导读:本文包含了低血清论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:糖尿病,miR-328,HUVECs,血管新生
低血清论文文献综述
邹燕[1]（2019）在《miR-328调控高糖低血清条件下HUVECs血管新生的初步研究》一文中研究指出目的:近几十年来,糖尿病(Diabetes mellitus,DM)的发病率、致残率和死亡率都在急剧上升,糖尿病患者由于多种有害刺激,最终导致糖尿病血管并发症,主要有视网膜病变、肾脏功能下降、足部缺血性溃疡和坏疽等,其中足部缺血性溃疡和坏疽主要是由严重的血液低灌注导致的,与血管缺血性损伤有关,因此促进血管生成从而增加血液灌注是治疗糖尿病足的一种治疗策略。microRNAs(miRNAs)是一种内源性非编码小RNA,可在转录后调控基因表达,在细胞增殖、管形成、迁移等细胞功能中起重要作用。有研究表明miR-328具有调节高糖条件下内皮间质转换、参与房颤后心房重构的过程、肿瘤抑制等作用。本研究旨在观察miR-328对糖尿病缺血细胞模型的血管新生作用及初步探讨其作用机制。方法:我们通过在高糖低血清条件下培养脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)24 h从而模拟糖尿病引起的血管缺血状态,通过CCK-8细胞增殖活性检测实验、划痕实验、管形成实验分别检测在高糖低血清条件培养24 h的和正常条件培养24 h的脐静脉内皮细胞的细胞增殖能力、迁移能力和管形成能力,并且通过RT-qPCR实验检测miR-328分别在高糖低血清条件培养的和正常条件培养的脐静脉内皮细胞中的表达,同时采用Western Blot实验观察血管新生能力标志物血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达和相关通路蛋白的表达;进一步在HUVECs中通过转染NC和miR-328 inhibitor达到对照、下调miR-328表达水平的目的后,两组均在高糖低血清条件培养24 h,再以CCK-8细胞增殖活性检测实验、划痕实验、管形成实验检测在高糖低血清条件培养中脐静脉内皮细胞的增殖能力、迁移能力和管形成能力,同时用Western Blot实验观察下调miR-328后HUVECs中VEGF的表达和miR-328调控血管新生过程中相关通路蛋白的表达,用AKT通路抑制剂Periforsin抑制AKT磷酸化后再观察内皮细胞管形成的变化和AKT/mTOR通路的变化;根据观察内皮细胞的功能实验结果,在miRWalk数据库里(http://zmf.umm.uni-heidelberg.de/apps/zmf/mirwalk/index.html)预测miR-328的靶基因,取Target Scan、miRanda、miRDB、miRWalk中的靶基因的交集作为预测的靶基因,再将这些预测到的靶基因在DAVID数据库(https://david.ncifcrf.gov/)里进行Gene Ontology功能富集分析和KEGG Pathway分析,最后通过阅读文献,预测miR-328调节高糖低血清条件影响HUVECs血管新生的靶基因并采用WB实验验证靶基因。结果:内皮细胞血管新生功能实验显示:在CCK-8细胞增殖活性检测实验中,在高糖低血清条件下培养的HUVECs增殖活性比正常对照组的HUVECs增殖活性下降,为正常对照组的0.65倍(P=0.0004);在细胞划痕实验中,在高糖低血清条件下培养的HUVECs迁移能力比正常对照组的HUVECs迁移能力下降,为正常对照组的0.81倍(P=0.0003);在内皮细胞管形成实验中,在高糖低血清条件下培养的HUVECs管形成能力比正常对照组的HUVECs管形成能力下降,为正常对照组的0.45倍(P<0.0001);通过RT-qPCR发现在高糖低血清条件下培养的HUVECs中miR-328表达水平较正常对照组的表达水平增高,为正常对照组的4.2倍(P<0.0001);Western Blot实验显示:在高糖低血清条件下培养的HUVECs的VEGF蛋白表达水平比正常对照组HUVECs的VEGF蛋白表达水平下降,为正常对照组的0.4223倍(P<0.0001)。在经过转染NC和miR-328 inhibitor分别达到对照和下调miR-328的目的,并且两组均在高糖低血清条件培养24 h后:在CCK-8细胞增殖活性检测实验中,转染miR-328 inhibitor的实验组较NC组的HUVECs增殖活性上升,为NC组的1.19倍(P=0.0069);在细胞划痕实验中,转染miR-328 inhibitor的实验组较NC组的HUVECs迁移能力上升,为NC组的1.23倍(P=0.0038);在内皮细胞管形成实验中,转染miR-328inhibitor的实验组较NC组的HUVECs管形成能力上升,为NC组的1.28倍(P=0.0006);Western Blot实验显示转染miR-328 inhibitor的实验组较NC组HUVECs的VEGF表达水平上升,为NC组的3.337倍(P=0.0001)。Western Blot实验观察通路蛋白结果显示:高糖低血清组的p-AKT/AKT蛋白比率为对照组p-AKT/AKT蛋白比率的0.76倍(P<0.0001),得出在高糖低血清的条件下,HUVECs的AKT信号通路受到抑制;转染NC和miR-328 inhibitor后,转染miR-328 inhibitor组的p-AKT/AKT蛋白比率为转染NC组p-AKT/AKT蛋白比率的4.1倍(P<0.0001),转染miR-328inhibitor组的p-mTOR/mTOR蛋白比率为转染NC组p-mTOR/mTOR蛋白比率的1.4倍(P<0.05)。用Periforsin抑制AKT磷酸化后:内皮细胞管形成能力受到抑制,AKT/mTOR信号通路受到抑制(P<0.05)。靶基因预测结果中,miRWalk数据库初步得到miR-328的靶基因有183个,进一步Gene Ontology功能富集分析和KEGG Pathway分析显示,miR-328的靶基因主要与细胞对葡萄糖的反应、细胞增殖、细胞迁移、血管新生、细胞周期停等相关,通过查询文献,筛选出可能与内皮细胞血管新生有关的靶基因有:PIM1、MMP16、LYVE1、PTEN,其中我们选择PIM1进行WB实验验证,WB实验结果显示下调miR-328可促进内皮细胞PIM1蛋白的表达(P<0.05);通过KEGG Pathway分析发现,miR-328的靶基因主要涉及的细胞通路有PI3K-Akt signaling pathway、Insulin resistance、AMPK signaling pathway等共8条信号通路,其中AKT信号通路我们已经验证与本实验有关。结论:1.高糖低血清条件抑制内皮细胞的血管新生功能(抑制HUVECs的增殖功能、迁移功能、管形成功能),促进miR-328的表达水平。2.高糖低血清条件中下调miR-328可促进内皮细胞的血管新生功能(促进HUVECs的增殖功能、迁移功能、管形成功能)。3.miR-328调控高糖低血清条件内皮细胞的血管新生是通过靶基因PIM1和AKT/mTOR信号通路实现的。(本文来源于《西南医科大学》期刊2019-05-01）
余彬辉,贾布拖,贾志平,李卫诚[2]（2019）在《猪瘟病毒生物反应器低血清培养及其免疫效力检测》一文中研究指出目的利用生物反应器低血清培养基灌流培养猪瘟病毒,制备猪瘟病毒活疫苗,检测其免疫效价。方法对猪睾丸ST细胞进行低血清培养驯化,待ST细胞适应低血清培养后,接种至生物反应器,当细胞达到接种密度后,感染猪瘟兔化弱毒株(Classical Swine)毒种,培养96 h后,连续收液48 d,收获的病毒液经滤膜过滤后,制备猪瘟病毒活疫苗。将疫苗免疫健康新西兰家兔和28日龄健康仔猪,检测病毒滴度及免疫效价。结果用2%血清培养ST细胞,细胞接毒密度为5×106个/m L,病毒按3%~5%比例接种。利用上述条件培养的猪瘟病毒连续收获20次,病毒滴度均在7 500 RID/m L以上。免疫仔猪后第14天抗体效价达1∶128,未免疫仔猪抗体效价低于1∶16;攻毒后观察16 d,免疫仔猪无任何猪瘟临床表现,保护率100%,而未免疫仔猪在攻毒后第6天开始陆续死亡,死亡率100%。结论用低血清培养ST细胞制备的猪瘟病毒活疫苗具有较高的免疫效价,为猪瘟病毒疫苗生产工艺的改进奠定了基础。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2019年04期）
史长安,王建伟,苏晨晨[3]（2018）在《低血清硫酸脱氢表雄酮水平对老年男性髋部骨质疏松性骨折风险的影响》一文中研究指出目的探讨低血清硫酸脱氢表雄酮(DHEAS)水平对老年男性髋部骨质疏松性骨折风险的影响。方法将120例老年男性髋部骨质疏松性骨折患者根据未来10年髋部骨质疏松性骨折概率判定标准分为高危组(n=72)和低危组(n=48)。检测患者临床及实验室指标,比较血清DHEAS水平与各指标的相关性,并应用多因素非条件logistic回归分析判断影响老年男性髋部骨质疏松性骨折的危险性因素。结果高危组在年龄、吸烟史人数、嗜酒史人数方面显着高于低危组(P<0.05),在BMI、DHEAS水平、雌二醇水平、性激素结合球蛋白水平、血清IGF-1水平、骨钙素水平、骨密度水平显着低于低危组(P<0.05)。DHEAS与年龄呈负相关(P<0.05);与BMI、雌二醇水平、性激素结合球蛋白水平、血清IGF-1水平、皮质醇水平、骨钙素水平、骨密度水平呈正相关(P<0.05)。年龄越大、DHEAS及雌二醇水平偏低、骨密度值偏低的老年男性会增加髋部骨质疏松性骨折风险(P<0.05)。结论低血清DHEAS水平能增加老年男性髋部骨质疏松性骨折风险,老年男性患者应提前进行DHEAS治疗,预防髋部骨质疏松性骨折发生。(本文来源于《临床骨科杂志》期刊2018年03期）
陈以衡[4]（2016）在《低血清微载体悬浮体系生产ST细胞源CSFV工艺的开发与研究》一文中研究指出猪瘟是由猪瘟病毒(CSFV)引起的一种高度接触性传染病,接种疫苗是应对国内猪瘟疫情不间断流行与爆发的主要措施。由于传统CSFV生产工艺过程繁琐、生产周期长,难以在较短周期内满足质量稳定、数目庞大的猪瘟疫苗的需求。开发与优化基于低血清微载体悬浮培养体系生产ST细胞源CSFV的工艺,能在提高生产效率的同时显着降低成本,是未来大规模生产细胞源猪瘟疫苗的重要方向。本文首先使用DoE对6种低血清(1%FBS)培养基进行混料实验,与DMEM+10%FBS相比,筛选出的Low Serum Medium (LSM)能以更高的比生长速率(0.626 d~(-1))连续稳定传代。进一步考察微载体浓度与细胞接种密度对ST细胞生长的影响。结果表明,3 g/L微载体用量与3×10~5 cells/ml细胞接种密度既能提供充足的贴壁面积,同时微载体利用率达到44.4%,培养13天细胞扩增了8.80倍,最高细胞密度达到(2.94±0.30)×10~6 cells/ml。理论计算搅拌转速后,在3 L Sartorius生物反应器中设定搅拌转速为5 rpm培养ST细胞最高密度达到27.7×10~5 cells/ml。其次,在病毒增殖阶段对基于LSM的方瓶体系CSFV生产工艺进行研究。结果表明,以RT-q(?)R检测病毒基因拷贝数为指标,方瓶体系LSM收获病毒(26.68±0.73)×107copies/ml,总量是DMEM的1.90倍。但兔体定型热免疫结果显示,LSM毒样均低于50万倍免疫效果,产生的CSFV可能在抗原结构上存在缺陷。进一步对培养过程中急剧变化的pH进行调控,不同的pH调节方式均能显着改善pH,但病毒产量没有显着提高。对CSFV同样有重要影响的温度及冻融次数的研究发现,37℃与35℃条件下孵育CSFV4天最终含量相差5.6%反复冻融5次CSFV病毒量即下降50%。再次在搅拌瓶体系考察不同MOI、TOI及(?)歇搅拌模式对病毒产量与单位细胞产毒能力的影响,结果表明TOI为120 h以15%(v/v(?)OI接毒能达到最高CSFV产量为(4.55±0.46)×107 copies/ml,兔体定型热检测能到达50(?)倍免疫效果。低于15%MOI接毒时,CSFV不能有效利用高细胞密度进行复制扩增,(?)I达到30%对细胞维持负面影响过大。此外,不同MOI病毒产量均随TOI的延迟而增加,在细胞生长平台期接毒更有利于CSFV在短时间内的快速复制。接毒后12 h内设置每20 min停10 min的间歇搅拌模式对CSFV增殖有促进作用。最后,在搅拌瓶体系在4(?)3天全换液条件下,收获的毒样均只有第一收病毒达到RT-qPCR与50万倍兔体定型(?)指标,其他几收病毒含量均随着收毒次数的增加而逐渐减少。理论计算搅拌瓶50 rpm条件下的溶氧限制很可能是其原因。通过本文研究,开发了适合ST细(?)贴壁生长的低血清培养基LSM,初步优化了细胞生长与病毒增殖相关参数,为大规模低血清微载体悬浮体系生产ST细胞源CSFV工艺的建立提供了基础数据。(本文来源于《华东理工大学》期刊2016-11-08）
张瑞永,管宇,吴信明,梅建国,姚春阳[5]（2016）在《低血清培养PK-15细胞及其增殖猪圆环病毒2型的研究》一文中研究指出依次采用含60、30、20、10mL/L血清浓度的低血清培养基驯化PK-15细胞,并给驯化好的细胞上接种猪圆环病毒2型(PCV-2),以确定PCV-2在该培养体系下的生长情况。结果用含60、30、20mL/L血清浓度的低血清培养基各进行3代次驯化,PK-15细胞能完全适应且生长状态良好;当血清浓度降至10mL/L时,传代1次细胞无法保持良好状态,细胞出现贴壁较差、生长停滞等现象。各血清浓度培养体系中细胞生长曲线测定结果显示,在细胞培养的0、24、48、72、96h各组细胞密度与常规培养的对照组差别不明显。因此用该低血清培养体系培养PK-15细胞时,血清最低添加量为20mL/L。用该体系培养的PK-15细胞接种PCV-2后,通过荧光抗体染色测定病毒滴度。结果显示,低血清培养的PCV-2病毒滴度为10~(6.5)TCID_(50)/mL,与常规条件培养的PCV-2对照(病毒滴度为10~(6.375 )TCID_(50)/mL)差别不明显,表明该体系可用于PCV-2的增殖。表明研究建立了PK-15细胞低血清培养PCV-2体系,为PCV-2的相关研究奠定了基础。(本文来源于《动物医学进展》期刊2016年09期）
陈苗苗,董金杰,杜平[6]（2016）在《低血清培养的BHK21细胞染色体遗传稳定性分析》一文中研究指出[目的]对一种商业化的低血清培养基适应BHK21细胞进行传代培养,并分析该细胞染色体的变异稳定性,以判定其质量。[方法]采用直接法制备4个代次BHK21细胞的染色体标本,用常规Giemsa染色,在1 000倍光学显微镜下计数中期分裂相染色体数目,并进行核型分析。[结果]BHK21为亚二倍体或亚四倍体细胞系,亚二倍体总数为42,亚四倍体细胞总数为72~74,该细胞系染色体的畸变率在各代次所占比例为0~2%,均较低。[结论]该细胞系的遗传学特性相对稳定,各代次间无本质差异,可候选为制苗用细胞。(本文来源于《安徽农业科学》期刊2016年23期）
陈苗苗,董金杰,杜平[7]（2016）在《低血清培养的BHK21细胞染色体遗传稳定性分析》一文中研究指出目的:分析1种商业化的低血清培养基适应BHK21细胞进行传代培养,该细胞染色体的变异稳定性,以判定其质量。方法:采用直接法制取4个代次的BHK21细胞的染色体标本,用常规Giemsa染色,1 000倍光学显微镜下计数中期分裂相染色体数目,求出染色体变异率(%),并进行核型分析。结果:BHK21为亚二倍体或亚四倍体细胞系,亚二倍体众数为42,亚四倍体细胞众数为72~74,该细胞系染色体的畸变率在各代次所占的比例为0~2%,均较低。结论:用商业化的低血清培养基驯化培养BHK21细胞,逐渐降低培养液中血清含量,进行传代培养,通过选取不同代次细胞的染色体进行核型分析,该细胞系的遗传学特性相对稳定,各代次间无本质差异,可候选为制苗用细胞。(本文来源于《贵州畜牧兽医》期刊2016年04期）
冯年花,曲学彬[8]（2016）在《人胚胎干细胞向间充质干细胞分化的低血清诱导法的建立》一文中研究指出目的建立人胚胎干细胞向间充质干细胞分化的低血清诱导方法。方法用低血清培养体系培养人胚胎干细胞,每3 d半量换液,7~10 d后消化成单细胞用扩增培养基培养,每3 d传代1次。结果人胚胎干细胞呈克隆样增殖,边缘呈锯齿状,表达多能干细胞标志OCT4、SOX2和NANOG。诱导3 d后,克隆间隙出现体积较小的成纤维样细胞,增殖能力强,经两次传代后可获得形态一致的长梭形细胞。这些细胞表达间质细胞标志VIMENTIN,细胞均表达CD105、CD90、CD73、CD44和HLA-ABC,不表达CD34、CD45和HLA-DR,且具有成脂和成骨分化能力。结论用低血清诱导法能快速获得较高纯度的人胚胎干细胞源性间充质干细胞。(本文来源于《基础医学与临床》期刊2016年08期）
[9]（2016）在《低血清维生素D水平与IBD的发病率和不良预后有关》一文中研究指出近期,一项在线发表于《American Journal of Gastroenterology》上的5年纵向研究结果显示,低血清维生素D水平与IBD(炎症性肠病)患者的发病率,疾病严重程度和不良预后有关,而且补充似乎与保健应用减少有关。(本文来源于《临床合理用药杂志》期刊2016年10期）
舒彦,贾玉柱,谢波,叶文鑫,程一宁[10]（2016）在《低血清PSA前列腺癌的磁共振表现分析》一文中研究指出随着人口老龄化及社会生活方式的改变,我国前列腺疾病尤其是前列腺癌的发病率呈逐年上升的态势~([1])。血清前列腺特异性抗原(PSA)是鉴别前列腺良恶性病变的重要辅助诊断指标,但早期前列腺癌患者PSA往往没有明显升高,因此前列腺癌早期诊断仍存在困难~([2])。磁共振具有良好的软组织分辨率,被认为是(本文来源于《浙江医学》期刊2016年06期）
低血清论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的利用生物反应器低血清培养基灌流培养猪瘟病毒,制备猪瘟病毒活疫苗,检测其免疫效价。方法对猪睾丸ST细胞进行低血清培养驯化,待ST细胞适应低血清培养后,接种至生物反应器,当细胞达到接种密度后,感染猪瘟兔化弱毒株(Classical Swine)毒种,培养96 h后,连续收液48 d,收获的病毒液经滤膜过滤后,制备猪瘟病毒活疫苗。将疫苗免疫健康新西兰家兔和28日龄健康仔猪,检测病毒滴度及免疫效价。结果用2%血清培养ST细胞,细胞接毒密度为5×106个/m L,病毒按3%~5%比例接种。利用上述条件培养的猪瘟病毒连续收获20次,病毒滴度均在7 500 RID/m L以上。免疫仔猪后第14天抗体效价达1∶128,未免疫仔猪抗体效价低于1∶16;攻毒后观察16 d,免疫仔猪无任何猪瘟临床表现,保护率100%,而未免疫仔猪在攻毒后第6天开始陆续死亡,死亡率100%。结论用低血清培养ST细胞制备的猪瘟病毒活疫苗具有较高的免疫效价,为猪瘟病毒疫苗生产工艺的改进奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
低血清论文参考文献
[1].邹燕.miR-328调控高糖低血清条件下HUVECs血管新生的初步研究[D].西南医科大学.2019
[2].余彬辉,贾布拖,贾志平,李卫诚.猪瘟病毒生物反应器低血清培养及其免疫效力检测[J].中国生物制品学杂志.2019
[3].史长安,王建伟,苏晨晨.低血清硫酸脱氢表雄酮水平对老年男性髋部骨质疏松性骨折风险的影响[J].临床骨科杂志.2018
[4].陈以衡.低血清微载体悬浮体系生产ST细胞源CSFV工艺的开发与研究[D].华东理工大学.2016
[5].张瑞永,管宇,吴信明,梅建国,姚春阳.低血清培养PK-15细胞及其增殖猪圆环病毒2型的研究[J].动物医学进展.2016
[6].陈苗苗,董金杰,杜平.低血清培养的BHK21细胞染色体遗传稳定性分析[J].安徽农业科学.2016
[7].陈苗苗,董金杰,杜平.低血清培养的BHK21细胞染色体遗传稳定性分析[J].贵州畜牧兽医.2016
[8].冯年花,曲学彬.人胚胎干细胞向间充质干细胞分化的低血清诱导法的建立[J].基础医学与临床.2016
[9]..低血清维生素D水平与IBD的发病率和不良预后有关[J].临床合理用药杂志.2016
[10].舒彦,贾玉柱,谢波,叶文鑫,程一宁.低血清PSA前列腺癌的磁共振表现分析[J].浙江医学.2016