克隆的基因经核苷酸序列分析,为抗体的轻重链可变区。该轻重链可变区基因的克隆和序列分析为抗ER-α36单克隆抗体的基因工程改造完成关键的一步。(本文来源于《浙江大学》期刊2018-03-01）
李巍[2]（2011）在《鸡柔嫩艾美耳球虫子孢子单链抗体轻重链可变区基因的扩增与序列分析》一文中研究指出鸡球虫病是由艾美耳属的柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)等7种球虫单独或混合感染肠道不同部位引起的一种肠道细胞内寄生性原虫病。目前,防治鸡球虫病主要依靠抗球虫药物,但长期的使用使球虫产生了耐药性,同时畜禽产品的药物残留影响人类的健康,使得利用免疫防治来取代药物治疗成为控制球虫病的必然。本试验对鸡柔嫩艾美耳球虫(农安株)建立了针对子孢子可溶性抗原的单克隆抗体细胞株并对E. tenella单链的轻重链可变区基因进行了扩增和序列分析。为以后进行E. tenella单链抗体的构建及特异性单链抗体基因与绿脓杆菌外毒素PE40重组毒素的构建、表达及活性测定奠定基础,该重组毒素有望成为对抗柔嫩艾美耳球虫病的新工具。本试验具体研究内容如下：1.鸡柔嫩艾美耳球虫子孢子特异性单抗的制备首先制备鸡柔嫩艾美耳球虫(农安株)子孢子可溶性抗原,即经过卵囊的复壮、收获、体外孢子化、纯化、研磨、胰酶脱囊、DEAE-52层析柱纯化、反复冻融、超声裂解,离心所得上清即为子孢子可溶性抗原。经紫外法测得抗原样品的浓度为330ug/ml。建立针对子孢子可溶性抗原的单克隆抗体细胞株,利用此抗原检测杂交瘤细胞上清液,获得阳性杂交瘤细胞叁株4C6、4D8、4E11,并对其进行克隆及扩大培养。2.鸡柔嫩艾美耳球虫子孢子单链抗体可变区基因的扩增与序列分析复苏分泌抗鸡柔嫩艾美耳球虫单克隆抗体杂交瘤细胞,达最佳生长状态后应用琼脂糖扩散法检测该杂交瘤细胞的活性。Trizol法提取活性高的杂交瘤细胞总RNA,琼脂糖凝胶电泳结果显示鸡柔嫩艾美耳球虫特异性杂交瘤细胞基因组RNA提取成功,A260/280值=1.96；根据GenBank上发表的鸡堆型艾美耳球虫单克隆抗体轻重链可变区相关序列(登录号AJ298107),合成特异性引物,以提取的RNA为模板,RT-PCR一步法扩增目的基因,将目的基因与pMD18-T载体连接,经PCR鉴定后,对阳性重组质粒进行测序。结果获得的轻链可变区基因的大小约321bp,重链可变区基因的大小约369bp。测序结果显示符合鸡抗体轻链可变区和重链可变区基因特征,但发现与抗原表位互补结合的互补决定区(CDR)基因有多数发生改变,且在轻链可变区基因的CDR3中有基因缺失现象。(本文来源于《吉林农业大学》期刊2011-06-01）
种法政,徐辞,王石,郑君,赵权[3]（2009）在《抗猪囊尾蚴单克隆抗体轻重链可变区基因的扩增及序列分析》一文中研究指出从分泌抗猪囊尾蚴单克隆抗体杂交瘤细胞提取总RNA,以此为摸板,RT-PCR扩增出抗猪囊尾蚴单克隆抗体轻重链可变区基因,琼脂糖凝胶电泳检测显示约350 bp,符合鼠抗体特征。PCR产物与pMD18-T连接后转化JM109,蓝白斑法筛选出阳性重组子。以载体通用引物对阳性重组子进行鉴定,对证明为阳性的重组子测序。结果显示,轻链可变区和重链可变区基因符合鼠抗体轻链可变区和重链可变区基因特征,VH和VL有3个比较明显的CDR区和FR区。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2009年09期）
赵月兰,郭红斌,秦建华,康桂英,张磊[4]（2009）在《鸡堆型艾美耳球虫特异性单抗轻、重链可变区基因的克隆与序列测定》一文中研究指出将已扩增出的鸡堆型艾美耳球虫特异性单抗轻、重链可变区基因进行纯化,并用纯化的2基因片段与pMD-18T载体连接,将重组载体转化于感受态细胞JM109,筛选出阳性重组子,提取阳性重组子质粒并进行测序。得到单抗轻、重链可变区的基因序列。轻链基因为312 bp,重链基因为381 bp,为单链抗体基因的构建及免疫毒素的构建奠定了基础。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2009年01期）
陆盛军,孙伟,李瑜,梁智辉,翁秀芳[5]（2008）在《大鼠源性杂交瘤TIB219的IgG轻、重链可变区基因克隆和序列分析》一文中研究指出研究背景:转铁蛋白受体(transferrin receptor,TfR或CD71)在细胞膜上主要负责细胞所需铁的跨膜转运和信号转导。它在增殖期细胞、未成熟的红细胞和大多数培养的肿瘤细胞中高表达。与细细胞活化、增殖、分化和肿瘤细胞恶变存在着密切关系。因此,TfR被视(本文来源于《第六届全国免疫学学术大会论文集》期刊2008-10-01）
种法政[6]（2008）在《抗猪囊尾蚴单克隆抗体轻重链可变区基因扩增和序列分析》一文中研究指出猪囊尾蚴病是由猪带绦虫的幼虫(囊尾蚴)引起的一种人畜共患病。我国人体囊尾蚴病分布广泛,严重威胁着广大人民健康。多年来防治本病主要是以药物防治为主,但是由于抗药性的不断出现及药物残留等问题的严重性,限制了其在临床上的应用。进入20世纪80年代后,分子生物学技术的快速发展促进了抗体研究的进展,基因工程抗体应运而生。其中单链抗体是目前应用最为广泛的重组抗体,在各个领域均有大量研究报道。但在寄生虫研究中尤其是猪囊尾蚴领域没有单链抗体的报道。本实验克隆出抗猪囊尾蚴单克隆抗体轻重链可变区基因片段,为抗猪囊尾蚴单链抗体的构建奠定了基础。方法:首先,复苏分泌抗猪囊尾蚴单克隆抗体杂交瘤细胞,培养至最佳生长状态,琼脂糖扩散试验检测分泌抗猪囊尾蚴单克隆抗体杂交瘤细胞的活性。取活性高的杂交瘤细胞,用Trizol一步法提取分泌抗猪囊尾蚴单克隆抗体杂交瘤细胞总RNA。然后,根据genebank公布的相关序列,合成两对特异性引物,以提取的总RNA为模板,经一步法RT-PCR反应扩增抗体轻重链可变区基因。最后,将扩增抗体轻重链可变区基因与克隆载体pMD18-T连接,琼脂糖电泳检测后,转化于感受态细胞JM109。蓝白斑法筛选出阳性重组子进行菌落PCR鉴定。取含有阳性重组子的菌液送至生物公司测序。结果:提取分泌抗猪囊尾蚴单克隆抗体的杂交瘤细胞总RNA后,应用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测提取得总RNA。结果显示:A_(260/280)值=1.96;RNA琼脂糖凝胶电泳可以清晰地看到28sRNA,18sRNA的条带。证明得到了能够分泌抗猪囊尾蚴特异性单克隆抗体杂交瘤细胞总RNA。以提取的总RNA为模板,一步法RT-PCR反应扩增抗体轻重链可变区基因。经琼脂糖凝胶电泳检测,轻链可变区基因和重链可变区基因长度在400bp左右,符合鼠抗体特征,表明得到了抗猪囊尾蚴单克隆抗体轻重链可变区基因片段。经琼脂糖凝胶电泳检测回收后连接克隆载体pMD18-T,转化感受态细胞JM109,蓝白斑法筛选出阳性重组子,以通用引物对阳性重组子进行鉴定,菌落-PCR检测证明重组子为阳性。测序结果显示:重链可变区基因全长为357bp,编码119个氨基酸;轻链可变区基因全长315bp,编码105个氨基酸。同源性比较结果显示:重链的同源性为94%,轻链的同源性为96%,符合鼠抗体轻链可变区和重链可变区基因特征。抗原表位互补结合的互补决定区(CDR)基因有多数发生改变,且在重链可变区基因的CDR2中有基因缺失现象,轻链可变区基因的CDR3中有基因缺失现象。(本文来源于《吉林农业大学》期刊2008-06-01）
秦建华,汪明,康桂英,赵月兰,包永占[7]（2007）在《堆型艾美耳球虫特异性单抗轻重链可变区基因的制备》一文中研究指出单链抗体是一种新型的基因工程抗体[1],由抗体的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)通过一段短肽(L inker)连接而成,其分子质量小,结构简单,较亲本抗体免疫原性低,但却较好地保持了亲本抗体的抗原亲和活性。单链抗体具有完整抗原相结合位点的小抗体片段(本文来源于《中国兽医杂志》期刊2007年08期）
宁铂涛,汤永民,曹江,沈红强,钱柏芹[8]（2007）在《抗人CD14新克隆ZCH-7-2F9单抗轻重链可变区基因克隆与序列分析》一文中研究指出目的:获取抗人CD14单克隆抗体(单抗)ZCH-7-2F9(简称2F9)轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)基因,为2F9单链抗体(ScFv2F9)的构建奠定基础。方法:复苏2F9和NS-1细胞株,并亚克隆2F9细胞株,从其最佳克隆93A10提取总RNA,RQ1 RNase-Free DNase处理污染的DNA,与NS-1细胞进行同步对照,通过RT-PCR,扩增获得2F9单抗VL基因和VH基因,分别克隆入pGEM○R-T Easy载体,然后转化DH5α细菌,酶切鉴定并纯化阳性重组子,测序后进行在线核苷酸序列分析。结果:2F9单抗VL基因全长321 bp,编码107个氨基酸,归属于小鼠Ig的Vκ基因,氨基酸序列分析结果显示,VL含有明确的4个框架区(FR)和3个抗原决定簇互补区(CDR),在第23位和第88位为半胱氨酸,是与抗体二硫键形成有关的两种特征性氨基酸;其VH基因全长360 bp,编码120个氨基酸,归属于小鼠Ig的VH基因,氨基酸序列分析结果显示,VH含有明确的4个框架区和3个抗原决定簇互补区,在第22位和第96位为半胱氨酸,是与抗体二硫键形成有关的两种特征性氨基酸。结论:经核苷酸序列分析证明所克隆的基因分别是2F9单抗的VL和VH基因,为2F9基因工程抗体研究奠定了坚实的基础。(本文来源于《浙江大学学报(医学版)》期刊2007年04期）
褚敏,梁景平[9]（2003）在《抗黏性放线菌Ⅰ型菌毛蛋白单抗轻、重链可变区基因测序》一文中研究指出目的 :克隆并测序抗黏性放线菌Ⅰ型菌毛蛋白单抗的轻、重链可变区基因。方法 :从抗黏性放线菌Ⅰ型菌毛蛋白杂交瘤细胞系 (mABCM)中分离总RNA ,经RT -PCR体外扩增重、轻链可变区基因并测序。结果 :VH、VL 可变区的分子量在 30 0～ 4 0 0bp之间 ,基因测序结果符合小鼠抗体可变区特征。 结论 :获得了抗黏性放线菌Ⅰ型菌毛蛋白单抗的可变区基因序列 ,与小鼠抗体可变区基因相同。(本文来源于《牙体牙髓牙周病学杂志》期刊2003年08期）
高瀛岱[10]（2003）在《抗PGP单克隆抗体轻重链可变区基因及其应用》一文中研究指出肿瘤细胞对多种化疗药物产生交叉耐药性(Multidrug resistance，MDR)是造成肿瘤化疗失败的主要原因，MDR的形成机制很多，但能在临床得到验证的耐药机制很少，其中对由P-糖蛋白(P-glycoprotein，PGP)介导的耐药机制的研究最为广泛和深入，并在临床得到了证实。PGP不仅与耐药相关，而且还与肿瘤的侵袭、转移等生物学特性相关，因此以PGP为靶点制备抗PGP的单克隆抗体成为治疗耐药肿瘤的最新策略。与其他特异性的肿瘤抗原不同，在所有正常人类组织中均可检测到PGP及mdr-1基因的mRNA，许多研究证明PGP与正常细胞的分泌功能密切相关。而且，越来越多的研究表明PGP是人体保护正常细胞免受毒物损害的机制之一。这就要求单抗本身不抑制PGP的正常功能，而且也不能携带对正常细胞具有杀伤活性的外源性毒物。双特异抗体(bispecific antibody，BsAb)通过激活人体内的效应细胞发挥杀伤肿瘤细胞的作用，从而避免了使用外源非特异细胞毒物质，这就使抗PGP抗体应用于耐药肿瘤的治疗提供了可能。 HIT3a是我所研制的鼠源性抗CD3的单克隆抗体，并已经过国际人类白细胞分化抗原协作组会议正式命名。PHMA02为本实验室自行研制的具有自主知识产权的抗PGP的鼠源性单克隆抗体我们克隆单克隆抗体HIT3a和PHMA02轻、重链可变区基因，构建表达了抗PGP×抗CD3 diabody，并对其体内外活性进行深入研究。 我们利用RT-PCR克隆了抗PGP单抗PHMA02的轻、重链可变区基因，并利用噬菌体抗体库技术构建了抗PGPscFv的抗体库并进行了筛选。筛选到的高亲和力克隆经序列测定和氨基酸序列分析为一典型的抗体序列。将筛选到的高亲和力抗体基因克隆到具有强启动子的PET28a(+)载体上进行表达，表达产物具有与靶抗原PGP特异结合的能力，但不抑制PGP外排泵的功能。在此基础上，利用抗体HIT3a和PHMA02轻、重链可变区基因，构建表达了抗PGP×抗CD3 diabody，并实现了在大肠杆菌内的分泌性的(本文来源于《中国协和医科大学》期刊2003-05-01）
轻重链可变区基因论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
鸡球虫病是由艾美耳属的柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)等7种球虫单独或混合感染肠道不同部位引起的一种肠道细胞内寄生性原虫病。目前,防治鸡球虫病主要依靠抗球虫药物,但长期的使用使球虫产生了耐药性,同时畜禽产品的药物残留影响人类的健康,使得利用免疫防治来取代药物治疗成为控制球虫病的必然。本试验对鸡柔嫩艾美耳球虫(农安株)建立了针对子孢子可溶性抗原的单克隆抗体细胞株并对E. tenella单链的轻重链可变区基因进行了扩增和序列分析。为以后进行E. tenella单链抗体的构建及特异性单链抗体基因与绿脓杆菌外毒素PE40重组毒素的构建、表达及活性测定奠定基础,该重组毒素有望成为对抗柔嫩艾美耳球虫病的新工具。本试验具体研究内容如下：1.鸡柔嫩艾美耳球虫子孢子特异性单抗的制备首先制备鸡柔嫩艾美耳球虫(农安株)子孢子可溶性抗原,即经过卵囊的复壮、收获、体外孢子化、纯化、研磨、胰酶脱囊、DEAE-52层析柱纯化、反复冻融、超声裂解,离心所得上清即为子孢子可溶性抗原。经紫外法测得抗原样品的浓度为330ug/ml。建立针对子孢子可溶性抗原的单克隆抗体细胞株,利用此抗原检测杂交瘤细胞上清液,获得阳性杂交瘤细胞叁株4C6、4D8、4E11,并对其进行克隆及扩大培养。2.鸡柔嫩艾美耳球虫子孢子单链抗体可变区基因的扩增与序列分析复苏分泌抗鸡柔嫩艾美耳球虫单克隆抗体杂交瘤细胞,达最佳生长状态后应用琼脂糖扩散法检测该杂交瘤细胞的活性。Trizol法提取活性高的杂交瘤细胞总RNA,琼脂糖凝胶电泳结果显示鸡柔嫩艾美耳球虫特异性杂交瘤细胞基因组RNA提取成功,A260/280值=1.96；根据GenBank上发表的鸡堆型艾美耳球虫单克隆抗体轻重链可变区相关序列(登录号AJ298107),合成特异性引物,以提取的RNA为模板,RT-PCR一步法扩增目的基因,将目的基因与pMD18-T载体连接,经PCR鉴定后,对阳性重组质粒进行测序。结果获得的轻链可变区基因的大小约321bp,重链可变区基因的大小约369bp。测序结果显示符合鸡抗体轻链可变区和重链可变区基因特征,但发现与抗原表位互补结合的互补决定区(CDR)基因有多数发生改变,且在轻链可变区基因的CDR3中有基因缺失现象。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
轻重链可变区基因论文参考文献
[1].郭银红.抗ER-α36单克隆抗体轻重链可变区基因的克隆和序列分析[D].浙江大学.2018
[2].李巍.鸡柔嫩艾美耳球虫子孢子单链抗体轻重链可变区基因的扩增与序列分析[D].吉林农业大学.2011
[3].种法政,徐辞,王石,郑君,赵权.抗猪囊尾蚴单克隆抗体轻重链可变区基因的扩增及序列分析[J].中国兽医学报.2009
[4].赵月兰,郭红斌,秦建华,康桂英,张磊.鸡堆型艾美耳球虫特异性单抗轻、重链可变区基因的克隆与序列测定[J].中国兽医学报.2009
[5].陆盛军,孙伟,李瑜,梁智辉,翁秀芳.大鼠源性杂交瘤TIB219的IgG轻、重链可变区基因克隆和序列分析[C].第六届全国免疫学学术大会论文集.2008
[6].种法政.抗猪囊尾蚴单克隆抗体轻重链可变区基因扩增和序列分析[D].吉林农业大学.2008
[7].秦建华,汪明,康桂英,赵月兰,包永占.堆型艾美耳球虫特异性单抗轻重链可变区基因的制备[J].中国兽医杂志.2007
[8].宁铂涛,汤永民,曹江,沈红强,钱柏芹.抗人CD14新克隆ZCH-7-2F9单抗轻重链可变区基因克隆与序列分析[J].浙江大学学报(医学版).2007
[9].褚敏,梁景平.抗黏性放线菌Ⅰ型菌毛蛋白单抗轻、重链可变区基因测序[J].牙体牙髓牙周病学杂志.2003
[10].高瀛岱.抗PGP单克隆抗体轻重链可变区基因及其应用[D].中国协和医科大学.2003