导读:本文包含了选择性杀伤作用论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:GP73抗体,阳离子脂质体,肝细胞癌,基因治疗
选择性杀伤作用论文文献综述
孟凡秀[1]（2017）在《GP73抗体修饰阳离子脂质体介导HSV-tk基因对肝癌细胞的选择性杀伤作用研究》一文中研究指出目的:1.筛选肝癌细胞和其他非肝癌细胞表面高尔基体膜蛋白73(GP73)阳性表达率,确定GP73在肝癌细胞表面表达的特异性;2.制备普通阳离子脂质体;3.将普通阳离子脂质体(lipoplexes)与GP73抗体偶联,构建一种新型的由GP73抗体修饰的能够特异性结合肝癌细胞的靶向治疗载体;4.制备不同剂量的GP73抗体修饰脂质体,转染Hep G2肝癌细胞,流式细胞术筛选转染率最高的GP73抗体修饰组,确定脂质体中GP73抗体的最佳负载量;5.比较GP73抗体修饰的脂质体和普通阳离子脂质体对人肝癌细胞株Hep G2、Bel-7402、SMMC-7721和人正常肝细胞HL-7702以及人非肝癌细胞SW480和正常人胚肾细胞HEK293T的转染效率;6.研究由GP73抗体修饰的阳离子脂质体介导的HSVtk自杀基因联合更昔洛韦(GCV)对肝癌细胞的体外杀伤作用;7.研究由GP73抗体修饰的阳离子脂质体介导的HSVtk自杀基因联合GCV对肝癌荷瘤裸鼠体内肿瘤的杀伤作用。方法:1.用GP73的一抗(Anti-GOLPH2)连接二抗FITC分别孵育细胞Hep G2、SMMC-7721、Bel-7402、HL-7702、Hela、SW480和HEK293T,通过流式细胞仪检测细胞表面GP73的阳性表达率。2.乙醇注入法和挤压法联合制备普通阳离子脂质体(实验室前期制备方法)。3.将GP73抗体与阳离子脂质体偶联,制备GP73抗体修饰的脂质体。4.将普通阳离子脂质体和GP73抗体修饰脂质体分别与p Genesil-1质粒混匀、孵育,确定最佳的包裹比例。5.制备含量不同的GP73抗体修饰的阳离子脂质体,转染Hep G2肝癌细胞,流式细胞术筛选转染率最高的GP73抗体修饰脂质体组,确定脂质体中GP73的最佳负载量。6.分别使用GP73抗体修饰的阳离子脂质体转染p Genesil-1质粒,流式细胞仪检测Hep G2、Bel-7402、SMMC-7721、HL-7702、Hela、SW480、HEK293T细胞的报告基因绿色荧光蛋白(EGFP)的表达。7.用GP73抗体修饰的阳离子脂质体携带p Survivin-TK-PBI-CMV2质粒分别转染细胞Hep G2、Bel-7402和HL-7702,48小时后提取细胞的总RNA和总蛋白,并通过RT-PCR、Westernblot技术方法检测细胞中HSVtk基因的m RNA和蛋白表达水平。8.用GP73抗体修饰的阳离子脂质体携带p Survivin-TK-PBI-CMV2质粒分别转染肝癌细胞Hep G2、Bel-7402和肝正常细胞HL-7702,加入浓度为150μg/m L的前体药物GCV处理24 h,经流式细胞仪检测细胞凋亡情况。9.梯度剂量的GCV处理转染后的肝癌细胞48小时,MTT法检测HSVtk自杀基因系统对肝(癌)细胞生存率的影响情况。10.用生长状态良好的Hep G2肝癌细胞接种裸鼠成瘤,利用公式V=ab2/2,(a代表瘤体最长径,b代表瘤体最短径)计算瘤体积。11.HE染色检测干预后叁组肿瘤组织坏死情况。12.TUNEL凋亡试剂盒检测干预后叁组肿瘤组织细胞凋亡情况。13.裸鼠开始治疗后,观察裸鼠生长状态,并持续40天记录裸鼠存活状态,用Graphpad Prism v 6.0软件分析数据,绘制生长曲线图谱,比较叁组荷瘤裸鼠生存期。结果:1.通过对细胞表面GP73阳性表达率的筛选,肝癌细胞Hep G2、Bel-7402、SMMC-7721细胞表面GP73阳性率高于HL-7702、Hela、SW480、HEK293T,差异有统计学意义(P<0.05),表明了GP73在肝癌细胞表面表达有特异性;2.制备了一种普通阳离子脂质体;3.制备了一种GP73抗体修饰的能够特异性结合肝癌细胞的靶向治疗载体(Anti GP73-lipoplexes);4.GP73抗体修饰的脂质体对人肝癌细胞株Hep G2、Bel-7402和SMMC-7721的转染效率明显高于肝正常细胞和非肝癌细胞(P<0.05);5.基因和蛋白水平检测表明,HSVtk基因在Hep G2和Bel-7402肝癌细胞中有表达,而在肝正常细胞HL-7702中未见表达;6.细胞增殖实验(MTT)结果可见,Hep G2和Bel-7402肝癌细胞转染组在GCV浓度不断增加的情况下,细胞存活率不断下降,与未转染加药组和正常肝细胞HL-7702相比有统计学差异(P<0.05);7.流式细胞仪(FC 500)检测凋亡结果表明Hep G2、Bel-7402肝癌细胞死亡率明显高于肝正常细胞组(P<0.05);8.肝肿瘤裸鼠造模成功,肿瘤体积达160~200 mm3;9.免疫组化和TUNEL检测肿瘤组织细胞凋亡结果表明,Anti GP73-lipoplexes运载HSVtk基因联合GCV治疗组肿瘤组织细胞凋亡明显,而lipoplexes+HSVtk+GCV组有少量细胞凋亡,空载组(lipoplexes+Vector+GCV)几乎未见凋亡细胞;10.生存曲线分析表明Anti GP73-lipoplexes+HSVtk+GCV治疗组裸鼠生存期明显长于对照组(P<0.05)。结论:1.肝癌细胞Hep G2、Bel-7402和SMMC-7721表面GP73阳性表达率高于肝正常细胞和非肝癌细胞。2.GP73修饰的阳离子脂质体(GP73-lipoplexes)载体运输系统成功构建。3.Anti GP73-lipoplexes对肝癌细胞具有较高的转染效率。4.Anti GP73-lipoplexes介导自杀基因真核表达质粒p Survivin-TK-PBI-CMV2在GP73阳性高表达的Hep G2、Bel-7402肝癌细胞内成功表达。5.在细胞水平:Anti GP73-lipoplexes介导SUR启动子调控的HSVtk/GCV自杀基因系统对Hep G2、Bel-7402肝癌细胞具有选择性杀伤作用,对正常肝细胞HL-7702没有杀伤作用。6.Hep G2肝癌细胞异种移植瘤裸鼠接种成功。7.在动物水平:Anti GP73-lipoplexes介导SUR启动子调控的HSVtk/GCV自杀基因系统对Hep G2肝癌细胞异种移植瘤裸鼠肿瘤的生长与增殖有抑制作用,而且能够延长治疗组荷瘤裸鼠的生存期。(本文来源于《山西医科大学》期刊2017-06-20）
高然朋[2]（2015）在《新型靶向基因载体介导TK基因对肝癌细胞选择性杀伤作用研究》一文中研究指出目的:1.使用载脂蛋白E(apoE)与阳离子脂质体组合成一种具有靶向性结合肝(癌)细胞的基因运输载体apoE-lipoplexes,检测其转染肝(癌)细胞的效率。2.采用甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)启动子调控的,以增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)为报告基因的,单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpes simplex virus thymidine kinase,HSVtk)为自杀基因的真核表达质粒pAFP-TK-IRES2-EGFP,将apoE-lipoplexes结合pAFP-TK-IRES2-EGFP质粒转染肝(癌)细胞,检测HSVtk在肝(癌)细胞内的特异表达情况。3.检测apoE-lipoplexes介导AFP启动子调控的TK/GCV自杀基因系统对肝癌细胞的体外杀伤作用。方法:1.制备载脂蛋白E修饰阳离子脂质体(apoE-lipoplexes)和单纯的阳离子脂质体(lipoplexes),分别运载以EGFP为报告基因的pGenesil-1质粒转染肝癌细胞HepG2、HUH-7和Li-7,正常肝细胞HL-7702和大肠癌细胞SW480,流式细胞术检测转染效率。2.检测apoE-lipoplexes与pAFP-TK-IRES2-EGFP质粒复合物在DNaseⅠ中的稳定性。3.以AFP启动子调控的HSVtk自杀基因真核表达质pAFP-TK-IRES2-EGFP作为杀伤质粒,以apoE-lipoplexes运载pAFP-TK-IRES2-EGFP分别转染HepG2、HUH-7、Li-7、HL-7702和SW480细胞,分别采用RT-PCR和western blotting法检测HSVtk基因在mRNA与蛋白水平的表达。4.以pAFP-IRES2-EGFP质粒作对照组,pAFP-TK-IRES2-EGFP作实验组,分别转染肝癌细胞HepG、HUH-7、Li-7,加入前体药物更昔洛韦(ganciclovir,GCV)后,流式细胞术检测细胞死亡率。结果:1.成功合成一种具有肝(癌)细胞靶向结合特性的脂质体apoE-lipoplexes,与单纯的脂质体lipoplexes比较,apoE-lipoplexes对肝(癌)细胞转染效率显着提高,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。2.酶切鉴定pAFP-TK-IRES2-EGFP真核表达质粒后,转染HepG2、HUH-7、Li-7、HL-7702和SW480细胞,经RT-PCR和western blotting检测,HSVtk在甲胎蛋白阳性的HepG2、HUH-7、Li-7细胞内表达,但在甲胎蛋白阴性的HL-7702和SW480细胞内未检测出HSVtk表达。3.与对照组比较,肝癌细胞HepG2、HUH-7、Li-7的死亡率均显着提高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:1.载脂蛋白E修饰的阳离子脂质体apoE-lipoplexes对肝(癌)细胞具有较高的转染效率。2.apoE-lipoplexes介导AFP启动子调控的自杀基因真核表达质粒pAFP-TK-IRES2-EGFP在甲胎蛋白阳性的HepG2、HUH-7和Li-7肝癌细胞内成功表达。3.apoE-lipoplexes介导HSVtk/GCV自杀基因系统对HepG2、HUH-7和Li-7肝癌细胞具有杀伤作用,对正常肝细胞没有杀伤作用。(本文来源于《山西医科大学》期刊2015-05-25）
张金花,赵明才,贺莉芳,万启惠[3]（2014）在《家蝇胚胎细胞抗菌蛋白对人髓样白血病细胞K562选择性杀伤作用的研究》一文中研究指出目的利用脂多糖刺激家蝇胚胎细胞产生并提取抗菌蛋白,对比研究家蝇胚胎细胞抗菌蛋白和高叁尖杉酯碱(HHT)对人髓样白血病细胞K562和正常人体细胞的抑制杀伤作用。方法采用含20mg/L脂多糖的无血清M3培养基作用于处于对数生长期的家蝇胚胎细胞16h,提取上清液中的抗菌蛋白,将抗菌蛋白配制为40、80、160、320和640μg/mL 5个浓度组,采用MTT法测定各浓度抗菌蛋白对K562和人脐静脉血管内皮细胞的抑制作用。将处于对数生长期的K562细胞和人脐静脉血管内皮细胞配制成相同浓度的HHT组、家蝇胚胎细胞抗菌蛋白组,两种细胞均采用自身设置对照组。采用流式细胞术测定K562细胞和人脐静脉血管内皮细胞3组药物的有效杀伤率。结果 MTT法检测显示,5种浓度抗菌蛋白对K562细胞均具有明显抑制作用,各浓度抗菌蛋白对人脐静脉血管内皮细胞均无抑制作用。对照组、HHT组及家蝇胚胎细胞抗菌蛋白组对K562细胞的有效杀伤率分别为(28.16±2.14)%、(81.41±1.95)%和(82.90±3.03)%;对人脐静脉血管内皮细胞的有效杀伤率分别为(41.13±2.51)%、(82.20±2.57)%和(36.68±1.86)%。结论家蝇胚胎细胞抗菌肽与常用的白血病化疗药物相比,优点在于能有效杀伤白血病细胞又不损伤正常人体细胞。(本文来源于《重庆医学》期刊2014年33期）
秦田田[4]（2014）在《EGFRvⅢ胞外段修饰的树突状细胞诱导CTL细胞对EGFRvⅢ阳性神经胶质瘤细胞的选择性杀伤作用》一文中研究指出背景：传统的针对恶性肿瘤的免疫治疗效果不佳的原因主要是由于副作用大,因而在临床推广受到极大的限制。针对肿瘤细胞表面的特异性肿瘤抗原的靶向免疫治疗方法能够准确且有效的清除体内残存的肿瘤细胞。而表达于神经胶质瘤细胞表面且也广泛表达于其它肿瘤表面的表皮生长因子受体Ⅲ型突变体是一个非常引人注目的免疫治疗作用靶点。目的：探讨GFRvⅢ胞外段修饰的树突状细胞诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对表皮生长因子Ⅲ型突变体(EGFRvⅢ)阳性神经胶质瘤细胞的的选择性杀伤作用。方法：我们利用rAAV系统制备重组腺相关病毒(rAAV/EGFRvⅢext/GFP),感染由人外周血单核细胞衍生而来的树突状细胞,进而诱导产生针对EGFRvⅢ特异性的细胞毒性T淋巴细胞(CTL),流式细胞仪检测树突状细胞表面CD80、CD83、HLA-DR分子的表达情况,Western blot检测EGFRvIIIext在树突状细胞中的表达,MLR检测EGFRvⅢext+树突状细胞诱导的特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的选择性杀伤作用,ELISA法检测细胞因子IL-2和IFN-γ的分泌情况。结果：结果显示为：(1)流式细胞仪检测树突状细胞表面的CD80、CD83、HLA-DR的表达分别为81.59%、67.37%、85.38%。(2)rAAV对树突状细胞的感染率达到91.37%,EGFRvⅢext蛋白在被rAAV/EGFRvⅢext/GFP感染的树突状细胞中显着表达,westernblot显示其分子量约为58kDa。(3)体外试验显示EGFRvⅢext+树突状细胞诱导的CTL细胞对EGFRvⅢ+U87胶质瘤细胞的抗原依赖性激活和特异性的杀伤作用。(4)T淋巴细胞与EGFRvⅢext+的树突状细胞共培养的上清中检测到显着的IFN-γ和IL-2活性。(5)与EGFRvⅢext+的树突状细胞共培养使T细胞大量增殖。结论：我们的研究表明在体外EGFRvⅢext+树突状细胞显着地加强了针对EGFRvⅢext+神经胶质瘤细胞U87的免疫杀伤作用。(本文来源于《新乡医学院》期刊2014-04-01）
黄莹[5]（2013）在《嵌合EGFRvⅢ scFv-CD137-CD3ζ质粒的构建及其所修饰T淋巴细胞的选择性杀伤作用》一文中研究指出背景：以免疫效应细胞为基础的过继免疫治疗（AIT）是肿瘤生物治疗的重要方法之一，从实验室到临床都显现出了一定的抗肿瘤作用，日益受到人们的重视。然而对于大多数肿瘤来说，AIT并未取得满意的治疗效果，在临床上只起辅助治疗作用。嵌合抗原受体（CAR）基因修饰T细胞是近年来发展的靶向免疫治疗新策略，它赋予T细胞更强的增殖性，持久的生命力，靶向杀伤活性，使T细胞能克服肿瘤局部免疫抑制微环境和打破宿主免疫耐受状态，为肿瘤过继免疫治疗注入了新的活力。表皮生长因子受体Ⅲ型突变体（EGFRvⅢ）是脑胶质瘤等恶性肿瘤中表达率很高的肿瘤特异性抗原，与肿瘤的发生、发展有密切关系，为肿瘤靶向治疗理想的分子靶点。本课题设计第二代嵌合抗原受体EGFRvⅢ scFv-CD137-CD3ζ，利用EGFRvⅢ scFv实现肿瘤抗原靶向性，共刺激分子CD137增强T细胞活性，CD3ζ激活T细胞毒性反应。以慢病毒介导CAR修饰T细胞，重定向T细胞特异性识别表达EGFRvⅢ的脑胶质瘤细胞，体内外试验证实其选择性杀伤作用，为胶质瘤等恶性肿瘤的免疫治疗探索新方法。目的：探讨嵌合EGFRvⅢ scFv-CD137-CD3ζ修饰T细胞对EGFRvⅢ阳性胶质瘤细胞的靶向杀伤作用。方法：利用基因合成方法获得Hinge-TM-CD137-CD3ζ，应用分子克隆技术将其克隆入慢病毒转移载体pCDH-CMV-MCS的EcoRI和BamHI位点，新获得的载体命名pCDH-CD137-CD3ζ。用PCR扩增pCR2.1TOPO-EGFRvⅢ scFv中的EGFRvⅢ scFv基因序列，将其克隆入pCDH-CD137-CD3ζ的EcoRI位点，基因连接方向的确定用菌落PCR鉴定。最后经DNA测序鉴定，新质粒命名为pCDH-CAR。通过磷酸钙沉淀法将包装质粒pDel8.9、包膜蛋白质粒pVSVG和含目的基因的转移质粒pCDH-CAR共转染293T包装细胞，收集病毒上清。用蔗糖超速离心沉淀法浓缩，制备成慢病毒（LV-EGFRvⅢ/CAR），用p24ELISA试剂盒测定病毒滴度。应用免疫磁珠技术分离、激活人外周血CD3~+T淋巴细胞并用慢病毒感染，用流式细胞仪和Western blot检测CAR在T细胞的表达，~(51)Cr释放法检测CAR~+T细胞的选择性杀伤作用，ELISA法检测细胞因子IFN_(-γ)的分泌。并在裸鼠体内验证其对人脑胶质瘤细胞株EGFRvⅢ~+U87的肿瘤抑制作用。结果：DNA测序鉴定嵌合抗原受体各基因片段EGFRvⅢ scFv、铰链区、跨膜区、CD137胞内段和CD3ζ序列和连接正确，制备的慢病毒LV-EGFRvⅢ/CAR滴度达1.8x10~6TU/ml，转染T细胞的效率68.73%，体外试验显示CAR~+T细胞对EGFRvⅢ~+U87胶质瘤细胞的抗原依赖性激活和特异性的杀伤作用，共培养上清中检测到显着的IFN_(-γ)活性，动物实验显示出CAR~+T细胞对裸鼠移植肿瘤的特异性肿瘤抑制作用。结论：CAR~+T细胞在体内和体外均显示出较好的肿瘤抗原特异性杀伤作用，为靶向性肿瘤过继免疫治疗奠定了一定的实验基础。(本文来源于《河南大学》期刊2013-04-01）
陈竞[6]（2011）在《人端粒酶逆转录酶调控的CD基因对卵巢癌细胞株的选择性杀伤作用研究》一文中研究指出[目的]构建人端粒酶逆转录酶启动子(hTERTp)调控下的自杀基因—胞嘧啶脱氨酶-胸苷激酶/5-氟胞嘧啶(CD-TK/5-FC)系统对人卵巢细胞及正常细胞株的体外杀伤作用。[方法]应用脂质体转染法将hTERT核心启动子启动质粒pBTdel-279转染人卵巢癌细胞系3AO、正常卵巢上皮细胞(NOEC)和人胚肺成纤维细胞株HELF,用荧光素酶分析检测hTERT启动子活性;应用RT-PCR技术检测hTERTmRNA的表达水平;用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法及流式细胞仪检测pBTdel-279-CD-TK/5-FC系统和pcDNA3-CD-TK/5-FC系统对上述3种细胞不同的杀伤作用;利用RT-PCR技术检测转染前后3AO和NOEC细胞中CD和TK基因的不表达情况。[结果]卵巢癌细胞系3AO中hTERT启动子活性增高,为23.2%,与pBTdel-279-TK/GCV系统作用相比,pBTdel-279-CD-TK/5-FC+GCV系统对端粒酶阳性的卵巢癌细胞系3AO的杀伤作用显着增强,对于端粒酶阴性正常细胞NOEC和HELF则无杀伤作用;pcDNA3-CD-TK转染后,3种细胞中均可检测到CD和TK基因;pBTdel-279-TK转染后,3AO可检测到CD和TK基因,正常细胞中则呈阴性。[结论]人端粒酶逆转录酶启动子调控下的CD自杀基因对卵巢癌细胞株选择性杀伤作用治疗是一种高效、靶向的卵巢癌基因治疗方式。(本文来源于《现代预防医学》期刊2011年15期）
白明慧[7]（2011）在《联邻苯二酚结构的DNA交联剂的设计合成研究及其对黑素肿瘤细胞的选择性杀伤作用》一文中研究指出DNA作为生物体中遗传信息的主要载体在遗传信息的传递中车关重要,以DNA为靶目标的抗癌药物的设计一直是药物研究的热点之一。其中,许多临床上使用的抗肿瘤药物的作用机理涉及到DNA的交联。它们通过与DNA的共价结合作用将DNA双链交联,阻碍DNA双链的打开,使之不能进行遗传信息的复制和传递,从而导致细胞的死亡达到治疗癌症的目的。可诱导的DNA交联剂的引入,增强了药物的靶向性和选择性。本论文设计合成了十二个含不同连接基团的联邻苯二酚结构的化合物,通过高碘酸钠或者酪氨酸酶的氧化诱导,研究了它们与DNA的交联活性。同时,鉴于恶性黑素瘤细胞中酪氨酸酶的含量高表达,我们建立了一种以联邻苯二酚结构的DNA交联剂选择性的杀伤黑素瘤细胞的方法。具体研究内容涵盖以下几点：1.首先在体外实验中,我们用琼脂糖凝胶电泳实验检测了化合物与线性DNA交联的能力。在高碘酸钠的氧化诱导下,两个酚羟基在邻位的化合物7a-f都表现出了很强的DNA交联能力,而两个酚羟基在间位的化合物10a-f交联能力很差。在酪氨酸酶的氧化诱导下,所有的化合物均表现出DNA交联能力,两个酚羟基在间位的化合物10a-f比两个酚羟基在邻位的化合物7a-f的交联能力略好。并且,中间连有联苯结构的化合物10f交联活性最好。另外,我们通过3-甲基-2-苯并噻唑酮腙(MBTH)的颜色实验,捕捉到这类化合物在酪氨酸酶氧化诱导后有二醌的中间体的产生,初步提出了交联机理。2.我们进一步对此类联邻苯二酚化合物的抗癌活性进行了研究。我们用MTT法对药物的细胞毒性进行了研究。细胞毒性实验表明此类联邻苯二酚化合物对酪氨酸酶高表达的恶性黑素瘤细胞的毒性非常明显,而对不含有酪氨酸酶的宫颈癌细胞Hela和正常卵巢细胞CHO毒性很弱。我们通过一系列的分了生物学的方法,包括在细胞内检测邻苯二酚结构的BODIPY荧光探针实验,单细胞凝胶电泳实验,γ-H2AX免疫荧光实验以及通过观测细胞核形态变化,验证了化合物对恶性黑素瘤细胞的选择性杀伤力主要是通过DNA损伤起作用。更重要的是,这些DNA损伤与DNA交联有关。联邻二苯酚的化合物是因为能与恶性黑色素瘤细胞的细胞核中的DNA发生交联,而导致了它具有高选择性的杀伤恶性黑色素瘤细胞的能力。(本文来源于《武汉大学》期刊2011-05-01）
金军[8]（2011）在《水疱性口炎病毒对胃肠道肿瘤细胞的选择性感染和杀伤作用研究》一文中研究指出目的研究水疱性口炎病毒对胃肠道肿瘤细胞的选择性感染和杀伤作用。方法用0.1 pfu/细胞的水疱性口炎病毒分别感染胃癌细胞株(SGC-7901,BGC-823)、结肠癌细胞株(SW-480,HT-29)和脐静脉内皮细胞(HUVECs),应用标准噬斑测定技术滴定病毒在各类细胞中的产量,MTT法检测细胞增殖能力,TUNEL法检测细胞凋亡。结果 0.1 pfu/细胞的水疱性口炎病毒与上述5种细胞共同培养48h后,各细胞水疱性口炎病毒的产量分别为HUVECs(3.10±0.32)×104,SGC-7901(5.61±0.44)×105,BGC-823(6.3 2±0.36)×105,SW-480(7.22±0.82)×105,HT-29(6.97±0.18)×105。MTT结果显示除脐静脉内皮细胞外,其他细胞被大量杀死;TUNEL凋亡检测结果显示胃癌细胞和结肠癌细胞部分凋亡,脐静脉内皮细胞则很少凋亡。结论水疱性口炎病毒对上述胃癌细胞和结肠癌细胞有选择性感染和杀伤作用,并且能够诱导这些细胞凋亡,对正常细胞则影响不大,水疱性口炎病毒有希望成为有效的抗胃肠道肿瘤制剂。(本文来源于《中国肿瘤临床与康复》期刊2011年01期）
金军,周瑞[9]（2010）在《水疱性口炎病毒对胃癌细胞的选择性感染和杀伤作用的研究》一文中研究指出目的研究水疱性口炎病毒(VSV)对胃癌细胞的选择性感染和杀伤作用。方法用0.1PFU/细胞的VSV分别感染胃癌细胞株(SGC-7901、BGC-823)和人脐静脉内皮细胞(HUVEC),应用标准噬斑测定技术滴定病毒在各类细胞中的产量,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,TUNEL法检测细胞凋亡。结果 0.1PFU/细胞的VSV与上述3种细胞共同培养48h后,各细胞VSV的产量分别为HUVEC(3.10±0.32)×104、SGC-7901(5.61±0.44)×105、BGC-823(6.32±0.36)×105。MTT结果显示除脐静脉内皮细胞外,其他细胞被大量杀死;TUNEL凋亡检测结果显示胃癌细胞部分凋亡,脐静脉内皮细胞则很少凋亡。结论 VSV对上述胃癌细胞有选择性感染和杀伤作用,能够诱导这些细胞凋亡,对正常细胞则影响不大。(本文来源于《医学综述》期刊2010年20期）
黄淑华,彭芝兰,王和,陈晓芸,冯炜强[10]（2010）在《人端粒酶逆转录酶启动子调控的胞嘧啶脱氨酶基因对宫颈癌细胞株的选择性杀伤作用研究》一文中研究指出目的探讨由人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)启动子驱动的含胞嘧啶脱氨酶(cytosine deaminase,CD)基因的复制缺陷型腺病毒,对宫颈癌细胞的选择性杀伤作用。方法将自行构建复制的缺陷型腺病毒载体Ad-hTERTp-CD,由端粒酶逆转录酶启动子调控的携带胞嘧啶脱氨酶基因的重组腺病毒,分别感染人宫颈癌细胞株Hela(研究组)及人胚肺成纤维细胞(humanembryo lung fibroblast cells,hELF)(对照组),采用不同滴度重组腺病毒及不同浓度氟胞嘧啶(5-flurocy-tosine,5-FC)作用于Hela细胞(研究组)后,通过MTT法,检测研究组和对照组受染细胞的存活率,观察分析腺病毒载体对两种细胞的杀伤作用。结果 MTT法检测到研究组细胞存活率随病毒滴度和氟胞嘧啶浓度的增加,不断降低;而同样处理,对人胚肺成纤维细胞(对照组)也有部分杀伤作用,但远较Hela细胞(研究组)弱,两组比较,差异有显着意义(P<0.01)。结论本实验构建的复制缺陷型腺病毒Ad-hTER-Tp-CD对Hela细胞具有靶向杀伤作用。(本文来源于《中华妇幼临床医学杂志(电子版)》期刊2010年03期）
选择性杀伤作用论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:1.使用载脂蛋白E(apoE)与阳离子脂质体组合成一种具有靶向性结合肝(癌)细胞的基因运输载体apoE-lipoplexes,检测其转染肝(癌)细胞的效率。2.采用甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)启动子调控的,以增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)为报告基因的,单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpes simplex virus thymidine kinase,HSVtk)为自杀基因的真核表达质粒pAFP-TK-IRES2-EGFP,将apoE-lipoplexes结合pAFP-TK-IRES2-EGFP质粒转染肝(癌)细胞,检测HSVtk在肝(癌)细胞内的特异表达情况。3.检测apoE-lipoplexes介导AFP启动子调控的TK/GCV自杀基因系统对肝癌细胞的体外杀伤作用。方法:1.制备载脂蛋白E修饰阳离子脂质体(apoE-lipoplexes)和单纯的阳离子脂质体(lipoplexes),分别运载以EGFP为报告基因的pGenesil-1质粒转染肝癌细胞HepG2、HUH-7和Li-7,正常肝细胞HL-7702和大肠癌细胞SW480,流式细胞术检测转染效率。2.检测apoE-lipoplexes与pAFP-TK-IRES2-EGFP质粒复合物在DNaseⅠ中的稳定性。3.以AFP启动子调控的HSVtk自杀基因真核表达质pAFP-TK-IRES2-EGFP作为杀伤质粒,以apoE-lipoplexes运载pAFP-TK-IRES2-EGFP分别转染HepG2、HUH-7、Li-7、HL-7702和SW480细胞,分别采用RT-PCR和western blotting法检测HSVtk基因在mRNA与蛋白水平的表达。4.以pAFP-IRES2-EGFP质粒作对照组,pAFP-TK-IRES2-EGFP作实验组,分别转染肝癌细胞HepG、HUH-7、Li-7,加入前体药物更昔洛韦(ganciclovir,GCV)后,流式细胞术检测细胞死亡率。结果:1.成功合成一种具有肝(癌)细胞靶向结合特性的脂质体apoE-lipoplexes,与单纯的脂质体lipoplexes比较,apoE-lipoplexes对肝(癌)细胞转染效率显着提高,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。2.酶切鉴定pAFP-TK-IRES2-EGFP真核表达质粒后,转染HepG2、HUH-7、Li-7、HL-7702和SW480细胞,经RT-PCR和western blotting检测,HSVtk在甲胎蛋白阳性的HepG2、HUH-7、Li-7细胞内表达,但在甲胎蛋白阴性的HL-7702和SW480细胞内未检测出HSVtk表达。3.与对照组比较,肝癌细胞HepG2、HUH-7、Li-7的死亡率均显着提高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:1.载脂蛋白E修饰的阳离子脂质体apoE-lipoplexes对肝(癌)细胞具有较高的转染效率。2.apoE-lipoplexes介导AFP启动子调控的自杀基因真核表达质粒pAFP-TK-IRES2-EGFP在甲胎蛋白阳性的HepG2、HUH-7和Li-7肝癌细胞内成功表达。3.apoE-lipoplexes介导HSVtk/GCV自杀基因系统对HepG2、HUH-7和Li-7肝癌细胞具有杀伤作用,对正常肝细胞没有杀伤作用。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
选择性杀伤作用论文参考文献
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