贵州省毕节市食品药品检验所551700
【摘要】目的建立测定喘嗽宁片中苦参碱含量的高效液相色谱法。方法用DiamonsilC18（5μm，200×4.6mm）色谱柱，流动相为乙腈—水（1000ml水加2ml三乙胺，用磷酸调pH值至3．0）（4：96），检测波长为220nm，流速0.8mL/min。结果苦参碱进样量在0.1783～2.8534μg（r=0.9991）范围内与峰面积积分值具有良好线性关系，平均回收率为100.2%，RSD为0.9%（n=6）。结论该方法专属性强、灵敏、操作简便，可用于喘嗽宁片中苦参碱的含量测定。
【关键词】喘嗽宁片；苦参碱；高效液相色谱法；含量测定
Abstract：ObjectiveToestablishaHPLCmethodforthedeterminationofthematrinecontentinChuansouningTablets.MethodsTheDiamonsilC18（5μm，200×4.6mm）wasusedwiththemobilephaseofacetontrile—water（2mltriethylarmine，addwaterto1000ml，adjustedtopH3.0withphosphateacid）（4：96）asmobilephase.Theflowratewas0.8mL/min，thedetectionwavelengthwas220nmandthecolumntemperaturewas40°C.ResultsThesampiesizeofmatrineintherangeof0.1783~2.8534μg（r=0.9991）showedagoodlinearrelationshipwiththepeakarea，Theaveragerecoveryratewas100.2%withRSD=0.9％（n=6）.ConclusionThemethodishighlyspecific，sensitive，simpletooperate，andcanbeusedforthedeterminationofthematrinecontentinChuansouningTablets.
Keywords：ChuansouningTablets，matrine，HPLC，contentdetermination
喘嗽宁片[1]由白果100g、苦杏仁160g、地龙160g、桑白皮160g、陈皮160g、黄芩160g、白前160g、苦参160g、甘草160g、茯苓270g等组成，具有清热平喘，止咳化痰的功效，用于支气管哮喘，喘息型支气管炎，肺气肿，肺心病早期。其标准中对主药苦参虽有定性但无定量分析，为确保该制剂的疗效，更好地控制其质量，本试验以高效液相色谱法测定苦参的有效成分苦参碱的含量，现报道如下。
1.仪器与试药
1.1仪器Waters2695e型高效液相色谱仪（四元泵、柱温箱、DAD二极管阵列检测器、自动进样器）及色谱数据工作站；AY120型电子天平（SHIMADZU，感量0.1mg）；MSE3.6p-0CE-DM型电子天平[赛多利斯科学仪器（北京）有限公司，感量0.001mg]；洁康PS-100超声波清洗器。
1.2试药苦参碱对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110805-200508）；喘嗽宁片同一生产厂家3个批号：130601、130602、130901；乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水；其余试剂为分析纯。
2.方法与结果
2.1色谱条件DiamonsilC18（5μm，200×4.6mm）色谱柱。流动相：乙腈—水（1000ml水加2ml三乙胺，用磷酸调pH值至3.0）（4：96）；检测波长：220nm；流速为0.8mL/min；进样量：10μL；柱温40℃。
2.2对照品溶液的制备精密称取苦参碱对照品5.573mg，置25mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取4mL至10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得每1mL含苦参碱0.08917mg的对照品溶液。
2.3供试品溶液的制备取本品20片，除去包衣，精密称定，研细，取约两片量，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL、浓氨1.0mL，密塞，称定重量，超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。按处方制备工艺以十分之一的处方量制得不含苦参的阴性样品，同供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。
2.4色谱行为与系统适应性实验分别取2.2与2.3项下制备的对照品、供试品、阴性对照溶液，按照2.1项下的色谱条件进样，如图1所示，阴性对照溶液无干扰。苦参碱峰与邻峰分离度大于1.5，理论板数按苦参碱峰计算约为4900。
2.5线性关系考察分别精密吸取2.2项下对照品溶液（0.08917mg/mL）2，4，8，16，32μL，按2.1项下的色谱条件进样，测定苦参碱峰面积，以峰面积积分值（A）作为纵坐标，以进样量（X）（μg）为横坐标绘制标准曲线，得回归方程为A=1.8111×105X+64368，r=0.9991，结果表明苦参碱进样量在0.1783～2.8534μg范围内与峰面积积分值具有良好线性关系。
2.6稳定性实验将2.3项下的供试品溶液室温放置，分别于0、2、4、6、8、10、12小时测定，记录峰面积，结果RSD为：1.6%（n=7），可见供试品溶液在室温下12小时内稳定。
2.7精密度实验精密量取2.2对照品溶液，按2.1色谱条件重复进样6次，记录峰面积，RSD为0.5%（n=6），表明仪器精密度良好。
2.8重复性实验取同一批号（130601）的样品6份，按供试品溶液制备方法及试验条件测定，结果苦参碱平均含量为6.72mg/g，RSD为1.7%（n=6），表明本法重复性良好。
2.9加样回收率实验取已知含量的样品（6.72mg/g，批号：130601）六份。按照2.3项下制备，取样量约为1片，至“置具塞锥形瓶中”该步骤，分别精密加入对照品贮备液50mL（精密称取上述苦参碱对照品24.82mg，置500ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品贮备液）、浓氨溶液1.0mL，从“密塞”开始，同法处理即得。按2.1色谱条件进样。记录色谱图，计算回收率，结果见表1。
2.10样品含量的测定取3个批号（130601，130602，130901）的样品，按供试品溶液制备方法及试验条件测定，结果苦参碱平均含量分别为6.72，6.81，7.13mg/g。
3讨论
3.1苦参具有清热燥湿，杀虫，利尿的功效[2]，是喘嗽宁片中的主药之一。为控制该制剂的质量，确保其疗效，故研究其中苦参碱的含量测定方法。3.2色谱条件的选择方面，对比了C18柱和2010年版一部药典苦参项下采用的氨基柱，发现C18柱测定的含量结果无明显差别且成本低、应用广泛，文献[3]中报道了3种流动相，本试验中进行了比较，以乙腈—水（1000ml水加2ml三乙胺，用磷酸调pH值至3.0）（4：96）为流动相，流速为0.8mL/min，柱温为40℃时，苦参碱峰理论板数高，与邻峰分离良好，故用此色谱条件进行实验。
3.3结果表明此方法操作简便、专属性强，可作为喘嗽宁片中苦参碱的含量测定方法。
参考文献：
[1]卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂[M]．第十九册，1998．205．
[2]中华人民共和国国家药典委员会.中华人民共和国中国药典（一部）[S].北京，2010：188-189．
[3]屈蓉，尹萌，张厚宝.高效液相色谱法测定止痢宁片中苦参碱的含量[J].时珍国医国药，2008，19（11）：2786-2788.