导读:本文包含了高效植物表达载体论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:热纤梭菌,嗜热阿魏酸酯酶,碳水化合物结合域,酶学特性
高效植物表达载体论文文献综述
刘奕彤[1]（2017）在《热纤梭菌阿魏酸酯酶的酶学特性分析及其植物高效表达载体构建》一文中研究指出阿魏酸和半纤维素、木质素共价交联形成木质素—阿魏酸—阿拉伯木聚糖复合物,是禾本科植物细胞壁形成坚固抗降解屏障的重要分子基础。在植物中异源表达阿魏酸酯酶(Ferulic acid esterase,FAE),可水解细胞壁中的阿魏酸酯键,促进细胞壁解聚,有效降低木质纤维素降解转化的成本,但目前仍面临转基因的常温FAE酶活性干扰宿主植物生长发育、降低抗逆性等技术挑战,而采用嗜热FAE酶基因进行遗传转化是一种重要的替代策略。本文对一种来源于热纤梭菌(Clostridium thermocellum)的嗜热FAE酶的酶学特性开展了系统的研究,并构建了该嗜热FAE酶编码基因的植物高效表达载体,为培育木质纤维素易降解的新型能源植物奠定了基础,其主要研究结果如下:1)分别克隆了热纤梭菌C.thermocellum XynZ的阿魏酸酯酶催化域(FAE)及该阿魏酸酯酶催化域和碳水化合物结合域(FAE-CBM6)编码基因,与pET22b连接分别构建了原核表达重组质粒pET22b-FAE和pET22b-FAE-CBM6,并在大肠杆菌BL21(DE-3)中实现异源表达,分别获得分子量约为29.0 kDa和45.0 kDa的重组蛋白产物。2)分析比较了温度、pH、底物、金属离子等因子对FAE和FAE-CBM6这两种重组嗜热阿魏酸酯酶活性的影响。结果表明,它们的最适温度分别为60℃和70℃,最适pH值分别为6.0和7.0。FAE酶在pH 5.0-pH 9.0范围内比较稳定,而FAE-CBM6酶在pH 4.0-pH 9.0范围内比较稳定;FAE酶在70℃或75℃下孵育2 h后其相对酶活仍能维持在60%以上,而FAE-CBM6酶在70℃孵育2 h后仍能维持80%以上的酶活。Mn2+和Zn2+对于FAE酶的酶活有促进作用,但Mg2+、Cu2+、Ni2+有抑制作用;而Cu2+和Zn2+对FAE-CBM6酶活有明显抑制作用。在同一反应条件下,FAE-CBM6的酶活一般比FAE的高,说明CBM6结合域的存在对该嗜热阿魏酸酯酶活性有促进作用。3)根据禾本科植物玉米(Zea mays)密码子偏好性对嗜热阿魏酸酯酶的编码基因序列进行了优化,并人工合成了优化后的基因序列,在此基础之上,通过与单子叶植物Ubiquitin强启动子、增强子Ω序列以及不同亚细胞定位信号肽(质外体或内质网定位信号肽)编码序列进行组合,构建了该嗜热阿魏酸酯酶基因的多种植物高效表达载体。(本文来源于《江苏大学》期刊2017-05-31）
刘晨[2]（2016）在《金属硫蛋白突变体的烟草植物高效表达载体探讨》一文中研究指出金属硫蛋白通常由α和β两个结构域组成,其中α的结构域构成包括Cd~(2+)和Hg~(2+),小鼠突变体则在大肠杆菌中进行搭建,并获得了转基因植株。为了更好地增强外源基因在烟草中的表达效果,可以在基因起始密码子ATG附近融入适合植物需要的碱基组合AACAATG,这种组合有利于将突变体基因插入具有35S强启动子的植物双元表达载体p GPTVd35S-BAR中,并获得αα突变体的植物双元表达载体。在该次研究中,将采用PCR-Southern和蛋白Dot-blotting检测方法,证明αα突变体可以在烟草中良好地表达。同时,在抗重金属的实验中证明转基因烟草能够在Cd400中良好的生长。(本文来源于《科技资讯》期刊2016年12期）
唐旭,郑雪莲,郭家会,杨仕鑫,邓科君[3]（2013）在《植物高效序列特异性核酸酶表达载体的构建及应用》一文中研究指出序列特异性核酸酶技术的发展,为基因组定向遗传修饰技术带来了重大突破。目前,如何实现序列特异性核酸酶在目标植物中的高效表达及定向遗传修饰突变体材料的有效筛选,是成功应用序列特异性核酸酶技术进行目标植物基因组定向遗传修饰的关键所在。本研究中,基于pGreen/pSoup双元表达载体系统为基本骨架,针对TALEN(transcriptionactivator-like effector nucleases)及ZFN(zinc finger nucleases)构成特点,完成了植物高效序列特异性核酸酶双元表达骨架载体的构建。在此基础上,通过进一步融合SSA-YFP报告单元,构建了基于SSA报告系统的目标基因核酸酶选择表达载体。本研究完成构建的序列特异性核酸酶骨架载体的构建,将有效地促进序列特异性核酸酶技术在植物基因组定向修饰研究中的应用,为进一步应用基因组定向修饰技术进行植物基因功能分析、目标性状改良等提供了基本骨架载体工具。(本文来源于《中国遗传学会第九次全国会员代表大会暨学术研讨会论文摘要汇编（2009-2013）》期刊2013-09-18）
薛计雄[4]（2012）在《高效双价（Bt+cpti）植物表达载体的构建及其在棉花中的表达分析》一文中研究指出棉铃虫的持续性爆发给棉花生产造成了灾难性的损失,如何有效防治虫害一直是提高棉花产量面临的一个巨大问题。20世纪90年代,人们通过生物工程手段将抗虫基因构建到合适的植物表达载体上,并转化棉花获得转基因抗虫棉。如中国农业科学院生物技术研究所郭叁堆研究员课题组先后获得了单价Bt抗虫棉和双价Bt、cpti抗虫棉,不但减少了农药使用量,提高了棉农的经济效益,而且对环境无污染,大大提高了棉花的抗虫性,在生产上得到了广泛的推广。然而,随着抗虫棉的大面积种植,不论是单价还是双价,种植一定年限后,害虫也会对其产生相应的抗性或者耐受性,使得农业生物技术再次面临严峻的考验。针对这种情况,有人在待表达外源基因的两端加上信号肽序列,通过外源基因在植物体内的定向运输而提高外源基因在植物体内的积累量。Alexander Schouten等1996年将一个单链抗体(scFv)的C端增加了内质网滞留信号肽(KDEL)序列,结果显示带有信号肽的基因其蛋白表达量提高了近1%。基于这种情况,本论文开展了如下研究：1.以实验室已有的双价基因为基础,在cpti基因的5'端增加了大豆胰蛋白酶抑制剂(SKTI)信号肽序列,而在其3'端增加了内质网滞留信号肽(KDEL)序列,同时在Bt基因的5'端增加了叶绿体靶向肽序列,最终构建了含有信号肽序列的双价表达载体；2.通过southern杂交分析了外源基因在受体植株中的拷贝数。结果表明,外源基因分别以不同的拷贝数整合到了受体植物中；3.通过ELISA分析了外源基因在受体植株中的积累情况。结果表明,Bt蛋白的积累量提高了1-8倍,而CpTI蛋白的积累量也提高了1倍左右,推测可能与cpti自身表达量以及抗原抗体的结合能力和ELISA操作过程有关；4.通过接虫实验分析了转基因植株的抗虫性。结果表明,双价转基因阳性植株的叶片面积受损程度较低,且棉铃虫已致死；而对照叶片面积受损严重,棉铃虫仍然存活,且体积明显增大；单价Bt转基因植株的叶片面积受损也较为严重,但四天后棉铃虫还是致死；Bt单价的严重损伤说明棉铃虫确实产生了一定的抗性,而修饰的双价抗虫效果则明显增强。说明添加信号肽的高效植物表达载体提高了转基因棉花的抗虫性。本研究构建了含有内质网滞留信号肽序列、大豆胰蛋白酶抑制剂信号肽序列以及叶绿体靶向肽序列的双价表达载体,并以恢复系Y18为受体进行转化,对获得的转基因植株进行了Southern杂交、ELISA以及抗虫性分析,为获得更高抗性的双价转基因抗虫棉以及基因工程中其它植物蛋白积累量的提高提供了一种新的方法。(本文来源于《新疆农业大学》期刊2012-06-01）
崔波,牛苏燕,蒋素华,武思,王默菲[5]（2012）在《蝴蝶兰LFY基因克隆及高效植物表达载体的构建》一文中研究指出根据NCBI中蝴蝶兰LFY花序分生组织基因序列设计2对引物,用RT-PCR法从蝴蝶兰花芽中扩增出LFY基因,对扩增产物进行克隆和测序。结果表明,获得的蝴蝶兰LFY基因约为1 500 bp,与报道序列同源性达98.71%。将LFY基因插入pRI101-ON载体中,经PCR、双酶切及测序鉴定,证实重组表达质粒中含有目的片段,表明成功构建了高效植物表达载体pRI101-LFY。(本文来源于《生物技术通报》期刊2012年02期）
韩凯,翁建峰,郝转芳,李新海,李明顺[6]（2012）在《一种快速高效构建植物表达载体的方法》一文中研究指出植物表达载体是将目的基因转化宿主细胞的媒介,载体构建是通过遗传转化方法开展基因功能鉴定与应用等研究的重要环节。以构建玉米谷氨酰胺合成酶基因(GS1)表达载体pCUbi1390-Ubi-GS1-35S-EPSPS为例,研究简单、通用、高效的构建载体的方法。该方法目的片段和载体不需要酶切产生互补的黏性末端,只需通过在目的基因PCR上下游引物的5’端设计与线性载体两端有15个碱基的同源序列,根据序列的同源性,将目的基因插入载体中,通过PCR程序实现DNA重组。结果表明,正确构建了设计的转化载体,该方法大大简化了载体构建的过程,也适用于任何一个基于单酶切位点把外源DNA重组插入目标序列。(本文来源于《玉米科学》期刊2012年01期）
牛苏燕,蒋素华,武思,张国付,崔波[7]（2012）在《甜蛋白thaumatin基因高效植物表达载体的构建》一文中研究指出根据thaumatin氨基酸序列及植物蛋白质表达密码子的偏爱性,设计了thaumatinⅠ的全基因序列引物,采用重迭延伸PCR法,人工合成了thaumatinⅠ全长基因,克隆至载体pMD19-T上,序列测序表明,克隆的DNA序列与原设计序列完全相同,利用表达载体pRI101-ON,构建了高效植物表达载体pRI101-thaumatin。(本文来源于《江西农业学报》期刊2012年01期）
邹璐琳,魏建华,王宏芝,张少斌[8]（2011）在《高效删除标记基因的Bhlea2植物表达载体的构建》一文中研究指出为培育去除选择标记基因的耐旱转基因植物,同时利用Cre/Lox和FLP/frt系统,构建一个能够高效删除标记基因的Bhlea2基因植物表达载体。拟南芥rd29A启动子是在低温、干旱、高盐胁迫下的快速应答启动子,玉米ubiquitin启动子可有效驱动外源基因的转录,拟南芥pAB5启动子是花粉及胚胎等发育早期特异表达的启动子,利用上述启动子构建了表达Bhlea2基因并能够删除标记基因的植物表达载体。该表达载体包括重组酶表达元件pAB5-FLP、Bhlea2抗旱基因表达元件rd29A-Bhlea2和bar标记基因表达元件ubiquitin-bar。(本文来源于《生物技术通报》期刊2011年11期）
王贵君,郑月,陈敏,廖志华[9]（2011）在《颠茄H6H基因的克隆及高效植物表达载体的构建》一文中研究指出[目的]克隆颠茄(Atropa belladonna)H6H基因并构建高效植物表达载体。[方法]采用RT-PCR方法从颠茄中克隆莨菪碱-6β-羟化酶和1,4-丁二胺-氮-甲基转移酶基因编码区,插入经改造后获得双元叁价植物高效表达载体p2301-gus,构建植物表达载体p2301-H6H,并将该表达载体导入根癌农杆菌LBA4404和发根农杆菌C58C1。[结果]获得了可直接用于遗传改良的颠茄工程菌p2301-H6H-LBA4404和p2301-H6H-C58C1。[结论]为利用植物基因工程技术提高颠茄中生物碱含量奠定了基础。(本文来源于《安徽农业科学》期刊2011年17期）
王贵君,郑月,陈敏,廖志华[10]（2011）在《颠茄H6H基因的克隆及高效植物表达载体的构建(英文)》一文中研究指出[目的]克隆颠茄(Atropa belladonna)H6H基因并构建高效植物表达载体。[方法]采用RT-PCR方法从颠茄(Atropa belladonna)中克隆莨菪碱-6β-羟化酶和1,4-丁二胺-氮-甲基转移酶基因编码区,插入经改造后获得双元叁价植物高效表达载体p2301-gus,构建植物表达载体p2301-H6H,并将该表达载体导入根癌农杆菌LBA4404和发根农杆菌C58C1。[结果]获得了可直接用于遗传改良的颠茄工程菌p2301-H6H-LBA4404和p2301-H6H-C58C1。(本文来源于《Agricultural Science & Technology》期刊2011年02期）
高效植物表达载体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
金属硫蛋白通常由α和β两个结构域组成,其中α的结构域构成包括Cd~(2+)和Hg~(2+),小鼠突变体则在大肠杆菌中进行搭建,并获得了转基因植株。为了更好地增强外源基因在烟草中的表达效果,可以在基因起始密码子ATG附近融入适合植物需要的碱基组合AACAATG,这种组合有利于将突变体基因插入具有35S强启动子的植物双元表达载体p GPTVd35S-BAR中,并获得αα突变体的植物双元表达载体。在该次研究中,将采用PCR-Southern和蛋白Dot-blotting检测方法,证明αα突变体可以在烟草中良好地表达。同时,在抗重金属的实验中证明转基因烟草能够在Cd400中良好的生长。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
高效植物表达载体论文参考文献
[1].刘奕彤.热纤梭菌阿魏酸酯酶的酶学特性分析及其植物高效表达载体构建[D].江苏大学.2017
[2].刘晨.金属硫蛋白突变体的烟草植物高效表达载体探讨[J].科技资讯.2016
[3].唐旭,郑雪莲,郭家会,杨仕鑫,邓科君.植物高效序列特异性核酸酶表达载体的构建及应用[C].中国遗传学会第九次全国会员代表大会暨学术研讨会论文摘要汇编（2009-2013）.2013
[4].薛计雄.高效双价（Bt+cpti）植物表达载体的构建及其在棉花中的表达分析[D].新疆农业大学.2012
[5].崔波,牛苏燕,蒋素华,武思,王默菲.蝴蝶兰LFY基因克隆及高效植物表达载体的构建[J].生物技术通报.2012
[6].韩凯,翁建峰,郝转芳,李新海,李明顺.一种快速高效构建植物表达载体的方法[J].玉米科学.2012
[7].牛苏燕,蒋素华,武思,张国付,崔波.甜蛋白thaumatin基因高效植物表达载体的构建[J].江西农业学报.2012
[8].邹璐琳,魏建华,王宏芝,张少斌.高效删除标记基因的Bhlea2植物表达载体的构建[J].生物技术通报.2011
[9].王贵君,郑月,陈敏,廖志华.颠茄H6H基因的克隆及高效植物表达载体的构建[J].安徽农业科学.2011
[10].王贵君,郑月,陈敏,廖志华.颠茄H6H基因的克隆及高效植物表达载体的构建(英文)[J].AgriculturalScience&Technology.2011