导读:本文包含了体外复性论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:高效疏水相互作用色谱法,脲,Flt3配体,包涵体蛋白质
体外复性论文文献综述
余秀娟,张如月,卢金铭[1]（2017）在《脲对Flt3配体包涵体蛋白质体外复性与同时纯化的作用研究》一文中研究指出目的研究小分子脲对包涵体蛋白质体外复性与同时纯化的作用。方法考察在高效疏水相互作用色谱(HPHIC)流动相中添加脲时,不同浓度的小分子脲对包涵体蛋白重组人酪氨酸激酶配体(recombined human Flt3ligand,rhFL)复性效率的影响,并采用荧光光谱技术,进一步研究目标蛋白Flt3复性前后复性效果变化与荧光强度变化的规律。结果当脲的添加浓度为3mol·L~(-1)时,rhFL的质量回收率达到33.1%,更易于恢复其天然构象及生物活性。结论添加适当浓度的脲可促进rhFL的复性与同时纯化,通过荧光光谱技术可以初步推测包涵体蛋白在复性过程中生物活性的变化,为rhFL蛋白药物的研发提供参考。(本文来源于《河北北方学院学报(自然科学版)》期刊2017年12期）
祁祺,李龙,孙凯雷,胡小健[2]（2017）在《复性的乙型肝炎病毒X蛋白突变体HBxΔNΔC具有体外生物学活性（英文）》一文中研究指出乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)在肝炎引起的肝癌病变中作为一个多功能调节因子起着关键的作用.对HBx的功能有非常多的体外研究报导,而由于HBx蛋白难以溶解和稳定使得体外的研究报导非常少.我们根据肝癌患者中最常见的截短突变体,在大肠杆菌包涵体中重组表达了一个保留了第12~127位氨基酸的、N端和C端截断的突变体HBxΔNΔC,并使用变复性的方法将其复性溶解.分子筛显示HBxΔNΔC为单体;圆二色谱显示HBxΔNΔC包含有5%的α-螺旋,30%的β-折迭和65%的其他结构.复性的HBxΔNΔC能从人HepG2细胞中拉下(pull-down)肿瘤抑制因子p53和DDB1蛋白,它还能刺激肝细胞的迁移.腹腔注射1μg/g的HBxΔNΔC能明显刺激小鼠肝的生长.这些结果显示HBxΔNΔC具有一定的生物学活性,它可以用来研究体外的HBx结构和分子作用机制.(本文来源于《复旦学报(自然科学版)》期刊2017年04期）
王俊雄[3]（2015）在《二硫键氧化还原酶DsbA/DsbC协助瑞替普酶包涵体体外复性研究》一文中研究指出富含二硫键重组蛋白在大肠杆菌中表达时由于二硫键的错配极易形成包涵体,其体外重折迭复性问题一直是生物下游过程的瓶颈,研究新型重组蛋白复性策略,发展适合于大规模生产此类蛋白的高效复性方法具有重要实际意义。本文以瑞替普酶(reteplase)为研究对象,将二硫键氧化还原酶DsbA/DsbC引入复性体系以促进二硫键的正确形成,围绕reteplase包涵体制备及DsbA/DsbC协助复性开展研究。首先,成功构建了reteplase的E. coli表达载体,制备得到了reteplase包涵体。细胞破碎后,每升发酵液可分离得到粗制包涵体1.7g。经洗涤纯化和溶解后,reteplase变性液的纯度可达85%以上。随后,采用稀释复性法对变性reteplase进行了简单复性研究,在对低蛋白浓度下reteplase复性条件进行单因素考察的基础上,运用正交试验设计对高蛋白浓度(800μg/mL)下的reteplase体外复性过程进行了优化,其活性收率呈现明显的提高。其次,发酵制备得到了重组DsbA与DsbC蛋白,采用Ni-NTA亲和层析进行了纯化,DsbA/DsbC蛋白产量分别为166 mg DsbA/L发酵液与78 mg DsbC/L发酵液,且纯度分别可达到98%和95%。将纯化后的DsbA/DsbC固定化于NHS-activated Sepharose 4 Fast Flow凝胶上,稳定性测试表明其固定化后稳定性能良好,且固定化率高。研究了不同固定化DsbA/DsbC添加量、氧化还原环境、复性温度、pH、尿素浓度等因素对固定化DsbA/DsbC协助reteplase复性效果的影响。结果显示,相较于固定化DsbA,DsbC能更有效协助reteplase包涵体的复性,复性后活性收率可达65.8%,比稀释复性提高了40.3%。最后,结合固定化DsbC与SEC层析技术构建了复合层析柱,详细研究了固定化DsbC协助reteplase柱上复性效果。考察了SEC柱体积、洗脱流速、上样方式等参数对复性过程的影响,优化后活性收率提高到81.3%以上。8批次连续实验结果显示复合层析柱具有优异的协助复性性能、良好的操作稳定性和较高的重复利用率。本文通过二硫键氧化还原酶DsbA/DsbC的引入实现了reteplase包涵体蛋白的体外高效复性。尤其是DsbC在诱导二硫键异构、促进蛋白质重折迭中发挥着重要的作用,是针对富含二硫键蛋白质的一种极具应用潜力的折迭酶。(本文来源于《浙江大学》期刊2015-05-01）
王俊雄,关怡新,姚善泾[4]（2015）在《重组瑞替普酶包涵体制备及其体外复性》一文中研究指出将携带重组瑞替普酶(reteplase,rt-PA)的质粒成功转化到大肠杆菌BL21(DE3)后,诱导表达获得包涵体,考察了诱导剂浓度、培养温度和培养时间等条件对目标蛋白表达量的影响。在此基础上,对高效表达的rt-PA包涵体体外复性过程进行了详细研究。首先利用单因素实验考察了复性液p H、GSH浓度、GSH/GSSG比例、蛋白浓度等各种复性条件对复性效果的影响;并结合正交实验设计,进一步研究了高蛋白浓度下复性后rt-PA酶活变化情况。以0.2 mmol·L-1 IPTG诱导,在33℃下培养6 h,每升发酵液约可获得1.7 g粗制包涵体。适宜的复性条件为蛋白浓度50μg·ml-1,p H 10.0,GSH浓度1 mmol·L-1,GSH/GSSG比例8,复性收率为87.2%。影响高蛋白浓度下rt-PA复性的关键因素为复性液初始p H及GSH浓度,在800μg·ml-1蛋白浓度下复性后rt-PA比活可达7.54×104 IU·mg-1,荧光光谱分析结果表明复性后rt-PA恢复了其天然态结构。(本文来源于《化工学报》期刊2015年02期）
沈琴,邓汉卿,侯文思,马柏林,陶虎[5]（2014）在《人降钙素受体胞外域的复性及新的体外活性测定方法》一文中研究指出人降钙素受体胞外域是降钙素受体的药物靶点区域.本研究截取降钙素受体的N端胞外域22~140氨基酸残基区域,依据大肠杆菌偏爱密码子优化并人工合成基因,克隆至pET22b(+)载体,构建的表达质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)中表达.表达产物经复性、纯化后进行受体-配体结合实验.结果表明,目的蛋白质绝大部分以包涵体形式存在.本研究探索出了一套高效的复性方法,经SDS-PAGE鉴定,纯化蛋白质为单一条带,质谱测定蛋白质分子量与理论分子量一致.复性后的蛋白质采用新的体外活性测定方法证实,有较强的结合鲑鱼降钙素(salmon calcitonin,sCT)的能力.这为其进一步的结构与功能研究奠定了基础.(本文来源于《中国生物化学与分子生物学报》期刊2014年09期）
曾威红[6]（2014）在《突变型FGFR2c胞外段的原核表达与体外复性工艺改进的研究》一文中研究指出目的：鉴定重组质粒pET-3c-msFGFR2c的稳定性、优化基因重组菌的表达条件，提高表达量；改良复性工艺获取高得率、高活性的胞外段。方法：质粒pET-3c-msFGFR2c并转入BL2（1DE3）菌，挑取阳性克隆，SDS-PAGE检验重组蛋白的表达。检测重组质粒稳定性。优化最佳的培养温度、IPTG浓度、诱导时间。优化菌体破碎浓度、破碎时间。比较改良的分段透析复性和凝胶层析柱上复性。WB、质谱确定复性后蛋白为msFGFR2c胞外段及其分子量。cck-8法检测胞外段对肺癌细胞H1648的增殖影响，比较两种复性方法所得胞外段的活性。cck-8法检测msFGFR2c对肺癌细胞PC-9及其耐药株PC-9（G2）、（G10）的增殖影响。结果：pET-3c-msFGFR2c重组质粒被成功转入BL21(DE3)并表达，质粒稳定性高。温度37℃、IPTG0.8mM诱导4h，可获得45%的目的蛋白。以100mg/ml的菌体浓度，超声破碎3s停5s，总工作15min可完全破碎菌体。用2%TritonX-100清洗后可得干净包涵体。透析复性后得胞外段27mg，柱复性得20mg；前者对肺癌细胞H1648抑制率为21%，后者为17.5%。msFGFR2c对肺癌细胞PC-9及其耐药株的增殖有强的抑制效果。结论：分段透析复性比凝胶层析柱复性更好，msFGFR2c得率更高、蛋白活性更好。透析复性能更好地实现大规模生产。(本文来源于《暨南大学》期刊2014-06-30）
黄寿锟,关怡新,于洪巍,姚善泾[7]（2014）在《巯基微球协助重组γ-猪肝酯酶包涵体体外复性》一文中研究指出猪肝酯酶(PLE)是一种广泛应用于光学活性醇或羧酸合成的水解酶。大肠杆菌异体表达为大规模生产猪肝酯酶γ同工酶提供了可能,但表达过程中会形成包涵体,需经体外重折迭恢复其生物活性。针对γ-PLE含二硫键的特点,制备了叁种不同巯基负载量的功能聚合物微球SG-DTT(6.1μmol·g-1、25.2μmol·g-1和143.4μmol·g-1),将其应用于协助γ-PLE包涵体体外复性,并考察了微球浓度、pH、温度和尿素浓度对复性效果的影响。复性过程需要适宜的氧化还原环境,较高的巯基负载量微球协助复性效果较好,当γ-PLE浓度为1000μg·ml-1时,微球协助复性后γ-PLE的活性可达到1885 U·L-1,比对照组提高了72%。研究表明,巯基微球能有效促进二硫键的正确配对,阻止蛋白分子间的聚集,是一种新型高效的复性添加剂。(本文来源于《化工学报》期刊2014年01期）
余秀娟,赵丽艳,张晓光[8]（2013）在《体外蛋白质复性方法及小分子添加剂在复性过程中的作用》一文中研究指出变性蛋白质体外复性的方法主要有传统的辅助复性法包括了:稀释法、透析法、超滤法以及蛋白质折迭液相色谱法(PFLC),也有在此基础上模拟体内分子伴侣、折迭酶、人工分子伴侣、反胶束的辅助复性方法。到目前为止,在复性液中添加小分子试剂是提高体外辅助蛋白质复性效率的策略之一。其目的是为了降低蛋白质复性过程中聚集形式的形成,从而促进变性蛋白质向其天然和活性构象的转变。这种方法在一定程度上能够提高蛋白质的复性效率并且得到了长足的发展。为了捕捉变性蛋白质向其活性结构折迭过程的差异性变化规律,明确小分子添加剂对体外辅助蛋白质分子折迭过程的机制,推测一些小分子添加剂辅助蛋白质色谱复性过程中构象的变化规律,为解决包涵体蛋白质难于复性和复性效率低的问题起到指导性的作用。(本文来源于《河北北方学院学报(自然科学版)》期刊2013年02期）
黄寿锟[9]（2013）在《巯基微球协助含二硫键蛋白质体外复性研究》一文中研究指出对于包涵体蛋白的体外重折迭,如何减少聚集体产生和实现二硫键正确配对是复性过程中亟待解决的两个问题。本文以溶菌酶和重组Y-猪肝酯酶(γ-PLE)为研究对象,向复性体系中添加巯基微球(SG-DTT),该折迭助剂与蛋白分子间通过巯基/二硫键交换反应促进二硫键的正确配对,同时使蛋白分子可逆结合于微球表面以阻止分子间的聚集作用,从而提高折迭效率。首先,通过两步无皂乳液聚合法合成苯乙烯和甲基丙烯酸缩水甘油酯共聚微球(SG),并与DTT反应制得巯基负载量不同(分别为4.3μmol/g、15.1μmol/g和79.7μmol/g)的叁种SG-DTT微球,以溶菌酶为模型蛋白考察其协助复性效果。结果表明,巯基微球能有效提高复性收率,蛋白浓度为1000μg/mL时,溶菌酶活性收率从未加微球的58%提高到84%。当GSSG浓度为0.5mM时,巯基负载量较高的微球协助复性效果更好,复性条件为微球与溶菌酶浓度比0.5、复性温度15℃和尿素浓度2.5M。多批次复性实验证明该巯基微球可回收循环利用。其次,通过大肠杆菌发酵制备得到了重组γ-PLE包涵体。破胞离心后,每升发酵液可获得粗制包涵体2.0g,经洗涤和溶解,γ-PLE纯度达到80%。采用稀释复性,去折迭γ-PLE逐渐折迭成天然结构,氧化还原环境对复性效果具有重要影响。适合γ-PLE复性的GSSG浓度随着蛋白浓度升高而增加,还原态GSH和氧化态GSSG的比例在2-4时γ-PLE可达到较高的复性收率,γ-PLE复性时对氧化还原环境的要求要低于含4对二硫键的溶菌酶。最后,在稀释复性的基础上,将巯基负载量不同(分别为6.1μmol/g、25.2μmol/g和143.4μmol/g)的叁种SG-DTT微球用于协助γ-PLE体外复性。巯基负载量较高的微球协助复性效果较好,当其加入量为0.5mg/mL时,复性后γ-PLE活性达到1187U/L(蛋白浓度500μg/mL)和1885U/L(蛋白浓度1000μg/mL),比未加微球对照组的活性分别提高了81%和72%,且优于GSH协助复性效果,复性条件为pH9.5、复性温度15℃和尿素浓度1M。研究表明,巯基微球在含二硫键蛋白质复性过程中能有效促进二硫键的正确配对,且复性后易分离回收,是一种新型高效复性添加剂,具有广阔的应用前景。(本文来源于《浙江大学》期刊2013-04-01）
李瑞,王青山,王云,赵蒙蒙,王爽[10]（2012）在《四甲基偶氮唑盐法评价牙体修复性纳米羟基磷灰石复合材料的体外细胞毒性》一文中研究指出背景:越来越多的新型材料被纳入口腔领域应用的视野,对生物材料进行生物相容性评价是进入临床试验前的重点研究内容。目的:通过体外细胞毒性实验评价自制牙体修复性纳米羟基磷灰石复合材料的生物相容性。方法:根据ISO标准,采用四甲基偶氮唑盐比色法行体外细胞毒性实验,阴性对照组为DMEM培养液,阳性对照组为含有0.1%苯酚的DMEM培养液,实验组为受试材料的浸提液。测试人牙龈成纤维细胞在牙体修复性纳米羟基磷灰石复合材料浸提液中培养1,3,5d的吸光度值,观察细胞形态变化,计算细胞相对增殖率,判断细胞毒性的级别。结果与结论:实验组体外细胞毒性实验吸光度值均与阴性对照组差异无显着性意义(P>0.05),与阳性对照组差异有显着性意义(P<0.01),自制牙体修复性纳米羟基磷灰石复合材料体外细胞毒性级别为0～1级,初步认为其具有良好的生物相容性。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2012年34期）
体外复性论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)在肝炎引起的肝癌病变中作为一个多功能调节因子起着关键的作用.对HBx的功能有非常多的体外研究报导,而由于HBx蛋白难以溶解和稳定使得体外的研究报导非常少.我们根据肝癌患者中最常见的截短突变体,在大肠杆菌包涵体中重组表达了一个保留了第12~127位氨基酸的、N端和C端截断的突变体HBxΔNΔC,并使用变复性的方法将其复性溶解.分子筛显示HBxΔNΔC为单体;圆二色谱显示HBxΔNΔC包含有5%的α-螺旋,30%的β-折迭和65%的其他结构.复性的HBxΔNΔC能从人HepG2细胞中拉下(pull-down)肿瘤抑制因子p53和DDB1蛋白,它还能刺激肝细胞的迁移.腹腔注射1μg/g的HBxΔNΔC能明显刺激小鼠肝的生长.这些结果显示HBxΔNΔC具有一定的生物学活性,它可以用来研究体外的HBx结构和分子作用机制.
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
体外复性论文参考文献
[1].余秀娟,张如月,卢金铭.脲对Flt3配体包涵体蛋白质体外复性与同时纯化的作用研究[J].河北北方学院学报(自然科学版).2017
[2].祁祺,李龙,孙凯雷,胡小健.复性的乙型肝炎病毒X蛋白突变体HBxΔNΔC具有体外生物学活性（英文）[J].复旦学报(自然科学版).2017
[3].王俊雄.二硫键氧化还原酶DsbA/DsbC协助瑞替普酶包涵体体外复性研究[D].浙江大学.2015
[4].王俊雄,关怡新,姚善泾.重组瑞替普酶包涵体制备及其体外复性[J].化工学报.2015
[5].沈琴,邓汉卿,侯文思,马柏林,陶虎.人降钙素受体胞外域的复性及新的体外活性测定方法[J].中国生物化学与分子生物学报.2014
[6].曾威红.突变型FGFR2c胞外段的原核表达与体外复性工艺改进的研究[D].暨南大学.2014
[7].黄寿锟,关怡新,于洪巍,姚善泾.巯基微球协助重组γ-猪肝酯酶包涵体体外复性[J].化工学报.2014
[8].余秀娟,赵丽艳,张晓光.体外蛋白质复性方法及小分子添加剂在复性过程中的作用[J].河北北方学院学报(自然科学版).2013
[9].黄寿锟.巯基微球协助含二硫键蛋白质体外复性研究[D].浙江大学.2013
[10].李瑞,王青山,王云,赵蒙蒙,王爽.四甲基偶氮唑盐法评价牙体修复性纳米羟基磷灰石复合材料的体外细胞毒性[J].中国组织工程研究.2012
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