导读:本文包含了毛橘红论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献,主要关键词:一测多评法,毛橘红,光橘红,柚皮苷
毛橘红论文文献综述
李宇邦,肖凤霞,宋小欣,陈周华,林励[1](2018)在《一测多评法比较毛橘红与光橘红5种黄酮类成分含量》一文中研究指出目的建立一测多评法同时测定毛橘红与光橘红中5种黄酮类成分的含量,并进行分析。方法采用HPLC法,以柚皮苷为内参物,建立其与新橙皮苷、野漆树苷、柚皮素和芹菜素的相对校正因子,并利用相对校正因子计算毛橘红与光橘红样品中各成分含量。同时通过外标法计算各成分含量,并比较2种方法的差异。采用t检验比较分析毛橘红与光橘红中5种黄酮类成分含量。结果柚皮苷与新橙皮苷、野漆树苷、柚皮素、芹菜素的校正因子分别为0.898、1.519、0.313、0.406,RSD<3.0%。一测多评法与外标法计算得到的含量测定结果无显着差异。毛橘红与光橘红中的柚皮苷、野漆树苷、柚皮素含量存在显着差异。结论以柚皮苷为内参物建立的相对校正因子准确、可行,毛橘红与光橘红黄酮类成分存在很大差异,一测多评法可用于毛橘红与光橘红的质量控制。(本文来源于《中草药》期刊2018年02期)
李宇邦[2](2017)在《基于一测多评法对毛橘红与光橘红的质量比较研究》一文中研究指出目的:在2015年版《中国药典》基础上,筛选出质量合格的化橘红药材样品,系统建立适用于快速测定化橘红中5种黄酮类成分含量的一测多评法,并揭示两种来源化橘红(毛橘红与光橘红)之间的差异。方法:参考2015年版《中国药典》要求,首先建立用于一测多评法质量评价研究的化橘红药材的质量控制方法,对各批供试品进行水分、总灰分、水溶性浸出物和醇溶性浸出物的含量测定;通过性状鉴别、显微鉴别分析毛橘红与光橘红样品的外观性状和显微结构特征差异;采用2015年版《中国药典》薄层色谱法对化橘红药材进行薄层鉴别,并建立一种可有效区别毛橘红与光橘红样品的薄层色谱法;采用高效液相色谱法建立毛橘红与光橘红样品的HPLC指纹图谱,进行分析比较。通过以上方法,筛选出的合格的化橘红药材样品,建立一测多评法同时测定毛橘红与光橘红中柚皮苷、新橙皮苷、野漆树苷、柚皮素、芹菜素5种黄酮类成分的含量,运用相关系数法对一测多评法计算所得的5种黄酮类成分含量与传统外标法计算所得的黄酮类成分含量进行验证。采用一测多评法对毛橘红与光橘红药材进行质量比较。结果:1用于一测多评法的化橘红药材的质量控制1.1理化鉴别31批毛橘红样品的水分含量范围在7.77%~9.81%之间,平均水分含量为8.78%;17批光橘红样品的水分含量范围在7.68%~10.88%之间,平均水分含量为9.46%。31批毛橘红的总灰分含量范围在2.77%~4.57%之间,平均含量为3.59%;17批光橘红的总灰分含量范围在3.60%~4.88%之间,平均含量为4.19%。31批毛橘红样品与17批光橘红样品的水分含量均不超过11%,总灰分含量均不超过5.0%,符合2015年版《中国药典》要求。浸出物含量测定结果显示,毛橘红样品的水溶性浸出物(热浸法)含量范围在36.60%~49.45%之间,平均含量为42.77%;光橘红样品的水溶性浸出物(热浸法)含量范围在37.91%~48.16%之间,平均含量为43.37%。毛橘红样品的乙醇浸出物(热浸法)含量范围在20.52%~27.12%之间,平均含量为23.68%。光橘红样品的乙醇浸出物(热浸法)含量范围为18.27%~28.34%,平均含量为 23.85%。1.2性状鉴别与显微鉴别31批毛橘红表面观呈黄绿色至深褐色,外果皮密被白色茸毛,其粉末中除了含有光橘红粉末中可发现的表皮细胞、中果皮薄壁细胞、网纹导管、螺纹导管、草酸钙方晶外,还含有其特有的非腺毛,横切面显微结构中,表皮细胞类方形,有非腺毛分布,外缘可见1列油室,呈圆形或椭圆形。17批光橘红表面观呈黄棕色至深褐色,外果皮光滑无毛,中果皮薄壁细胞排列较疏松,表皮不含非腺毛,油室较大。1.3薄层色谱研究薄层色谱法(药典法)结果显示,化橘红样品在柚皮苷对照品相应位置上显示相同颜色的斑点。本实验所建立的薄层色谱法,在紫外光(365nm)下,在Rf=0.35与Rf=0.27处,毛橘红样品的乙醇提取部位在相应位置上没有显示斑点。光橘红样品的乙醇提取部位在Rf= 0.35处显示蓝色斑点,部分光橘红样品在Rf= 0.27处显示蓝色斑点。1.4HPLC指纹图谱研究HPLC指纹图谱显示,从毛橘红与光橘红样品共检出色谱峰24个,对其HPLC指纹图谱进行色谱峰匹配,其中21个为共有峰,8、17号峰为毛橘红特有峰,2号峰为光橘红特有峰。31批毛橘红的HPLC指纹图谱相似度在0.954~0.995之间,17批光橘红的HPLC指纹图谱相似度在0.905~0.999之间,相似度均达到0.90以上。2 一测多评法的建立以柚皮苷作为内参物,建立新橙皮苷、野漆树苷、柚皮素、芹菜素的相对校正因子分别为0.898、1.519、0.313、0.406,RSD<3.0%。运用相关系数法对一测多评法测定的毛橘红与光橘红的5种黄酮类成分进行验证,结果显示,一测多评法计算得到的5种黄酮类成分含量结果与外标法计算得到的5种黄酮类成分含量结果无显着差异。3 一测多评法评价毛橘红与光橘红药材质量采用一测多评对毛橘红与光橘红样品进行质量比较,结果显示,毛橘红柚皮苷含量在56.321 mg·g-1~274.513 mg·g-1之间,平均含量127.138 mg·g-1;新橙皮苷含量在0.032mg·g-1~0.163mg·g-1之间,平均含量0.085mg·g-1;野漆树苷含量在1.307mg·g-1~14.726mg·g-1之间,平均含量7.079mg·g-1;柚皮素含量在0.116 mg·g-1~1.162 mg·g-1 之间,平均含量 0.394 mg·g-1;芹菜素含量在 0.018 mg·g-1~0.094mg·g-1之间,平均含量0.05mg·g-1。光橘红柚皮苷含量在28.387mg·g-1~229.015 mg g-1之间,平均含量76.085 mg·g-1;新橙皮苷含量在0.040 mg·g-1~0.143 mg·g-1 之间,平均含量 0.078 mg·-1;野漆树苷含量在 0.857 mg·g-1~5.675 mg·g-1之间,平均含量2.488 mg·g-1;柚皮素含量在0.083 mg·g-1~0.373 mg·g-1之间,平均含量0.194 mg·g-1;芹菜素含量在0.017 mg·g-1~0.124 mg·g-1之间,平均含量0.052mg·g-1。独立t检验结果显示,毛橘红与光橘红的柚皮苷、野漆树苷、柚皮素成分的含量存在显着差异(P<0.05)。结论:1用于一测多评法的化橘红药材的质量控制所检化橘红样品的水分含量、总灰分含量、性状与显微鉴别、薄层鉴别等,均符合2015年版《中国药典》要求。初步拟定浸出物检查项,毛橘红与光橘红样品的水溶性浸出物(热浸法)不得少于33%,醇溶性浸出物(热浸法)不得少于18%。本实验所建立的薄层色谱法,色谱图斑点清晰、直观,可有效地区分毛橘红与光橘红。所建HPLC指纹图谱法可用于毛橘红与光橘红药材来源鉴别,可通过所测样品的特征峰准确区分化橘红样品的来源,所测毛橘红样品来源于化州柚,光橘红样品来源于柚。2一测多评法的建立一测多评法所建立的相对校正因子准确、可靠,可用于毛橘红与光橘红5种黄酮类成分的含量测定。通过一测多评法计算化橘红中5种黄酮类成分的含量,与传统外标法相比,该方法能在新橙皮苷、野漆树苷、柚皮素、芹菜素对照品紧缺的情况下,准确得到待测成分的含量,可降低实验成本。3 一测多评法评价毛橘红与光橘红药材质量毛橘红与光橘红在有效成分上存在差异,毛橘红的柚皮苷含量是光橘红柚皮苷含量的近一倍,毛橘红中野漆树苷、柚皮素含量是光橘红的数倍以上,毛橘红中的柚皮苷、野漆树苷、柚皮素成分含量显着高于光橘红。从药材来源上对毛橘红与光橘红区分,可提高化橘红的总体药材质量。(本文来源于《广州中医药大学》期刊2017-05-01)
张肖[3](2016)在《毛橘红抗氧化产品研制及其功效研究》一文中研究指出目的:化橘红(毛橘红)是广东化州特产的道地药材,富含具有抗氧化能力的黄酮类成分,是值得深入研发、加以利用的特产资源。因此,笔者开展了毛橘红原料品种筛选、毛橘红抗氧化产品的研制及其功效研究,以期为该广东特产资源的精深开发提供科学依据。方法:1.采用高效液相色谱(HPLC)法分别对不同品种毛橘红的柚皮苷、野漆树苷、柚皮素、芹菜素进行含量测定,采用HPLC法对不同品种的毛橘红药材指纹图谱进行研究,使用Stata软件对21批毛橘红药材指纹图谱进行聚类分析。对不同品种的毛橘红药材进行黄酮类成分含量测定,并对其体外清除DPPH自由基能力进行比较,初步探究不同品种毛橘红的黄酮类成分含量及其清除DPPH自由基能力的差异。2.采用水提醇沉法提取凤尾品种毛橘红中的总黄酮有效成分。采用DPPH法测定不同砧木树种芽接凤尾后所得毛橘红药材的提取物清除DPPH自由基的能力。利用包合技术将毛橘红总黄酮溶液制备成包合液,添加蜂蜜、苹果酸、木糖醇等辅料对毛橘红总黄酮包合液进行味道的调节和配制,加入1Og/L壳聚糖溶液作为口服液的澄清剂,加入量为溶液总体积的8%,冷藏静置24 h后,滤过,滤液使用全自动灌封机灌封,并进行灭菌检漏。3.采用DPPH法测定毛橘红口服液体外清除DPPH自由基的能力;对溴代苯肝脂质过氧化小鼠灌胃低、中、高(3.0、6.0、9.0 mg.kg-1)叁组剂量的毛橘红口服液,30天后利用试剂盒测定实验小鼠血清和肝脏中SOD、GSH-Px两种抗氧化功能酶的活性,初步评价该毛橘红口服液的抗氧化能力。结果:1.假西洋、凤尾、金钱肚、黄绒果、大茶岭、密叶金毛、光青七个品种原料药材中柚皮苷含量分别为:93.03 mg/g、121.26 mg/g、99.51 mg/g、110.13 mg/g、101.43 mg/g、107.22 mg/g、66.28mg/g,野漆树苷含量分别为:2.04 mg/g、4.35mg/g、2.31mg/g、4.13mg/g、4.04 mg/g、2.97 mg/g、0.71 mg/g,柚皮素含量分别为:0.57 mg/g、0.91 mg/g、0.69 mg/g、0.80 mg/g、0.85 mg/g、0.63 mg/g、0.37 mg/g,芹菜素含量分别为:0.325 mg/g、0.236 mg/g、0.308 mg/g、0.327 mg/g、0.261 mg/g、0.316 mg/g、0.156 mg/g。DPPH 自由基的清除率 SA%分别为:14.3、22.6、14.8、21.8、20.2、15.9、6.2。指纹图谱研究表明:21批不同栽培品种毛橘红药材指纹图谱相似度均≥0.90,符合要求。10个共有峰中第一大峰为柚皮苷,第二大峰为野漆树苷。2.不同砧木树种芽接凤尾所得毛橘红药材的提取物清除自由基能力结果表明:凤尾毛橘红与本地柚芽接凤尾这两个品种的野漆树苷含量均在0.5%以上,且其体外清除DPPH自由基能力较强,SA%均高于20.0;凤尾植株分别经枳壳和沙田柚两品种砧木芽接后,野漆树苷含量均降低至0.2%以下,其体外清除自由基能力SA%均低于 11.0。毛橘红口服液100mL配方为:取毛橘红总黄酮包合液(柚皮苷含量:25mg/mL)20 mL,加入800%蜂蜜20 mL、苹果酸3g、木糖醇2g,纯化水60 mL。加入8ml的浓度为10g/L的壳聚糖溶液,静置滤过,所得口服液柚皮苷含量为48.0-52.Omg/mL。3.1mg/mL柚皮苷清除DPPH自由基的平均清除率SA(%)为51.55。正常对照组实验小鼠血清中SOD、GSH-PX抗氧化酶的活性分别为:5744.19±73.73、310.61±9.78,灌胃毛橘红口服液的高剂量组实验小鼠血清中SOD、GSH-PX 抗氧化酶的活性分别为:6289.88±279.39、565.63±39.28。经Stata/SE 11.0统计软件计算,差异均具有显着性意义,P<0.01;模型组实验小鼠肝脏内SOD、GSH-PX抗氧化酶的活性分别为66.40±7.07、176.42±6.87,灌胃毛橘红口服液的高剂量组实验小肝脏内中SOD、GSH-PX抗氧化酶的活性分别为:81.11±5.35、429.29±10.15。经Stata/SE 11.0统计软件计算,差异均具有显着性意义,P<0.01。结论:1.不同批次毛橘红指纹图谱与对照指纹图谱相似度不得低于0.90。对比21批不同品种毛橘红有效成分含量进行分析,综合评价选出凤尾是含有效成分较高的毛橘红品种。通过对不同品种毛橘红中所含有效成分及其清除DPPH自由基能力测定,优选出凤尾品种作为本次实验所用原料药材。2.采用水提醇沉法提取毛橘红总黄酮,方法简单可靠。芽接砧木的选择能显着影响毛橘红药材野漆树苷含量及其清除自由基的能力,应选择本地柚作为毛橘红芽接的砧木。利用蜂蜜、苹果酸、木糖醇对总黄酮溶液进行矫味,口感酸甜适中;可利用壳聚糖作为澄清剂,应用于毛橘红口服液产品的制备。3.毛橘红口服液具有一定的清除体外自由基的能力;适宜剂量的毛橘红口服液可以提高溴代苯模型小鼠血清和肝脏中SOD、GSH-PX两种抗氧化酶的活性,表明该口服液具有一定的抗氧化功效。(本文来源于《广州中医药大学》期刊2016-03-01)
林靖然[4](2014)在《毛橘红中野漆树苷的提取及其药动学研究》一文中研究指出目的:确立毛橘红中野漆树苷的提取纯化工艺,并研究野漆树苷的肠道吸收特点及其在大鼠血液、组织中的药物代谢动力学特征,以期探索野漆树苷的体内吸收、分布过程,为该化合物及毛橘红总黄酮的深入研究提供实验依据,从而促进毛橘红资源的开发利用。方法:1.采用渗漉法结合重结晶法提取纯化野漆树苷,并用TLC、IR、LC-MS/MS、UV等方法对所制备的野漆树苷样品进行鉴别,UPLC法检测其纯度。2.应用UPLC-UV法测定大鼠肠灌流液中野漆树苷的浓度。ACQUITY BEH C18色谱柱(3.0mm×100mm,1.7μm);流动相为甲醇(A):0.5%乙酸水溶液(B)(48:52);流速为0.3ml/min;柱温为30℃;检测波长:337nm;进样体积2uL。3.利用在体单向肠灌流模型,研究野漆树苷溶液在大鼠十二指肠、空肠、回肠和结肠的吸收,并考察不同质量浓度对十二指肠上端至空肠下端吸收的影响。4.用溶剂沉淀蛋白法预处理血浆样品后,利用UPLC-UV法测定大鼠血浆中野漆树苷的浓度。ACQUITY BEHC18 色谱柱(3.0mm×100mm,1.7um);流动相为甲醇(A):0.5%乙酸水溶液(B),梯度洗脱;梯度洗脱:0~2min,48%A~75%A;2~4min,75%A~48%A;4~5min,48%A~48%A,流速为0.3ml/min;柱温为30℃;检测波长:337nm;进样体积2uL。内标物为木犀草素。5.对大鼠静脉注射低、中、高叁组剂量(20mg/kg、30mg/kg、40mg/kg)野漆树苷,分别于给药 2min、5min、10min、15min、30min、45min、60min、75min、90min和120min后从大鼠眼底静脉丛取血0.5mL,按血浆预处理方法处理后,用建立的UPLC法测定不同取样点血浆中野漆树苷的浓度,并根据所得的血药浓度-时间曲线,分析其药物动力学参数。6.用溶剂蛋白沉淀法预处理组织样品后,采用UPLC-UV法测定大鼠组织样品中野漆树苷的浓度。ACQUITY BEH(C18色谱柱(3.0mm×100mm,1.7u m);流动相为甲醇(A):0.5%乙酸水溶液(B),梯度洗脱;梯度洗脱:1~3min,35%A~75%A;3~4min,75%A~750%A;4~6min,75%~35%;流速为0.3ml/min;柱温为30℃;检测波长:337nm;进样体积2uL。内标物为木犀草素。7.通过大鼠静脉注射给药(40mg/kg),于给药后10min、30min及60min3个时间点(分别代表分布,平衡,消除相)将大鼠拉断脊椎处死,每个时间点一组,每组6只,雌雄各半。处死后立即解剖,分别取出心、肝、脾、肺,肾、胃、肠共7种组织制备组织匀浆,并用建立的UPLC法测定不同取样点组织匀浆中野漆树苷的浓度。结果:1.野漆树苷的提取纯化制备所得野漆树苷单体运用薄层色谱鉴别,结果显示,其与野漆树苷标准品相比具有相同的比移值Rf=0.50;所得野漆树苷单体红外分析,与标准品的红外光谱一致;质谱测得分子量为578.09;综合分析,鉴定样品为野漆树苷。在不同色谱条件下(ACQUITY BEH C18 色谱柱(3.0mm×100mm,1.7um);流动相:甲醇:水(45:55)、乙腈-水(30:70)、甲醇:乙腈:0.5%乙酸水(30:10:60);流速为0.3ml/min;柱温为30℃;检测波长:337nm、283nm、267nm;进样体积2uL)采用UPLC测定野漆树苷,经面积归一化法计算,其纯度≥98%,可作为定性定量对照品使用,同时纯度满足药动学研究的要求。2.灌流液中野漆树苷浓度测定方法的建立实验表明,灌流液中的内源性物质不干扰野漆树苷的测定。同时,经方法学确认,野漆树苷在2~24ug/mL的浓度范围,线性关系良好,相关系数R2=0.9999;日内精密度RSD在0.40%~0.60%范围之内,日间精密度RSD在0.25%~1.07%范围内;方法回收率在96.11%~104.91%之间。由此表明,本方法适用于野漆树苷大鼠在体肠吸收的研究。3.在体单向肠灌流实验研究研究结果表明,各肠段的表观吸收系数(Papp)均大于0.2×10-4cm/s,表明野漆树苷在整个肠段吸收良好,其中十二指肠的Papp与表观吸收速率(Ka)最高,与其他肠段相比具有显着差异,说明十二指肠是野漆树苷的主要吸收部位。通过考察不同浓度野漆树苷对吸收的影响,发现不同浓度之间的Ka是趋于平衡的,并无显着性差异(P>0.05),且Papp随着药物浓度增加而增大,野漆树苷的吸收机制可能为被动扩散。4.血浆中野漆树苷UPLC测定方法的建立在该色谱条件下,血浆中的内源性物质不干扰野漆树苷样品的测定,并经方法学确认,野漆树苷在0.1~100.0ug/mL浓度范围内呈线性,相关系数R2=0.9997;日内精密度RSD在0.01%~1.53%范围之内,日间精密度RSD在0.44%~1.32%范围内;提取回收率在81.9%~85.7%之间。表明本方法适用于野漆树苷在大鼠体内的药物动力学研究。5.大鼠体内血浆药动学研究实验结果显示,野漆树苷在SD大鼠的体内过程符合二室模型,T1/2α分别为3.62、3.76 及 3.71 min;T1/2β分别为 17.00、21.66 及 23、70 min。K12分别为 0.081、0.077和 0.080 min-1;K21 分别为 0.059、0.044 和 0.042 min-1;AUC(0-t)分别为 590.36、1362.91及1823.49。药动学参数显示,野漆树苷在大鼠体内的吸收、分布、消除较快,静脉注射野漆树苷2min后体内浓度达到高峰,且血药浓度随时间成一级动力学消除,120min后,血浆中药物浓度基本检测不到。6.组织样品中野漆树苷UPLC测定方法的建立在该色谱条件下,各组织中的内源性物质不干扰野漆树苷样品的测定,且经方法学确认,野漆树苷在各组织样品的浓度范围内,均呈良好的线性,相关系数R2≥0.9993;日内精密度RSD在0.06%~0.36%范围之内,日间精密度RSD在0.58%~2.01%范围内;提取回收率在86.11%~91.49%之间,相对回收率在98.79%~101.69%之间;整体分析时间为6min,说明本方法适用于野漆树苷在大鼠体内的组织分布研究。7.野漆树苷在大鼠体内的组织分布研究实验表明,野漆树苷在大鼠体内分布广泛,各组织器官均有分布,其中以肝脏、肾脏分布最高,其次为肠、肺、胃,而脾、心的药物浓度分布较低。结论:建立的生物样品中野漆树苷UPLC测定方法,灵敏度高、精密度好、回收率高,适用于野漆树苷在大鼠体内的药物动力学相关研究。同时,野漆树苷在整个肠段吸收良好,其中十二直肠为主要吸收部分,吸收机制可能为被动扩散。野漆树苷在大鼠体内过程符合二室模型分布,并以一级动力学方式消除,在体内分布和消除均相对较快。此外,野漆树苷在大鼠体内主要分布在肝脏、肾脏,其次为肠、肺、胃,其中脾、心的药物浓度分布较低。(本文来源于《广州中医药大学》期刊2014-06-01)
王铁杰,宋茜,江坤,王平,殷果[5](2014)在《毛橘红与光橘红的HPLC药效指纹图谱比较研究》一文中研究指出目的:建立能代表毛橘红与光橘红止咳、祛痰、抗炎药效的HPLC指纹图谱,并比较两者的差异。方法:采用小鼠氨水引咳法、酚红排泄法和二甲苯致耳肿胀法对毛橘红和光橘红进行止咳、祛痰和抗炎作用研究。采用HPLC法建立指纹图谱。色谱柱为Shiseido Capcell Pak C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为甲醇(A)-0.5%醋酸水溶液(B),二元梯度洗脱(0 min,10%A→20%A;10 min,20%A→40%A;30 min,40%A→49%A;85 min,49%A→90%A);检测波长为320 nm;柱温为30℃;流速为1.0 mL·min-1。分别采用"中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012.1版本)"和SPSS 17.0对谱图进行相似度分析和聚类分析。结果:毛橘红与光橘红70%乙醇提取物均具有止咳、祛痰和抗炎作用,毛橘红优于光橘红。毛橘红与光橘红的指纹图谱分别有18和17个共有峰,从对照指纹图谱和聚类分析结果看,两者存在明显差异。结论:建立了基于药效的毛橘红与光橘红70%乙醇提取物的HPLC指纹图谱,该分析方法专属、灵敏、准确,为毛橘红与光橘红的鉴别及该药品有效性质量控制提供参考。毛橘红与光橘红药效成分指纹图谱差异显着,质量标准中可以分别建立毛橘红和光橘红的指纹图谱的检测。(本文来源于《药物分析杂志》期刊2014年05期)
伍柏坚,陈康,林励,黄晓丹[6](2014)在《毛橘红传统产地加工工艺的探讨及优化》一文中研究指出【目的】对毛橘红传统产地烫煮工艺的必要性进行探讨,优化并规范毛橘红产地加工工艺。【方法】采用紫外分光光度法和高效液相色谱法分别测定毛橘红中总黄酮和柚皮苷含量,醚提质量法测定毛橘红醚提物含量;以3者含量为考察指标,采用均匀设计法对毛橘红产地加工工艺进行考察、优化。【结果】经过烫煮后烘干的毛橘红的总黄酮和柚皮苷含量较采收后直接烘干的高;优化的烫煮炮制工艺条件为:毛橘红鲜果置80℃水中烫煮1 min,取出稍晾干后于70℃烘焙80 h。【结论】毛橘红传统烫煮加工工艺具有一定的必要性与科学性;优选的毛橘红产地加工工艺可行。(本文来源于《广州中医药大学学报》期刊2014年02期)
张旭倩[7](2013)在《毛橘红总黄酮对乙醇体外诱导脂肪变性L 02细胞的影响》一文中研究指出目的:通过对毛橘红总黄酮(CGTF)进行质量控制,确保其质量稳定、可控的条件下,研究CGTF对酒精性脂肪肝L 02细胞模型的影响,初步探讨其抗酒精性脂肪肝的药效和作用机制,为CGTF的开发提供研究基础和科学依据。方法:1.采用水提醇沉法对CGTF进行提取分离,应用分光光度法测定CGTF含量,应用UPLC法测定CGTF中柚皮苷含量,并对不同品种药材的CGTF指纹图谱进行研究,通过以上指标综合对CGTF进行质量控制。2.体外培养L 02细胞,采用MTT法筛选乙醇诱导L 02肝细胞脂肪变性的适宜浓度以及CGTF进行干预的最适浓度;采用倒置显微镜观察空白组、模型组、给药组细胞形态,并检测各组培养液中乳酸脱氢酶(LDH)含量,采用AnnexinV/PI试验和流式细胞仪检测细胞凋亡率;采用油红O染色法通过倒置显微镜观察不同组别细胞中脂滴生成情况,并采用酶标仪-试剂盒法检测细胞培养基中谷草转氨酶(ALT)、谷丙转氨酶(AST)泄露量以及细胞内甘油叁酯(TG)、总胆固醇(TC)水平;并通过酶标仪-试剂盒法检测抗氧化指标谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量,以及丙二醛(MDA)含量:采用荧光分光光度法检测细胞内活性氧(ROS);采用Western-blot法检测各组细胞中固醇调节元件结合蛋白-1 c(SREBP-1 c)和过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR-α)蛋白的表达量。结果:1.制备得到质量均一、稳定的CGTF本课题采用醇水处理法对CGTF进行提取分离,工艺路线简单,精制工艺少,适合工业化生产;提取出的总黄酮直接与铝盐反应显色进行含量测定,方法简便易行,提取率均在80%以上;对4批CGTF提取物中柚皮苷含量进行分析,发现柚皮苷含量均占总黄酮提取物的73.16%~80.09%之间;对11批不同品种来源的CGTF进行指纹图谱分析,结果显示,其有15个共有峰,各共有峰保留时间一致,RSD均小于0.2%,而峰面积有较大差异,但共有峰面积均占总面积99%以上,其中8号峰为柚皮苷,10号峰为野漆树苷,11号峰为柚皮素。2.CGTF对乙醇体外诱导脂肪变性L 02细胞的影响结果2.1酒精以及CGTF对L 02细胞增殖的影响:MTT实验显示,0.3%乙醇对L 02细胞增殖有促进作用,0.6%乙醇作用后细胞存活率均在80%以上,随着酒精浓度逐渐增大,细胞存活率逐渐下降,并随时间延长而加剧,因此选用0.6%的乙醇浓度作为最适浓度。CGTF干预组剂量低于250μg/mL时,促进L02细胞增殖,但规律性不明显。但随着浓度增加,超过250μg/mL时,结晶析出,细胞浓度达到1000μg/mL时,结晶大量析出,但细胞存活率仍在70%以上,说明CGTF低毒性的特点。2.2 CGTF对酒精性脂肪肝L 02细胞模型常规指标的影响:油红O染色结果显示,对比空白组,模型组细胞肿胀明显,胞浆内含有大小不一被染成橘红色的脂滴,CGTF干预组与模型组相比,细胞内脂滴数量和大小均有所减轻,并呈现一定的剂量依赖性;用0.6%乙醇干预L 02细胞后,与空白组相比培养液中AST、ALT泄漏量明显增加,差异具有统计学意义(P<0.01),CGTF干预组与模型组相比,浓度为10μg/mL时,上述指标含量降低,差异有统计学意义(P<0.05),当浓度大于10μg/mL时,差异异常显着(P<0.01);TG检测结果显示,模型组对比空白组,差异具有统计学意义(P<0.01),提示已成功制备酒精性脂肪肝细胞模型,不同浓度CGTF进行干预后,浓度为10μg/mL时,差异有统计学意义(P<0.05),当浓度大于10μg/mL时,差异异常显着(P<0.01);TC检测结果显示,模型组与空白组相比,差异具有显着性(P<0.05),CGTF浓度为100μg/mL时,差异有统计学意义(P<0.05),当浓度为250μg/mL时,差异异常显着(P<0.01)。2.3 CGTF对酒精性脂肪肝L 02细胞模型损伤的影响:L 02细胞形态学观察显示模型组相对空白组细胞量相对减少、且细胞略显肿胀,CGTF干预组细胞形态与正常组相似;LDH测定结果显示模型组与空白组相比,差异具有统计学意义(P<0.05),用浓度为10Oμg/mL和250μg/mL进行干扰时,与模型组相比,差异具有统计学意义(P<0.05);Annexin-Ⅴ/PI细胞凋亡实验结果显示,0.6%酒精浓度诱导细胞,模型与空白组相比,差异没有统计学意义(P>0.05),干预组与模型组相比,其凋亡率降低不显着,差异不具有统计学意义(P>0.05)。2.4 CGTF对酒精性脂肪肝L 02细胞模型氧化应激水平的影响:氧化应激指标检测结果发现,SOD模型组与空白组相比,差异具有统计学意义,(P<0.05),当CGTF浓度为250μg/mL时,与模型组相比,差异有统计学意义(P<0.05);模型组肝细胞内的GSH含量与空白组相比,差异具有统计学意义(P<0.01),当浓度为100μg/mL和250μg/mL时,与模型组相比差异具有统计学意义(P<0.05);MDA检测结果发现,模型组与空白组相比,差异具有统计学意义(P<0.01),当CGTF浓度为100μg/mL和250μg/mL时,与模型组相比差异具有统计学意义(P<0.05);ROS检测结果显示,模型组与空白组相比,差异具有统计学意义(P<0.01),当浓度为50μg/mL、100μg/mL和250μg/mL时,与模型组相比差异具有统计学意义(P<0.01)。2.5 CGTF对酒精性脂肪肝L 02细胞模型保护作用机制研究:Western Blot检测CGTF干预酒精诱导L 02脂肪肝细胞模型中SREBP-1c和PPAR-α蛋白表达量。SREBP-1c蛋白测定结果显示模型组与空白组相比,SREBP-1c蛋白表达量增加(P<0.01),CGTF干预组与模型组比较,随CGTF浓度增加,SREBP-1c蛋白表达量降低,浓度高于10μg/mL时,差异具有显着性(P<0.05),当浓度大于10μg/mL时,差异异常显着(P<0.01),并呈现一定的剂量依赖性;PPAR-α蛋白测定结果显示,模型组与空白组相比,差异具有统计学意义(P>0.05),CGTF浓度高于10μg/mL时,PPAR-α蛋白表达量增加,并且差异具有显着性(P<0.01)。结论:1.CGTF质量可控、均一本实验制备的CGTF为淡黄色或黄绿色粉末,味苦。粉末中总黄酮含量不低于80%,柚皮苷含量不低于73%,不同品种CGTF指纹图谱具有15个共有峰,各共有峰保留时间一致,共有峰总面积占99%以上,相似度在0.98以上,。2.CGTF可能是通过保护细胞损伤、抗氧化应激、参与调节与脂肪代谢有关的酶类等综合作用保护酒精性脂肪肝L 02细胞模型。MTT实验结果提示用0.6%(V/V)的酒精进行诱导L 02细胞造模,选择10、50、100和250μg/mL的CGTF进行干预。油红O染色实验以及AST、ALT、TG、TC等检测结果均显示造模成功,且操作简单,时程短,不同浓度CGTF进行干预后,各指标病变程度均有所减轻。实验从保护细胞损伤角度探讨了 CGTF对酒精致L 02脂肪肝细胞模型的保护作用,0.6%酒精通过增加LDH含量造成细胞损伤,但未引起细胞凋亡,CGTF可通过降低LDH防止L 02细胞损伤,但对0.6%酒精作用下的细胞凋亡影响不大。从CGTF抗氧化应激角度讲,0.6%的酒精可以造成细胞内氧化应激,细胞内ROS、MDA含量增加,并且降低抗氧化物的含量;CGTF可以通过提高细胞抗氧化物质水平—GSH和SOD的含量,并降低MDA和ROS的含量来提高细胞抗氧化能力。从CGTF对参与调节与脂肪代谢有关的酶类的影响角度讲,酒精作用导致参与脂肪代谢的SREBP-1c上调和PPAR-α蛋白下调,而CGTF可以抑制SREBP-1c蛋白表达、促进PPAR-α蛋白表达,使细胞脂肪代谢恢复正常,从而达到保护细胞的作用。(本文来源于《广州中医药大学》期刊2013-04-01)
肖凤霞,张旭倩,邓少东,邓超明,邓韬[8](2012)在《毛橘红总黄酮对酒精性肝损伤大鼠肝组织病理的影响》一文中研究指出目的探讨毛橘红总黄酮在组织及细胞水平对酒精性肝损伤模型的影响。方法将雄性大鼠随机分为正常对照组、模型组、五子衍宗丸组(阳性药对照)及毛橘红总黄酮高、中、低剂量组,采用白酒灌胃造成酒精性肝损伤模型,造模同时进行药物治疗,28 d后取各组大鼠肝组织,常规HE染色,光镜观察。用乙醇体外诱导L-02肝细胞损伤,分别加入不同浓度的毛橘红总黄酮作用于L-02酒精性肝损伤细胞,检测培养液中丙氨酸氨基转移酶(ALT)和门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性,MTT法检测肝细胞存活率。结果模型组肝呈典型酒精肝组织病变特征,毛橘红总黄酮各剂量组脂变程度、水肿程度以及炎性程度均有不同程度减轻;毛橘红总黄酮可显着降低L-02酒精性肝损伤细胞模型中的ALT、AST含量,增加细胞存活率。结论毛橘红总黄酮对大鼠酒精性肝病理损伤及L-02酒精性肝损伤细胞有一定保护作用。(本文来源于《中药新药与临床药理》期刊2012年06期)
陈南迪,方妙玉,于超凡,林励,赵红英[9](2012)在《毛橘红总黄酮指纹图谱与其抗氧化活性的谱效关系研究》一文中研究指出【目的】研究毛橘红总黄酮指纹图谱与其抗氧化活性的谱效关系。【方法】采用高效液相色谱(HPLC)法制备毛橘红总黄酮指纹图谱,按中国药典法进行抗氧化作用强度的测定。应用灰关联(GM)数学模型计算各色谱峰与抗氧化活性的灰关联度,采用逐步多元回归对指纹色谱峰进行回归、筛选,并结合广义回归人工神经网络(GRNN)进行抗氧化性预测。【结果】筛选出对抗氧化作用有统计学意义(P<0.05)的4个峰,GRNN预测模型显示筛选后的预测误差显着小于筛选前的预测误差(P<0.05)。【结论】灰关联与逐步多元回归结合的方法可阐明毛橘红总黄酮指纹图谱与抗氧化活性间的谱效关系,GRNN法可较好地预测毛橘红谱峰的抗氧化强度。(本文来源于《广州中医药大学学报》期刊2012年06期)
王莲婧,林励,魏航,佘丹,黄小龙[10](2012)在《不同栽培品种毛橘红药材HPLC指纹图谱》一文中研究指出目的:探讨化州柚栽培品种间的质量差异,为寻找良种提供科学依据。方法:采用HPLC建立化州市绿色生命有限公司GAP基地不同栽培品种毛橘红药材指纹图谱,采用国家药典委员会"中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004 A版"软件进行相似度分析及品种判定。结果:不同栽培品种样品指纹图谱整体特征相似,18个共有峰峰面积相似度在0.938~0.998,利用相似度软件判定栽培品种成功率为92%。结论:应用该法可较好地判别毛橘红药材质量优劣及品种来源,并可为化州柚良种寻找提供技术手段和科学依据。(本文来源于《中国中药杂志》期刊2012年20期)
毛橘红论文开题报告
(1)论文研究背景及目的
此处内容要求:
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例:
目的:在2015年版《中国药典》基础上,筛选出质量合格的化橘红药材样品,系统建立适用于快速测定化橘红中5种黄酮类成分含量的一测多评法,并揭示两种来源化橘红(毛橘红与光橘红)之间的差异。方法:参考2015年版《中国药典》要求,首先建立用于一测多评法质量评价研究的化橘红药材的质量控制方法,对各批供试品进行水分、总灰分、水溶性浸出物和醇溶性浸出物的含量测定;通过性状鉴别、显微鉴别分析毛橘红与光橘红样品的外观性状和显微结构特征差异;采用2015年版《中国药典》薄层色谱法对化橘红药材进行薄层鉴别,并建立一种可有效区别毛橘红与光橘红样品的薄层色谱法;采用高效液相色谱法建立毛橘红与光橘红样品的HPLC指纹图谱,进行分析比较。通过以上方法,筛选出的合格的化橘红药材样品,建立一测多评法同时测定毛橘红与光橘红中柚皮苷、新橙皮苷、野漆树苷、柚皮素、芹菜素5种黄酮类成分的含量,运用相关系数法对一测多评法计算所得的5种黄酮类成分含量与传统外标法计算所得的黄酮类成分含量进行验证。采用一测多评法对毛橘红与光橘红药材进行质量比较。结果:1用于一测多评法的化橘红药材的质量控制1.1理化鉴别31批毛橘红样品的水分含量范围在7.77%~9.81%之间,平均水分含量为8.78%;17批光橘红样品的水分含量范围在7.68%~10.88%之间,平均水分含量为9.46%。31批毛橘红的总灰分含量范围在2.77%~4.57%之间,平均含量为3.59%;17批光橘红的总灰分含量范围在3.60%~4.88%之间,平均含量为4.19%。31批毛橘红样品与17批光橘红样品的水分含量均不超过11%,总灰分含量均不超过5.0%,符合2015年版《中国药典》要求。浸出物含量测定结果显示,毛橘红样品的水溶性浸出物(热浸法)含量范围在36.60%~49.45%之间,平均含量为42.77%;光橘红样品的水溶性浸出物(热浸法)含量范围在37.91%~48.16%之间,平均含量为43.37%。毛橘红样品的乙醇浸出物(热浸法)含量范围在20.52%~27.12%之间,平均含量为23.68%。光橘红样品的乙醇浸出物(热浸法)含量范围为18.27%~28.34%,平均含量为 23.85%。1.2性状鉴别与显微鉴别31批毛橘红表面观呈黄绿色至深褐色,外果皮密被白色茸毛,其粉末中除了含有光橘红粉末中可发现的表皮细胞、中果皮薄壁细胞、网纹导管、螺纹导管、草酸钙方晶外,还含有其特有的非腺毛,横切面显微结构中,表皮细胞类方形,有非腺毛分布,外缘可见1列油室,呈圆形或椭圆形。17批光橘红表面观呈黄棕色至深褐色,外果皮光滑无毛,中果皮薄壁细胞排列较疏松,表皮不含非腺毛,油室较大。1.3薄层色谱研究薄层色谱法(药典法)结果显示,化橘红样品在柚皮苷对照品相应位置上显示相同颜色的斑点。本实验所建立的薄层色谱法,在紫外光(365nm)下,在Rf=0.35与Rf=0.27处,毛橘红样品的乙醇提取部位在相应位置上没有显示斑点。光橘红样品的乙醇提取部位在Rf= 0.35处显示蓝色斑点,部分光橘红样品在Rf= 0.27处显示蓝色斑点。1.4HPLC指纹图谱研究HPLC指纹图谱显示,从毛橘红与光橘红样品共检出色谱峰24个,对其HPLC指纹图谱进行色谱峰匹配,其中21个为共有峰,8、17号峰为毛橘红特有峰,2号峰为光橘红特有峰。31批毛橘红的HPLC指纹图谱相似度在0.954~0.995之间,17批光橘红的HPLC指纹图谱相似度在0.905~0.999之间,相似度均达到0.90以上。2 一测多评法的建立以柚皮苷作为内参物,建立新橙皮苷、野漆树苷、柚皮素、芹菜素的相对校正因子分别为0.898、1.519、0.313、0.406,RSD<3.0%。运用相关系数法对一测多评法测定的毛橘红与光橘红的5种黄酮类成分进行验证,结果显示,一测多评法计算得到的5种黄酮类成分含量结果与外标法计算得到的5种黄酮类成分含量结果无显着差异。3 一测多评法评价毛橘红与光橘红药材质量采用一测多评对毛橘红与光橘红样品进行质量比较,结果显示,毛橘红柚皮苷含量在56.321 mg·g-1~274.513 mg·g-1之间,平均含量127.138 mg·g-1;新橙皮苷含量在0.032mg·g-1~0.163mg·g-1之间,平均含量0.085mg·g-1;野漆树苷含量在1.307mg·g-1~14.726mg·g-1之间,平均含量7.079mg·g-1;柚皮素含量在0.116 mg·g-1~1.162 mg·g-1 之间,平均含量 0.394 mg·g-1;芹菜素含量在 0.018 mg·g-1~0.094mg·g-1之间,平均含量0.05mg·g-1。光橘红柚皮苷含量在28.387mg·g-1~229.015 mg g-1之间,平均含量76.085 mg·g-1;新橙皮苷含量在0.040 mg·g-1~0.143 mg·g-1 之间,平均含量 0.078 mg·-1;野漆树苷含量在 0.857 mg·g-1~5.675 mg·g-1之间,平均含量2.488 mg·g-1;柚皮素含量在0.083 mg·g-1~0.373 mg·g-1之间,平均含量0.194 mg·g-1;芹菜素含量在0.017 mg·g-1~0.124 mg·g-1之间,平均含量0.052mg·g-1。独立t检验结果显示,毛橘红与光橘红的柚皮苷、野漆树苷、柚皮素成分的含量存在显着差异(P<0.05)。结论:1用于一测多评法的化橘红药材的质量控制所检化橘红样品的水分含量、总灰分含量、性状与显微鉴别、薄层鉴别等,均符合2015年版《中国药典》要求。初步拟定浸出物检查项,毛橘红与光橘红样品的水溶性浸出物(热浸法)不得少于33%,醇溶性浸出物(热浸法)不得少于18%。本实验所建立的薄层色谱法,色谱图斑点清晰、直观,可有效地区分毛橘红与光橘红。所建HPLC指纹图谱法可用于毛橘红与光橘红药材来源鉴别,可通过所测样品的特征峰准确区分化橘红样品的来源,所测毛橘红样品来源于化州柚,光橘红样品来源于柚。2一测多评法的建立一测多评法所建立的相对校正因子准确、可靠,可用于毛橘红与光橘红5种黄酮类成分的含量测定。通过一测多评法计算化橘红中5种黄酮类成分的含量,与传统外标法相比,该方法能在新橙皮苷、野漆树苷、柚皮素、芹菜素对照品紧缺的情况下,准确得到待测成分的含量,可降低实验成本。3 一测多评法评价毛橘红与光橘红药材质量毛橘红与光橘红在有效成分上存在差异,毛橘红的柚皮苷含量是光橘红柚皮苷含量的近一倍,毛橘红中野漆树苷、柚皮素含量是光橘红的数倍以上,毛橘红中的柚皮苷、野漆树苷、柚皮素成分含量显着高于光橘红。从药材来源上对毛橘红与光橘红区分,可提高化橘红的总体药材质量。
(2)本文研究方法
调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
毛橘红论文参考文献
[1].李宇邦,肖凤霞,宋小欣,陈周华,林励.一测多评法比较毛橘红与光橘红5种黄酮类成分含量[J].中草药.2018
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[3].张肖.毛橘红抗氧化产品研制及其功效研究[D].广州中医药大学.2016
[4].林靖然.毛橘红中野漆树苷的提取及其药动学研究[D].广州中医药大学.2014
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