导读:本文包含了祖样细胞论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:祖样,原代,肝细胞,OCt4
祖样细胞论文文献综述
李冰,郝好杰,韩庆旺,申晶,程愈[1]（2013）在《OCt4联合小分子化合物诱导肝细胞转化为胰腺干祖样细胞》一文中研究指出目的:Oct4介导下小鼠原代肝细胞发生去分化的细胞形态及基因表达的变化趋势,应用小分子化合物将去分化的肝细胞诱导为胰腺干祖样细胞。方法:采用两步胶原酶灌流法体外分离小鼠原代肝细(本文来源于《中华医学会第十二次全国内分泌学学术会议论文汇编》期刊2013-08-21）
李冰,郝好杰,韩庆旺,申晶,程愈[2]（2013）在《SOX9的表达在诱导肝细胞向胰腺干祖样细胞转化中的意义研究》一文中研究指出目的:研究SOX9的表达在诱导肝细胞向胰腺干祖样细胞转化过程中的意义。方法:分离培养小鼠原代肝细胞,包装、浓缩表达OCT4的慢病毒并感染肝细胞,使用RT-PCR监测慢病毒感染后肝细胞中SOX9的表达,并根据SOX9表达情况尝试向胰腺干祖样细胞诱导。使用PCR和免疫荧光鉴定生成的胰腺干祖样细胞。结果:肝细胞感染OCT4-慢病毒后,肝细胞内颗粒逐渐释出,细胞折光性增强。SOX9表达从第6 d持续至第8 d。从SOX9阴性的第4 d开始向胰腺诱导,无集落样的胰腺干祖样细胞生成,RT-PCR检测其标志物CK19为阴性;从SOX9阳性的第6 d开始向胰腺诱导,可见集落样生长的胰腺干祖样细胞,RT-PCR检测CK19为阳性,免疫荧光染色显示CK19表达在胞浆中。结论:肝细胞向胰腺干祖样细胞转化过程中SOX9的表达提示了"兼性肝细胞"的出现,此细胞具有向胰腺谱系诱导分化的潜能,这为进一步生成有功能的胰岛内分泌细胞和实现糖尿病的细胞替代治疗提供了理论和实验依据。(本文来源于《现代生物医学进展》期刊2013年15期）
李冰[3]（2013）在《Oct4联合小分子化合物诱导肝细胞重编程为胰腺干祖样细胞》一文中研究指出目的1、探讨在Oct4介导下小鼠原代肝细胞发生去分化的细胞形态及基因表达的变化趋势，探索肝细胞去分化后向胰腺干祖样细胞诱导的合适时机。2、应用小分子化合物将去分化的肝细胞诱导为胰腺干祖样细胞。方法第一部分：分离培养小鼠原代肝细胞，构建慢病毒表达质粒pWPT-Oct4，包装表达Oct4的慢病毒，将其感染原代肝细胞，观察细胞的形态变化，用RT-PCR法监测nestin、ALB、AFP以及Foxa2的表达并进行半定量分析。用RT-PCR法监测“中间状态细胞”标志物：SOX17，HNF6，HNF1β，SOX9的表达趋势，结合细胞形态的变化，探索肝细胞去分化后向胰腺干祖样细胞诱导的合适时机。第二部分：根据SOX9的表达，联合应用小分子化合物：表皮生长因子（EGF）,碱性成纤维细胞生长因子（bFGF），Exendin-4等对去分化后的肝细胞进行诱导，观察细胞形态，用RT-PCR及免疫荧光染色法检测胰腺干细胞标志物CK19、ABCG2的表达。结果第一部分：感染Oct4-慢病毒后，原代肝细胞胞内颗粒逐渐释放出来，在第7天时细胞的增殖能力有所增强。RT-PCR结果显示，感染Oct4-慢病毒后，成熟肝细胞的标志物ALB表达减弱，不成熟肝细胞标志物AFP、Foxa2表达增强，表明肝细胞发生去分化，细胞成熟表型逐渐丢失。在此过程中，多谱系前体细胞标志物nestin表达逐渐增强，从第3天持续至第9天，从第12天起开始减弱。在感染Oct4-慢病毒后第2天可检测到HNF1β,HNF6的表达，第6天可检测到SOX9的表达。第二部分：在SOX9开始表达的第6天起，用小分子化合物诱导去分化的肝细胞生成胰腺干祖样细胞，在诱导4天后细胞呈集落样生长，可检测到胰腺干细胞标志物CK19、ABCG2的表达。结论在基因Oct4及小分子化合物联合诱导下，肝细胞经去分化可进一步向胰腺谱系诱导。本实验探索了体外产生胰腺干细胞的新途径，为扩大胰岛移植的来源和实现糖尿病的β细胞替代治疗提供了实验依据。(本文来源于《中国人民解放军医学院》期刊2013-05-14）
王利娟[4]（2011）在《人肝癌干/祖样细胞对肝脏损伤作用的研究》一文中研究指出目的：观察从肝癌细胞系中分离的肝癌干／祖样细胞(Hepatocarcinoma stem cell, HSC)对NOD/SCID小鼠生存时间的影响,并从体内和体外两方面初步探讨其引起NOD/SCID小鼠死亡的可能原因。方法：1.无血清悬浮培养法分离培养肝癌SK-Hep-1细胞中的肝癌干/祖样细胞(球形体细胞,spheroid cells, SC);2.应用MTS和流式细胞术观察球形体细胞增殖和细胞周期分布的情况；3.软琼脂克隆形成实验观察球形体细胞的自我更新、无限增殖能力：NOD/SCID小鼠体内成瘤实验观察球形体细胞的体内成瘤能力；4.应用MTS法检测球形体细胞对化疗药物(5-Fu、DDP、ADM和NVB)的敏感性；5.应用实时荧光定量PCR和免疫印迹法观察球形体细胞干细胞基因Oct-4、Nanog、BMI-1、Notch-1以及SMO mRNA和蛋白的表达水平；6.肝癌干/祖样细胞接种NOD/SCID小鼠观察肝癌干/祖样细胞对荷瘤小鼠生存时间的影响;7.HE染色显微镜下观察NOD/SCID小鼠各个脏器组织结构的变化；检测肝癌干/祖样细胞对NOD/SCID小鼠血液生化指标(肝功能)的影响,应用Tunel和PCNA染色观察肝癌干/祖样细胞对小鼠肝脏凋亡及增殖情况的影响；8.胶原酶消化法分离小鼠原代肝细胞并培养；9.流式细胞术联合CFSE染色检测肝癌干/祖样细胞体外对小鼠和人正常肝细胞增殖的影响；10.流式细胞术联合AnnexinV/PI双染检测肝癌干/祖样细胞体外对小鼠和人正常肝细胞凋亡的影响；11.流式细胞术联合PI染色检测肝癌干/祖样细胞体外对小鼠和人正常肝细胞周期分布的影响。结果：1. SK-Hep-1细胞可在添加生长因子的无血清培养基中呈球形悬浮生长并可长期培养、扩增。2.球形体细胞呈低增殖状态,大多数处于静止期,即细胞周期G0/G1期。3.球形体细胞和SK-Hep-1细胞在双层软琼脂培养基中均可呈克隆性生长,球形体细胞克隆形成率为51.63%,显着高于SK-Hep-1细胞,具有更强的克隆形成能力；体内成瘤性实验显示球形体细胞具有较强的致瘤能力,1000个球形体细胞接种于NOD/SCID小鼠皮下即可形成肿瘤,并能分化出与原代细胞特征相仿的肿瘤细胞。4.药物敏感性分析结果显示,经不同化疗药物作用48hrs,球形体细胞活性明显高于SK-Hep-1细胞,对化疗药物具有更强的耐受性。5.球形体细胞中干细胞基因Oct4、Nanog、BMI-1、Notchl、和SMO mRNA和蛋白的表达水平明显高于SK-Hep-1细胞。6.生存分析可见HSC接种的NOD/SCID小鼠组生存时间与SK-Hep-1组相比明显缩短。7.HE染色显微镜下观察HSC组小鼠的肝脏组织肝索紊乱,肝细胞呈大小不等的空泡样变,嗜酸性变,可见小灶性坏死,肝窦扩张,单核巨噬细胞重度增生,病变较SK-Hep-1组明显加重；HSC组小鼠肝功能指标中.白蛋白水平下降,ALT水平升高；Tunel结果显示HSC组小鼠肝组织凋亡细胞的数量较SK-Hep-1组明显增加；PCNA染色结果显示SK-Hep-1和HSC组小鼠的肝组织均有PCNA阳性细胞,但是与SK-Hep-1组相比,HSC组的阳性细胞较少。8.小鼠原代肝细胞体积大,呈多边形或不规则形,单核或双核,细胞界限清楚。9.HSC细胞培养上清及HSC与肝细胞共培养均能够抑制肝细胞的增殖,与SK-Hep-1细胞相比,HSC对肝细胞增殖抑制的作用更为明显。10.HSC细胞培养上清能够诱导肝细胞的凋亡,与SK-Hep-1细胞比较,HSC上清对肝细胞凋亡的促进作用更加明显。HSC和SK-Hep-1细胞与正常肝细胞共培养对肝细胞凋亡均没有影响。11.HSC细胞培养上清及HSC细胞与肝细胞共培养均能够引起肝细胞S期百分比升高,G0/G1、G2/M期百分比均出现不同程度的降低,与SK-Hep-1细胞相比,HSC对肝细胞具有更强的细胞周期阻滞作用。结论：经无血清悬浮培养法从人肝癌SK-Hep-1细胞系中分离得到了具有肿瘤干细胞特性的肝癌干/祖样细胞(Hepatocarcinoma stem-like cell, HSC)亚群；HSC在体内表现出较强的肝损伤作用,促进肝细胞凋亡,并且抑制肝细胞的增殖再生；同时体外实验进一步验证了HSC具有抑制肝细胞增殖、促进肝细胞凋亡、引起细胞周期阻滞的作用；由此可见,肝癌干/祖样细胞诱导肝细胞凋亡,引发肝细胞损伤以及抑制肝细胞再生修复可能是导致荷瘤小鼠死亡率升高,生存期缩短的原因之一。(本文来源于《天津医科大学》期刊2011-05-01）
徐琼[5]（2010）在《人肝癌干/祖样细胞生物学特性及表面分子标志物的研究》一文中研究指出目的：建立一种初步富集肝癌干细胞相关亚群的方法,对其生物学特性进行分析,寻找肝癌干细胞特异性标志分子,为研究肝癌干细胞的本质提供实验依据。方法：1.应用流式细胞术检测人肝癌细胞系Hep3B、HepG2(?)SK-Hep-1中的SP细胞,确定肿瘤干细胞的存在；无血清悬浮培养法分离培养肝癌SK-Hep-1细胞中的肝癌干/祖样细胞(球形体细胞)。2.应用MTS和流式细胞术观察球形体细胞增殖和周期分布情况；应用免疫印迹法检测球形体细胞细胞周期调控蛋白的表达水平。3.软琼脂克隆形成实验观察球形体细胞的自我更新、无限增殖能力；将球形体细胞置于含血清培养基中诱导分化,观察其分化能力。4.应用MTS和流式细胞术检测球形体细胞对化疗药物的敏感性和抗DDP诱导凋亡的能力；应用实时荧光定量PCR和流式细胞术检测球形体细胞耐药基因ABCG2、MDR1和MRP1mRNA和蛋白的表达水平,观察其耐药性。5.应用实时荧光定量PCR(?)TRAP-PCR银染法检测球形体细胞的端粒酶活性：应用实时荧光定量PCR和免疫印迹法观察球形体细胞干细胞基因Oct4、Nanog、BMI-1、Notch1、B-catenin以及SMO mRNA和蛋白的表达水平。6. NOD/SCID小鼠体内成瘤实验观察球形体细胞的体内成瘤能力。7.应用MTS和Transwell小室实验模型检测球形体细胞的体外粘附和侵袭能力,观察其转移性。8.应用免疫组化的方法观察球形体细胞细胞角蛋白CK7、CK19、CK8和CK18的表达水平9.应用流式细胞术观察干细胞表面标志分子(CD133、CD117、CD90、CD34、CD44(?)EpCAM)在球形体细胞中的表达;应用免疫印迹和免疫组化方法观察CD117在SK-Hep-1细胞和球形体细胞中的表达差异；应用流式细胞术观蔡球形体细胞分化过程中CD117的表达情况。结果：1.人肝癌细胞系SK-Hep-1中的SP细胞比例为1.2%,另外两株人肝癌细胞系HepG2和Hep3B均未检测到SP细胞；SK-Hep-1细胞可在添加生长因子的无血清培养基中呈球形悬浮生长并可长期培养、扩增。2.球形体细胞呈低增殖状态,大多数处于静止期,即细胞周期G0/G1期；免疫印迹结果显示,球形体细胞中抑制细胞周期进程的蛋白p21和1p27表达明显增高,而促进细胞周期进程的蛋白cyclinD表达明显下降。3.球形体细胞具有更强的克隆形成能力,在双层软琼脂培养基中可呈克隆样生长,克隆形成率为51.63%,显着高于SK-Hep-1细胞的克隆形成率17.54%；球形体细胞在含血清的培养基中呈现与SK-Hep-1细胞相同的贴壁生长方式,细胞形态上与SK-Hep-1细胞无差别。4.药物敏感性分析结果显示,不同剂量的化疗药物作用48hrs,随着药物浓度的增大,球形体细胞和SK-Hep-1细胞的细胞活性均逐渐减小,但球形体细胞的细胞活性均明显高于SK-Hep-1细胞：同时球形体细胞在20μg/mlDDP作用48小时后凋亡率为22.92%,而SK-Hep-1细胞的凋亡率为63.55%,提示球形体细胞抗凋亡的能力明显高于SK-Hep-1细胞；球形体细胞耐药基因ABCG2、 MDR1和MRP1mRNA和蛋白表达水平明显高于SK-Hep-1细胞。5.球形体细胞hTERT mRNA的表达水平明显高于SK-Hep-1细胞,具有较强的端粒酶活性；此外,球形体细胞中干细胞基因Oct4、Nanog、BMI-1、Notch1、和SMO mRNA和蛋白的表达水平明显高于SK-Hep-1细胞,而β-catenin的mRNA水平虽然高于SK-Hep-1细胞,但其蛋白表达水平无明显变化。6.体内成瘤实验结果显示球形体细胞具有较强的致瘤能力,1000个球形体细胞接种于NOD/SCID小鼠皮下即可形成肿瘤,接种7000个球形体细胞成瘤率即可达到100%,并能分化出与原代细胞特征相仿的肿瘤细胞；而低于10000个SK-Hep-1细胞均不能形成肿瘤。7.球形体细胞的体外粘附和侵袭能力明显高于SK-Hep-1细胞,提示球形体细胞具有高转移性。8.细胞角蛋白免疫组化结果显示,CK8、CK18呈强阳性/CK7、CK19呈阴性表达的球形体细胞经血清诱导分化后生成CK8、CK18呈强阳性/CK7、CK19阳性表达的肿瘤细胞,与SK-Hep-1细胞的表型基本相同。9.干细胞表面标志分子检测结果显示,SK-Hep-1细胞CD117表达率约为95%,而球形体细胞表达率仅为1%左右,变化最为显着,免疫印迹和免疫组化结果与流式细胞术检测结果一致,并且随着分化后球形体细胞培养代数的增加,CD117的表达逐渐增高。而其他标记分子在两种细胞中的表达无明显差别。结论：人肝癌SK-Hep-1细胞存在异质性,其中极小部分细胞可在无血清培养基中持续增殖并呈球形悬浮生长,具有自我更新、无限增殖和分化潜能,高表达干细胞基因,具有高耐药性等于细胞特性；同时实验证明也具有较强的致瘤能力和高转移性等肿瘤细胞的特点。体内体外实验结果均证实从SK-Hep-1细胞中分离的球形体细胞具有肿瘤干细胞样特性,因此,我们认为球形体细胞是富含肝癌干细胞的细胞群,或称为肝癌干/祖样细胞,其表面标志CK7-CK19-CD117-,是否可以作为肝癌干细胞筛选标志有待于今后进一步研究。(本文来源于《天津医科大学》期刊2010-06-01）
赵惠丰[6]（2008）在《人卵巢癌细胞系SK-OV-3中肿瘤干/祖样细胞的研究》一文中研究指出目的：肿瘤干／祖样细胞的分离及鉴定是肿瘤干／祖细胞研究领域中的关键性问题之一。本课题通过球形体形成法对人卵巢癌细胞系SK-OV-3中肿瘤干／祖样细胞进行分离、培养扩增,并对其干／祖样细胞的特性进行鉴定,为研究卵巢癌发病机理及治疗奠定基础。方法：1.球形体形成法分离人卵巢癌细胞系SK-OV-3中肿瘤干／祖样细胞。2.将以球形体形成法筛选出的球形体形成细胞于CM与SGM交替更换培养基观察其多向分化和自我更新的潜能。3.双层软琼脂集落形成实验软琼脂培养检测球形体形成细胞的非依赖性锚定生长能力。4.通过PI染色利用FCM观察球形体形成细胞的细胞周期分布特点。5.检测球形体形成细胞在10μg/ml DDP作用下的凋亡率,分析其对DDP的抵抗作用。6.流式细胞仪检测球形体形成细胞中SP细胞及ALDH+细胞的比例。7.实时荧光定量PCR检测球形体形成细胞中干／祖细胞基因Oct4、Nanog的表达情况。8.球形体形成细胞裸鼠体内致瘤性的检测。结果：1.人卵巢癌细胞系SK-OV-3细胞中的极少部分肿瘤干／祖样细胞可在无血清特殊生长培养基中以球形体样悬浮长并长期培养、扩增并可连续传代50代以上。2.球形体形成细胞可在CM中贴壁生长,再更换为SGM后,有极少部分细胞以球形体样悬浮。3.球形体形成细胞具有强锚定非依赖性生长能力,在双层软琼脂培养基中可呈克隆样生长,克隆形成率为6.83%,显着高于SK-OV-3细胞的克隆形成率0.41%。4.细胞周期结果表明：球形体形成细胞中处于G0／G1期的细胞高于SK-OV-3细胞。5.球形体形成细胞在10μg／ml DDP作用后的0、12、24、36小时的凋亡率依次为0.30%%、2.64%、3.13%、11.05%,而SK-OV-3细胞在同浓度DDP作用后的0、12、24、36小时的凋亡率依次为4.95%、9.59%、29.77%、44.23%,球形体形成细胞的有较强的对于DDP的抵抗性。6.流式细胞仪检测结果证实：球形体形成细胞中SP细胞(8.7%)、ALDH+细胞(25.05%)均高于SK-OV-3中SP细胞(0.6%)、ALDH+细胞(8.00%)的比例。7.通过实时荧光定量检测表明：球形体形成细胞中干／祖细胞基因Oct4、Nanog的表达较SK-OV-3细胞分别上调8.8925倍、9.8783倍。8.裸鼠移植试验还证实了球形体形成细胞的致瘤性比SK-OV-3细胞强100倍。结论：利用球形体形成法从人卵巢癌细胞系SK-OV-3中分离纯化出的球形体形成细胞在体外具有干／祖细胞的自我更新、无限增殖、多向分化、对DDP的抵抗性的特点及SP细胞和ALDH+细胞比例较高、干／祖细胞基因Oct4、Nanog上调,在裸鼠体内证实具有高致瘤性,初步表明这些球形体形成细胞具有肿瘤干／祖细胞的特性。(本文来源于《天津医科大学》期刊2008-05-01）
祖样细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:研究SOX9的表达在诱导肝细胞向胰腺干祖样细胞转化过程中的意义。方法:分离培养小鼠原代肝细胞,包装、浓缩表达OCT4的慢病毒并感染肝细胞,使用RT-PCR监测慢病毒感染后肝细胞中SOX9的表达,并根据SOX9表达情况尝试向胰腺干祖样细胞诱导。使用PCR和免疫荧光鉴定生成的胰腺干祖样细胞。结果:肝细胞感染OCT4-慢病毒后,肝细胞内颗粒逐渐释出,细胞折光性增强。SOX9表达从第6 d持续至第8 d。从SOX9阴性的第4 d开始向胰腺诱导,无集落样的胰腺干祖样细胞生成,RT-PCR检测其标志物CK19为阴性;从SOX9阳性的第6 d开始向胰腺诱导,可见集落样生长的胰腺干祖样细胞,RT-PCR检测CK19为阳性,免疫荧光染色显示CK19表达在胞浆中。结论:肝细胞向胰腺干祖样细胞转化过程中SOX9的表达提示了"兼性肝细胞"的出现,此细胞具有向胰腺谱系诱导分化的潜能,这为进一步生成有功能的胰岛内分泌细胞和实现糖尿病的细胞替代治疗提供了理论和实验依据。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
祖样细胞论文参考文献
[1].李冰,郝好杰,韩庆旺,申晶,程愈.OCt4联合小分子化合物诱导肝细胞转化为胰腺干祖样细胞[C].中华医学会第十二次全国内分泌学学术会议论文汇编.2013
[2].李冰,郝好杰,韩庆旺,申晶,程愈.SOX9的表达在诱导肝细胞向胰腺干祖样细胞转化中的意义研究[J].现代生物医学进展.2013
[3].李冰.Oct4联合小分子化合物诱导肝细胞重编程为胰腺干祖样细胞[D].中国人民解放军医学院.2013
[4].王利娟.人肝癌干/祖样细胞对肝脏损伤作用的研究[D].天津医科大学.2011
[5].徐琼.人肝癌干/祖样细胞生物学特性及表面分子标志物的研究[D].天津医科大学.2010
[6].赵惠丰.人卵巢癌细胞系SK-OV-3中肿瘤干/祖样细胞的研究[D].天津医科大学.2008