导读:本文包含了线性反向探针杂交法论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:沙门菌,检测方法,反向线性探针杂交
线性反向探针杂交法论文文献综述
魏立雯[1]（2013）在《沙门菌反向线性探针杂交检测方法的建立及应用》一文中研究指出沙门菌遍布于世界各地，是一种人兽共患病病菌。在世界范围内，沙门菌食物中毒常占首位或第二位。沙门菌感染也是影响实验动物质量和动物实验进程的主要因素之一。随着多重耐药菌株的陆续产生，及时检测出沙门菌，是有效预防沙门菌传播，保证实验动物质量和动物实验顺利进行的关键。因此，开发出一种简便、快速的实验动物沙门菌检测技术具有很大的应用价值。反向线性探针杂交方法(RLPH)能够特异、灵敏地扩增目的基因，具有简便、快速、可靠及造价低等特点，能够满足这一要求。本研究确定了沙门菌的RLPH检测方法，并制备了沙门菌检测试纸条。针对沙门菌特异的argT基因设计了生物素标记上游引物5′端的1对引物，以沙门菌DNA为模板，PCR扩增出496bp大小的片段，在PCR产物序列中选择保守区设计的两条特异性探针，使此PCR产物与探针杂交反应，并对反应条件进行优化。通过优化，设定条件为PCR退火温度为55℃，探针两端添加15C，杂交时间为30min，洗脱温度为50℃，所加原液抗体为0.4μl。利用设计的1对引物，分别对重庆医科大学检验医学院分离、保藏的沙门菌以及金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌、蜡样芽孢杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌进行PCR扩增。琼脂糖凝胶电泳结果显示，只有沙门菌PCR扩增结果呈阳性。进一步证明了argT基因的特异性，说明argT基因可以作为检测沙门菌的可靠靶序列。RLPH方法检测灵敏高，PCR产物浓度为3ng/μl时，可有效检出。与其它常见实验动物致病菌未出现交叉反应。反应结果可通过NBT/BCIP碱性磷酸酶系统显色直接判断。本研究建立的沙门菌RLPH方法具有快速、灵敏、特异、操作简单、设备要求低等特点，不仅可以应用于实验动物的沙门菌检测，同样适用于食品、临床感染沙门菌的检测和诊断，能够满足大批量样本和快速检测的需求。(本文来源于《重庆医科大学》期刊2013-04-01）
魏立雯,韦莉,张文露,潘永全,谭毅[2]（2013）在《反向线性探针杂交在检测实验动物沙门菌中的研究》一文中研究指出目的建立简便、快速、准确、灵敏、特异的沙门菌检测方法。方法根据沙门菌argT基因序列设计通用引物和3'、5'均加有polyC的特异性探针。上游引物5'标记生物素,将探针线性固定在硝酸纤维素膜上,使沙门菌PCR扩增产物与探针进行杂交,通过优化杂交条件,建立反向线性探针杂交检测方法。利用该方法对重庆地区74只实验动物进行检测,同时与传统分离培养方法比较。结果反向线性探针杂交方法灵敏度高,对沙门菌PCR扩增产物在3ng/μL以上可有效检测。从细菌分离培养及DNA提取到PCR扩增及反向杂交结束仅需27h。该检测方法特异性高,对6种非沙门菌的检测中,其特异性为100%。应用传统分离培养方法和反向线性探针杂交方法分别检测42只KM小鼠和32只SD大鼠,两种方法检测结果一致性为100%。结论反向线性探针杂交检测方法,具有快速、可靠、敏感和特异的特点,可用于沙门菌感染时的检测,适合应用于实验动物沙门菌的监测。(本文来源于《四川动物》期刊2013年02期）
魏立雯,韦莉,张文露,潘永全,赖国旗[3]（2012）在《反向线性探针杂交在检测实验动物沙门菌中的研究》一文中研究指出目的建立简便、快速、灵敏、特异的沙门菌检测方法。方法根据沙门菌argT基因设计通用引物,3'、5'对称加有poly-C的特异性探针。上游引物5'标记生物素,将探针线性固定在硝酸纤维素膜上,使沙门菌PCR扩增产物与探针进行杂交,通过优化杂交条件,建立反向线性探针杂交检测方法。利用该方法对重庆地区74只实验动物进行检测,同时与传统分离培养方法比较。结果新建的反向线性探针杂交检测方法灵敏度高,对沙门菌PCR扩增产物在3ng/μl以上可有效检测。检测快速,从DNA提取到PCR扩增及反向杂交结束仅需7h。特异性高,对6种非沙门菌的检测中,其特异性为100%。应用新建方法与传统分离培养方法分别检测42只昆明小鼠和32只SD大鼠,新建方法的检测阳性率为5.4%(4/74),传统分离培养方法的检测阳性率为0%(0/74),两种方法检测结果一致性为94.6%(70/74)。结论反向线性探针杂交检测方法,具有快速、可靠、敏感和特异的特点,可用于沙门菌感染时的检测,适合应用于实验动物沙门菌的监测。(本文来源于《第十届中国实验动物科学年会论文集》期刊2012-09-25）
赖国旗,张文露,胡源,唐红,张磊[4]（2012）在《反向线性探针杂交技术检测慢性乙型肝炎病毒拉米夫定耐药研究》一文中研究指出目的:建立起简单、快速、灵敏、准确的慢性乙型肝炎病毒拉米夫定耐药位点的反向线性探针(reverse lineprobe,RLP)检测方法.方法:根据HBV野生及耐药基因序列设计通用探针、3’、5’对称加有poly-C的特异性探针和5’标记生物素的扩增引物.将探针线性固定在硝酸纤维膜上,使HBV PCR扩增产物与探针进行杂交.通过优化杂交条件,建立RLP检测方法.利用该方法对重庆地区86个慢性乙肝病人进行检测,同时与直接测序结果比较.结果:半巢式PCR可对103拷贝/ml的血清样本进行有效特异扩增,新建的RLP检测方法可对PCR扩增产物在1ng/ml以上,或血清样本中突变型DNA占野生型DNA比例为5%以上的均可有效检测,86例临床的检测灵敏度为100%,野生型和耐药型的检测准确性分别为98.09%(103/105)、100%(43/43),与直接测序法比,RLP检测野生与耐药混合型准确性更好.结论:反向线性探针杂交检测方法检测HBV拉米夫定耐药位点方便、灵敏、准确,是HBV拉米夫定治疗有效的监控工具,该方法适合临床应用.(本文来源于《西南师范大学学报(自然科学版)》期刊2012年03期）
赖国旗,张文露,胡源,唐红,张磊[5]（2011）在《反向线性探针杂交技术检测慢性乙型肝炎病毒拉米夫定耐药研究》一文中研究指出目的:建立起简单、快速、灵敏、准确的慢性乙型肝炎病毒拉米夫定耐药位点的检测方法。方法:根据HBV野生及耐药基因序列设计通用探针、3‘、5‘对称加有poly-C的特异性探针、和5‘标记生物素的扩增引物。将探针线性固定在硝酸纤维膜上,使HBV PCR扩增产物与探针进行杂交。通过优化杂交条件,建立反向线性探针杂交检测方法。利用该方法对重庆地区86个慢性乙肝病人进行检测,(本文来源于《第七届全国医学生物化学与分子生物学和第四届全国临床应用生物化学与分子生物学联合学术研讨会暨医学生化分会会员代表大会论文集》期刊2011-08-13）
姜丽丽,王平忠,张野,黄长形,连建奇[6]（2009）在《DNA测序与线性反向探针杂交法检测HBV P基因耐药突变的比较》一文中研究指出目的建立和优化扩增慢性乙型肝炎患者血清HBV P基因的PCR方法,比较DNA测序法与线性反向探针杂交法检测HBV基因突变情况,并对耐药相关基因突变及其意义进行分析。方法采用巢式PCR法扩增93例慢性乙型肝炎患者血清HBV P基因反转录酶区,对PCR产物进行DNA测序,采用Bioedit6.0.5、SeqmanTMⅡ、EditSeq TM和Me-gAlign软件分析结果;同时随机抽取40份血清进行线性反向探针杂交,比较两者的检测结果,并对11个已知耐药相关突变位点进行分析。结果在93份标本中DNA序列测定法检测到碱基突变113个,其中与LAM相关突变50份(53.78%),与ADV相关突变6份(6.46%),与LdT相关突变3份(3.23%),与ETV相关突变3份(3.23%);在40份血清中与线性反向探针杂交检测结果一致的突变为87.5%(35/40),氨基酸位点一致为98.0%(431/440)。此外,还检测到V84I、S85C、A181S、L229W、N238T等与耐药相关的突变位点。结论应用线性反向探针杂交检测虽然比较快捷,但其价格昂贵且只能检测已知常见的变异位点;建立在巢式PCR基础上的DNA序列测定法敏感性与线性反向探针杂交法相当,两者检测结果有较高的符合率,但似可检出更多的耐药相关突变。(本文来源于《实用肝脏病杂志》期刊2009年03期）
姜丽丽[7]（2009）在《DNA测序与线性反向探针杂交法检测HBV P基因耐药相关性突变的研究》一文中研究指出乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染发病率高,严重危害人们的生命健康。全世界乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阳性者约3.5亿,我国约有1.2亿,其中3000万为慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者。据统计,全球每年约有80万人死于HBV慢性感染所引发的重型肝炎、肝硬化和肝细胞癌等相关疾病。因此防治HBV感染对提高人们的健康水平具有重要意义。抗病毒治疗是临床上治疗慢性乙型肝炎的主要措施。核苷/酸类药物因其用药方便、副作用少、能迅速抑制HBV复制等优点得到广泛应用。临床上应用的此类药物主要有拉米夫定(LAM)、阿德福韦酯(ADV)、替比夫定(LdT)、恩替卡韦(ETV)等,但随着用药时间的延长,出现HBV耐药相关性变异的机率越来越高,并随之出现HBV-DNA反跳、肝功能恶化,因此耐药已成为抗HBV治疗中迫切需要解决的问题。实验研究发现,HBV在人体免疫压力和药物作用下易发生变异,加之HBV逆转录酶(reverse transcriptase,RT)区不具备校正功能,更加剧了HBV的突变,使病毒持续存在和不断复制,导致病情进展。近年来,国内外学者进行了大量探索,尽管建立了多种检测HBV耐药相关性基因变异的方法,但各有其特点和局限性,因此建立一种具有较高特异性和灵敏性且操作简便的方法对于国内临床抗HBV治疗具有重要的现实意义。本研究旨在建立和优化扩增慢性乙型肝炎患者血清标本中HBV P基因的聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法,比较DNA序列测定与线性反向探针杂交法(INNO-LiPA试剂)检测HBV基因突变的结果,以期为指导临床制定合理的个体化治疗方案提供重要手段。93例研究对象均系慢性乙型肝炎患者,男77例,女16例,年龄16～66岁;HBsAg阳性均超过6个月;既往接受核苷/酸类药物治疗至少6个月。所有患者治疗期间均出现可疑耐药的情况,或者血清HBV-DNA不同程度下降后又出现反弹,或者HBV DNA自最低值上升>1log10 copies /mL,并伴或不伴有ALT升高。以上研究均获得患者的知情同意。研究的内容和实验结果如下:1. HBV血生化指标抽取使用核苷/酸类药物不同阶段慢性乙型肝炎患者的外周血,常规检测HBV-DNA、ALT和TBiL等血生化指标。发现不同时间点患者的HBV-DNA和ALT与治疗前相比均明显降低(P<0.05),但是LAM组和联合用药组的HBV-DNA在治疗13～24月阶段比7～12月阶段明显升高(P<0.05)。TBiL变化无统计学意义。2.扩增HBV-DNA P基因逆转录酶片段巢式PCR方法的建立根据GenBank收录的HBV adr亚型基因全序列(GI:329616)。采用Oligo6.67软件辅助分析,设计巢式PCR引物,通过反复试验,筛选出有较好序列兼容性及较高反应效率的外引物和内引物,目的片段大小为725bp,包括RT区A、B、C、D、E亚区。用不同病毒载量的患者血清提取出的HBV-DNA作为模板,反复试验,优化巢式PCR反应条件,用2%琼脂糖凝胶电泳检测。3. DNA序列测定取PCR产物进行序列测定(由上海Invitrogen生物技术有限公司完成),成功测序86份,其中含2例血清标本中的HBV-DNA<1×103copies/mL者。进一步用SeqmanTMⅡ、EditSeq TM和MegAlign软件进行分析,共检测到突变位点113个。除已知确定的相关耐药位点外,还检测到V84I、S85C、A181S、L229W、N238H、N238A和N238T等突变位点。4.线性探针反向杂交法的检测随机抽取40例患者的血清标本,用线性反向探针杂交法(INNO-LiPA HBV DR v3)检测已知的11个耐药位点,即HBV-DNA聚合酶的第80、173、180、181、184、194、202、204、233、236和250位氨基酸。经扩增、杂交、洗脱、显色后在检测条带上呈紫/棕色沉淀物。在40份血清标本中检出了以下突变形式:10例L180M+M204V,1例V173L+L180M+M204V,7例M204I,另有L80I+M204I、L80I、L80V、A181T、A181V和N236T各1例。仅5例与DNA测序结果不一致。结论:1.核苷/酸类药物长期使用可导致耐药,多出现在治疗12个月以后。2.建立在巢式PCR基础上的DNA序列测定法,其敏感性与INNO-LiPA相当,检测结果与INNO-LiPA试剂有较高符合率,并可检出更多的耐药相关突变,提供更全面的信息,且价格相对便宜,更加适合现实的中国国情。(本文来源于《第四军医大学》期刊2009-04-01）
线性反向探针杂交法论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的建立简便、快速、准确、灵敏、特异的沙门菌检测方法。方法根据沙门菌argT基因序列设计通用引物和3'、5'均加有polyC的特异性探针。上游引物5'标记生物素,将探针线性固定在硝酸纤维素膜上,使沙门菌PCR扩增产物与探针进行杂交,通过优化杂交条件,建立反向线性探针杂交检测方法。利用该方法对重庆地区74只实验动物进行检测,同时与传统分离培养方法比较。结果反向线性探针杂交方法灵敏度高,对沙门菌PCR扩增产物在3ng/μL以上可有效检测。从细菌分离培养及DNA提取到PCR扩增及反向杂交结束仅需27h。该检测方法特异性高,对6种非沙门菌的检测中,其特异性为100%。应用传统分离培养方法和反向线性探针杂交方法分别检测42只KM小鼠和32只SD大鼠,两种方法检测结果一致性为100%。结论反向线性探针杂交检测方法,具有快速、可靠、敏感和特异的特点,可用于沙门菌感染时的检测,适合应用于实验动物沙门菌的监测。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
线性反向探针杂交法论文参考文献
[1].魏立雯.沙门菌反向线性探针杂交检测方法的建立及应用[D].重庆医科大学.2013
[2].魏立雯,韦莉,张文露,潘永全,谭毅.反向线性探针杂交在检测实验动物沙门菌中的研究[J].四川动物.2013
[3].魏立雯,韦莉,张文露,潘永全,赖国旗.反向线性探针杂交在检测实验动物沙门菌中的研究[C].第十届中国实验动物科学年会论文集.2012
[4].赖国旗,张文露,胡源,唐红,张磊.反向线性探针杂交技术检测慢性乙型肝炎病毒拉米夫定耐药研究[J].西南师范大学学报(自然科学版).2012
[5].赖国旗,张文露,胡源,唐红,张磊.反向线性探针杂交技术检测慢性乙型肝炎病毒拉米夫定耐药研究[C].第七届全国医学生物化学与分子生物学和第四届全国临床应用生物化学与分子生物学联合学术研讨会暨医学生化分会会员代表大会论文集.2011
[6].姜丽丽,王平忠,张野,黄长形,连建奇.DNA测序与线性反向探针杂交法检测HBVP基因耐药突变的比较[J].实用肝脏病杂志.2009
[7].姜丽丽.DNA测序与线性反向探针杂交法检测HBVP基因耐药相关性突变的研究[D].第四军医大学.2009