导读:本文包含了转染效率论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:支原体,质粒,转染效率,精氨酸
转染效率论文文献综述
Zi-fei,YIN,Ya-ni,ZHANG,Shu-fang,LIANG,Sha-sha,ZHAO,Juan,DU[1]（2019）在《支原体污染通过耗竭L-精氨酸降低HEK-293细胞中质粒DNA转染效率（英文）》一文中研究指出目的:明确支原体污染对HEK-293细胞质粒DNA转染效率的影响,并从支原体对细胞精氨酸代谢的角度探究其机制。创新点:支原体是细胞培养中的常见污染源。HEK-293是目前常用的生产蛋白、包装病毒的常用细胞系。然而,目前支原体污染对于质粒DNA转染效率的影响未见报道。本研究首次报道支原体污染对HEK-293细胞质粒DNA转染效率的影响,并揭示其机理。方法:采用4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)和聚合酶链反应(PCR)方法鉴定HEK-293细胞中的支原体污染情况以及支原体抗生素Plasmocin对支原体污染的清除效果。通过聚乙烯亚胺(PEI)方法对支原体污染的HEK-293细胞及支原体清除后的HEK-293细胞转染质粒,比较转染效率差异。通过高效液相色谱法(HPLC)分析支原体污染的和支原体清除后的HEK-293细胞的细胞裂解产物和细胞上清中的L-精氨酸、瓜氨酸含量变化。在支原体污染的HEK-293细胞中补充L-精氨酸,观察质粒转染效率的改变情况。结论:支原体污染能大大降低HEK-293细胞中质粒DNA的转染效率,且其原因与支原体能耗竭细胞中的L-精氨酸有关。(本文来源于《Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology)》期刊2019年12期）
张士坤,张雪,贠志敏,季守平[2]（2019）在《用于增强阳离子聚合物转染效率的pH敏感肽的设计》一文中研究指出背景:阳离子聚合物/DNA复合物从溶酶体内释放效率低是其转染效率低的主要原因,抗菌肽通过裂解酸性条件下的溶酶体膜能够增加转染复合物的释放从而提高基因转染效率,通过谷氨酸残基替换天然抗菌肽中带正电荷的氨基酸残基,我们设计了新的pH敏感肽,该多肽在酸性条件下膜裂解能力明显增强,能显着增强聚乙烯亚胺(PEI)介导的转染效率。方法:用谷氨酸残基取代抗菌肽melittin (Mel)和RV-23 (RV)序列中带正电荷的氨基酸残基,合成了两个pH敏感肽aMel和aRV。测定了多肽在不同pH条件下的膜裂解能力、多肽对PEI/DNA转染复合物理化特性的影响、多肽对PEI转染效率和细胞毒性的影响。结果:谷氨酸残基取代的多肽在低pH条件下的溶血能力增强,表示其在低pH条件下膜裂解活性强。谷氨酸残基取代的多肽掺入不影响PEI复合的DNA结合能力,但影响PEI/DNA复合物的理化特性。谷氨酸残基取代的多肽能提高PEI介导的转染效率,在HeLa细胞中其转染效率相比单独PEI提高了约42倍。结论:本研究结果表明,谷氨酸残基取代抗菌肽序列中带正电荷的残基可用于设计pH敏感肽,作为转染增强剂提高PEI/DNA复合物在哺乳动物细胞系中的转染效率。(本文来源于《中国生物化学与分子生物学会2019年全国学术会议暨学会成立四十周年论文集》期刊2019-10-24）
孙莉,纵艳艳,魏建峰[3]（2020）在《两种传代方法影响人胚胎干细胞转染效率的比较》一文中研究指出背景:现有方法将外源分子如DNA导入到人胚胎干细胞用于科学研究的效率普遍较低,如何优化现有条件,提高转染效率显得尤为重要。目的:比较两种不同的传代方法对人胚胎干细胞系H9转染效率的影响,优化胚胎干细胞转染条件。方法:人胚胎干细胞系H9分别采用小克隆传代法和单细胞传代法进行传代,传代后继续培养细胞48h,用Lipofectamine 3000转染p AdTrack-AKT1荧光质粒2 d后,荧光显微镜下观察荧光质粒的表达,流式细胞仪检测人胚胎干细胞的转染效率;RT-qPCR和Westernblot分别检测转染后AKT1在mRNA和蛋白质水平的表达。结果与结论:①荧光显微镜下观察发现单细胞传代组表达荧光质粒的细胞数量更多,流式细胞仪检测单细胞传代法的转染效率[(47.18±2.00)%]高于小克隆传代法的转染效率[(19.52±0.86)%],差异有显着性意义(P<0.01);②单细胞传代组转染后AKT1 mRNA和蛋白的表达均高于小克隆传代组,差异有显着性意义(P <0.01);③结果表明,采用单细胞传代法,增加细胞与转染试剂脂质体的接触面积可提高人胚胎干细胞的转染效率。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2020年01期）
郑东颖,侯悦,李媛媛,杨云,乔宠[4]（2019）在《长链非编码RNA-GAS5慢病毒表达载体构建及其转染效率鉴定》一文中研究指出目的构建长链非编码RNA-GAS5(lncRNA-GAS5)过表达及干扰慢病毒载体,并在人滋养细胞中进行转染效率鉴定。方法获取lncRNA-GAS5基因序列,合成重组lncRNA-GAS5全基因序列,同时设计并合成3条lncRNA-GAS5 RNAi序列,构建过表达及干扰慢病毒载体,转染至293T细胞包装病毒并测定其滴度,转染人滋养细胞株HTR-8/SVneo后,使用荧光显微镜观察荧光表达情况,采用实时定量聚合酶链式反应法检测lncRNA-GAS5表达,并筛选出最佳干扰效率的表达载体。结果过表达载体感染细胞后,其表达量提高了2.12倍;干扰载体感染细胞后,其表达量降低了67.3%。结论本实验成功构建了lncRNA-GAS5慢病毒过表达和干扰载体,可为后续进一步研究提供基础。(本文来源于《临床军医杂志》期刊2019年08期）
林琼,张祝琴,刘德培[5]（2019）在《CRISPR质粒和同源重组模板的共转染可降低CRISPR/Cas9系统的基因编辑效率》一文中研究指出目的探讨CRISPR质粒和同源重组模板的共转染对CRISPR/Cas9系统的基因编辑效率的影响以及可行的解决办法。方法用T7E1内切酶实验和RT-qPCR检测只转染CRISPR质粒组和质粒和模板共转染组细胞内Cas9的切割效率,Cas9 RNA和DNA水平的差异;RT-qPCR检测降低共转染的模板DNA的数量时,细胞内Cas9 DNA和RNA水平的变化;RT-qPCR和T7E1内切酶实验检测先转染CRISPR质粒后转染同源重组模板时,细胞内Cas9 DNA和RNA水平以及切割效率的变化。结果与只转染CRISPR质粒组相比,CRISPR质粒和同源重组模板的共转染显着降低了CRISPR质粒的转染效率(P<0.001)和Cas9的切割效率(P<0.001)。而先转染质粒后转染同源重组模板组和只转染质粒组在CRISPR质粒的转染效率和Cas9的切割效率差别无统计学意义。结论 CRISPR质粒和同源重组模板的共转染降低了CRISPR/Cas9系统的基因编辑效率,而先转染质粒后转染同源重组模板可以解决这一问题。(本文来源于《基础医学与临床》期刊2019年07期）
李奇,杨俊,杨简,杨英,郑涛[6]（2019）在《大鼠microRNA-327重组腺病毒载体的构建及其在心肌细胞的转染效率》一文中研究指出目的:构建含微小RNA-327(miRNA-327)基因的腺病毒载体,并观察其在H9C2心肌细胞中的转染效率。方法:利用聚合酶链反应(PCR)法钓取目的基因miRNA-327,并将目的基因与穿梭载体GV202连接形成miRNA-327腺病毒表达载体。经酶切及测序鉴定后,将构建的miRNA-327腺病毒表达载体与包装质粒共转染到人胚肾293细胞,再通过Cre/loxP重组酶系统以获得重组腺病毒,并对其进行扩增、纯化及滴度测定。最后将构建成功的重组腺病毒载体转染H9C2心肌细胞48 h,并通过荧光显微镜以及流式细胞仪测定其转染效率。结果:双酶切与测序结果证明了大鼠miRNA-327腺病毒载体构建成功,且最终获得滴度为2×10~(10)PFU/ml的病毒液。转染心肌细胞48h后倒置荧光显微镜观察结果显示,腺病毒转染效率为90.15%±5.15%,流式细胞仪检测结果显示其转染效率为85.46%±3.08%。结论:成功构建了含miRNA-327基因的重组腺病毒载体,其在H9C2心肌细胞中具有较高的转染效率。(本文来源于《解剖学杂志》期刊2019年03期）
胡小青,肖广原,张鹏,陈厚早,刘德培[7]（2019）在《一种提高质粒转染效率的质粒提取方法的优化》一文中研究指出目的优化和改进质粒提取方法,以提高质粒的提取效率,增加其在哺乳动物细胞中的表达效率。方法分别在室温条件和4℃条件提取质粒,并将细菌裂解、过柱和洗脱3个过程分解在两种温度下提取质粒;使用紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳分别检测质粒浓度和超螺旋形式;将质粒转染哺乳动物细胞,使用荧光显微镜和Western blot检测荧光蛋白的表达水平。结果低温进行质粒提取能够显着提高质粒提取效率(P<0.05),并显着提高其在哺乳动物细胞中的表达效率(P<0.01)。质粒提取的3个步骤:细菌裂解、过柱和洗脱均对温度敏感,从而影响质粒的得率和在哺乳动物细胞中的表达效率。结论成功获得一种简单易行的提高质粒得率和在哺乳动物细胞中表达效率的质粒提取方法。(本文来源于《基础医学与临床》期刊2019年05期）
林琼[8]（2019）在《CRISPR质粒和同源重组模板的共转染降低了CRISPR/Cas9系统的基因编辑效率》一文中研究指出CRISPR/Cas9系统具有识别并切割特定序列DNA的功能,是广泛应用的基因编辑工具。虽然CRISPR/Cas9系统可以高效地产生基因敲除,但是精确的基因编辑的效率仍然很低,这主要是由于同源重组修复的效率很低。目前已有多个方法可以在一定程度上提高CRISPR/Cas9系统介导的同源重组的效率,例如抑制非同源末端连接修复,优化同源模板的设计等。最近有研究报道将Cas9 RNP和同源模板相继电转染进细胞提高了同源重组的效率,但是其具体机制仍不清楚。因此,本研究探讨了共转染CRISPR质粒和同源重组模板对CRISPR/Cas9系统的基因编辑效率的影响以及可行的降低影响的办法。首先,我们用T7E1内切酶实验和RT-qPCR检测了只转染CRISPR质粒组以及共转染质粒和模板组细胞内Cas9的切割效率,RNA和DNA水平的差异。其次,检测了降低共转染的同源模板DNA的数量时,细胞内Cas9DNA和RNA水平的变化。然后,将GFP质粒分别和单链DNA、双链DNA共转染细胞,检测细胞内的绿色荧光强度。最后,为了验证将二者相继转染是否可以降低上述的影响,我们先转染了 CRISPR质粒后转染了同源重组模板,并检测了细胞内Cas9DNA,RNA水平以及切割效率的变化。结果显示相比于只转染CRISPR质粒组,CRISPR质粒和同源重组模板的共转染显着降低了细胞内Cas9 DNA和RNA水平,以及Cas9的切割效率。DNA的双链互补片段也降低了共转染的GFP质粒的转染效率。而先转染CRISPR质粒后转染同源模板组和只转染质粒组在Cas9DNA和RNA水平,以及CRISPR/Cas9系统的切割效率上无明显差别。综合以上结果,共转染CRISPR质粒和同源重组模板降低了 CRISPR/Cas9系统的基因编辑效率。而先转染CRIPSR质粒后转染同源重组模板法可以解决这个问题。本研究的结果有助于人们优化CRISPR/Cas9系统的转染方法,进一步提高CRISPR/Cas9系统介导的同源重组的效率。(本文来源于《北京协和医学院》期刊2019-05-01）
孙越鹏,朱晓西,苏杏丽,范芳,李长福[9]（2019）在《质粒表达载体转染HepG2.2.15和BEL-7402细胞的效率分析》一文中研究指出目的:探讨pEGFP-N1质粒表达载体转染HepG2.2.15和BEL-7402两种肝癌细胞的效率。方法:提取、纯化pEGFP-N1质粒,采用脂质体将纯化的pEGFP-N1质粒转染HepG2.2.15和BEL-7402两种肝癌细胞。显微镜下观察细胞形态,分析转染效率。结果:HepG2.2.15细胞呈梭形或不规则叁角形,可成层生长,有许多颗粒样物质和空泡。BEL-7402肝癌细胞呈梭形,相互拥挤呈现"铺路石"状。pEGFP-N1质粒转染HepG2.2.15细胞的转染率为27%,转染BEL-7402细胞的转染率为89%。结论:pEGFP-N1质粒转染BEL-7402细胞效率高于HepG2.2.15细胞。(本文来源于《华夏医学》期刊2019年02期）
王小文,李送,钟昌明,张诚,黄春[10]（2019）在《Poloxamer 407-胰蛋白酶混合凝胶提高腺病毒转染移植静脉组织效率的研究》一文中研究指出安全高效地将治疗基因导入移植静脉组织是移植静脉再狭窄基因治疗研究的重要内容。该研究探讨应用Poloxamer 407-胰蛋白酶混合凝胶局部转染提高移植静脉的腺病毒转染效率的可行性。构建大鼠移植静脉再狭窄模型,应用Poloxamer 407-胰蛋白酶混合凝胶涂染法,通过增加腺病毒载体与血管组织的接触时间以及改善血管壁的渗透性,提高移植静脉的腺病毒转染效率。分别在术后7、14、28天采集标本,应用冰冻切片、免疫组化染色和qRT-PCR检测移植静脉中EGFP的表达以评估转染效率。Poloxamer 407-胰蛋白酶混合凝胶局部转染能够显着提高移植静脉的腺病毒转染效率,其中0.25%的胰蛋白酶转染效率最佳,并且不影响移植静脉血管的组织抗拉性。Poloxamer 407-胰蛋白酶混合凝胶涂染是一种简单、安全和高效的局部基因转染方法,可用于移植静脉再狭窄的防治研究。(本文来源于《中国细胞生物学学报》期刊2019年03期）
转染效率论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
背景:阳离子聚合物/DNA复合物从溶酶体内释放效率低是其转染效率低的主要原因,抗菌肽通过裂解酸性条件下的溶酶体膜能够增加转染复合物的释放从而提高基因转染效率,通过谷氨酸残基替换天然抗菌肽中带正电荷的氨基酸残基,我们设计了新的pH敏感肽,该多肽在酸性条件下膜裂解能力明显增强,能显着增强聚乙烯亚胺(PEI)介导的转染效率。方法:用谷氨酸残基取代抗菌肽melittin (Mel)和RV-23 (RV)序列中带正电荷的氨基酸残基,合成了两个pH敏感肽aMel和aRV。测定了多肽在不同pH条件下的膜裂解能力、多肽对PEI/DNA转染复合物理化特性的影响、多肽对PEI转染效率和细胞毒性的影响。结果:谷氨酸残基取代的多肽在低pH条件下的溶血能力增强,表示其在低pH条件下膜裂解活性强。谷氨酸残基取代的多肽掺入不影响PEI复合的DNA结合能力,但影响PEI/DNA复合物的理化特性。谷氨酸残基取代的多肽能提高PEI介导的转染效率,在HeLa细胞中其转染效率相比单独PEI提高了约42倍。结论:本研究结果表明,谷氨酸残基取代抗菌肽序列中带正电荷的残基可用于设计pH敏感肽,作为转染增强剂提高PEI/DNA复合物在哺乳动物细胞系中的转染效率。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
转染效率论文参考文献
[1].Zi-fei,YIN,Ya-ni,ZHANG,Shu-fang,LIANG,Sha-sha,ZHAO,Juan,DU.支原体污染通过耗竭L-精氨酸降低HEK-293细胞中质粒DNA转染效率（英文）[J].JournalofZhejiangUniversity-ScienceB(Biomedicine&Biotechnology).2019
[2].张士坤,张雪,贠志敏,季守平.用于增强阳离子聚合物转染效率的pH敏感肽的设计[C].中国生物化学与分子生物学会2019年全国学术会议暨学会成立四十周年论文集.2019
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[4].郑东颖,侯悦,李媛媛,杨云,乔宠.长链非编码RNA-GAS5慢病毒表达载体构建及其转染效率鉴定[J].临床军医杂志.2019
[5].林琼,张祝琴,刘德培.CRISPR质粒和同源重组模板的共转染可降低CRISPR/Cas9系统的基因编辑效率[J].基础医学与临床.2019
[6].李奇,杨俊,杨简,杨英,郑涛.大鼠microRNA-327重组腺病毒载体的构建及其在心肌细胞的转染效率[J].解剖学杂志.2019
[7].胡小青,肖广原,张鹏,陈厚早,刘德培.一种提高质粒转染效率的质粒提取方法的优化[J].基础医学与临床.2019
[8].林琼.CRISPR质粒和同源重组模板的共转染降低了CRISPR/Cas9系统的基因编辑效率[D].北京协和医学院.2019
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[10].王小文,李送,钟昌明,张诚,黄春.Poloxamer407-胰蛋白酶混合凝胶提高腺病毒转染移植静脉组织效率的研究[J].中国细胞生物学学报.2019